重复利用淋巴瘤组织切片行荧光原位杂交的可行性分析

淋巴瘤的分类非常复杂,形态多样,鉴别诊断有时非常困难,需借助免疫组化及分子检测来进行分析。FISH检测在淋巴瘤的鉴别诊断中广泛使用^([1-3])。目前淋巴瘤石蜡组织较多来源于门诊小手术样本、B超引导下的粗针穿刺组织样本、胸腔镜和腹腔镜样本等,共同的缺点是组织较小,标本量少,且病变细胞不明确,组织易受挤压,形态欠佳,前期形态学检测项目多,所剩样本有时不足以进行相关FISH检测。

粗穗披碱草1H^(t)S染色体特异荧光原位杂交标记开发

小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL罗伯逊易位系高抗小麦条锈病和叶锈病,是小麦遗传改良的优异基因源。我们前期利用中国春ph1b基因突变体对该易位系进行诱导,获得了一批诱导后代材料,为了从中准确鉴定小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系,需要建立能够覆盖粗穗披碱草1H^(t)S染色体的荧光原位杂交(FISH)标记。本研究利用21个小麦及其近缘种探针、61个基于中国春基因组序列新开发的小麦1BS染色体探针以及40个根据简单三碱基重复序列新开发的探针对小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL易位系进行非变性FISH分析。结果显示,B74、B76和B77等36个探针(33个为新开发的)在1H^(t)S染色体上具有杂交信号,并且杂交信号可分为仅在染色体末端、仅在着丝粒处、同时在着丝粒处和近着丝粒处、覆盖1H^(t)S约3/4染色体臂、覆盖绝大部分1H^(t)S共五种类型。因此,部分探针单独使用或多个探针联合使用,其信号能覆盖1H^(t)S染色体,能够满足小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系鉴定,这可为小麦背景中粗穗披碱草染色质追踪提供新的检测手段。

观察全自动免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)评价胃癌HER2状态的效果

探讨荧光原位杂交(FISH)和全自动免疫组化(IHC)评价胃癌表皮生长因子受体2(HER2)状态的效果。方法 对我院胃食管交界处腺癌或手术切除原发性胃石蜡组织标本展开FISH和IHC检测,288例标本采集时间为2019.1.1-2023.12.31,对FISH和IHC检测的胃癌HER2蛋白与基因表达情况加以分析。结果 228例标本中,50例(21.93%)表达为IHC2+与3+,178例(78.07%)表达为0+与1+。FISH检测HER2基因扩增病理病例34例,其中31例IHC+1病例FISH检测有27例扩增,未扩增病例共2例,来源于17号染色体多体;FISH检测扩增病例共2例,来源于IHC2+的19例;在检测FISH下可检出HER2扩增34例,其中低度、中度以及高度扩增分别有15例(44.12%)、10例(29.41%)、9例(26.47%);扩增病理中17号染色体非整倍性者17例,其中亚二体性、低多体性、高多体性各有1例(5.88%)、11例(64.71%)、5例(29.41%);HER2蛋白表达与WHO分化程度与Lauren分级密切相关,P<0.05;HER2基因扩增、Lauren分级、肿瘤分化程度三者之间关系密切,P<0.05。结论 HER2基因扩增中17号染色体多倍体发生比例与分化程度相对更高,HER2阳性率偏高,以肠型多见,IHC虽能够用于胃癌HER2的筛查,但若遇到无法明确的病例,可借助FISH检测进一步确诊,能够有效提升临床诊断的准确性。

两种国产膀胱癌荧光原位杂交检测试剂盒的临床应用比对

目的:通过比对两种国产膀胱癌荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)试剂盒在尿液脱落细胞染色体畸变检测结果差异,探究膀胱癌FISH试剂盒的实际临床应用价值。方法:选取2021年1月至2022年1月,首都医科大学临床检验中心20例血尿患者尿液筛查样本,分别使用不同厂家试剂盒,检测尿液脱落细胞染色体畸变,并与液基薄层细胞特殊染色(CellDetect染色)结果进行对比,分析两种不同试剂盒检测结果的差异。结果:20例样本中,19例样本检测结果一致,仅有1例样本结果不一致。两种试剂盒阳性检出率分别为50%和45%,结果无统计学差异(P>0.05)。结论:两种国产膀胱癌FISH试剂盒检测结果一致性高,均可应用于临床膀胱癌FISH检测。

应用EBER-RNA探针原位杂交技术在鼻咽癌组织中EB病毒的检测效果

分析EBER-RNA探针原位杂交技术在鼻咽癌组织中EB病毒的检测效果。方法 选取2022年1月-2022年12月本院100例疑似鼻咽癌患者,所有患者经病理组织检查确诊,术中提取病灶组织,通过EBER-RNA探针原位杂交技术对不同组织中EB病毒进行检查,分析检查结果。结果 鼻咽癌患者病灶组织中EB检出率较非鼻咽癌患者组织检出率高(P<0.05)。鼻咽癌患者EB病毒检出率肿瘤类型及发病位置存在显著差异(P<0.05)。经多因素分析,鼻咽癌患者EB病毒检出率与肿瘤类型、发生部位及性别等有关。结论 鼻咽癌组织中EB病毒检测过程中,EBER-RNA探针原位杂交技术应用价值较高,其可以将病情严重程度清楚反映出来,为临床治疗提供参考,值得采纳。

220例骨髓增生异常综合征患者的荧光原位杂交和染色体核型结果分析

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术和染色体核型分析(CCA)对骨髓异常综合征(MDS)的诊断及预后评估的价值。方法采集2016年1月至2021年1月南昌大学第一附属医院的220例MDS初诊患者骨髓标本,对其进行染色体核型分析和荧光原位杂交技术检测,并整理分析患者临床资料。结果世界卫生组织(WHO)分型的各亚型中,骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多Ⅰ型(MDS-EB-1)和骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多Ⅱ型(MDS-EB-2)组的FISH异常染色体检出率高于CCA法,差异有统计学意义(P<0.05),而两种检测方法对其他亚型的异常染色体检出率无统计学意义(P>0.05);同时,两种方法的联合诊断异常染色体总检出率高于CCA法,差异有统计学意义(P<0.05);进一步采用修订版国际预后积分系统(IPSS-R)进行等级评分,结果提示联合诊断风险等级显著高于单独CCA检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FISH联合CCA法可显著提高MDS患者的染色体异常检出率,在MDS的诊断、分型甚至预后分层都具有显著指导意义。

原位杂交结合半薄切片对石鳖贝壳发育相关细胞的观察研究

多板纲软体动物(石鳖)生有8片重复排列的贝壳,与其他类群如腹足类、双壳类等有显著的区别,这些差异蕴含着重要的发育和演化意义。前期研究发现,红条毛肤石鳖(Acanthochitona rubrolineata)幼虫贝壳发育组织的细胞排列欠规则,在普通显微镜下不易识别单个细胞结构。本研究首先利用整装原位杂交手段鉴定出一些参与贝壳发育的细胞群体,发现表达engrailed的细胞分布于贝壳发育区中央区域的突起部位(脊)和边缘区域,其中脊区域的表达呈条纹状,边缘区域的表达则与贝壳发育区的外周吻合,但是对这些细胞的形态和排列模式等细节无法开展深入观察。接下来对石鳖幼虫进行了半薄切片,发现可以识别出壳板发育区细胞及脊细胞的大致轮廓和分布模式,但分辨率仍然受限。为了进一步提升分辨能力,结合了整装原位杂交实验及半薄切片技术,对表达engrailed基因的贝壳发育相关细胞开展了观察研究。结果显示,对整装原位杂交后的幼虫进行半薄切片,组织细胞结构保持完整,细胞轮廓清晰,能够清楚区分engrailed阳性细胞。观察表明,这些细胞具有较高的核质比,总体呈V形排列,且贝壳发育区中央部位与边缘部位的engrailed阳性细胞在形态和排列上存在区别。这些结果证明,将原位杂交与半薄切片结合,可提升对细胞结构观察的分辨率,实现同时从分子和细胞学层面研究石鳖贝壳发育相关细胞。本研究对进一步从细胞水平研究石鳖的贝壳发育过程、解析相关贝壳发育相关基因的功能有重要的支撑作用。研究结果对揭示更多贝壳起源的信息,理解软体动物贝壳的起源和演化有重要意义。

烤片时间对淋巴瘤累及骨髓穿刺组织石蜡切片EBER原位杂交检测的影响

目的探讨淋巴瘤累及骨髓穿刺组织石蜡切片EBER原位杂交检测最佳烤片时间。方法选取苏州大学附属第一医院病理科EBER原位杂交检测结果为阳性的淋巴瘤累及骨髓穿刺组织20例。所有骨髓标本均经10%中性福尔马林固定、混合酸脱钙、石蜡包埋组织,每例标本连续切片6张,根据烤片时间不同随机分成6组,烤片后进行EBER原位杂交检测。结果烤片5 min和10 min组均出现脱片现象,烤片30 min及以上,则骨髓组织结构完整,无脱片现象发生。烤片30 min组EBER染色质量评分最高,随着烤片时间延长,EBER阳性信号着色强度逐渐减弱,阳性细胞核数量逐渐减少,EBER阳性率也降低。结论75℃烘箱中烤片30 min,骨髓石蜡切片EBER原位杂交检测效果最佳,无脱片现象发生、组织结构完整、阳性信号呈棕黄色定位于细胞核、背景干净,阳性率高。

无水乙醇替代甲醇在膀胱癌荧光原位杂交技术中的应用

目的探讨无水乙醇替代甲醇在膀胱癌荧光原位杂交技术中的应用价值。方法收集30例疑似膀胱癌患者尿脱落细胞,每例均随机平均分为A、B组,分别使用传统方法甲醇:乙酸=3:1配制固定液和无水乙醇:乙酸=3:1配制固定液,并使用膀胱癌染色体异常检测试剂盒进行荧光原位杂交检测,观察两组方法的染色一致性。结果两组方法均能获得良好制片效果,检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论在膀胱癌尿脱落细胞荧光原位杂交实验中,使用无水乙醇替代传统方法中的甲醇配制固定液能取得良好的制片效果及一致性的检测结果,在不影响结果和报告准确性的前提下,减少了职业危害的发生,为病理技术人员的健康提供更多的保障,是值得推广的试剂替代方法。

尿液基细胞荧光原位杂交检测对膀胱尿路上皮癌的诊断价值

目的探讨尿液基细胞学(LBC)靶向的荧光原位杂交(FISH)对膀胱尿路上皮癌(BUC)的诊断价值。方法回顾性收集2020年10月—2022年10月于首都医科大学附属北京天坛医院泌尿外科行膀胱镜检查的128例患者的临床资料。所有患者在行膀胱镜检查前进行尿核基质蛋白22(NMP22)检测、尿LBC检测与尿LBC靶向的FISH检测,以术后病理结果为标准,分析3种检查方法的灵敏度和特异度。结果NMP22、尿LBC与LBC靶向的FISH的灵敏度分别为61.11%、79.17%、82.46%,特异度分别为57.14%、73.21%、86.67%;NMP22、尿LBC的灵敏度在检测高级别BUC时优于低级别,差异有统计学意义(P=0.01,P=0.03);3种方法对肌层浸润性膀胱癌与非肌层浸润性膀胱癌检测的灵敏度比较,差异无统计学意义(P≥0.05)。结论尿LBC靶向的FISH对BUC诊断的灵敏度和特异度较高,尤其是对于低级别BUC,可以作为BUC早期筛查、诊断的重要方法。

揭秘基因密码—荧光原位杂交分子病理报告解读

生命是一部由基因编写的复杂交响曲,而荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是揭示这部交响曲内在奥秘的重要工具之一。FISH是一种生物分子分析技术,用于研究细胞和组织中的染色体结构、基因定位和基因表达。该技术通过使用荧光标记的DNA或RNA探针与目标DNA或RNA序列杂交,然后通过荧光显微镜观察杂交信号的位置和数量。FISH技术让人们能够在细胞和组织层面上观察基因、染色体的情况,了解患者病变部位的分子生物学特征,从而为个体化医疗提供支持。但对于许多患者而言,他们并不了解FISH,甚至对为何进行FISH检测存在疑惑。本文将从科普角度解读FISH分子病理报告,以及FISH走入临床工作的意义。

单分子荧光原位杂交(smFISH)技术及应用

单分子荧光原位杂交(single-molecule fluorescence in situ hybridization,smFISH)技术是一种通过用偶联荧光基团的寡核苷酸探针,对固定细胞或组织中单个mRNA分子进行成像的方法。smFISH可对RNA进行定位、定量,以此对目标转录本进行实时研究。sm FISH适用于细胞、组织切片等多种类型生物样本。近年来,多种基于基础smFISH的改进技术被发明,进一步促进了该技术的实际应用。smFISH良好的RNA单分子可视化能力,使得其在发育生物学、神经生物学及肿瘤生物学等基础生物学科中得到了广泛的应用。本文综述了smFISH技术基本原理、smFISH技术的局限性、smFISH衍生技术方法、smFISH在不同生物学科中的应用进展,并对smFISH技术的发展前景做出展望。

RNAscope原位杂交技术在肺结核病理诊断中的应用价值

目的探讨RNAscope原位杂交技术在肺结核病理诊断中的应用价值。方法收集72例肺结核临床资料,采用qRT-PCR法、RNAscope原位杂交技术进行检测,分析两种方法检测率的差异。结果qRT-PCR法检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为80.56%(58/72)、94.12%(32/34)、96.67%(58/60)、69.57%(32/46)和84.91%(90/106)。RNAscope原位杂交技术检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为70.83%(51/72)、100%(34/34)、100%(51/51)、61.82%(34/55)和80.19%(85/106)。RNAscope原位杂交技术检测肺结核分枝杆菌的特异度和阳性预测值高于qRT-PCR法,敏感度、阴性预测值和准确度则低于qRT-PCR法。统计学分析:两种检测方法差异均无统计学意义(P>0.05)。一致性分析:两者的一致性较好。结论RNAscope原位杂交技术在肺结核病理诊断中具有较高的敏感度和特异度,与qRT-PCR法一致性较高,且未破坏组织的完整性值得在临床中推广。

免疫组化及荧光原位杂交检测人类表皮生长因子受体2的临床意义

目的:探讨结直肠癌中不同免疫组化评分标准下人类表皮生长因子受体2(HER2)蛋白表达情况及荧光原位杂交方法检测HER2基因扩增与临床病理特征之间的关系。方法:选择2019年1月-2021年12月结直肠癌根治术的石蜡组织标本100例,同时收集患者的临床和病理信息。采用三种不同评分标准对所有病例行全自动免疫组化(IHC)检测HER2蛋白和荧光原位杂交(FISH)检测HER2基因表达,分析其与临床病理特征的关系。结果:100例结直肠癌组织中,三种不同评分标准下HER2的蛋白阳性表达率分别为34%,27%和20%,差异无统计学意义(P>0.05)。IHC评分标准1下HER2蛋白表达3+,2+,1+,0+与基因扩增的一致性分别为50.0%,12.5%,2.9%和0。IHC评分标准2下HER2蛋白表达与基因扩增的一致性分别为71.4%,15.0%,2.9%和0,IHC评分标准3下HER2蛋白表达与基因扩增的一致性分别为100.0%,20.0%,2.9%和0,IHC评分标准3下HER2蛋白与基因扩增一致性最高。FISH检测HER2基因扩增9例(9.0%)。HER2基因扩增与年龄、性别、病理分期、浸润深度无相关性(P>0.05),与分化程度、淋巴结转移有相关性(P<0.05)。结论:三种评分标准检测HER2蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义,但评分标准3下HER2蛋白表达与基因扩增的一致性最高。HER2基因扩增与分化程度和淋巴结转移有关。临床上应优先选用评分标准3进行HER2蛋白表达检测。

荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因的影响因素

探究荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)在乳腺癌人类表皮生长因子受体2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER2)基因状态检测中的影响因素。方法 选择40例2021年1月至2023年12月我院外科手术切除乳腺癌组织标本,使用FISH检测HER2基因状态,观察不同的酶消化时间、煮片的温度与时间、组织前期处理固定效果对FISH检测HER2基因扩增的影响。结果 酶消化11分钟癌细胞杂交成功率>75%,实验较为稳定;酶消化9分钟时提示消化时间不足;酶消化13分钟提示消化过度。煮片水温在92℃,时间在15~25分钟左右会出现荧光杂交信号弱量较少情况;温度在97℃,时间15分钟会出现荧光杂交信号弱量较少情况,时间在20~25分钟会出现荧光杂交信号强度不均匀情况;煮片水温在95℃,时间保证在20分钟左右最佳。在乳腺组织离体30min内使用10%中性缓冲福尔马林固定最佳,乳腺组织离体到固定时间间隔不超过1h,不宜用微波快速固定。结论 使用荧光原位杂交技术检测人类表皮生长因子受体2基因扩增时,在乳腺组织离体30min内使用10%中性缓冲福尔马林固定、酶消化11分钟、煮片水温在95℃,时间保证在20分钟左右具有较高的杂交成功率,同时可以保持实验的稳定性。

荧光原位杂交检测MDM2和DDIT3基因信号改变在诊断脂肪肉瘤中的价值

目的:探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法检测MDM2和DDIT3基因在各亚型脂肪肉瘤的临床诊断价值。方法:回顾性分析北京大学第一医院病理科2015年1月至2019年12月诊断的62例脂肪肉瘤的临床病理学特征,所有病例进行了MDM2基因扩增FISH检测,其中48例进行了DDIT3基因断裂FISH检测,观察MDM2和DDIT3基因信号改变模式,并综合临床病理学特征确诊不同亚型脂肪肉瘤。结果:62例患者以男性多见(男∶女=1.75∶1),中位年龄59(31~89)岁。脂肪肉瘤组织学亚型包括20例非典型脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤(atypical lipomatous tumour/well differentiated liposarcoma,ALT/WDLPS)、26例去分化脂肪肉瘤(dedifferentiated liposarcoma,DDLPS)、13例黏液样脂肪肉瘤(myxoid liposarcoma,MLPS)和3例多形性脂肪肉瘤(pleomorphic liposarcoma,PLPS),其中23例(23/26)DDLPS和8例(8/20)WDLPS位于腹膜后,而MLPS和PLPS则均不位于腹膜后。肿瘤发生部位在不同亚型脂肪肉瘤间的差异具有统计学意义(P<0.05)。组织形态学上,各亚型脂肪肉瘤均可见多少不等的黏液样间质,且差别具有统计学意义(P<0.05)。MDM2基因扩增见于所有ALT/WDLPS和DDLPS(均为100%,20/20及26/26);DDIT3分离探针典型信号表现为基因断裂/易位,仅见于MLPS(100%,13/13),但值得注意的是,该探针还可出现非典型信号(端粒侧信号簇状扩增),比较常见,包括绝大多数DDLPS(96.2%,25/26)和ALT/WDLPS(83.3%,5/6,探针只随机检测6例)。对照分析探针说明书上的设计图,DDIT3分离探针之红绿色探针并未覆盖DDIT3基因本身,而是跨越了DDIT3基因,且探针端粒侧红色探针覆盖了CDK4基因,而DDIT3基因与CDK4基因距离很近,因此,当DDIT3分离探针端粒侧出现簇状扩增信号,提示CDK4基因扩增而非DDIT3基因断裂。随机挑选10例出现这种非典型信号的病例,以FISH法进一步应用CDK4和DDIT3计数探针进行验证,证实为CDK4基因扩增(100%,10/10),其中2例同时检测到DDIT3基因扩增(20%,2/10);DDIT3分离探针还存在另一种少见的非典型信号,即基因拷贝数增加(黄色融合信号数目≥3个),对应形态学表现为多形性和预后差,见于1例DDLPS和2例PLPS。结论:利用FISH技术观察MDM2和DDIT3基因信号改变模式时,需要注意对非典型信号做出正确判读,并结合患者的临床病理学特征,才能对不同亚型脂肪肉瘤做出正确诊断,进一步指导临床治疗。

4种荧光原位杂交探针检测隐匿易位急性早幼粒细胞白血病的比较

目的:比较4种临床常用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)探针对罕见隐匿PML-RARα插入易位急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)的检测能力。方法:联合FISH、RT-PCR及常规染色体核型分析技术检测3例罕见APL病例相关融合基因及染色体异常,其中FISH技术采用4家不同公司PML-RARα探针进行检测。结果:FISH方法检测罕见插入易位PML-RARα融合时,由于片段短小极易出现假阴性的情况。4家不同探针FISH检测结果显示,美国Abbott公司探针3例PML-RARα融合基因检测均为阴性;英国Cytocell公司探针检测到2例阳性,1例阴性;武汉康录和广州安必平公司探针在3例中均成功检测到融合信号。结论:康录和安必平公司探针PML-RARα检出率高,是FISH检测此类罕见PML-RARα融合基因时的更优选择。

免疫组织化学切片行EBER原位杂交检测方法的建立及应用

目的在石蜡组织免疫组织化学(IHC)阴性切片上建立EBER原位杂交(ISH)检测方法,为EB病毒相关淋巴组织病变在组织资源不足的情况下提供及时有效的检测结果及诊断依据。方法回顾性收集首都医科大学附属北京友谊医院病理科2021年1月至2023年2月间EBER原位杂交检测阳性的病例23例,其中NK/T细胞淋巴瘤8例,弥漫大B细胞淋巴瘤6例,伯基特淋巴瘤2例,经典霍奇金淋巴瘤4例,传染性单核细胞增多症3例。先选取1例组织量充足的EB病毒阳性弥漫大B细胞淋巴瘤组织用于IHC后EBER ISH前组织预处理条件的摸索,然后使用最佳预处理条件建立本实验的检测流程并用于另外22例组织中。22个蜡块每例连续切片2张,1张进行常规的EBER原位杂交检测,归为对照组;另1张归为实验组,先进行IHC染色,再按最佳预处理条件进行EBER原位杂交。最后对两组切片杂交的成功率、阳性强度、阳性细胞比例及组织细胞结构进行观察对比。结果实验组EBER杂交的成功率为90.91%(20/22),与对照组[100%(22/22)]相比,差异无统计学意义(P>0.05),杂交成功的切片阳性着色位于细胞核,定位准确,背景干净。两组切片的阳性细胞比例差异无统计学意义(P>0.05)。染色强度上,对照组中8例评分为3分的组织在实验组评分为2分,使两组染色强度的对比差异有统计学意义(P<0.05),但杂交结果仍可清晰明确地判读。实验组与对照组切片均未出现组织脱片、细胞形态结构不完整的现象。结论本文建立的IHC-EBER原位杂交检测方法操作简单、定位准确、成功率高、结果准确,可有效解决患者因切片或组织资源不足而无法进行EBER原位杂交检测的难题,能够为EB病毒相关淋巴组织疾病提供及时有效的诊断依据,具有临床实用价值,值得推广。

蜡块保存年限对乳腺癌HER2基因荧光原位杂交结果的影响

目的以浸润性乳腺癌HER2基因表达为研究对象,探讨蜡块保存年限对HER2基因荧光原位杂交(FISH)检测结果的影响。方法回顾性收集2012年1月至2017年12月在首都医科大学附属北京友谊医院病理科初诊为原发浸润性乳腺癌的石蜡样本70例,其中免疫组织化学检测HER2蛋白2+且FISH检测HER2基因扩增的病例每年度10例,共60例,归为Fp组,包括手术切除标本32例,穿刺标本28例;另外选取2012年1月至2012年12月HER2蛋白2+且FISH检测HER2基因未扩增的病例10例,作为阴性对照,归为Fn组,包括手术切除标本5例,穿刺标本5例。将所有病例的归档蜡块以4μm厚度连续切片2张,一张用于苏木精和伊红染色以确定肿瘤位置,另一张重新进行FISH检测,切片预处理采用高温高压热修复方法,胃酶消化使用光学显微镜观察控制。最后按照乳腺癌HER2检测指南(2019版)进行判读并将计数的平均HER2拷贝数/细胞、平均CEP17拷贝数/细胞以及HER2/CEP17比值与初诊结果进行对比。结果Fp组60张切片中,除1张2016年的穿刺组织杂交失败外,其余组织均杂交成功,成功率为98.33%(59/60),成功的切片均判读为阳性,与初诊结果符合率为100%;Fn组10张切片全部杂交成功且均判读为阴性,与初诊结果符合率为100%。Fp组、Fn组中平均HER2拷贝数/细胞、平均CEP17拷贝数/细胞以及HER2/CEP17比值与初诊结果相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论保存5~10年的乳腺癌归档蜡块,采用高温高压热修复后行HER2基因FISH检测,成功率高、结果准确,可为初诊HER2 IHC 2+但未行FISH检测的癌转移患者在抗HER2靶向用药的筛选中提供一定的依据。

甲酸表面脱钙法在骨髓活检荧光原位杂交制片中的应用

目的对骨髓活检组织使用甲酸溶液进行表面脱钙,提高其石蜡切片荧光原位杂交检测的成功率,为骨髓内淋巴瘤的精确诊治及预后判断提供分子生物学依据。方法回顾性收集2015年1月至2022年5月间首都医科大学附属北京友谊医院病理科骨髓活检组织58例,其中套细胞淋巴瘤33例,弥漫大B细胞淋巴瘤21例,滤泡性淋巴瘤4例。根据常规制片前所用脱钙液和脱钙方式的不同,将实验分为3组:硝酸传统脱钙组(DG1)、硝酸表面脱钙组(DG2)和甲酸表面脱钙组(DG3)。其中DG2组和DG3组蜡块在荧光原位杂交制片前,需放入50%甲酸溶液中二次脱钙10 min,流水冲洗10 min。之后对3组蜡块进行连续切片,每例捞取组织面2张,分别用于苏木素和伊红染色和杂交检测。结果DG1组、DG2组和DG3组杂交的成功率分别为5.6%(1/18)、94.7%(18/19)和95.2%(20/21)。与DG1组相比,DG2组和DG3组杂交成功率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。DG2组和DG3组成功率之间差异无统计学意义(P>0.05)。DG2组13例MCL和1例FL、DG3组8例MCL和2例FL中的CCND1/IGH和BCL2/IGH融合探针检测均为阳性。DG1组1例DLBCL、DG2组5例DLBCL、DG3组11例DLBCL细胞内MYC基因均未出现异常断裂信号,表现为两个红绿融合的黄色信号。杂交成功的切片上组织结构完整,细胞轮廓清楚,信号定位准确。结论甲酸表面脱钙法脱钙速度快,荧光原位杂交检测成功率高,结果准确。甲酸代替硝酸,配制安全而且容易购买。该法在骨髓活检FISH制片中的应用具有重要的临床价值,应用前景广阔,值得推广。