浅析反相高效液相色谱中样品溶剂对中药成分色谱保留行为的影响

目的探究反相高效液相色谱(RP-HPLC)中样品溶剂对中药成分色谱保留行为的影响。方法选取2020版《中国药典》一部收载的5种中药,参照各药材含量测定项下要求进行HPLC法测定,初步研究龙胆苦苷-龙胆、紫丁香苷-刺五加、松脂醇二葡萄糖苷-杜仲、秦皮甲素-秦皮、腺苷-冬虫夏草受样品溶剂影响产生的色谱峰异常行为,深入探讨溶剂效应的机理,并提出解决方案。结果5种中药化学成分的色谱异常行为表现为保留时间漂移、色谱峰展宽、前延及裂分,产生上述异常现象的根本原因是溶解样品的溶剂和流动相存在某种不匹配,导致样品在溶剂与流动相中所处状态出现差异(溶剂效应)。消除溶剂效应的首选方法是用流动相或相近的溶剂溶解样品,此外,减小进样量和使用溶剂效应消除器可作为辅助手段。结论溶剂效应容易引起色谱峰异常,影响对化学成分定性和定量的准确性,应该在日常中药分析工作中予以重视。

反相高效液相色谱双梯度洗脱分离肽混合物及质谱分析

复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。"鸟枪法"(Shotgun)蛋白质组学研究策略通常采用蛋白酶切、二维液相色谱-串联质谱分析肽段混合物从而鉴定蛋白质,其中高效率地分离肽段混合物是关键步骤之一。本文通过pH梯度结合有机溶剂梯度的反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行一维液相色谱分离,按等时间间隔收集馏分并将一个梯度的前段的一个馏分与后段一个馏分混合,然后进行纳升级液相色谱-质谱联用(nanoRPLC-MS/MS)分析。将该方法应用于酵母蛋白质的分离和鉴定,实验结果为:与常规的强阳离子色谱-反相液相色谱-质谱分离鉴定方法相比,采用pH梯度结合有机相梯度的RP-HPLC-RPLC-MS分离鉴定方法多鉴定到567个酵母蛋白质(簇,含有3 035个唯一肽段);其中鉴定到肽段的pI分布范围为3.42～12.01,相对分子质量范围为587.67～3 499.79;蛋白质的pI分布范围为3.82～12.19,相对分子质量范围为3 446.55～432 905。该结果表明这种方法在复杂体系蛋白质组分离鉴定中具有明显的优势,在蛋白质组学研究中有较好的应用前景。

川西獐牙菜中不同部位3种药用成分的反相高效液相色谱测定

目的:建立野生与栽培的川西獐牙菜中不同部位3种有效成分,即龙胆苦苷(S_1)、芒果苷(S_2)、7-O-β-D-吡喃木糖-1,8-二羟基-3-甲氧基(口山)酮(S_3)的反相高效液相色谱定量分析方法。方法:色谱柱为 Kromasil C_(18)(250mm×4.60 mm,5μm),流动相为甲醇-0.02%磷酸水溶液,梯度洗脱,洗脱条件为0 min→50 min→55 min,甲醇:20%→80%→100%;流速为1 mL·min^(-1),检测波长为260nm。结果:该方法具有很好的线性关系和回收率。结论:本方法简单、准确、快速、实用性强。川西獐牙菜中3种药效成分在花的部位含量最高。

反相高效液相色谱法测定奥沙利铂的含量

目的:建立奥沙利铂反相高效液相色谱(RP-HPLC)含量测定方法。方法:采用RP-HPLC测定奥沙利铂的含量,色谱柱:kromasil C18柱(150mm×4.6mm),检测波长250nm。流动相:甲醇-水(5:95),流速:1.0ml/min。结果:本法线性范围为20μg/ml-100μg/ml,r=0.9999。日内和日间精密度RSD分别为0.71％和0.97％(n=5)。平均回收率为99.82％,RSD为0.89％。结论:该测定方法专属性强,操作简便,准确度高,精密度高,可作为奥沙利铂的含量测定方法,以控制其原料及制剂的质量。

反相高效液相色谱法测定化妆品中的24种防腐剂

建立了同时检测化妆品中24种防腐剂含量的反相高效液相色谱法（RP—HPLC）。采用KromasilC18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，以磷酸盐缓冲溶液（pH=4．26）为流动相，梯度洗脱。样品经甲醇超声提取，然后采用RP—HPLC-二极管阵列检测法测定，对样品前处理和色谱条件进行研究和优化。方法的相对标准偏差为1．3％～3．3％；回收率为90．6％～97．8％；各种防腐剂的线性相关系数≥0．9997，具有较高的准确度和精密度，可用于化妆品中24种防腐剂含量的分析。

反相高效液相色谱/质谱法同时测定鸡肉中5种喹诺酮药物残留

采用反相高效液相色谱／四级杆串联质谱（RP-HPLC／MS／MS）同时测定鸡肉中的5种喹诺酮药物（quinolones，QNs）。均质后的鸡肉样品采用磷酸盐缓冲溶液和乙腈的混和溶液提取。提取液经正己烷液-液分配（LLP）去除脂肪后，用C18固相萃取（SPE）柱净化，氨化甲醇洗脱，洗脱液用氮气吹干，流动相定容后，分析物采用LC／MS／MS电喷雾电离（ESI），正离子，多反应监测（MRM）模式检测，外标法定量。在添加浓度2．5～10μg/kg范围内，5种QNs的回收率在79．8％～95．1％之间；相对标准偏差（RSD）均小于11．7％。环丙沙星、丹诺沙星、恩诺沙星检出限（LOD）为0．5μg／kg，沙托沙星为1．0μg／kg，氟甲喹为0．1μg／kg。

反相高效液相色谱法测定山楂中的有机酸

采用Hypersil ODS2（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,以磷酸盐缓冲溶液（pH=2.6）为流动相,流速0.8 mL/min,检测波长210 nm,建立了山楂中柠檬酸、苹果酸等有机酸的高效液相色谱分析方法.其中柠檬酸和苹果酸的线性范围分别为0.50～50.04 μg、0.10～10.00 μg;3个浓度水平的回收率分别为95.5%～96.6%、100.2%～103.7%,RSD分别为0.11%～0.38%、0.41%～2.53%;检出限分别为0.04 μg、0.03 μg（S/N=3）.测定了5种不同产地山楂果肉及山楂核中的柠檬酸、苹果酸的含量.所建立的方法快速﹑灵敏度高、重复性好,可用于山楂中有机酸的测定.

天然酚酸类化合物的反相高效液相色谱分析

采用反相高效液相色谱法梯度洗脱 ,对 12种天然酚酸进行定性定量分析研究。通过色谱条件的优化 ,确定了最佳的分离条件 ;同时探讨了流动相的酸度对分离结果的影响 ,以及酚酸结构与保留行为之间的关系。实验中以确定的最佳分离条件对 12种天然酚酸进行了定量分析 ,测定了各个化合物的回归方程、相关系数、线性范围、检测限和相对标准偏差。实验结果显示 ,各个化合物回归方程的相关系数r为 0 9980～ 0 9999,检测限为 0 96ng～ 4 10ng ,相对标准偏差RSD≤ 2 6 4 % ,满足定量分析要求。

反相高效液相色谱法用于地钱中黄酮类化合物的分离与测定

采用反相高效液相色谱 ,在RP C1 8柱上以乙酸 甲醇 乙腈 磷酸 水为多元流动相 ,等度洗脱 ,在 30min内对地钱的黄酮提取物进行分离与测定 ,检测波长 35 0nm ,流速 0 .60mL/min ,采用校准曲线法对实际样品中的芹菜素、槲皮素和木犀草素进行定量分析。结果表明 :平均加标回收率 96.79%～ 1 0 1 .1 3% ,相对标准偏差 0 .66%～ 1 .5 2 %。

反相高效液相色谱法同时测定保健品中的四种类胡萝卜素

建立了不同剂型保健品中类胡萝h素的提取方法和同时测定保健品中4种类胡萝h素含量的高效液相色谱分析方法。采用Diamonsil^TM C18色谱柱（250mm×4．6mmi．d．，5μm），以乙腈和乙酸乙酯为流动相进行梯度洗脱，洗脱程序：先以100％乙腈洗脱15min，然后乙酸乙酯的含量在10min内从0增加到100％，再以100％乙腈洗脱5min；流速1mL／min；采用二极管阵列检测器检测，检测波长为450nm。以外标法定量，番茄红素、叶黄素、玉米黄素、β-胡萝h素4种组分的线性关系良好，相关系数为0．9994～0．9997，检测限为0．4～0．5mg／L。片剂样品、粉状样品、油状样品的加标回收率分别为95．3％～98．7％，93．7％～98．8％，97．1％～99．2％，相对标准偏差（RSD）分别为0．89％～2．0％，0．89％-2．8％，0．42％1．2％。该法简便、快速、准确，是保健品中多种类胡萝卜素定量测定的可靠方法之一。

反相高效液相色谱在发酵制备琥珀酸中的应用

对于生物法制备琥珀酸的微生物发酵体系,利用Alltech反相PrevailC18色谱柱,以2 5mmol/L磷酸二氢钾(pH 2 5 )作为流动相,在流速1mL/min时,于2 10nm处紫外检测器检测,能将发酵液中琥珀酸、甲酸、乙酸和乳酸完全分离并准确定量。琥珀酸等有机酸的回收率在96 %～10 4 %之间。本方法能够快速、精确测定发酵样品中主产物琥珀酸与其它有机酸含量。

用反相高效液相色谱-紫外检测法测定1-脱氧野尻霉素的含量

以0.05 mol/L HC l为溶剂提取蚕粉和桑叶粉中的1-脱氧野尻霉素(DNJ),并用9-芴基氯甲酸甲酯(FMOC)为衍化剂,在pH 8.5的硼酸盐缓冲液中进行衍生化反应,生成具有紫外吸收的DNJ-FMOC络合物,再用反相高效液相色谱-紫外检测法对其分离测定。结果表明,反应产物的色谱图分离效果良好,DNJ-FMOC的峰面积与DNJ浓度呈高度正相关关系,加样回收率平均为100.7%。精密度试验、稳定性试验、重现性试验、回收率试验表明,该方法稳定可靠,可以作为测定家蚕、桑叶及有关药物样品中DNJ含量的有效方法。

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定不同方法煮制的猪肉及其汤汁中的游离氨基酸

建立了反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离检测用不同方法煮制的猪肉及其汤汁中17种游离氨基酸的方法。样品经6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生后,采用Nova-PakTM C18色谱柱分离,以AccQ.Tag Eluent A稀释液、乙腈和超纯水为流动相,梯度洗脱,检测波长为248 nm,在47 min内实现了17种氨基酸衍生物的基线分离。各氨基酸在1～100μmol/L(胱氨酸在0.5～50μmol/L)范围内呈现出良好的线性关系,相应的线性相关系数(r2)均大于0.99;17种氨基酸的检出限(以信噪比为3计)为0.29～0.96μmol/L;在汤汁中的加标回收率为86.5%～101.0%。该方法前处理过程简单,分离效果好,是检测肉及其汤汁中氨基酸的有效手段,可应用于肉制品的质量评定和工艺优化。

反相高效液相色谱法同时测定植物油中四种生育酚

建立了反相液相色谱法同时测定植物油中4种生育酚的方法。样品用甲醇超声提取,离心后取上清液氮吹至干,甲醇定容后过有机相滤膜,反相C30柱(4.6 mm i.d.×250 mm,5μm)分离,甲醇-水-叔丁基甲醚(60∶15∶25)作流动相等度洗脱,荧光检测(λex=290 nm,λem=340 nm)。结果表明,4种生育酚的质量浓度在0.050～100.0 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数(r2)大于0.999。在加标水平为0.50、50.0、500.0 mg/kg时,4种生育酚的平均加标回收率为81.3%～93.2%,相对标准偏差(RSD)小于6%,α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚及δ-生育酚的方法检出限(LOD)分别为0.10、0.05、0.05、0.02mg/kg。方法准确、灵敏、可靠,可应用于实际样品的分析。

反相高效液相色谱法快速测定7种四环素类抗生素

建立了一种反相高效液相色谱梯度洗脱分离测定四环素类药物的新方法。采用DiamonsilTM C1 8ODS(2 5 0mm× 4 .6mmi.d ,5 μm)色谱柱 ,以甲醇 乙腈 0 .0 1mol/L草酸为流动相 ,流速 1.0mL/min ,2 70nm检测 ,在10min内分离检测四环素等 7种化合物。同时还研究了流动相组成、梯度条件、pH值、草酸浓度等因素对分离效果的影响。

水产食品中组胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱测定方法的建立及应用

建立一种快速测定水产食品中组胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱方法.该方法中样品经三氯乙酸提取、丹磺酰氯衍生,C18反相色谱柱分离,以70％乙腈和30％超纯水为流动相进行等度洗脱,254 nm波长处紫外检测.结果显示,组胺保留时间为5.5 min,组胺在1～500μg/rnL范围内线性系数为0.999 9,仪器检出限（RSN=3）为0.5 μg/mL,定量限（RSN=10）为1.0 μg/mL,且重复性良好;采用该方法测定了16种水产品和19种水产加工食品中的组胺,结果显示含量在0～～682.22 mg/kg之间;样品添加不同质量浓度组胺的回收率为89.54％～101.92％.结果表明,该方法快速准确、灵敏度高、重复性好,适用于水产食品中组胺的测定.采用该方法检测了鲣鱼、鲭鱼和蓝圆鲹在不同温度条件下的组胺变化情况,结果发现,3种鱼在低温贮藏条件下的组胺含量明显低于高温贮藏条件下的含量,表明低温贮藏可有效抑制组胺产生.

反相高效液相色谱法定量分析木质素的主要降解产物

建立了反相高效液相色谱定量分析玉米秸秆蒸汽爆破预处理过程中产生的主要木质素降解产物的方法。采用C18色谱柱,柱温30℃,乙腈-水（含1.5%的醋酸）为流动相,梯度洗脱,流速为0.8mL/min,254nm和280nm波长下紫外检测,可实现4-羟基苯甲酸、香草酸、紫丁香酸、4-羟基苯甲醛、香草醛和紫丁香醛的有效分离。6种主要木质素降解产物线性回归方程相关系数为0.999 9-1.000 0,加标回收率均在96%以上,相对标准偏差低于2.5%（n=6）,满足定量分析要求。

反相高效液相色谱法检测不同品种和叶位桑叶中1-脱氧野尻霉素

建立以芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)为衍化剂的柱前衍生化-反相高效液相紫外线检测法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的方法,并对不同品种、不同叶位桑叶中DNJ含量进行检测。结果表明:以0.05mol/LHCl为溶剂提取桑叶粉中的DNJ,用芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)为衍生化试剂,在pH8.50硼酸盐缓冲液条件下,衍生化和RP-HPLC检测效果最好。反相高效液相色谱-紫外检测法检测DNJ时,流动相中乙腈:0.1%醋酸为55:45(V/V)时色谱分离效果最好,DNJ-FMOC的峰面积与DNJ浓度呈高度正相关关系,相关系数为0.9852。不同品种的桑叶中DNJ含量不同,本研究的15个样品中青阳青桑的DNJ含量最高,达到0.1486%,皮桑含量最低,为0.04291%。不同叶位桑叶的DNJ含量不同,第1叶位至第5叶位桑叶的DNJ含量逐渐降低,说明桑叶随着发育成熟,DNJ的含量逐渐降低。结果显示该方法快捷、稳定、灵敏、准确度高,适合桑叶中DNJ含量的检测。

反相高效液相色谱法测定发酵饮料中有机酸和维生素C的含量

研究了利用高效液相色谱分离测定发酵饮料中10种有机酸和维生素C的方法。应用反相C18柱,3%CH3OH-0.05mol/L Na2HPO4(pH2.50)缓冲溶液作为流动相,流速为1.00mL/min,柱温为30℃,检测波长为215nm时,可以较好地分离和测定发酵饮料中常见的10种有机酸和Vc。方法相对标准偏差0.048%～4.416%,回收率98.6%～101.9%,各成分的线性相关系数r>0.99,方法简便,具有较高的准确度和精确度,可应用于发酵饮料中有机酸和Vc的检测。