E2F-1基因反转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞MGC-803增殖的影响

目的:通过构建人同源基因E2F-1反转录病毒表达载体,观察E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖的影响。方法:应用基因重组技术将E2F-1基因克隆到反转录病毒载体pLXSN中,并将经酶切和RT-PCR检测正确的重组载体转染PA317包装细胞,收集病毒上清液感染胃癌细胞MGC-803。应用RT-PCR和Western印迹法检测MGC-803/pLXSN-E2F-1细胞中E2F-1 mRNA和蛋白的表达情况。应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况。结果:经酶切和RT-PCR检测结果显示,成功构建E2F-1反转录病毒表达载体。与MGC-803和MGC-803/pLXSN组相比,MGC-803/pLXSN-E2F-1组E2F-1mRNA和蛋白的表达明显上调(P<0.05)。MGC-803/pLXSN-E2F-1组的克隆形成率为48%,明显低于MGC-803组的81%和MGC-803/pLXSN组的77%,差异有统计学意义(P<0.01)。MGC-803/pLXSN-E2F-1组的细胞增殖率明显慢于MGC-803组和MGC-803/pLXSN组(P<0.01)。结论:成功构建了E2F-1基因过表达的反转录病毒表达载体,并将其成功感染MGC-803细胞,E2F-1过表达可抑制MGC-803细胞的增殖。

反转录病毒介导的HPV16 E6-siRNA对SiHa细胞增殖及抗药性的影响

目的:探讨反转录病毒介导的靶向人乳头瘤病毒(human papillom avirus,HPV)16E6基因的小干扰RNA(small inter-fering RNA,siRNA)对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的影响。方法:收集产反转录病毒PA317细胞的病毒上清液感染SiHa细胞,G418筛选获得HPV16E6基因稳定沉默的细胞克隆(SiHa/16E6),同时设立载体对照(SiHa/pSUPER)和正常细胞对照(SiHa)。RT-PCR检测HPV16E6和E7mRNA的表达水平,Western印迹法检测p53、Rb、caspase3及其底物多聚ADP-核糖聚合酶(polyADP-ribose polymerase,PARP)蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖活性及细胞对顺铂的敏感性。结果:感染后与SiHa细胞对照组相比,各时间点的E6和E7mRNA表达水平均有所下降,p53和Rb蛋白表达水平增高,caspase-3和PARP剪切后的活性条带增加,感染后40d细胞的增殖活性下降;在同一药物浓度下,感染后20d的细胞存活率显著降低,顺铂的IC50值为(3.92±2.48)μg/mL。而SiHa/pSUPER组与SiHa细胞对照组相比,差异无统计学意义。结论:反转录病毒介导的HPV16E6-siRNA可有效沉默SiHa细胞中E6和E7基因的表达,抑制细胞增殖,并提高细胞对顺铂的敏感性。

马传染性贫血病毒编码一个新转录后调控因子Grev

马传染性贫血病毒(EIAV)是反转录病毒科慢病毒属成员,它与人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)等其他慢病毒属成员在病毒形态、复制分子机制、生活周期和宿主相互作用等方面具有高度相似性。我国科学家在上世纪70年代研制了EIAV弱毒疫苗,该疫苗是唯一成功大规模应用的慢病毒弱毒疫苗。因此,EIAV是研究慢病毒复制机制和免疫应答机理的重要模式病毒。病毒的基因组结构组成是决定其生物学特性的基础。

应用RTPCR技术检测禽白血病病毒及其在不同组织中检出结果的比较

用禽成髓性白血病病毒 (AMV)感染SPF鸡 ,从不同部位组织中提取病毒总RNA ,根据已发表AMVBAI A株序列设计一对特异引物 ,利用RT -PCR反应扩增AMV群特异性抗原p2 7基因片断。检测结果表明 ,在肝脏、肿瘤、血液及羽髓所取病料中 ,以羽髓组织提取的RNA所作RT -PCR最易出现目的条带 ,且特异性强、敏感性高 ,可以作为检测AMV感染的首选部位 。

马传染性贫血病毒囊膜基因的研究进展

马传染性贫血病毒是反转录病毒科慢病毒属的成员之一 ,不仅与人免疫缺陷病毒具有序列同源性 ,而且与其血清具有交叉反应。马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗是迄今为止唯一研究成功的慢病毒疫苗。在马传贫病毒囊膜基因的研究中有助于弄清其抗原变异、持续感染和疫苗免疫机理 ,为艾滋病疫苗的研究提供借鉴。对囊膜基因的结构、变异及其在机体免疫应答中的作用进行了讨论。

疑似山羊病毒性关节炎-脑炎脑脊髓炎型的诊断

山羊关节炎-脑炎（Caprine Arthritis Encephalitis，CAE）是由反转录病毒科、慢病毒属山羊关节炎脑炎病毒（CAEV）引起的山羊的慢性传染病。临床以出现慢性持续性病症为特征的急性脑脊髓炎，成年羊的关节炎、乳腺炎、慢性进行性肺炎和脑炎等。该病最早出现在瑞士，后来在美国、加拿大、英国、法国、意大利、德国、瑞典、瑞士、澳大利亚和新西兰等国家均有流行，现在该病呈世界性流行。我国在1987年发现此病，认为是由于当时从英国进口了患病的萨能奶山羊而引起的。

马传贫病毒主要基因变异研究进展

马传贫病毒是反转录病毒科慢病毒属的成员之一,它在体内要通过反转录酶的作用合成 DNA,整合到宿主的基因组中进行复制,由于反转录酶没有校正功能,使病毒在体内复制过程中 错误拷贝RNA基因组,导致高频率的遗传变异。近年国内外学者对EIAV的研究发现变异的基 因主要集中在env、gag、LTR和S2等区域,这些区域基因的变异与病毒的毒力、病毒在体内的复制 水平及免疫原性密切相关。由于EIAV是慢病毒中最简单的病毒,它具有独特的发病进程和明显 的病程分界,使其成为研究包括HIV 内其它慢病毒基因变异与临床症状之间相互关系的理想 动物模型。因此对EIAV基因变异情况的研究具有重要意义。

Jem brana病毒LTR及细胞因子AP-4调控机制的研究

Jembrana病毒 ( Jembrana disease virus,JDV)是一种新近分离到的病毒 ,在分类学上属于反转录病毒科牛慢病毒属 ,与牛免疫缺陷病毒 ( Bovine immunodeficiency virus,BIV)亲缘关系很近 .序列分析显示在 JDV LTR中存在许多潜在的转录因子如 NF-κB、SP-1、核心增强子和 AP-4 ( activatorprotein 4 )的应答元件 ,R区含有反式激活因子 Tat( transactivator of transcription)的应答元件 ( transactivation responese element,TAR) ,暗示有多个转录因子协同参与 JDV LTR的转录调控 .本研究将带有 luc报告基因的 JDV LTR系列缺失质粒分别与 JDVTat表达质粒 p RSV-JTAT共转染 BL-1 2细胞系 ,体外瞬时表达分析显示 ,当 LTR从 nt-2 36缺失到 -1 2 1时 ,基本转录活性提高了 2 .5倍 ,表明 nt-2 36到 -1 2 1间存在负调控元件 .在 He La细胞中的转染结果显示 ,细胞因子参与由 Tat诱导的反式激活作用 .而细胞转录因子 AP-4对 JDV LTR起始转录具有正、负调控作用 ,正、负调控的开关受自身蛋白产量的影响 .

马传染性贫血病毒中和抗体的研究进展

马传染性贫血病毒（Equine infectious anemia virus，EIAV）与人类免疫缺陷病毒（HIV）同属反转录病毒科、慢病毒属的重要成员，具有高度的传染性，传播迅速、广泛，直接危及动物或人类健康的特点。至今，只有我国研制成功了马传贫驴白细胞（EIAV DL）弱毒疫苗，此疫苗是经过在驴白细胞体外培养继代、培育驯化，致使对马、驴毒力明显减弱而制成的一种减毒活疫苗。通过对该疫苗的使用已有效地控制了马传贫在我国的猖獗流行。这一创新成果轰动了兽医界，并引起医学界的高度关注。

绵羊肺腺瘤病毒与绵羊肺炎支原体双重PCR检测方法的建立及应用

绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiektesheepretrovirus，JSRV）是反转录病毒科β-反转录病毒属的成员之一，是引起绵羊肺腺瘤病（ovinepulmonaryadenomato—sis，OPA）的病原。绵羊肺腺瘤病是绵羊的一种慢性、接触传染性、肺脏肿瘤性疾病。该病临床表现以患病羊潜伏期长、咳嗽、呼吸困难、伴发呼吸湿罗音、大量浆液性鼻漏、Ⅱ型肺泡上皮细胞和无纤毛细支气管上皮细胞肿瘤性增生为特征。目前，几乎所有养羊业发达的国家和地区，包括我国的新疆、内蒙古、青海等地都有该病的发生和流行，严重制约和影响着养羊业的发展。

禽白血病病毒J亚群诱导CD117^+chB6^+前体B细胞克隆无能引起机体免疫耐受

禽白血病病毒J亚群(ALV-J)属于反转录病毒科α-反转录病毒属的第10个亚群,由英国学者Payne于1991年分离于肉鸡,之后迅速向全世界传播,在1997年~1998年,ALV-J诱导的髓细胞瘤病在欧美肉种鸡群全面爆发,造成了 1/3肉种鸡的损失,有些地区甚至到了无鸡可养的地步。ALV-J垂直传播和水平传播能力均高于其它亚群,其中垂直传播是其扩散的主要途径,病毒经由卵进入子代后,可引起机体产生4种状态,即病毒阳性抗体阴性(V+A)、病毒阳性抗体阳性(V+A+)、病毒阴性抗体阳性(V+A+)和病毒阴性抗体阴性(V-A-),其中V+A-是感染鸡群的主要状态.

囊膜基因多样性组成是慢病毒疫苗免疫保护的关键因素

马传染性贫血病毒(EIAV)属反转录病毒科慢病毒属成员,主要感染马、驴和骡等马属动物。其引起马属动物呈现发热、贫血、出血、黄疸、消瘦、水肿和心脏衰弱等一系列症状的传染性疾病称为马传染性贫血(EIA),简称为马传贫。EIAV与人类免疫缺陷病毒(HIV-1)和猴免疫缺陷病毒(SIV)等慢病毒属成员在病毒基因组结构、复制分子机制、免疫机理及与宿主相互作用等方面都具有相似性。因此,EIAV被认为是研究慢病毒致病机制的重要模型病毒。

Keap1识别马传染性贫血病毒Rev蛋白并调控病毒复制的分子机制

马传染性贫血病毒(EIAV)属反转录病毒科慢病毒属成员,与人类免疫缺陷病病毒(HIV-1)等其他慢病毒属成员在基因组结构、复制分子机制、病毒形态、生活周期、免疫机理及与宿主相互作用等方面具有高度相似性。EIAV除了具有慢病毒的共性外,还有其独特之处。体现在EIAV感染的马在经历多次发热的病程后,大多数会转归为终身病毒携带的状态,且能对高致病力病毒的攻击产生一定的抵抗力。说明EIAV感染可以实现自身的免疫调控。

慢病毒与泡沫病毒分子生物学

读者对象：本书可供从事反转录病毒，特别是慢病毒和泡沫病毒研究的科技工作者及相关专业的研究生参考。 内容提要：慢病毒和泡沫病毒同属反转录病毒科。前者的某些成员，如人免疫缺陷病毒，可引发严重威胁人类健康的艾滋病；而后者，迄今尚未发现它与宿主的任何疾病相关。本书介绍了作者在慢病毒和泡沫病毒方面的部分研究成果，内容包括慢病毒基因组的结构和功能、潜伏感染机制、动物慢病毒在艾滋病防控方面的潜在价值、泡沫病毒独特的基因表达调控方式及其在进化中的重要地位等。

马传染性贫血病毒囊膜蛋白胞浆尾调控病毒复制的分子机制

马传染性贫血病毒(EIAV)属反转录病毒科慢病毒属成员,它与人类免疫缺陷病毒(HIV-1)等其他慢病毒属成员在基因组结构、病毒形态、复制分子机制、生活周期、免疫机理及与宿主相互作用等方面具有高度相似性。慢病毒囊膜蛋白(Env)与宿主细胞的受体蛋白结合介导病毒侵入靶细胞,是病毒感染的关键因素。Env前体蛋白在内质网合成,之后转运到高尔基体被细胞蛋白酶(Furin)切割为表面蛋白SU和跨膜蛋白TM,二者以非共价键相连组成Env复合体,参与病毒粒子的组装,并包裹于病毒粒子的表面。不同慢病毒的TM氨基酸差异很大。

鸡白血病致病机理及其危害

鸡白血病主要是指由反转录病毒科禽反转录病毒属的鸡白血病病毒（ALN）引起的鸡的各种可传播的良性和恶性肿瘤。本病可经由母鸡向后代传播，也可通过直接或问接接触在鸡与鸡之间水平传播。

2009年湖北省禽白血病的流行特点

禽白血病（Avian Leukosis，AL）是由反转录病毒科甲型反转录病毒属禽反转录病毒（Avian Leukosi Svirus，ALV）引起的以禽类造血组织中某些细胞成分增生为主的各种可传染的肿瘤疾病、免疫抑制病。根据病毒中和试验宿主范围和囊膜糖蛋白的特性，禽白血病／肉瘤群病毒划分为A-J10个亚群，

河北省蛋鸡群ALV p27抗原ELISA检测

禽白血病（Avian Leukusis,AL）是由反转录病毒科禽白血病/肉瘤病毒群病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称,可引起感染鸡免疫抑制和多组织器官发育迟缓、萎缩以及肿瘤等,造成鸡的生产性能下降甚至死亡,由鸡分离的ALV划分为A、B、C、D、E、J六个亚群。自2002年蛋鸡群发现禽白血病以来,全国各地频发,特别是自2009年以来,湖北、山东等地鸡白血病疑似病例频发,鸡群ALV的感染率高达60%,病死率高达50%以上[1]。