基于TNF-α/NF-κB通路探讨四君子汤对快速衰老型小鼠海马神经元炎症因子调节自噬蛋白的作用机制研究

目的 探讨四君子汤(Sijunzi decoction,SJZD)对快速衰老型(senescence-accelerated mouse prone 8,SAMP8)小鼠海马组织炎症因子、自噬蛋白表达的影响及作用机制。方法 将SAMR1小鼠作为对照组、32只SAMP8小鼠分为模型组、多奈哌齐组(Donepezil)、SJZD低、高剂量治疗组。采用Y字迷宫实验检测小鼠记忆功能的变化;免疫组化法检测NF-κB蛋白表达变化;ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量;Western blot法检测海马组织Aβ蛋白、caspse-1、beclin-1、LC3-II蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠总进臂次数减少、交替次数减少,TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高,Aβ蛋白、caspse-1蛋白表达上调,beclin-1蛋白及LC3-II蛋白表达下调;Donepezil与模型组比较,总进臂次数增加,交替次数增加,IL-6含量减少,Aβ蛋白表达下调。SJZD低剂量组和高剂量组,与模型组比较,总进臂次数增加,交替次数增加;TNF-α、IL-1β、IL-6、Aβ蛋白、caspase-1含量降低;beclin-1、LC3-II蛋白表达上调。结论 四君子汤治疗阿尔茨海默病可能与纠正中枢海马相关炎症因子及自噬功能失调有关。

肠内营养联合四君子汤对消化道肿瘤术后临床疗效的Meta分析

目的:系统评价肠内营养联合四君子汤对消化道肿瘤术后的临床疗效及其安全性。方法:通过计算机检索相关外文电子数据库:Cochrane图书馆、PubMed数据库和EMbase数据库,以及国内中文数据库:中国生物医学文献数据库、中国知网、重庆维普科技数据库和万方数据等,并手工检索无电子版的杂志增刊和会议论文来收集文献。筛选并纳入肠内营养联合四君子汤用于消化道肿瘤术后的临床随机对照试验,文献语种限定为中文或者英文,所有检索时间范围为各数据库建库至2022年10月1日。由两名研究人员各自独立对文献资料的各项数据进行提取,并完成对文献资料的方法学质量评价和结果分析,采用RevMan5.2.3软件进行Meta分析。结果:本次研究共纳入13个临床随机对照试验研究,研究质量均不高。Meta分析结果显示肠内营养联合四君子汤在改善消化道肿瘤术后患者的细胞免疫指标、体液免疫指标、营养指标均高于单独使用肠内营养治疗(P <0.05),而不良反应发生率的差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:由于纳入文献篇目较少,文献质量不统一,且原始文献均为中文文献,当前的证据还不能确认该治疗方式在临床实践中是否完全有效,但是从目前的研究来看,其疗效优势值得进一步探究,尤其需要进行高质量的多中心大样本随机双盲对照试验来验证其疗效。

四君子汤调控AMPK-SIRT1蛋白改善运动性疲劳小鼠学习记忆的机制研究

目的:观察四君子汤对运动性疲劳(EF)小鼠AMPK/SIRT1信号通路的影响,并探讨其改善EF认知损伤和学习记忆能力的机制。方法:将60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、四君子汤高剂量组、四君子汤中剂量组、四君子汤低剂量组。除空白组外,其他各组小鼠构建脾气虚证EF小鼠模型。四君子汤高、中、低剂量组小鼠分别给予不同浓度的四君子汤灌胃,空白组和模型组以等体积蒸馏水灌胃,各组连续灌胃4周。采用Morris水迷宫实验评估小鼠的认知功能,采用ELISA法检测小鼠血清中乳酸、血糖、肝糖原、肌糖原的水平,Western Blot法检测小鼠脑组织中AMPK和SIRT1的蛋白表达量。结果:实验后,模型组小鼠体质量、摄食量、血糖、肝糖原含量、肌糖原含量、目标象限游泳时间、穿越平台次数、AMPK蛋白表达量、SIRT1蛋白表达量低于空白组,血清乳酸水平高于空白组(P<0.05)。给药干预后,四君子汤高、中、低剂量组小鼠体质量、摄食量、力竭游泳时间、肝糖原含量、肌糖原含量、目标象限游泳时间、穿越平台次数高于模型组,血清乳酸水平低于模型组(P<0.05)。四君子汤高剂量小鼠游泳力竭时间高于低剂量组,乳酸水平低于低剂量组(P<0.05)。四君子汤高、中剂量组肝糖原、肌糖原含量高于低剂量组(P<0.05)。与模型组比较,四君子汤高、中剂量组AMPK及SIRT1蛋白表达量增多(P<0.05),四君子汤低剂量组SIRT1蛋白表达量增多(P<0.05)。与四君子汤低剂量组比较,四君子汤高、中剂量组AMPK及SIRT1蛋白表达量增多(P<0.05)。结论:四君子汤可在一定程度调控AMPK/SIRT1的活性,进而改善EF小鼠脾虚症状。

四君子汤联合替吉奥治疗晚期胃癌患者的临床疗效及安全性分析

目的观察四君子汤联合替吉奥治疗晚期胃癌患者的临床疗效及安全性。方法选取2021年1月—2022年12月在云南省中医医院接受诊治的86例胃癌晚期患者作为研究对象,根据治疗方法不同将其分为对照组和观察组,每组43例。对照组口服替吉奥胶囊治疗,观察组采用替吉奥胶囊联合四君子汤治疗。观察两组的疗效、治疗前后中医证候评分、免疫功能情况以及治疗期间不良反应发生率。结果观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的中医证候评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的免疫功能指标优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组总不良反应发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论四君子汤联合替吉奥治疗晚期胃癌,能有效提升治疗效果,增强免疫功能,改善临床症状且安全性较高。

四君子汤调节氧化三甲胺改善慢性心力衰竭大鼠心肌能量代谢重构

目的:探讨四君子汤通过调节氧化三甲胺(trimetlylamine oxide,TMAO)对心力衰竭大鼠心肌能量代谢的影响。方法:70只清洁级健康雄性SD大鼠,适应性饲养3 d后,随机选取8只作为正常组,其余大鼠采用左冠状动脉前降支结扎术制备急性心肌梗死动物模型。采用随机数字表法将造模成功的24只大鼠分为模型组、四君子汤低剂量组(2.97 g·kg^(-1))、四君子汤高剂量组(11.88 g·kg^(-1)),每组各8只,连续灌胃给药4周,给药体积为10 mL·kg^(-1),正常组和模型组大鼠给予等体积的生理盐水。采用超声心动图测定各组大鼠左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)、左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVDd)、左心室收缩末期内径(left ventricular end systolic diamete,LVDs)、左心室后壁舒张末期厚度(left ventricular posterior wall at end-diastole,LVPWd)、左心室后壁收缩末期厚度(left ventricular posterior wall at end-systolic,LVPWs);ELISA法检测血清N末端B型利钠肽前体(N-terminal pro-B type natriuretic peptide,NT-proBNP)的水平;使用比色法检测血清丙酮酸(pyruvic acid,PA)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)水平;RT-PCR检测心肌组织CPT-1 mRNA、PDH mRNA的表达情况;采用稳定同位素稀释液相色谱-串联质谱法检测大鼠血清中TMAO的含量及心肌组织中ATP的水平;HE染色和透射电镜观察各组大鼠心肌组织结构变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠LVDs、LVDd显著升高(P<0.01),LVEF和LVFS明显降低(P<0.01);血清PA、FFA、NT-proBNP及TMAO含量明显升高(P<0.01);大鼠心肌组织CPT-1 mRNA、PDH mRNA水平明显降低(P<0.05),ATP水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,四君子汤各剂量组大鼠LVEF、LVFS明显升高(P<0.01);血清FFA及TMAO含量均明显降低(P<0.01);心肌组织大鼠PDH mRNA水平明显升高(P<0.05),ATP水平明显升高(P<0.01)。HE染色和透射电镜发现,四君子汤可明显改善心力衰竭大鼠心肌组织结构紊乱。结论:四君子汤可调节肠道菌群代谢产物TMAO的水平,从而改善心肌线粒体能量代谢,抑制心室重塑及心力衰竭的进展。

四逆散合四君子汤治疗肝胃气滞型胃脘痛患者的临床效果

目的:分析四逆散合四君子汤治疗肝胃气滞型胃脘痛患者的临床效果。方法:选取2022年1月—2023年12月南京中医药大学附属苏州市中医医院收治的94例肝胃气滞型胃脘痛患者,采用随机数字表法随机将其分为观察组和对照组两组,每组47例。对照组采用常规西医治疗,观察组采用四逆散合四君子汤治疗。比较两组临床疗效、胃肠激素、血清学指标和不良反应。结果:治疗后,观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组胃肠激素和血清学指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组胃肠激素及表皮生长因子(EGF)水平均高于治疗前,转化生长因子-β1(TGF-β1)水平均低于治疗前;观察组胃肠激素和EGF水平高于对照组,TGF-β1水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,观察组不良反应总发生率低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:四逆散合四君子汤治疗肝胃气滞型胃脘痛患者效果显著,可有效改善患者临床症状,调节患者胃肠激素和血清学指标,且安全性较好。

脾虚证功能性消化不良十二指肠黏膜下神经节损伤及四君子汤对其干预的研究

目的研究脾虚证功能性消化不良(Functional dyspepsia,FD)十二指肠黏膜下神经节损伤表现及四君子汤对其干预的情况。方法36只SD大鼠随机分为空白组、模型组和四君子汤低、中、高剂量组、西药组,每组6只。除空白组外,其他组均采用碘乙酰胺灌胃+站小平台法+隔日禁食法建立脾虚气滞证FD大鼠模型。四君子汤各剂量组分别给予相应剂量四君子汤灌胃,西药组给予枸橼酸莫沙必利灌胃,空白组和模型组灌胃等量生理盐水。比较6组大鼠造模前后、治疗前后体质量变化情况,治疗后的胃排空率、十二指肠黏膜下神经节细胞结构形态与数量。结果造模后,其他5组大鼠的体质量增加均少于空白组(均P<0.05);药物治疗后,四君子汤中、高剂量组和西药组大鼠的体质量增加均大于模型组(均P<0.05)。模型组的胃排空率低于空白组,而四君子汤各剂量组和西药组大鼠的胃排空率均高于模型组(均P<0.05)。模型组的十二指肠黏膜下神经元细胞数量低于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);四君子汤中、高剂量组和西药组的十二指肠黏膜下神经元细胞数量均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论十二指肠黏膜下神经节损伤是FD脾虚证的重要体现,四君子汤可修复十二指肠黏膜下神经节损伤情况,促进脾虚证FD大鼠胃排空及体质量增长,四君子汤治疗脾虚滞证FD疗效确切,其机制可能与十二指肠黏膜下神经节有关。

基于网络药理学探讨寿胎四君子汤调控子宫蠕动波的作用机制

目的采用网络药理学及分子对接技术探讨寿胎四君子汤调控子宫蠕动波潜在作用靶点和作用机制。方法根据中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中药综合数据库(TCMID)筛选寿胎四君子汤的药物活性成分及作用靶点,同时利用Gencards和Drug Bank数据库挖掘子宫蠕动波相关靶点,取交集后,得到寿胎四君子汤调控异常子宫内膜蠕动波的潜在作用靶点。利用STRING平台构建潜在作用靶点蛋白相互作用网络,应用Cytoscape软件构建“药物-活性成分-交集靶点-疾病”网络。采用“cluster Profiler”包进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用Py MOL和Au To Dock软件对核心作用靶点和活性成分单体进行分子对接验证。结果检索出寿胎四君子汤594个靶点,子宫蠕动波相关靶点90个,得到交集靶点共33个。山柰酚、β-谷甾醇、槲皮素、异鼠李素和7-甲氧基-2-甲基异黄酮为寿胎四君子的主要活性成分单体,内皮型一氧化氮合酶(NOS3)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、前列腺素合成酶2(PTGS2)、胱天蛋白酶3(CASP3)和前列腺素合成酶1(PTGS1)为核心作用靶点。KEGG通路主要富集在神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、5-羟色胺能突触、肾素分泌、瞬时受体电位(TRP)通道的炎症介质调节、环磷酸鸟苷酸-蛋白激酶G(c GMP-PKG)信号通路和松弛素信号通路等。分子对接显示山柰酚、β-谷甾醇、槲皮素、异鼠李素和7-甲氧基-2-甲基异黄酮均能与核心作用靶点稳定结合。结论寿胎四君子汤可能靶向NOS3、TRPV1、PTGS2、CASP3和PTGS1等核心基因,调控神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、5-羟色胺能突触、肾素分泌、TRP通道的炎症介质调节、c GMP-PKG信号通路和松弛素信号等通路,发挥调控子宫蠕动波的作用。

四君子汤加减对慢性胃炎脾胃虚弱证患者中医证候积分和胃肠功能的影响

目的研究四君子汤加减治疗对慢性胃炎脾胃虚弱证患者中医证候积分、炎症因子、胃肠功能及不良反应的影响。方法选取郑州人民医院2021年7月至2023年7月收治的90例慢性胃炎脾胃虚弱证患者,以随机数字表法分为两组。对照组(45例)患者应用常规西药(奥美拉唑)治疗,观察组(45例)患者在此基础上口服四君子汤加减治疗,两组均治疗2周。比较两组患者治疗前后中医证候积分、血清炎症因子水平、胃肠功能指标,以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后两组患者各项中医证候(胃脘痛、反酸呕吐、上腹不适)积分及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)水平较治疗前均降低,且观察组较对照组更低;两组患者血清胃动素(MOT)、胃蛋白酶原I(PGI)、胃泌素(GAS)水平较治疗前均升高,且观察组均较对照组更高(均P<0.05);观察组不良反应总发生率低于对照组,但经比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性胃炎脾胃虚弱证患者采用四君子汤加减治疗可改善患者临床症状和胃肠功能,缓解机体炎症反应,且不良反应较少,安全性良好。

防己黄芪汤合四君子汤辅助常规西药治疗肝硬化腹水临床研究

目的:观察防己黄芪汤合四君子汤辅助常规西药治疗肝硬化腹水的临床疗效。方法:将104例肝硬化腹水患者以随机数字表法分为研究组与对照组各52例,2组均给予常规西药治疗,研究组在此基础上给予防己黄芪汤合四君子汤治疗。比较2组临床疗效、临床指标、肝功能及肝纤维化指标。结果:治疗后,研究组总有效率92.31%,高于对照组76.92%(P<0.05)。治疗后,2组24 h尿量均增多(P<0.05),且研究组多于对照组(P<0.05);2组腹围、体质量及腹水深度均减小(P<0.05),且研究组小于对照组(P<0.05)。治疗后,2组谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBil)水平均降低(P<0.05),且研究组低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)及Ⅲ型胶原(PCⅢ)水平均降低(P<0.05),且研究组低于对照组(P<0.05)。结论:防己黄芪汤合四君子汤辅助常规西药治疗肝硬化腹水临床疗效显著,可增加24 h尿量,降低腹围、体质量及腹水深度,改善患者肝功能及肝纤维化程度。

四君子汤治疗脾虚型慢性疲劳综合征临床研究

目的:观察四君子汤治疗脾虚型慢性疲劳综合征的临床疗效。方法:选取脾虚型慢性疲劳综合征患者72例作为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和试验组各36例。2组均提供健康宣教,试验组采用四君子汤颗粒剂治疗,对照组给予安慰剂颗粒干预。比较2组临床疗效和安全性,以及治疗前后疲劳症状评分、中医证候评分、疲劳度[Chalder疲劳问卷评分表(Chalder)]评分、SF-36健康调查量表中文版(SF-36)评分、五水平五维健康量表(EQ-5D-5L)评分及血清氧化应激指标[皮质醇稳定蛋白(CORT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]水平。结果:治疗后,试验组总有效率为94.44%,对照组为77.78%,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗1、2个月后,2组睡眠障碍、紧张焦虑和记忆力减退等疲劳症状评分均较治疗前降低(P<0.05),且试验组3项评分在相同时间点均低于对照组(P<0.05)。治疗1、2个月后,2组中医证候评分、Chalder评分均较治疗前降低(P<0.05),且试验组中医证候评分、Chalder评分在相同时间点均低于对照组(P<0.05)。治疗1、2个月后,2组SF-36、EQ-VAS评分评分均较治疗前升高(P<0.05);且试验组2项评分在相同时间点均高于对照组(P<0.05)。治疗1、2个月后,2组血清中CORT、SOD及GSH-PX水平均较治疗前升高(P<0.05),MDA水平均较治疗前降低(P<0.05),且试验组CORT、SOD及GSH-PX水平在相同时间点均高于对照组(P<0.05),MDA水平在相同时间点低于对照组(P<0.05)。结论:四君子汤治疗脾虚型慢性疲劳综合征疗效显著,可改善脾虚症状,提高患者生活质量,改善氧化应激反应,且安全性较好。

四君子汤对糖尿病引起记忆损伤小鼠的神经保护作用

目的 探究四君子汤对1型糖尿病引起认知损伤小鼠的神经保护作用。方法 ICR小鼠腹腔注射STZ,4周后通过Morris水迷宫实验筛选记忆损伤小鼠。记忆损伤小鼠随机分为模型组、雷帕霉素组和四君子汤低、中、高剂量组(1.56、3.12、6.24 g/kg),检测血糖和体质量,给药6周后检测糖耐量,ELISA法检测血清胰岛素水平,Morris水迷宫实验检测学习记忆能力,条件恐惧实验检测恐惧记忆消退能力,HE染色和尼氏染色观察脑组织病理变化,试剂盒检测海马组织SOD活性和MDA水平,Western blot法检测海马组织p-AMPK、p-mTOR、NR^(2)A、NR^(2)B、NR1、Shank 3、PSD 95蛋白表达。结果 腹腔注射STZ能诱导小鼠出现认知功能障碍。与模型组比较,四君子汤能降低糖尿病小鼠血糖,改善认知功能障碍,减轻海马组织神经元细胞损伤,抑制氧化应激反应,上调海马组织中p-AMPK、Shank 3、PSD 95、NR^(2)A、NR^(2)B、NR1蛋白表达,下调p-mTOR蛋白表达。结论 四君子汤能提高糖尿病小鼠胰岛素敏感性,改善糖尿病引起的认知功能障碍,减轻神经元细胞损伤,其机制可能与通过AMPK/mTOR信号通路调控突触蛋白表达、保护海马突触稳态、改善突触功能有关。

经典名方四君子汤古今临床应用衍变分析

【目的】比较补气经典名方四君子汤在古今文献中临床应用的异同,为其临床应用和研究开发提供借鉴。【方法】基于《中华医典》分析四君子汤的古代临床应用,基于中国知网数据库分析四君子汤的现代临床应用。【结果】古籍记载的四君子汤主治病症的病机以“荣卫气虚,脏腑怯弱”为特点,主治病症涉及内科、外科、妇科、儿科等各科疾病,主要适用于痢疾、虚劳、泄泻、黄疸、痘疹、崩漏、痈疽等疾病的治疗,还可用于久病虚弱、年高及气弱者或伤寒、霍乱、疟疾等疾病后期的调理。四君子汤的现代临床运用涉及消化系统疾病、外科疾病、肿瘤相关疾病、儿科疾病、妇科疾病、呼吸系统疾病、肝胆系统疾病等,主要适用于慢性胃炎、肿瘤放化疗相关不良反应、癌症术后、妊娠期糖尿病等。【结论】古今文献中四君子汤应用从古代文献以脾胃系疾病为主(消化系统疾病)已拓展至现代临床的外科疾病、肿瘤相关疾病、儿科疾病、妇科疾病、呼吸系统疾病、肝胆系统疾病等多个系统的病症,其适用病症的病机以“荣卫气虚,脏腑怯弱”为特点。

四君子汤对丝裂霉素C诱导免疫毒性的减毒作用研究

目的探究四君子汤(SJZD)对丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)诱导的免疫毒性的减毒作用.方法体外分离培养小鼠脾淋巴细胞,并采用刀豆蛋白A(ConA)刺激细胞增殖,选用系列浓度的MMC、SJZD以及两药联用分别与脾淋巴细胞共培养,采用MTT法检测不同药物对细胞活力的影响,采用ELISA法检测不同药物对脾淋巴细胞培养基上清液的细胞因子白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)水平的影响.结果培养24和48 h后,MMC组与对照组(CON)相比细胞活力均显著下降,且48 h下降更明显(∗P<0.05,∗∗P<0.01);培养24 h后,SJZD组在25~200μg·mL^(-1)内与CON组相比可促进细胞生长,100μg·mL^(-1)时细胞活力显著上升(∗P<0.05),在质量浓度400~800μg·mL^(-1)内抑制细胞生长,SJZD(25~800μg·mL^(-1))联用MMC组与MMC组相比细胞活力上升;培养48 h后,SJZD组在25~200μg·mL^(-1)内与CON组相比可促进细胞生长,100~200μg·mL^(-1)时细胞活力显著上升(∗P<0.05),在质量浓度400~800μg·mL^(-1)内抑制细胞生长,COM组与MMC组相比细胞活力上升,其中100~200μg·mL^(-1)内显著上升(#P<0.05);MMC组IL-2和IFN-γ水平与CON组相比显著下降,SJZD(100、200μg·mL^(-1))组与CON组相比显著上升(∗P<0.05,∗∗P<0.01),COM组与MMC组相比IL-2和IFN-γ水平显著上升(#P<0.05,##P<0.01).结论SJZD对免疫细胞的生长及细胞因子(IL-2和IFN-γ)的分泌具有很好的促进作用,可以在一定程度减弱MMC对脾淋巴细胞的毒性以及对细胞分泌IL-2和IFN-γ的抑制作用.

四君子汤调节铁死亡增强小鼠三阴性乳腺癌免疫治疗效果实验研究

目的探讨四君子汤对抗PD-1免疫治疗小鼠三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)的疗效及作用机制。方法建立TNBC移植瘤小鼠模型,将小鼠随机分为4T1组(模型组)、四君子汤组、抗PD-1治疗组、四君子汤联合抗PD-1治疗组,每组6只。四君子汤组小鼠按实验动物与人体表面积比换算给予4.85 g/(kg·d)四君子汤灌胃(每周5次),抗PD-1治疗组给予80μg/只抗PD-1抗体腹腔注射(每周2次),四君子汤联合抗PD-1治疗组则分别给予上述治疗,4T1组则灌胃等体积的0.9%氯化钠溶液(每周5次);连续干预3周。比较各组肿瘤体积大小,通过生存分析比较各组小鼠生存时间。采用C11-BODIPY染色法进行脂质过氧化评估各组小鼠肿瘤细胞脂质过氧化水平,并通过测量丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量确认;采用7-氨基放线菌素D(7-aminoactinomycin D,7-AAD)染色法检测细胞死亡比例;采用实时定量PCR检测铁死亡相关基因表达。并进一步通过体外实验分析四君子汤有效成分(人参皂苷Rb1)对4T1癌细胞脂质过氧化和铁死亡的影响。结果与抗PD-1治疗组相比,四君子汤联合抗PD-1治疗组小鼠肿瘤体积明显缩小(P<0.01),四君子汤联合抗PD-1治疗组中位生存期明显延长(34 d vs.25 d,P<0.05)。与抗PD-1治疗组相比,四君子汤联合抗PD-1治疗组脂质过氧化平均荧光强度明显升高(P<0.05),肿瘤细胞中的MDA含量、癌细胞死亡率均明显升高(P均<0.01)。四君子汤组(与4T1组相比)和四君子汤联合抗PD-1治疗组(与抗PD-1治疗组相比)铁死亡抑制基因NRF2、GPX4、SLC7A11表达水平显著降低(P均<0.05),但铁死亡促进基因TFRC组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。细胞实验结果显示:与4T1细胞空白对照组相比,人参皂苷Rb1单体对乳腺癌细胞脂质过氧化平均荧光强度的作用差异无统计学意义(P>0.05)。人参皂苷Rb1单体联合IFN-γ对乳腺癌细胞脂质过氧化平均荧光强度的作用明显高于单用IFN-γ(P<0.05)。人参皂苷Rb1干预下4T1癌细胞铁死亡抑制基因NRF2、GPX4、SLC7A11表达水平显著降低(P均<0.05)。结论四君子汤单独应用未见对小鼠TNBC有明显治疗效果,但可增强抗PD-1抗体免疫治疗小鼠TNBC的效果,其机制可能与四君子汤降低癌细胞铁死亡抑制基因表达有关。

基于网络药理学及实验验证探讨四君子汤抑制慢性结直肠炎腺瘤发生的作用机制

目的通过网络药理学预测并利用动物实验验证四君子汤的核心靶点,探究四君子汤抑制慢性结直肠炎腺瘤发生的作用机制。方法基于TCMSP、GeneCards及OMIM数据库,筛选四君子汤活性成分潜在靶标以及疾病与免疫相关基因靶点,构建四君子汤活性成分潜在靶标调控网络,通过通路富集和蛋白互作网络分析相关通路和核心靶点,探究四君子汤抑制肠道疾病的潜在作用靶点。通过对DSS诱导的慢性结直肠炎小鼠模型进行四君子汤干预,观察各组小鼠肠道表型及病理染色的变化,证实四君子汤对慢性结直肠炎小鼠的保护作用。最后,通过qRT-PCR及Western blot验证了基于网络药理学预测的与四君子汤相关的核心靶点的转录水平和蛋白的表达水平,进一步验证四君子汤抑制慢性结直肠炎小鼠腺瘤发生的作用机制。结果网络药理学分析表明,四君子汤与炎症、免疫和肿瘤相关通路有关,并筛选预测出15个相关的核心靶点。四君子汤干预DSS慢性结直肠炎模型小鼠后,减缓了结直肠的炎症反应,对肠道肿瘤的数量和大小均有显著改善。qRT-PCR和Western blot则进一步验证了四君子汤的作用机制与网络药理学预测的核心靶点EGFR、MAPK8和CASP3有关。结论四君子汤能够抑制EGFR、MAPK8和CASP3的表达水平,抑制慢性结直肠炎腺瘤发生,为进一步深入探究四君子汤抑制慢性结直肠炎腺瘤发生的作用机制提供了新思路。

基于中医圆运动理论探讨四君子汤加减治疗2型糖尿病

中医圆运动理论提出人体秉承阴阳圆运动之大气而生,人之五行土居中、木火金水居四维,以中气为轴,四维如轮。轴轮运行、轮运轴行为核心阐述了人体复杂的生理病理基础,并为2型糖尿病的中医治疗及临床遣方用药提供新思路。

基于网络药理学、微阵列数据分析和分子对接探究四君子汤治疗缺血性心力衰竭的作用机制

目的:通过网络药理学、微阵列数据分析和分子对接探讨四君子汤治疗缺血性心力衰竭的作用机制。方法:采用R软件对GEO数据库中下载的缺血性心力衰竭(HF)的微阵列数据进行分析;借助中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)数据库获取四君子汤中4味中药的化学成分和作用靶点,利用网络药理学的方法获取四君子汤有效成分与心力衰竭的匹配靶点;通过Cytoscape(v 3.2.1)软件和STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络;在R软件上使用clusterProfiler(v3.8)和DOSE(v3.6)软件包进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。最后,借助AutoDockTool、PyMOL软件进行预处理及分子对接。结果:通过对微阵列数据的分析,获得关于心力衰竭的371个差异表达基因(DEGs)。共筛选出四君子汤有效成分136种,活性成分所涉及的相关靶点4 134个,对9个匹配靶点和5个重要化学成分进行后续分析,构建了“四君子汤-心力衰竭”PPI网络。通过GO生物过程、KEGG富集分析,得到细胞对酸性化学物质的反应、有机羟基化合物转运、轴突再生、神经元投影再生、内质网腔、胶原三聚体、蛋白结合和局灶性黏附途径等重要生物学过程。分子对接显示核心成分柚皮素与核心靶点载脂蛋白B(APOB)、补体C1q结合蛋白(C1QB)对接良好。结论:四君子汤治疗缺血性心力衰竭的机制可能是多靶点、多途径的直接或间接作用,为后续的四君子汤药理机制研究提供了生物学依据。

基于网络药理学和分子对接分析古方四君子汤辅助治疗胃癌的作用机制

目的:运用网络药理学分析四君子汤辅助治疗胃癌的作用机制,并进行分子对接验证。方法:通过中药系统药理学数据库和分析平台提取四君子汤中各药物化学成分及相关靶点,并利用常用疾病数据库筛选出胃癌靶点,绘制药物-疾病共同靶点的韦恩图。再用Cytoscape软件构建药物-疾病调控网络,在STRING数据库中构建药物-疾病共同靶点的蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction,PPI),在Metascape数据库进行基因本体(gene ontology,GO)生物过程富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。通过分子对接验证前期所得的关键药物化学成分与核心靶点的结合可能性。结果:得到四君子汤135个药物化学成分,胃癌作用靶点1423个,药物-疾病共同作用靶点65个;通过药物-疾病调控网络和拓扑分析,发现药物化学成分中度值较高的为槲皮素、山柰酚、异鼠李素等;PPI网络核心靶点为MAPK8、ESR1、CCND1等;GO富集分析显示,四君子汤主要通过影响细胞RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、凋亡过程的负调控、DNA模板的转录正调控等发挥生物学和药理学的多种效应;相应的KEGG通路分析显著富集于癌症途径、p53信号通路、NF-κB信号通路等多条与胃癌密切相关的通路;分子对接验证结合性好。结论:网络药理学初步明确了四君子汤辅助治疗胃癌潜在的靶点通路机制,分子对接角度进一步验证了研究思路的正确性。

四君子汤加减辅助治疗慢性胃炎患者的效果

目的:探讨四君子汤加减辅助治疗慢性胃炎患者的效果。方法:选取2019年5月—2023年4月泰宁县中医院收治的86例慢性胃炎患者作为研究对象,以随机数表法分为常规组和中药组,每组各43例。常规组采用四联疗法治疗,中药组在其基础上加以四君子汤加减治疗。比较两组临床疗效、胃黏膜分泌功能、肠道菌群结构以及不良反应情况。结果:中药组治疗有效率高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);中药组胃泌素(GAS)、一氧化氮(NO)、胃黏膜前列腺素2(PGE2)水平均高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);中药组各菌门含量均高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);中药组恶心/呕吐发生率较常规组低,差异有统计学意义(P<0.05);其余不良反应对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在慢性胃炎患者中加以四君子汤加减辅助治疗疗效显著,能够增强患者肠道菌群丰度的调节,以促进胃黏膜分泌功能恢复,且不良反应相对较少,用药安全性较高。