两色金鸡菊提取物对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨两色金鸡菊提取物对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其作用机制。方法通过正交试验得到两色金鸡菊的最佳提取工艺,利用LC-MS分析两色金鸡菊提取物的活性成分;应用CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型,考察两色金鸡菊提取物对急性化学性肝损伤的保护作用;利用HE染色观察对肝脏组织损伤情况,考察小鼠体内ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(丙二醛)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白介素-6)及IL-1β(白介素-1β)等指标的变化情况。结果LC-MS分析结果显示,两色金鸡菊提取物中含有32种主要活性成分。动物试验结果显示,与空白组比较,模型组小鼠肝脏有明显病理性改变,两组小鼠ALT、AST、MDA、SOD、TNF-α、IL-6及IL-1β水平比较差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,两色金鸡菊给药组小鼠肝脏病理性改变及生化指标均有所改善,其中,ALT、AST、TNF-α、IL-6及IL-1β显著降低(P<0.01或P<0.05),MDA的含量显著下降(P<0.01或P<0.05),SOD的活力显著上升(P<0.01或P<0.05)。结论两色金鸡菊提取物对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,作用机制可能与其抗炎、抗氧化作用相关。

四氯化碳诱导C57BL/6J小鼠肝纤维化模型建立方法及优化

目的通过不同给药方式不同剂量四氯化碳诱导的C57BL/6J小鼠肝纤维化模型,通过影像学、分子生物学及组织病理学等方法进行比较,以此优化四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型。方法36只健康C57BL/6J雄性小鼠,适应性饲养1周后,随机分为空白组、2周组、3周组、4周组、6周组及8周组共6组(n=6),除空白组外均作为阳性对照组。空白组以橄榄油0.2 mL腹腔注射,每周3次,各阳性对照组以20%CCl4-橄榄油溶液腹腔注射,剂量为2 mL/kg,每周3次。记录各组小鼠体重变化情况。分别于第15、22、29、43及57天测量小鼠肝弹性值后取血,分别测量小鼠谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏蛋白(laminin,LN)、前Ⅲ型前胶原(pro-typeⅢcollagen,PC-Ⅲ)及Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,Ⅳ-C)含量,对肝组织进行苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)、Masson及天狼星红染色,Metavir评分系统评估肝纤维化程度。结果与空白组相比,各阳性对照组小鼠精神萎靡、扎堆喜卧。在小鼠体重方面,4周组、6周组、8周组与空白组相比均明显下降,而2周组与空白组相比体重明显升高。肝弹性超声显示,随着给药时间增加,弹性值呈进行性升高。生化结果显示,与空白组相比,各阳性对照组ALT、AST水平均显著升高,随着给药时间增加,各阳性对照组HA、LN、PC-Ⅲ及Ⅳ-C水平呈升高趋势。病理结果显示:随着给药时间增加,小鼠肝纤维化程度呈进行性加重,4周时符合肝纤维化病理诊断,6周时有假小叶形成趋势,而8周时已形成假小叶,提示早期肝硬化。结论20%CCl4-橄榄油溶液以每周3次、连续4周腹腔注射的方法能成功建立C57BL/6J小鼠肝纤维化模型,稳定性好、成模较快,可以作为肝纤维化模型制造的优化方案。

棉皮素在四氯化碳诱导的既存肝纤维化小鼠中的作用研究

目的 探讨天然类黄酮棉皮素对四氯化碳(CCl_(4))诱导的肝纤维化模型小鼠的作用。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CCl_(4)组和CCl_(4)+棉皮素组,每组6只。除对照组外,其余两组均采用20%CCl_(4)橄榄油溶液(0.75 μL/g, 2次/周,持续6周)腹腔注射,建立肝纤维化模型。CCl_(4)+棉皮素组于造模第6周开始每天腹腔注射棉皮素(10 mg/kg)进行干预,对照组与CCl_(4)组小鼠同一时间注射等体积的PBS溶液。末次给药24 h内,3组均取新鲜肝脏组织,并灌注固定制备石蜡切片;采用HE染色与Masson染色观察3组肝脏组织病理改变;免疫组化染色检测3组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase3)的表达情况;同时采用蛋白质印迹技术检测α-SMA表达情况。结果 与对照组相比,CCl_(4)组肝脏结构破坏,胶原纤维明显增生,形成纤维间隔,α-SMA、Caspase3、Cleaved Caspase3的蛋白表达水平升高(P<0.05),CCl_(4)+棉皮素组胶原纤维沉积减少,α-SMA、Caspase3的蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 天然类黄酮棉皮素可减少CCl_(4)诱导的肝纤维化模型小鼠胶原纤维沉积、肝星状细胞激活和细胞凋亡,对肝脏起保护作用。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨双术抗纤方改善四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用及机制

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨双术抗纤方(黄芪、麸炒白术、柴胡、醋莪术、丹参、荔枝核)改善四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的作用及机制。方法采用皮下注射3.0 m L·kg^(-1)质量分数为40%的CCl4复制肝纤维化大鼠模型,每周注射2次,共注射8周。将SD大鼠随机分为空白对照组(8只)、模型组(7只)、阳性对照组(7只,灌胃43.19 mg·kg^(-1)水飞蓟宾)、中药低剂量组(6只,灌胃4.3 g·kg^(-1)双术抗纤方颗粒)、中药中剂量组(6只,灌胃8.6 g·kg^(-1)双术抗纤方颗粒)、中药高剂量组(7只,灌胃17.2 g·kg^(-1)双术抗纤方颗粒);每日1次,连续灌胃给药4周,除空白对照组外,余各组在给药同时继续皮下注射CCl4。采用HE、Masson染色法观察肝脏组织病理变化;ELISA法检测血清Ⅳ型胶原(ColⅣ)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;Western Blot法检测肝脏组织Wnt1、β-catenin、PPAR-γ蛋白表达水平;q PCR法检测肝脏组织Wnt1、β-catenin、PPAR-γm RNA表达水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠肝脏出现肝细胞部分坏死,正常的肝小叶结构被破坏,肝细胞索排列紊乱,中央静脉或汇管区增大,炎症细胞大量浸润,形成桥接坏死;肝脏中央静脉或汇管区胶原纤维增生明显,形成纤维间隔,纤维化评分明显升高(P<0.05);血清ColⅣ、PCⅢ、HA、LN水平明显升高(P<0.05);肝脏组织Wnt1、β-catenin蛋白及m RNA表达水平明显升高(P<0.05),PPAR-γ蛋白及m RNA表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组以及中药中、高剂量组大鼠肝细胞脂肪变性情况有所改善,坏死、炎性细胞浸润减少;肝脏纤维化程度有所改善,肝脏胶原纤维减少,纤维化评分明显降低(P<0.05);血清ColⅣ、PCⅢ、HA、LN水平明显降低(P<0.05);肝脏组织Wnt1、β-catenin蛋白及m RNA表达水平明显降低(P<0.05),PPAR-γ蛋白及m RNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论双术抗纤方有抗CCl4诱导大鼠肝纤维化的作用,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及上调PPAR-γ表达有关。

虫草菌丝调节AMPK/SirT1信号通路对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的作用

目的研究虫草菌丝(cultured mycelium Cordyceps sinensis,CMCS)对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化模型小鼠肝腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1(AMPK/SirT1)信号通路的作用机制。方法将C57BL/6小鼠(n=40)按体重分层随机分为5组:正常对照组、CMCS对照组(3.0 g/kg)、模型对照组、CMCS 1.5 g/kg组(1.5 g/kg)和CMCS 3.0 g/kg组(3.0 g/kg),采用腹腔注射10%CCl4(2 mL/kg)诱导小鼠肝损伤模型。造模与给药2周后,检测血清ALT、AST、TBil水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝炎症;天狼星红染色观察肝胶原沉积;Jamall’s法检测肝羟脯氨酸(Hyp)含量;流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)检测肝组织IL-6、MCP-1、IFN-γ、TNF、IL-10、IL-12p70水平;免疫组化观察肝组织CollagenⅠ和SirT1表达情况;RT-qPCR检测肝组织Prkaa1、Prkaa2、Lkb1和p53水平。结果CCl4染毒2周后,模型对照组血清ALT、AST、TBil水平均明显升高(P<0.05);HE染色和天狼星红染色分别提示肝内大量炎症细胞浸润和胶原沉积;肝Hyp含量及IL-6、MCP-1、TNF表达明显增多(P<0.05),IL-10和IL-12p70表达明显减少(P<0.01);免疫组化染色提示肝组织Collagen I表达增多;SirT1在肝窦间隙表达减少,在胶原沉积处表达增多;RT-qPCR检测提示肝组织Prkaa1、Prkaa2、Lkb1表达下降,p53表达增多(P<0.05)。CMCS可显著降低纤维化小鼠血清ALT、AST水平;降低肝组织IL-6、MCP-1、TNF表达(P<0.05),上调IL-10、IL-12p70水平(P<0.05);减少肝炎细胞浸润、胶原形成和Hyp含量,促进肝窦内SirT1表达,上调肝Prkaa1、Prkaa2、Lkb1表达(P<0.05);减轻肝内CollagenⅠ、p53表达(P<0.05)。与CMCS 1.5 g/kg组相比,CMCS 3.0 g/kg组抑制肝炎症、胶原沉积及上调AMPK/SirT1表达更为明显(P<0.05)。结论CMCS可通过上调AMPK/SirT1信号通路而发挥抗CCl4诱导小鼠肝纤维化的作用。

沙利度胺对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的影响

目的探讨沙利度胺对急性肝损伤模型小鼠的影响。方法将48只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(等体积生理盐水)、模型组(等体积生理盐水)、复方甘草酸苷组(0.035 mg/g)及沙利度胺低、中、高剂量组(0.01,0.03,0.05 mg/g),各8只。腹腔注射0.6%四氯化碳(CCl_(4),0.01 mL/g)以复制急性肝损伤小鼠模型,建模前12 h及建模后12 h、24 h时均灌胃给予相应药物或生理盐水。称定肝组织质量及体质量,并计算肝指数。以苏木精-伊红(HE)染色,观察小鼠肝组织病理形态变化。检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,酶联免疫吸附试验法检测小鼠肝组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,Western blot法检测小鼠肝组织匀浆中CD68蛋白表达水平。结果与模型组比较,复方甘草酸苷组及沙利度胺中剂量组小鼠肝细胞坏死、炎性浸润程度减轻;复方甘草酸苷组及沙利度胺低、中、高剂量组小鼠肝指数及血清中ALT、AST水平显著降低(P<0.05);复方甘草酸苷组及沙利度胺中、高剂量组小鼠肝组织匀浆中TNF-α表达水平显著降低(P<0.01);复方甘草酸苷组及沙利度胺中剂量组小鼠肝组织匀浆中CD68蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论沙利度胺可显著改善CCl_(4)诱导的小鼠急性肝损伤,其作用机制可能与抑制转氨酶活性及CD68蛋白的表达有关。

乙醛不能使溴的四氯化碳溶液退色吗

综合分析近期文献中有关乙醛能否使溴的四氯化碳溶液退色的研究与表述。通过实验验证了乙醛能使溴的四氯化碳溶液退色,打破了高中教学中对于这部分知识的原有认知。通过验证反应过程中产生的气体,以及改用甲醛进行对比实验,确认了乙醛与溴之间反应的基团,并进一步探讨了其反应机理。从实验和理论两个方面证实乙醛可以使溴的四氯化碳溶液退色。

碱蓬黄酮对四氯化碳诱导的雌性小鼠肝纤维化的保护作用

目的观察碱蓬黄酮对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化防治作用。方法采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析碱蓬黄酮的组分。用四氯化碳诱导建立小鼠肝纤维化模型,通过分析小鼠血脂、肝功能、肝组织外观及病理变化,基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)及1型胶原蛋白(Col1α1)mRNA水平,阐明碱蓬黄酮对小鼠肝纤维化防治的有效性及可能的作用机制。结果碱蓬黄酮包含35种化合物。碱蓬黄酮能有效降低四氯化碳诱导的小鼠血脂水平,改善肝脏外观,减轻组织病变,恢复肝功能,下调TIMP-1和Col1α1而上调MMP-9转录水平。结论碱蓬黄酮对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化有较好的缓解作用。

GB/T 5750.8—2023顶空-气相色谱法测定饮用水中三氯甲烷和四氯化碳的问题与建议

对GB/T 5750.8—2023中的顶空-气相色谱法测定生活饮用水中三氯甲烷和四氯化碳方法确认中影响定量准确性的因素,如分流比、色谱柱、基质空白、标准曲线配制等进行了讨论,并结合实验室的7697A顶空自动进样器、7890B气相色谱仪及所用DB-1701石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)对方法进行了条件优化.采用优化后的试验条件对方法进行了确认.结果表明,三氯甲烷和四氯化碳分别在质量浓度为0.1~10.0μg/L和0.01~1.0μg/L范围内线性良好,检出限分别为0.025和0.0020μg/L,定量限分别为0.083和0.0067μg/L,相关系数r均大于0.999,相对标准偏差分别为4.2%~6.5%和1.8%~4.0%,加标回收率分别为96.8%~102.5%和104.0%~107.2%.优化后的方法可满足生活饮用水中三氯甲烷和四氯化碳的测定要求,为水中三氯甲烷和四氯化碳含量相关测试提供参考.

忧遁草醇提取物对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 探究不同浓度的忧遁草醇提取物在对由四氯化碳导致的小鼠急性肝损伤中的保护作用及机制。方法 40只小鼠按照体重随机分为5组,其中包括正常组和模型组、给药组(10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg)。正常组和模型组均给予生理盐水连续灌胃,给药组给予不同浓度忧遁草醇提取物连续灌胃,共21 d。末次给药后,正常组腹腔注射橄榄油,其余组腹腔均注射含有0.1%四氯化碳橄榄油混合液建立小鼠急性肝损伤模型,16 h后小鼠眼眶采血,并分离血清。计算小鼠肝脏指数、测定丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,检测血清中的谷氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶(Super-oxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)等指标。通过H&E染色和Masson染色检测小鼠肝脏的组织病理学变化。结果 给予忧遁草醇提取物后,小鼠肝指数及血清ALT、AST均显著低于四氯化碳造模后的小鼠(P<0.05);SOD、GSH-Px的含量均明显更高,而MDA的含量均降低(P<0.05);且呈剂量依赖性。在肝组织病理学检查中,不同浓度的忧遁草均不同程度缓解炎症细胞浸润和肝细胞肿胀、坏死。结论 忧遁草对急性肝损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化反应和清除自由基有关。

四氯化碳中毒大鼠肝细胞核基质蛋白的变化

核基质是真核细胞核内一个精密的蛋白网络结构,它不仅是维持细胞核形态的支架,而且与细胞核内许多重要的生命活动密切相关,在染色体构建、DNA复制、RNA加工转运等方面均起重要作用.核基质蛋白与DNA上特异序列(MARs)结合,参与DNAloop构建,并作为反式作用因子与DNA相互作用,调控基因表达[1-28].核基质亦是许多毒物、致癌药物以及抗癌药物作用的靶点.CCl4对细胞核内生物大分子的损伤作用及其机制,机体对CCl4损伤发生适应性改变以恢复肝功能的分子基础尚未阐明.我们从与细胞核功能活动密切相关的核基质出发,对CCl4急性肝损伤的分子机制作一初步探讨.

鸡骨草浓缩液对四氯化碳诱导的犬肝损伤治疗效果研究

为探究鸡骨草浓缩液对四氯化碳诱导犬只肝损伤的治疗效果,将20只犬分为A组(空白对照组)、B组(模型组)、C组(高剂量组,造模+灌胃鸡骨草浓缩液50 g/kg体重)、D组(中剂量组,造模+灌胃鸡骨草浓缩液30 g/kg体重)、E组(低剂量组,造模+灌胃鸡骨草浓缩液10 g/kg体重),检测各组犬只体温、体重、谷丙转氨酶活力、谷草转氨酶活力和碱性磷酸酶活力。结果表明:B、C、D、E组犬只,造模处理期间体温均显著高于A组(P<0.05),4组犬只造模处理后的体重较造模前降低9%,且显著低于A组(P<0.05);经鸡骨草浓缩液灌胃10 d后,C、D、E组犬只体重均显著高于B组(P<0.05);给药第3天开始,C、D、E组犬只的谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶活力均显著低于B组(P<0.05),活力随给药时间的延长呈逐渐下降趋势,且于给药第12天均恢复到正常水平。实验结果表明:鸡骨草浓缩液对四氯化碳诱导的犬只肝损伤有显著的治疗效果。

栀子黄色素对四氯化碳肝损伤小鼠的影响

目的 : 研究栀子黄色素 (GY)对 CCl4 肝损伤小鼠的保护作用。方法 : 取健康的雄性昆明种小鼠 (2 0± 2 ) g 5 0只 ,按体重随机分成 5组 ,每组 1 0只 ,即正常组 ,(饲喂正常饲料 ) ,CCl4 肝损伤组 (正常饲料 +CCl4 ) ,低剂量组 (正常饲料 +CCl4 +0 .1 ml GY溶液 /只 ) ,中剂量组 (正常饲料 +CCl4 +0 .2 ml GY溶液 /只 ) ,高剂量组 (正常饲料 +CCl4 +0 .4ml GY溶液 /只 )。GY溶液提前 5 d每天灌胃 ,对照组与肝损伤组灌胃 0 .4ml生理盐水 ,末次灌胃后 2 h给 0 .1 0 % CCl4 0 .4ml致伤。1 8h后摘除眼球取血 ,测定血清谷丙转氨酶 (SGPT)、谷草转氨酶 (SGOT)、乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,破腹取肝脏 ,测定肝脏丙二醛 (MDA)、谷胱甘肽 (GSH)含量及肝脏指数 ,并对肝细胞的组织形态学进行观察。结果 : 预先灌 GY溶液 ,具有显著地抑制 CCl4 引起的小鼠血清 SGPT、SGOT、LDH及肝脏 MDA含量、肝脏指数的升高以及肝脏 GSH含量的降低 ,并能显著地减轻 CCl4 引起的肝小叶内的灶性坏死。结论 : 栀子黄色素对 CCl4

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化进展期和恢复期模型的建立

目的确定肝纤维化进展期和恢复期。方法采用50%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)皮下注射建立大鼠肝纤维化和自然恢复模型。检测血清中丙氨酸氨基转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(as-partate aminotransferase,AST)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅳ-C型胶原(collagenⅣ,Ⅳ-C)和Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ)含量及肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)水平;HE染色和Masson胶原染色观察肝脏病理组织学改变。结果 CCl4注射8周,大鼠肝组织己出现慢性肝炎的病理变化,注射12～16周出现了典型的从肝纤维化—肝硬化的病理改变,同时大鼠血清中ALT、AST、HA、LN、Ⅳ-C和PCⅢ含量及肝组织Hyp水平逐渐上升。而随着恢复期的延长,血清中ALT、AST、HA、LN、Ⅳ-C和PCⅢ含量及肝组织Hyp水平逐渐下降。结论成功建立CCl4诱导的大鼠自愈性肝纤维化模型,并确定进展期和恢复期。

四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型的建立

目的 建立四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化动物模型。方法 用体积分数为 2 0 %四氯化碳皮下注射 3mon ,诱导昆明种小鼠肝纤维化形成。在造模 30d、6 0d、90d时 ,检测肝纤维化程度、肝脏羟脯氨酸和丙二醛含量、以及血清氨基转换酶和血清白蛋白水平。结果 小鼠肝脏纤维化程度和肝脏羟脯氨酸含量随造模时间延长而逐渐增加 (P <0 0 5～0 0 1) ,肝匀浆丙二醛含量和血清丙氨酸氨基转换酶明显升高 (P <0 0 1) ,造模后期血清白蛋白比例下降 (P <0 0 1)。结论 长期给予四氯化碳可导致小鼠肝纤维化形成 ,并有较明显的阶段性变化。

某市岩溶地下水四氯化碳污染特征研究

赋存于寒武系和奥陶系灰岩中的岩溶水是某市的主要供水水源,每天供水量约为35×104t.2000年11月地下水监测资料表明,南郊水源地的岩溶水已受到了四氯化碳污染.污染源为一农药厂,该厂位于七里沟水源地补给区的山坡上,生产农药时用四氯化碳做溶剂.该厂生产废水中四氯化碳的浓度从281 0μg·L-1到2584 3μg·L-1.到2001年5月,水源地中53口水井中发现了四氯化碳,污染面积达17 5km2,井水中四氯化碳浓度最高达3909 2μg·L-1.根据四氯化碳浓度,污染区可以被划分为3个亚区:污染源附近亚区(初始最大浓度为3909 2μg·L-1,2003年4月最大浓度1891 5μg·L-1),集中抽水排泄区污染亚区(初始最高浓度195 5μg·L-1,2003年4月最大浓度504 5μg·L-1)和中间污染相对较轻的过渡区(一般20～200μg·L-1).过去3a间64口水井水质资料监测表明,岩溶含水层中四氯化碳含量受降雨、承压水位和含水层深度等多种因素的综合控制.由于四氯化碳为一种微溶于水的比水重的非水相有机物(DNAPL),它主要沿含水层底部运移,因此比较浅的水井(深度<150m)中四氯化碳含量比较低,而在深度较大的水井(深度>150m)中则浓度较高.

水飞蓟素对四氯化碳致鲫肝(细胞)损伤的保护和抗氧化作用

为了评价水飞蓟素(Silymarin,SM)对鲫(Cyprinus carpio)肝(细胞)的保护和抗氧化作用,分别从体外和体内两个方面探讨其作用效果。在体外,利用8 mmol/L的四氯化碳(CCl4)作用肝细胞4 h构建鲫肝细胞体外损伤模型,用不同质量浓度的水飞蓟素(100、300和600μg/mL)对鲫肝细胞进行前处理(CCl4损伤前加药)、后处理(CCl4损伤后加药)和前后处理(CCl4损伤前后均加药),然后检测细胞活力和细胞上清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。在体内,用含水飞蓟素的饲料(0.1、0.5和1.0 g/kg)饲喂鲫60 d,再腹腔注射30%四氯化碳-植物油混合液,然后检测血清和肝组织匀浆中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)等生化指标。研究结果表明,水飞蓟素不同程度地抑制CCl4损伤引起的肝细胞培养上清中GPT、GOT、LDH活性和MDA含量的升高,提高SOD活性及肝细胞的存活率。体内研究发现,0.5和1.0 g/kg水飞蓟素显著降低CCl4损伤导致的血清中GPT、GOT、LDH活性升高,显著提高总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含量,有效提高肝中谷胱甘肽(GSH)含量、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低丙二醛(MDA)含量(P<0.05或P<0.01);而0.1g/kg的水飞蓟素除了抑制LDH显著升高外,对其他指标均无效果。综合以上结果认为,水飞蓟素对鲫肝有保护作用,可防治鱼类肝(细胞)损伤,该保护作用可能与其抗氧化作用有关。

郁金水煎剂对四氯化碳致急性肝损伤小鼠肝细胞p53和caspase-3表达的影响及其对肝损伤的保护作用

目的:探讨单味郁金水煎剂对四氯化碳(CCl4)致急性肝损伤小鼠肝细胞凋亡基因p53和caspase-3蛋白表达的影响,阐明郁金对肝损伤保护作用的机制。方法:ICR小鼠60只,随机分为空白对照组(等体积生理盐水)、模型组(等体积生理盐水)、郁金低剂量组(2.5g·kg-1)、郁金中剂量组(5.0g·kg-1)、郁金高剂量组(10.0g·kg-1)和阳性药组(甘利欣22.5mg·kg-1);连续给药7d后,除空白对照组外各组小鼠均通过CCl4复制小鼠急性肝损伤模型。计算肝指数,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,HE染色观察肝组织形态学变化;RT-PCR法检测肝细胞p53基因转录情况;免疫组织化学法检测肝细胞caspase-3蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠肝指数明显增加(P<0.05);与模型组比较,各给药组小鼠肝指数明显降低(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组小鼠血清ALT增高(P<0.01);与模型组比较,阳性药组及郁金高、中剂量组小鼠血清ALT明显降低(P<0.05)。肝脏形态学变化,肉眼观察,空白对照组小鼠肝脏呈现粉红色,质软而富有弹性,模型组小鼠肝脏明显肿大、呈微黄色,表面可见散在点状及片状黄褐色斑点,质脆,各给药组小鼠肝脏大小、颜色及质地均界于空白对照组与模型组之间,且表面无明显黄褐色斑点;镜下观察,空白对照组小鼠肝脏结构正常,模型组小鼠细胞呈明显局灶性气球样变、水样变性和死亡,而阳性药组和郁金中、高剂量组小鼠与模型组比较肝组织上述病灶数量减少。与空白对照组比较,模型组小鼠肝细胞p53基因转录明显增强(P<0.05);与模型组比较,郁金高剂量组小鼠肝细胞p53基因转录显著减弱(P<0.05)。与模型组比较,郁金给药组小鼠肝细胞caspase-3蛋白表达减弱。结论:郁金对CCl4致小鼠急性肝损伤有一定的拮抗作用,其机制之一可能与下调凋亡基因p53和caspase-3蛋白的表达、阻碍肝细胞凋亡有关。