土鳖虫化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物(Q-Marker)的预测分析

土鳖虫是我国传统中药,分布于河南、河北、江苏、湖南等地,具有破血逐瘀、续筋接骨的功效。土鳖虫中化学成分种类丰富,主要包括蛋白质及多肽类、氨基酸类、脂肪酸类、生物碱、无机元素、核苷类等。现代药理研究表明,土鳖虫具备抗凝血并防止血栓形成、调节血脂的作用,此外,还具有抗肿瘤、抗炎、增强免疫力、抗氧化等作用。近年来,土鳖虫等动物类中药在临床应用方面备受关注。本文对土鳖虫化学成分和药理作用的研究现状进行总结,在此基础上分析功效作用与化学成分之间的联系,发现蛋白质及多肽类成分与抗凝血、调血脂作用关联紧密,生物碱类成分与抗菌抗炎作用相关。并从传统功效、现代药理、化学成分可测性、中药配伍等角度预测分析其质量标志物(quality marker,Q-Marker),初步确定土鳖虫活性肽组分、纤溶活性蛋白、脂肪酸类成分、生物碱、核苷类成分等可作为其质量标志物。中药质量标志物的研究为鉴定土鳖虫的真假优劣提供依据,也为后续开发土鳖虫新剂型、制定质量标准提供理论基础。

虫类药土鳖虫化学成分研究进展

土鳖虫为鳖蠊科昆虫地鳖Eupolyphaga sinensis Walker或冀地鳖Steleophaga plancyi Boleny的雌虫干燥体。其药用历史悠久,临床使用经验丰富,目前土鳖虫及其相关制剂被用于跌打损伤、筋骨疼痛、风湿、中风、冠心病及原发性肝癌等多种疾病的治疗。已有研究从土鳖虫中分离鉴定出蛋白质、活性肽、脂类、多糖、生物碱及核苷类等多种化学成分。其中蛋白质和肽类是土鳖虫中含量最高的成分,有多个研究从土鳖虫中分离鉴定得到具有活性的蛋白和肽,它们分别具有溶血栓、抗肿瘤、调节血脂、抗氧化及抗菌等活性。土鳖虫中还含有丰富的脂质,含量仅次于蛋白质,有研究指出这些脂质成分可能具有治疗肿瘤的潜力。此外,土鳖虫的化学成分还有多糖、生物碱、核苷、维生素和微量元素等,这些成分具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、保护肾脏、保护血管内皮细胞及抗缺血缺氧等多种活性。对国内外相关文献进行查阅并整理归纳,按照化学成分类型将土鳖虫化学成分研究获得的成果作一综述,以期为土鳖虫的进一步研究及开发利用提供参考。

土鳖虫指纹图谱分析

土鳖虫是一种动物类中药,入药部位为鳖蠊科昆虫地鳖Eupolyphaga sinensis Walker或冀地鳖Steleophaga plancyi Boleny的雌虫干燥体,而雄虫不能入药,为保证用药的安全性和有效性,需准确有效区分雌雄土鳖虫。本研究采用高效液相色谱法,色谱柱采用Zafex Supperfex AQ-C_(18)柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),以甲醇为流动相A,以0.1%冰醋酸溶液为流动相B,梯度洗脱60 min,柱温30℃,检测波长248 nm,进样量10μL。结果显示,28批土鳖虫(雌虫)均呈现与土鳖虫对照药材相对应的8个特征峰色谱峰,以对照品指认了其中4个化学成分,分别为尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟苷,且与土鳖虫雄虫的指纹图谱不匹配。该方法可以有效区分雌雄土鳖虫,有效避免掺伪情况发生,为土鳖虫质量控制提供了参考方法。

土鳖虫养殖技术的研究

土鳖虫作为一种药用价值极高的昆虫,近年来在特种养殖领域受到越来越多的关注。本文旨在探讨土鳖虫养殖技术要点,以期为土鳖虫养殖业健康发展提供理论支撑和实践指导。

土鳖虫雌雄虫对外伤血瘀证大鼠模型的作用差异研究

目的土鳖虫为伤科要药,临床多以雌虫干燥体入药,本文旨在对比雌雄干燥体对外伤血瘀证的作用差异,为土鳖虫的临床用药提供实验依据。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为5组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均用重物坠落的方法制备外伤血瘀证模型。采用治疗型给药原则,雌虫组、雄虫组、雌雄虫组大鼠每天灌胃给予雌虫水煎液(1 g生药/kg)、雄虫水煎液(1 g生药/kg)、雌雄虫混合水煎液(1 g生药/kg),正常组和模型组大鼠给予等量纯净水(10 mL/kg)。连续干预5 d后,比较各组大鼠造模前后瘀肿处腿径,采用硝酸还原法(比色法)和放射免疫法检测各组大鼠血清中一氧化氮(nitricoxide,NO)、内皮素(endothelin,ET)-1、血栓素(thromboxane,TX)B2和6-酮-前列腺素(6-keto-protaglandin,6-K-PG)F1α的水平。结果与正常组比较,模型组大鼠瘀肿处腿径增加,血清NO和6-K-PGFlα水平下降,血清ET-1和TXB2水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。干预后各治疗组大鼠瘀肿处腿径缩小,血清NO、ET-1、TXB2、6-K-PGFlα水平显著回调(P<0.05)。雌虫组、雄虫组和雌雄虫组之间比较,各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论土鳖虫雌虫和雄虫对外伤血瘀证均有较好的疗效,且二者的疗效未见明显差异。

高效液相色谱法分析土鳖虫药材黄曲霉毒素

将土鳖虫药材经70%甲醇提取,过免疫亲和柱后,采用高效液相色谱(HPLC)-柱后光化学衍生的方法测定土鳖虫药材黄曲霉毒素残留情况。结果表明,该测定方法线性关系良好,相关系数均为0.999,加样回收率在97.2%~104.0%。50批土鳖虫药材中黄曲霉B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)均有检出,检出率为92%。所用方法准确、灵敏,建议相关人员关注土鳖虫药材的黄曲霉毒素残留情况。

土鳖虫乳剂对SD大鼠毒副作用的初步评价

目的:初步评价土鳖虫乳剂的安全性。方法:以SPF级SD大鼠为实验对象,采用土鳖虫乳剂5ml灌胃,连续灌胃7次。动态观察给药前后大鼠体重变化,检测血常规、凝血三项及肝肾功能等指标。结果:实验前后NS灌胃组和土鳖虫乳剂灌胃组大鼠体重基本无变化,而CTX灌胃组大鼠体重明显下降(P<0.01)。土鳖虫乳剂灌胃组血常规、凝血三项、肝肾功能检测结果均优于CTX灌胃组。结论:土鳖虫乳剂具有一定的使用安全性。

土鳖虫水提液对实验性高脂血症大鼠血管内皮细胞的保护作用

目的 :研究土鳖虫水提液对高脂血症大鼠血管内皮细胞的保护作用。方法 :建立高脂血症大鼠模型 ,在实验不同阶段 ,观察大鼠血脂、血清超氧化物歧化酶 (SOD)、一氧化氮 (NO)、血浆内皮素 (ET)及循环内皮细胞 (CEC)的变化。结果 :实验第 4 0天 ,与正常组比较 ,高脂组血清总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)及血浆ET均显著升高 (P <0 .0 1) ;血清SOD、NO显著降低 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。土鳖虫各剂量组血清TC、LDL C均显著降低 (P <0 .0 1) ;土鳖虫中、高剂量组血清SOD、NO明显升高 ,而血浆ET显著降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;土鳖虫高剂量组血清TG明显降低 (P <0 .0 5 )。实验第 6 0天 ,高脂组的CEC明显高于正常组 ,土鳖虫中、高剂量组CEC低于高脂组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :土鳖虫水提液有调整脂质代谢、抗脂质过氧化反应、维持NO ET的平衡、保护内皮细胞作用 ,可能对防治动脉粥样硬化有益。

土鳖虫脂溶性成分的研究

从土鳖虫中分离出3个单体,经鉴定为胆甾醇,棕榈酸,5,4′二羟基-7-甲氧基黄酮。

土鳖虫对血虚小鼠红细胞免疫功能的实验研究

目的 :研究土鳖虫对环磷酰胺致小鼠“血虚”模型红细胞免疫功能的影响 ,为探讨“虚 瘀”及活血化瘀机理提供新思路和途径。方法 :腹腔注射环磷酰胺 0 0 1g kg建立小鼠“血虚”动物模型 ,观察土鳖虫对实验动物红细胞免疫粘附功能指标的影响。采用酶联免疫吸附法 (ELISA)测血清抗心磷脂抗体 (ACA) ,ACA IgG、ACA IgA和ACA IgM含量。造模前后称体重 ,解剖分离心、肝、脾、肺、肾、胸腺各脏器称重 ,计算脏器系数。给正常小鼠ig土鳖虫 ,观察其对血清锌、钙水平的影响。结果 :环磷酰胺 (0 0 1g kg)ip小鼠 ,随着“血虚”模型的形成 ,小鼠的红细胞C3b受体花环率 (RBC C3bRR)下降 ,血清抗心磷脂抗体(ACA)ACAIgG、ACAIgA含量明显升高 ,体重下降及脾脏 ,胸腺重量减轻。土鳖虫 (2 5g kg )ig能提高“血虚”小鼠RBC C3bRR ,降低血清ACAIgG、ACAIgA水平 ,能纠正环磷酰胺引起的体重下降及增加脾脏及胸腺免疫器官的重量 ,土鳖虫 (2 5g kg)ig正常小鼠可升高血清锌、钙的水平。结论 :土鳖虫通过提高红细胞CR1 活性 ,增加红细胞免疫粘附功能 ,抑制血清ACA水平 ,血清中锌、钙含量的升高 ,可作为药物“生物药效探针”。

土鳖虫水提物对实验性高脂血症大鼠血管内皮和内皮素的影响

目的研究土鳖虫水提物对高脂血症大鼠血管内皮和内皮素 (ET)的影响。方法建立高脂血症大鼠模型 ,测定血浆ET的浓度 ,并应用内皮细胞铺片和免疫组化相结合的方法 ,在大鼠主动脉内皮细胞铺片上 ,计数内皮细胞和ET阳性细胞并定量分析ET的合成。结果实验第 80d ,与正常组比较 ,高脂组血浆ET显著增高 (P <0 .0 1) ;内皮铺片显示内皮细胞数量增多 ,排列紊乱 ,胞核大小和染色深浅不一 ,ET阳性细胞率显著升高 (P <0 .0 1)。土鳖虫中、高剂量组血浆ET水平和ET阳性细胞率显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。结论土鳖虫水提物能保护血管内皮 。

重楼、土鳖虫对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制的协同作用

目的体外观察重楼及土鳖虫提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用及两者联合应用的抑制率及相互作用。方法采用MTT法测定两者对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制率，利用金式公式判定两药舍用的效果。结果重楼及土鳖虫提取物能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖，并呈浓度和剂量依赖性。两者作用于人肝癌SMMC-7721细胞72h的IC50分别为0．17mg／mL和1．99mg／mL。重楼提取物0．1-0．8mg／mL与土鳖虫提取物1～4mg／mL同时给药对人肝癌SMMC-7721细胞可产生单纯相加至协同杀伤作用.结论重楼、土鳖虫提取物联合用药可产生协同作用，两者联合应用在抗肿瘤治疗中具有合理性：

土鳖虫水煎剂对人多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖的影响

目的 :观察中药土鳖虫对多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖的影响。方法 :以灌服中药土鳖虫水煎液的 SD大鼠血清为含药血清 ,灌服等量生理盐水的 SD大鼠血清为对照血清。将囊肿衬里上皮细胞培养于含有下述物质的 RPMI 16 4 0液中 :(1)上皮生长因子 (EGF) 0、2 .5、5、10、2 0 ng/m l;(2 )含药血清 1%、2 .5 %、5 % ,以等量对照血清为对照 ;(3) EGF 10 ng/ml分别加含药血清 1%、2 .5 %、5 % ,并以等量 EGF加对照血清作为对照。培养 4 8h后 ,以 5 -溴 - 2 -脱氧尿核苷嘧啶 (Brdu)掺入法检测细胞增殖。结果 :EGF能显著地刺激囊肿衬里上皮细胞增殖 ,一定范围内呈剂量依赖性 ;与对照血清比较 ,土鳖虫含药血清能明显抑制经或未经 EGF刺激的囊肿衬里上皮细胞增殖 ,并呈剂量依赖性。结论

土鳖虫对大鼠抗凝血和促纤溶作用研究

目的:研究土鳖虫的抗凝、促纤溶作用。方法:土鳖虫给大鼠灌胃7天后测定凝血和纤溶两方面的指标。结果:土鳖虫在抗凝血方面未能表现出明显作用。在纤溶方面,土鳖虫表现出明显的血液纤溶酶原(P lg)活性提高和纤溶酶原激活剂(t-PA)活性提高。促进纤溶酶原活性的成分为非水溶性物质,而促进纤溶酶原激活物的成分存在于水提物中。结论:土鳖虫的作用主要在于促进纤溶功能,而不在于抗凝血。

土鳖虫提取液对人胃低分化腺癌细胞BGC-823的抑制作用

目的研究土鳖虫体外对人胃低分化腺癌BGC-823细胞抗肿瘤活性。方法采用MTT法测定了土鳖虫水提物和醇提物对人胃低分化腺癌BGC-823细胞增殖的抑制作用,采用生长曲线测定法检测土鳖虫醇提物对体外培养肿瘤细胞的细胞毒作用。结果土鳖虫水提物不能抑制体外培养的肿瘤细胞,而醇提物能显著抑制人胃低分化腺癌BGC-823细胞增殖,药物作用48h时抑制率最高,并有较好的剂量依赖关系。结论体外土鳖虫水提物没有抗肿瘤活性,醇提物有较强的抗肿瘤作用,值得进一步研究其抑制机理。

中药土鳖虫溶栓成分的分离纯化研究

对土鳖虫水浸醇沉提取物2号样品进行了离子交换柱层析,得组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。实验结果表明,组分Ⅲ的溶栓活性明显高于组分Ⅰ和组分Ⅱ,其蛋白质含量为88.9%,分子量约为38,018,效价为313 UK/mg,比活力为352 UK/mg蛋白。将组分Ⅲ再进行凝胶过滤柱层析,得组分Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ。组分Ⅵ的生物活性高于组分Ⅳ和组分Ⅴ,蛋白质含量为89.3%,电泳呈现两条带,分子量约为34,623和39,811,效价为77 UK/mg,比活力为86 UK/mg蛋白。将组分Ⅵ进行反相高效液相色谱柱层析,收集保留时间为17 m in的洗脱峰,得到土鳖虫纯蛋白质,呈白色絮状,极易溶于水。再一次用反相高效液相色谱检查其纯度,保留时间为17.073 m in,无杂质峰。纤溶活性实验结果表明,组分Ⅵ既有直接降解纤维蛋白的作用,同时也有纤溶酶原激活剂样作用。

土鳖虫对血瘀大鼠红细胞CR1活性及抗心磷脂抗体水平的影响

目的: 研究土鳖虫(ESW)对地塞米松(Dex)加肾上腺素(Adr)所致阴虚火旺慢性血瘀大鼠模型红细胞免疫功能和血清抗心磷脂抗体水平变化的影响。方法: 肌肉注射Dex(0. 5mg/kg)加Adr(0. 84mg/kg), 建立阴虚火旺慢性血瘀大鼠模型, 观察ESW对实验动物红细胞免疫黏附功能的影响。采用ELISA法检测血清抗心磷脂抗体 (ACA)ACA- IgG、ACA -IgA、ACA -IgM的含量及血浆D -二聚体的含量。造模前后称体质量, 并取心、肝、脾、肺、肾及胸腺称质量, 计算脏器系数。结果: 肌肉注射Dex(0. 5mg/kg)加Adr(0. 84mg/kg)的大鼠, 随着“阴虚火旺”血瘀模型的建立, 大鼠红细胞C3b受体花环率(RBC C3bRR)和红细胞肿瘤花环率 (RBC- CaR)下降, 血清ACA -IgG、ACA -IgA及ACA- IgM的水平明显升高, 血浆D 二聚体的含量明显升高; 体质量下降、脾脏及胸腺的质量减轻。ESW(5和 10mg/kg)能提高“阴虚火旺”血瘀大鼠红细胞C3b受体花环率和红细胞肿瘤花环率, 降低血清ACA -IgG、ACA- IgA及ACA- IgM的水平, 降低血浆D 二聚体的含量, 增加脾脏的质量。结论: ESW具有提高阴虚火旺慢性血瘀模型大鼠免疫功能的作用, 抑制血清ACA水平, 降低血浆D 二聚体含量。为探讨血瘀症及活血化瘀的机制提供了新的思路和途径。

土鳖虫超微粉体中游离氨基酸的测定及指纹图谱研究

目的建立土鳖虫超微粉体的游离氨基酸的HPLC指纹图谱,考察其主要氨基酸的量。方法采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生,梯度洗脱进行色谱分离,固定相为依利特Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相A乙腈-水(4∶1),流动相B醋酸钠缓冲溶液(pH=6.5)-乙腈(97∶3),检测波长为254 nm,体积流量为1 mL/min,柱温为30℃。结果初步建立了土鳖虫超微粉体中游离氨基酸的HPLC指纹图谱,标定了24个共有峰,同时定量分析了6种氨基酸成分。结论建立的方法分离效果好,灵敏、准确、简单,可作为土鳖虫超微粉体质量评价的方法。