基于LC-MS法研究百合地黄汤单煎及共煎液中化学成分变化

目的测定仲景古方百合地黄汤水煎液成分,并对鲜百合和鲜地黄的水煎液所含成分进行对比,为优化百合地黄汤提取工艺提供初步依据。方法以液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术为基础,定性分析百合地黄汤水煎液所含化学成分并进行归属及聚类分析,同时对百合水煎液、地黄汁所含化学成分进行比对。结果百合水煎液、鲜地黄汁中分别检测到35种、36种化学成分;古法煎煮后,在百合地黄汤水煎液中发现69种化学成分,其中有机酸类16种、糖类及苷类共6种、氨基酸及多肽类共8种、生物碱类3种;其中有8种物质为原百合水煎液与地黄汁共有,较两种原煎液新产生36种物质,且抗抑郁有效成分毛蕊花糖苷仅存在于共煎液中。结论古法百合地黄汤共煎液中抗抑郁有效成分比单煎液丰富,有助于抗抑郁有效成分的提取,LC-MS技术适用于复方提取液的含量测定,通过此研究,构建了基于质谱技术的中药复方化学物质组成表征的指纹图谱。

六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全模型小鼠的分子机制

背景:在临床上,大多数治疗早发性卵巢功能不全的方剂均以六味地黄丸为基础方演变而来,并且取得了较好的疗效。目前对六味地黄丸的实验研究大多为体内动物模型的形态学观察及生理生化指标的检测,而分子机制方面的研究报道较少。目的:探讨六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全的分子作用机制。方法:环磷酰胺120 mg/kg联合白消安12 mg/kg腹腔注射制备早发性卵巢功能不全小鼠模型,然后用六味地黄丸混悬液对早发性卵巢功能不全小鼠进行干预,干预12周采用ELISA法检测小鼠血清中促卵泡刺激素、促黄体生成素、雌激素、抗苗勒氏管激素、8-羟脱氧鸟苷、总抗氧化能力、活性氧水平;苏木精-伊红染色观察小鼠卵巢形态学改变;透射电镜观察小鼠卵泡颗粒细胞超微结构及颗粒细胞线粒体的凋亡情况;免疫组化法检测六味地黄丸对小鼠卵巢颗粒细胞中核受体转录辅激活因子(receptor gamma coactivator-1 alpha,PGC-1α)、线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionfactorA,TFAM)的表达水平。结果与结论:①与模型组比较,实验组小鼠血清促卵泡刺激素、促黄体生成素、活性氧、8-羟脱氧鸟苷水平降低(P<0.05),雌激素、抗苗勒氏管激素、总抗氧化能力水平升高(P<0.05);②苏木精-伊红染色发现模型组小鼠卵巢组织中闭锁卵泡和黄体较多,个别可见次级卵泡,间质纤维化增生;实验组小鼠卵巢组织可见大量闭锁卵泡,黄体较少,边缘可见原始卵泡,次级卵泡较少,未见明显成熟卵泡;③透射电镜发现实验组小鼠卵巢颗粒细胞内细胞器较完整;④免疫组化结果显示,实验组小鼠卵巢组织PGC-1α的表达水平在第4周稍有升高至第8,12周无明显变化,与模型组有明显差异;实验组小鼠卵巢组织TFAM的表达水平在第4周时短暂升高,然后稍有所下降,但结果均与模型组有明显差异;⑤结果表明,六味地黄丸通过PGC-1α-TFAM-ROS信号通路在一定程度上抑制早发性卵巢功能不全小鼠卵巢颗粒细胞凋亡,从而改善卵巢的内分泌功能,提高机体抗氧化能力,减轻氧化应激损伤程度。

黑地黄丸治疗功能性铁缺乏肾性贫血疗效观察

目的观察黑地黄丸治疗功能性铁缺乏肾性贫血的疗效,探索干预肾性贫血铁代谢紊乱的新方法。方法从2021年11月-2022年10月在泰安市中医医院肾病科病房及门诊治疗的非透析患者中选取功能性铁缺乏肾性贫血者80例,按随机数字表法分为观察组、对照组各40例。对照组给予重组人红细胞生成素+铁剂治疗,观察组在对照组治疗基础上给予黑地黄丸口服,2组均治疗12周。观察2组贫血指标[红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)含量、血细胞比容(HCT)]、铁代谢指标[血清铁蛋白(SF)、转铁蛋白饱和度(TSAT)、总铁结合力(TIBC)]、肾功能指标[血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、内生肌酐清除率(Ccr)]变化情况和治疗总体疗效、不良反应发生情况。结果对照组脱落2例、观察组脱落1例。治疗后2组RBC计数、Hb含量、HCT、SF、TSAT、Ccr均较治疗前明显升高(P均<0.05),TIBC、BUN、SCr均较治疗前明显降低(P均<0.05),且上述指标观察组较对照组改善更明显(P均<0.05)。观察组和对照组的治疗总有效率分别为94.87%(37/39)和81.58%(31/38),2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组和对照组的不良反应总发生率分别为7.69%(3/39)和7.89%(3/38),2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人红细胞生成素+铁剂+黑地黄丸治疗功能性铁缺乏肾性贫血疗效优于重组人红细胞生成素+铁剂治疗,可明显改善铁代谢和肾功能,且不增加不良反应。

基于地黄生、熟的肾气丸治疗糖尿病肾病模型小鼠药效差异研究

目的:探讨地黄生、熟的肾气丸对DKD模型小鼠的药效差异及可能的相关机制。方法:选取8只SPF级6~8周龄雄性db/m小鼠作为正常对照组(Control组),另选取24只SPF级6~8周龄雄性db/db小鼠按测定血糖随机分组为:模型对照组(Model组)、肾气丸生地黄组(S-L组)与肾气丸熟地黄组(S-R组),每组db/db小鼠8只。造模成功后,S-L组与S-R组每日分别灌服含有生、熟地黄的肾气丸水煎液(10.4 g/kg),正常组与模型组每日灌服等量生理盐水,连续56 d,检测二者对DKD模型小鼠末次给药24 h后空腹血糖、24 h尿蛋白定量(UP)、微量白蛋白(mAIB)、尿肌酐(Ucr)含量;总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆红素(TBIL)含量;HE染色观察肾脏组织病理形态学变化;Western blot法检测各组PI3K、Akt的蛋白含量。结果:与C组相比,Mo组小鼠空腹血糖、GSP、mAIB、Scr、UP、Ucr、TC、TG、LDL-C、ALT、AST、TBIL均增高,HDL-C、Ucr降低,HE染色显示肾小球系膜增生、肾小球系膜细胞增多、系膜基质沉积明显,PI3K、Akt蛋白的表达下调。与Mo组比较,S-L组与S-R组在生化指标上较Mo型组均有好转,HE染色显示肾小球病理损伤有所改善,并能上调PI3K、Akt的蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05);但治疗后两组对比,S-R组BUN、SCr、UP含量明显更低(P<0.05),AST低于S-L组差异明显(P<0.05)。结论:肾气丸中生、熟地黄均可改善DKD引起的肾功能损伤,而肾气丸熟地黄组在治疗DKD小鼠时药效更显著,其机制可能与上调肾组织中PI3K、Akt的表达水平有关。

熟地黄-山茱萸药对通过PI3K/AKT通路对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡的影响

目的研究熟地黄-山茱萸药对通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导小鼠脑神经瘤细胞株(N2a)细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35(20μmol/L)处理N2a细胞构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型,给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h。采用CCK8法测定细胞存活率,寻求最佳的Aβ25-35的诱导浓度;Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western Blot法检测cleaved Caspase-3、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果与空白对照组比较,经过Aβ25-35处理后的N2a细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值下降(P<0.05);给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h后,N2a细胞的凋亡率和Caspase-3蛋白表达及活性降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组比,高剂量组N2a细胞的凋亡率和Caspase-3活性降低,p-AKT/AKT比值升高(P<0.05)。结论熟地黄-山茱萸醇提物可对Aβ25-35诱导的N2a细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与促进PI3K/AKT信号通路有关。

经典方剂当归地黄饮治疗月经后期的网络药理学作用机制研究

目的采用网络药理学方法与分子对接技术探讨当归地黄饮治疗月经后期的作用机制。方法利用TCMSP、Uniprot数据库收集当归地黄饮活性成分以及其对应的靶点基因;通过检索GeneCards数据库、DrugBank数据库、OMIM数据库提取月经后期的疾病靶点;运用Venny2.1.0平台绘制药物与疾病交集靶点,运用Cytoscape软件构建当归地黄饮治疗月经后期的“药物-成分-靶点”相互作用网络图,绘制韦恩图;通过STRING数据库构建蛋白互作网络(PPI);同时进行核心靶点的GO功能富集分析及KEGG通路分析。最后,通过分子对接技术对网络药理学分析进行验证,并将结果进行可视化展示。结果筛选出当归地黄饮治疗月经后期的166个活性成分、128个药物与疾病的共同靶点。富集得到814个GO功能条目和183条KEGG信号通路。推测其与IL-17、TNF等信号通路相关。TNF、VEGFA与豆甾醇、VEGFA与β-谷甾醇等核心靶点对接结果良好。分子对接结果显示当归地黄饮中的核心有效成分与当归地黄饮治疗月经后期的核心靶点有较好的结合性。结论当归地黄饮可能通过多成分多靶点调节雌激素水平,抵抗颗粒细胞凋亡,提高卵母细胞质量,促进卵泡发育等作用来治疗月经后期。

铅胁迫对地黄生长及光合特性的影响

为了阐明铅(Pb)胁迫对地黄生长量及光合特征的影响,探讨药用植物对重金属胁迫的响应机制,以‘北京3号’地黄为试验材料,采用土培盆栽试验,以自然土壤加水为对照(0 mg·kg^(-1)),设置5个外源Pb浓度(50、100、200、300和400 mg·kg^(-1))处理,分析不同Pb浓度处理对地黄不同生长时期的生长量、叶片光合色素含量、光合参数和叶绿素荧光参数的影响。结果表明,高浓度Pb处理抑制了地黄叶片数、叶长、叶宽和叶厚的增长,光合色素含量和叶绿素荧光参数在整个生育期内随Pb浓度的升高均表现为先升高后降低,当Pb浓度高于200 mg·kg^(-1)时,电子传递速率、光合量子产量、最大荧光和初始荧光均显著降低;随Pb浓度的升高,地黄叶片的净光合速率、气孔导度和胞间CO_(2)浓度在地黄膨大初期至膨大前期逐渐降低,在膨大中期至收获期则表现为先升高后降低;蒸腾速率在整个生育期内随Pb浓度的升高呈下降趋势;地黄的光合特性对Pb的耐受性总体表现为50 mg·kg^(-1)处理>100 mg·kg^(-1)处理>0 mg·kg^(-1)处理>200 mg·kg^(-1)处理>300 mg·kg^(-1)处理>400 mg·kg^(-1)处理。综上所述,当Pb浓度低于200 mg·kg^(-1)时,地黄通过吸收光能、增强光合作用对抗Pb胁迫,当Pb浓度过高时,地黄光合作用减弱,对地黄的生长产生显著的抑制作用。研究比较了不同Pb浓度处理对地黄不同生育期生长量及光合特征的影响,解析了地黄对Pb元素的抗性机制,以期为农田土壤的安全利用及地黄的种植管理提供重要技术参考。

六味地黄汤对阿霉素肾病小鼠尿蛋白及肾小球p-p38 MAPK、α-actinin-4、synaptopodin的影响

目的探讨六味地黄汤对阿霉素肾病(adriamycin nephropaghy,ADRN)小鼠尿蛋白的干预作用及可能机制。方法30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机选取5只为空白组,余下小鼠以单次尾静脉注射阿霉素(0.01 g·kg^(-1))复制ADRN模型,2周后将造模成功的小鼠随机分为模型组、贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组,每组5只。空白组、模型组予等体积注射用水灌胃,贝那普利组予0.0013 g·kg^(-1)贝那普利灌胃,低、中、高剂量六味地黄汤组分别予9.75、19.5、39 g·kg^(-1)六味地黄汤灌胃,每日1次,连续8周。自动生化仪检测小鼠24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清钾;HE染色法、电镜观察小鼠肾脏病理改变及足突形态;免疫组织化学法、Western bolt检测小鼠肾脏磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)、α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、突触孔蛋白(synaptopodin)的表达;RT-PCR检测小鼠肾脏α-actinin-4、synaptopodin mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、24 h尿量、血清白蛋白降低,24 h尿蛋白定量升高(P<0.05);肾小球系膜细胞增生,部分系膜区扩大、肾小管蛋白管型,间质可见炎性细胞浸润,足突广泛融合;α-actinin-4蛋白及mRNA、p-p38 MAPK蛋白表达升高(P<0.05),synaptopodin蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,各干预组病理改变及足突融合均得到不同程度改善,贝那普利组及中、高剂量六味地黄汤组24 h尿蛋白定量减少,高剂量六味地黄汤组p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),低、中、高剂量六味地黄汤组synaptopodin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组组间比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论六味地黄汤可能通过抑制p38 MAPK通路活化和上调α-actinin-4、synaptopodin蛋白及mRNA表达,改善肾脏病理及足突融合,减轻足细胞损伤,减少ADRN小鼠尿蛋白。

六味地黄汤调控TGF-β及Smad家族蛋白表达对肾间质纤维化的影响研究

目的探究六味地黄汤抑制肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的干预作用及机制。方法将30只SPF级SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、阳性药物组、中药高剂量组和中药低剂量组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左侧输尿管结扎术制备RIF模型。造模结束后,假手术组和模型组予以蒸馏水灌胃,阳性药物组予以醋酸泼尼松片0.2 mg/kg灌胃,中药低、高剂量组分别予以六味地黄汤0.5、1 mg/kg灌胃,疗程为21 d。治疗结束后,采用HE染色法评估肾间质损伤,Masson染色法检测肾间质胶原蛋白沉积和纤维化,RT-PCR测定肾间质转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、针对半身不遂同源物2的重组母体(recombinant mothers against decapentaplegic homolog 2,Smad2)、Smad3、Smad7的mRNA表达,Western blot测定肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组的病理呈现系膜增生、间质增宽、胶原蛋白大面积沉积和明显纤维化,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05)。与模型组相比,阳性药物组和中药低、高剂量组的病理表现均减轻,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。与中药低剂量组相比,阳性药物组和中药高剂量组的TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论六味地黄汤能够减轻RIF大鼠的肾间质纤维化程度,且高剂量效果更佳,其机制可能与调控TGF-β及Smad家族蛋白表达有关。

六味地黄丸干预FGF23/Klotho轴对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱模型大鼠的影响

目的:观察六味地黄丸通过成纤维细胞生长因子23(FGF23)/Klotho轴对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱模型大鼠的影响及其干预机制。方法:50只SPF级SD大鼠随机分为假手术组(10只)、手术组(40只),手术组采用5/6肾切除及高磷饮食喂养构建慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱大鼠模型,模型复制成功后将30只造模成功大鼠随机分为模型组、骨化三醇组、六味地黄丸组,每组10只。六味地黄丸组、骨化三醇组大鼠分别予六味地黄丸和骨化三醇灌胃,假手术组及模型组大鼠予等体积的蒸馏水灌胃,持续给药8周。HE染色观察肾组织变化,检测大鼠血清钙(Ca^(2+))、磷(P^(3+))、碱性磷酸酶(ALP)、甲状旁腺激素(PTH)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),免疫组化及Western blotting法检测大鼠肾皮质Klotho、FGF23蛋白的表达。结果:HE染色显示,模型组大鼠肾小球结构紊乱、肾小管扩张,间质有大量炎症细胞浸润;与模型组比较,六味地黄丸组大鼠肾小球轻度增生,肾小管轻度扩张,间质炎症细胞浸润数目减少。模型组大鼠血清Scr、BUN、P^(3+)、PTH、ALP高于假手术组(P<0.01),体质量、血清Ca^(2+)低于假手术组(P<0.01);六味地黄丸组大鼠血清Scr、BUN、P^(3+)、PTH、ALP低于模型组,体质量、血清Ca^(2+)高于模型组(P<0.01)。模型组大鼠肾皮质Klotho蛋白相对表达量低于假手术组(P<0.05),FGF23蛋白相对表达量高于假手术组(P<0.01);六味地黄丸组大鼠肾皮质Klotho蛋白相对表达量高于模型组(P<0.01),FGF23蛋白相对表达量低于模型组(P<0.01)。六味地黄丸组大鼠血Scr、BUN及肾皮质FGF23、Klotho蛋白相对表达量与骨化三醇组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。六味地黄丸组大鼠血P^(3+)、Ca^(2+)高于骨化三醇组(P<0.05)。结论:六味地黄丸可能通过调控FGF23/Klotho轴改善慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱模型大鼠的肾功能和钙磷代谢。

六味地黄丸联合恩格列净治疗2型糖尿病的成本-效果分析

目的:探讨六味地黄丸联合恩格列净治疗2型糖尿病(T2DM)的成本-效果。方法:选取2021年6月~2023年9月三明市中西医结合医院收治的T2DM患者,单用恩格列净治疗的71例为对照组,六味地黄丸联合恩格列净治疗的71例为观察组,对两组治疗总有效率、不良反应发生率、总成本(C值)、总有效率(E值)、C/E值进行比较。结果:观察组总有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。观察组C值为(380.99±28.42)元,E值为97.18%,C/E值为392.04,与对照组[C值为(24.83±0.63)元,E值为87.32%,C/E值为284.35]比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:六味地黄丸联合恩格列净治疗T2DM的效果优于单用恩格列净,且不会增加不良反应发生风险,但是经济成本会相应增加,条件允许者可将六味地黄丸联合恩格列净作为首选治疗方案。

百合地黄汤及其类方在肿瘤治疗中的应用

肿瘤进展及化疗、放疗、手术各种治疗过程中患者常发生的不适症状(例如抑郁、心烦、食欲时好时坏、呕吐、口苦、小便色黄、身体虚弱)与百合病类似。仲景病证结合思路也适用于肿瘤治疗。例如,百合地黄汤加减治疗非小细胞肺癌及放射性肺炎、百合类方治疗肿瘤相关性抑郁焦虑、百合知母汤加减治疗乳腺癌术后心烦夜寐难安及肿瘤并发出血,百合滑石散加减治疗直肠癌术后抑郁兼小便灼热、百合滑石代赭汤加减治疗胃癌。以百合地黄汤为主方的病证结合思路在运用到肿瘤治疗时需注意明辨证型,抓住主症,病证结合。此外,对于百合地黄汤的其他类方(百合鸡子汤、百合洗方、栝蒌牡蛎散)目前虽未见肿瘤临床文献报道,但亦可应用于今后临床实践中,从而提高患者生活质量。

糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制研究

目的 探究糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制。方法 用小鼠单侧肾切除+腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)诱导糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)模型,选择糖尿病肾病小鼠模型组共45只小鼠,雌性CBA/J 30只,雄性DBA/2 15只,另选正常健康小鼠10只作为正常对照组。将造模的糖尿病肾病小鼠分为模型组、糖肾地黄汤高剂量组(TSDHDHD组)、糖肾地黄汤中剂量组(TSDHDMD组)、糖肾地黄汤低剂量组(TSDHDLD组),每组10只。HE染色检测小鼠的病理学变化,应用全自动生化分析仪对所获得小鼠血清空腹血糖(Fasting blood glucose, FBG),甘油三酯(Triglyceride, TG),胆固醇(Cholesterol, TC)水平,RT-PCR法分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2mRNA的表达,免疫印迹法(Westernblot, Wb)分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2的蛋白表达。采用SPSS 23.0统计软件。结果 对照组中细胞排列致密整齐、完整,存在少量脂肪细胞(P>0.05);与对照组比较,模型组细胞结构较为散乱,且由稀疏变细,近端脂肪细胞数目增多,差异存在统计学意义(P<0.05);相比模型组,各剂量组糖肾地黄汤脂肪细胞数目下降,比较存在统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05)。治疗前与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平升高(P<0.05),模型组与不同剂量糖肾地黄汤组相比无统计学差异(P>0.05);与治疗前相比,治疗12周后不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平均降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平明显升高,Bax/Bcl-2mRNA水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达明显升高,Bax/Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2水平降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 糖肾地黄汤可能通过调节lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴,从而达到延缓糖尿病肾病进展的目的。

地黄UDP-鼠李糖:鼠李糖基转移酶基因家族的生物信息学和表达分析

尿苷二磷酸鼠李糖基转移酶能将活性鼠李糖基供体转移到其糖基化受体分子上,合成鼠李糖基化的化合物.它们结构多样,活性广泛,具有药理、维持细胞结构、信号转导和化学防御及调节植物体内激素水平等重要作用.迄今,已从多种植物中分离得到这类酶,但有关其基因家族的结构特性与在植物次生代谢产物毛蕊花糖苷生物合成中的作用研究较少.以地黄尿苷二磷酸鼠李糖基转移酶基因(RgURT)家族的4个成员RgURT1~RgURT4为材料,利用生物信息学对该家族的特征进行了分析,比较了RgURT在高、低毛蕊花糖苷地黄品种块根中的表达模式.结果表明,其cDNA大小为645~1 422 bp,编码蛋白质分子量为24.05~53.24 kDa,由214~473个氨基酸残基组成,属于糖基转移酶GT-B型超家族,C端具有保守结构域盒(PSPG盒),无信号肽,亚细胞定位在细胞质中,二级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主;RgURT4与RgURT1~RgURT3分别聚类为2个簇,RgURT4蛋白与其他3个URT蛋白序列之间的同源性低;RT-qPCR分析表明,RgURT基因在高毛蕊花糖苷地黄块根中的表达量高于低毛蕊花糖苷地黄块根中的表达量.研究首次揭示了地黄RgURT家族的特征,初步验证了RgURT与地黄毛蕊花糖苷合成相关,将为进一步研究毛蕊花糖苷合成提供了重要酶基因.

针灸联合六味地黄丸序贯治疗肾精亏虚型早发性卵巢功能不全临床观察

目的探究针灸联合六味地黄丸序贯治疗对肾精亏虚型早发性卵巢功能不全(POI)的临床效果。方法将63例POI患者纳入试验,于月经期、经后期口服六味地黄丸,排卵期、经前期行灸法序贯治疗,针刺治疗贯穿后三期,隔日1次,每周治疗3次;连续治疗3个月经周期。观察序贯治疗对患者促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平及中医证候积分的影响。结果治疗3个月后,患者E2增高,FSH、LH均降低,中医证候得到有效改善(P<0.05)。结论采用针灸联合六味地黄丸序贯治疗肾精亏虚型POI,能较好地改善性激素水平及临床症状,且具有良好安全性。

黑地黄丸治疗慢性肾脏病肾性贫血患者的疗效及对其铁代谢的影响

目的探讨黑地黄丸治疗慢性肾脏病肾性贫血患者的疗效及对其铁代谢的影响。方法选取2020年6月—2022年6月期间我院肾内科门诊及住院部收治的80例肾性贫血患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组各40例。对照组采取常规治疗,观察组在对照组基础上予以黑地黄丸口服,两组患者均持续治疗12周。观察比较两组患者临床疗效、不良反应,治疗前后中医证候积分、贫血纠正情况[红细胞数(Red blood cell,RBC)、血红蛋白含量(Hemoglobin,HGB)、红细胞压积(Hematocrit,HCT)]、铁代谢指标[血清铁蛋白(Serum ferritin,SF)、血清铁(Serum iron,SI)、总铁结合力(Total iron bond strength,TIBC)和转铁蛋白饱和度(Transferrin saturation,TAST)]、肾功能指标[血清尿素氮(Serum urea nitrogen,BUN)、肌酐(Serum creatinine,Scr)、计算肾小球滤过率(Estimated glomerular filtration rate,eGFR)]。结果治疗后两组患者中医证候积分较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组中医证候积分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者RBC、HGB及HCT指标均较治疗前明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组RBC、HGB及HCT指标明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者SF、SI及TAST指标均较治疗前明显升高,TIBC指标明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组SF、SI及TAST指标明显高于对照组,TIBC指标明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者BUN及Scr指标均较治疗前明显降低,eGFR指标较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组BUN及Scr指标明显低于对照组,eGFR指标明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组总有效率(92.5%)明显高于对照组(75%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组患者不良反应比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论黑地黄丸能够纠正CKD肾性贫血患者铁代谢紊乱,改善铁代谢,继而减轻患者临床症状,改善贫血情况,最终改善患者肾脏功能,提高临床疗效,且具有较高安全性,值得推广。

基于Akt/mTOR信号通路探讨洋地黄毒苷调控甲状腺滤泡上皮细胞自噬与凋亡的机制

目的探究洋地黄毒苷对脂多糖刺激下的人甲状腺滤泡上皮细胞系Nthy-roi3-1凋亡与自噬的影响及其作用机制。方法①将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷低剂量组、脂多糖+洋地黄毒苷中剂量组及脂多糖+洋地黄毒苷高剂量组,各组进行对应处理后,CCK-8法检测各组细胞活力,免疫荧光染色观察各组细胞自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bcl-2同源结构域蛋白抗体(Beclin 1)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70S6K蛋白表达情况。②将Nthy-roi3-1细胞分为对照组、脂多糖组、脂多糖+洋地黄毒苷组、脂多糖+洋地黄毒苷+自噬抑制剂组,各组进行对应处理后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR及p70S6K蛋白表达情况。结果①与脂多糖组比较,脂多糖+洋地黄毒苷各组的细胞活力均明显升高(P均<0.05);LC3荧光染色强度随洋地黄毒苷剂量增加逐渐增强,细胞凋亡率均明显降低(P均<0.05);细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),细胞中p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p70S6K蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。②与脂多糖组比较,脂多糖+洋地黄毒苷组细胞凋亡率明显降低(P<0.05);细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),细胞中p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p70S6K蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与脂多糖+洋地黄毒苷组比较,脂多糖+洋地黄毒苷+自噬抑制剂组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),细胞中p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p70S6K蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论洋地黄毒苷能够促进脂多糖刺激下Nthy-roi3-1细胞自噬,抑制细胞凋亡,该作用可能与其抑制Akt/mTOR信号通路的激活有关。

熟地黄产地加工炮制一体化及其特色炮制虚拟仿真实验设计

基于中药产地加工炮制一体化技术和虚拟仿真技术,构建具有地域特色的熟地黄产地加工炮制一体化及其特色炮制虚拟仿真实验教学系统,使用Unity 3D游戏引擎虚拟仿真技术开发,采用3D Max软件建模和C#语言编程开发3D仿真操作实验教学系统,将由鲜地黄产地加工到生地黄炮制,最终到临床应有的熟地黄饮片的全过程炮制流程一一还原出来。利用该教学系统,可以针对熟地黄炮制流程进行反复训练,掌握各环节主要技术要点,提升学生对熟地黄加工流程的认知和操作技能。

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路、性激素、骨代谢探究知柏地黄丸联合治疗女性特发性性早熟的效果及机制

目的探讨联合知柏地黄丸对女性特发性性早熟(CPP)患儿性激素、骨代谢及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法选取2022年1月—2022年12月收治的60例CPP患儿,随机数字表法分为西药组、联合组2组,均30例。西药组给予注射用曲普瑞林治疗,联合组在西药组基础上联合知柏地黄丸治疗。比较2组临床疗效、安全性,以及治疗前后子宫体积、卵巢体积、卵泡直径、性激素水平[促黄体生成素(LH)、LH/促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E_(2))]、骨代谢指标[骨钙素、骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原氨基端肽(PⅠNP)、骨密度、β-胶原降解产物(β-CTX)]、PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。结果联合组总有效率96.67%(29/30)高于西药组70.00%(21/30)(P<0.05)。联合组治疗后子宫体积、卵巢体积、卵泡直径均低于西药组(P<0.05);联合组治疗后血清LH、LH/FSH、E_(2)、骨钙素、BALP、PⅠNP水平低于西药组,骨密度高于西药组(P<0.05)。2组治疗后血清β-CTX水平比较无显著差异(P>0.05)。联合组治疗后PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平低于西药组(P<0.05)。联合组不良反应总发生率与西药组比较无显著差异(P>0.05)。结论注射用曲普瑞林联合知柏地黄丸能降低CPP患儿性激素水平,改善骨代谢相关因子的表达,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活性,从而改善患儿症状。研究结果表明该方案临床疗效确切,且具有一定安全性。

六味地黄丸联合大黄液治疗慢性牙周炎的效果分析

目的:分析六味地黄丸联合大黄液治疗慢性牙周炎的效果及对牙龈指数(GI)、探针深度(PD)的影响。方法:选取2021年1月-2022年1月广州市胸科医院诊治的慢性牙周炎患者86例作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和联合组,各43例。两组患者均采用常规治疗,对照组在此基础上局部应用大黄液治疗,联合组在对照组基础上给予六味地黄丸治疗。比较两组临床疗效、中医证候积分、牙周健康指标和炎性因子水平。结果:联合组临床疗效总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.044)。治疗后,两组牙齿松动、肢体沉重、牙龈红肿、胸闷口苦、反复咽痛评分均下降,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组GI和PD均下降,联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β水平均下降,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:六味地黄丸联合大黄液治疗慢性牙周炎的临床效果显著,可有效改善患者中医证候积分和牙周健康指标,降低炎性因子水平。