尾加压素Ⅱ对培养的心脏成纤维细胞增殖和胶原基因表达的影响

目的观察尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)在体外对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖和Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)基因表达的直接影响,以探讨UⅡ在心力衰竭心肌重塑中的作用。方法以胰酶消化和差速贴壁法分离和纯化SD乳鼠的CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,RT-PCR测定CoL-ⅠmRNA表达水平。结果UⅡ对CFs增殖呈浓度依赖性,随着UⅡ作用浓度的增加,MTT光吸收值呈先升高后降低的趋势,其中1×10-8 mol/L和1×10-9 mol/L的UⅡ作用显著(P<0.05);1×10-7 mol/L、1×10-8 mol/L和1×10-9 mol/L浓度的UⅡ能促进CFs的CoL-ⅠmRNA表达(P<0.01)。结论UⅡ可直接促进CFs的增殖及CoL-ⅠmRNA表达,作用大小与UⅡ浓度有关,提示UⅡ在心力衰竭心肌重塑的病理生理过程中可能发挥重要作用。

大鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养

为了建立大鼠脑微血管内皮细胞体外培养模型,探索纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法并进行形态学观察.采用2～3周龄的SD大鼠,解剖得到大脑皮质,两次酶消化及牛血清白蛋白或葡聚糖和Pefcoll梯度离心获得较纯的脑微血管段后,接种于涂布基质的培养皿进行原代培养;培养的细胞采用相差显微镜形态学观察、透射电镜观察及Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测鉴定.结果发现,培养12 h即可见细胞从贴壁的脑微血管段周围长出,细胞呈短梭形,区域性单层生长,5～7天内皮细胞融合,内皮细胞纯度达90%以上;内皮细胞的贴壁和生长有赖于所涂布的基质,纤连蛋白/Ⅳ型胶原优于鼠尾胶和明胶;Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达阳性,透射电镜观察可见相邻内皮细胞间存在紧密连接结构.提示该方法能成功进行纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养,可用于脑微血管内皮的生理、生化及药理学研究,亦可用于构建大鼠血脑屏障模型.

人胚胎生殖干细胞的分离和体外培养

目的:体外培养人胚胎生殖干细胞(EG),在不添加细胞因子的培养条件下,观察细胞生长情况。方法:取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块培养,采用组织化学及免疫细胞化学技术对培养的细胞进行鉴定。结果:培养4d后,在成纤维细胞的上面出现EG细胞集落;培养2周后,显示细胞呈圆形,胞质染成深蓝色;细胞染色体均为正常的二倍体核型;碱性磷酸酶活性强阳性;并检测到SSEA-1。结论:体外培养人胚胎生殖腺嵴,利用源于自身胚胎组织的成纤维细胞作为饲养层,可观察到EG细胞集落的形成;培养的细胞初步鉴定为人胚胎干细胞。

培养大鼠星形胶质细胞牵张损伤后超微结构的变化

目的研究体外培养星形细胞牵张损伤后超微结构的变化.方法取新生1～2 d大鼠的皮层细胞原代培养,经纯化后传代培养于乳胶膜培养皿中.采用计算机控制的牵张损伤装置,分别以50、150、250kPa压力牵张损伤培养于乳胶膜上的大鼠皮层星形胶质细胞.用3%戊二醛固定后,行扫描电镜和透射电镜观察.结果当用50kPa驱动压力进行牵张损伤时,细胞结构即有明显破坏,表现为细胞间隙增宽,部分胞体和突起被撕裂;以50kPa牵张损伤后1 h,透射电镜下可见线粒体肿胀、嵴减少;损伤后6h可见线粒体致密、细胞器减少等.当牵张应力增大,星形细胞损伤程度加重,细胞器明显减少,线粒体空泡化,微丝、微管明显减少,直至水样胞质或致密胞体.结论较小的应力即可致星形细胞紧密连接的破坏和超微结构的改变,可能与脑外伤后产生广泛的脑水肿有关.

大鼠输精管平滑肌细胞的体外培养

目的 建立从SD大鼠的输精管中提取、培养获得平滑肌细胞的方法。方法 取SD大鼠的输精管,用酶消化法分离、提取平滑肌细胞,进行体外培养、扩增。倒置相差显微镜下观察体外培养的平滑肌细胞的生长情况,用平滑肌特异性的抗αSMA做免疫组化染色,鉴定培养的细胞。结果 平滑肌细胞体外培养呈长梭形,并出现“峰 谷”样生长特征。用抗αSMA免疫组化染色的方法鉴定所培养为平滑肌细胞,其纯度为(91 3±5 2 ) %。结论 成功地建立了从SD大鼠输精管中提取、培养获得自体平滑肌细胞的稳定模型。

体外培养破骨细胞的功能观察

观察破骨细胞在离体状态下的骨吸收功能。新鲜牛皮质骨经锯式切片机横切成５０μｍ厚０．５×０．５ｃｍ大小骨片。参照已建立的破骨细胞分离培养方法，从新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠四肢长骨分离破骨细胞，培养于２．５ｃｍ细胞培养皿内或上述骨片上，相差倒置显微镜或扫描电镜观察，可见培养的细胞具有典型破骨细胞的形态特点，接种子骨片上的破骨细胞分别培养１、３、５、７天，扫描电镜观察，可见破骨细胞能在骨片表面形成吸收陷窝，其形态多样，深浅不一，边界清晰，底面粗糙，而且随培养时间延长，陷窝扩大，数量增多。结论，破骨细胞在体外培养条件下具有良好的骨吸收功能，可进行药物干预的研究。

人脐静脉内皮细胞的培养和连续传代

本实验用新生小牛视网膜提取物作血管内皮细胞生长促进剂,成功地使人脐静脉内皮细胞在体外连续培养23代以上。细胞倍增时间平均为16.6h,细胞传代时间平均为5 d,传代比率为1:2～1:3。用ABC法证明细胞内存在Ⅷ因子相关抗原(FⅧr-Ag),透射电镜下可见胞浆内含WP(Weibe1-Palade)小体,证实所培养的细胞为血管内皮细胞。

藻酸双酯钠对培养神经细胞谷氨酸兴奋毒性的保护作用

目的 :观察藻酸双酯钠 (PSS)对培养神经细胞谷氨酸兴奋毒性的保护作用。方法 :体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞 ,加入谷氨酸观察谷氨酸对神经细胞的兴奋毒性及PSS的保护作用。结果 :PSS 5 0 ,1 0 0 ,1 5 0mg·L-1能显著减少细胞死亡 ,降低乳酸脱氢酶(LDH)漏出量 ,一氧化氮 (NO)含量及丙二醛 (MDA)生成 ,提高超氧歧化酶 (SOD)活性。结论 :PSS对培养神经细胞谷氨酸兴奋毒性具有显著的保护作用 ,其机制可能与PSS抗脂质过氧化作用有关。

高碘对体外培养的人甲状腺细胞超微结构的影响

[目的]探讨高碘对体外培养的人甲状腺细胞超微结构的影响与相关甲状腺疾病的关系。[方法]采用体外甲状腺细胞原代培养技术 ,术中取甲状腺腺瘤旁组织 ,常规培养7天后 ,分别加入不同浓度的KI溶液继续培养7天 ,收集细胞做透射电镜观察。[结果]当碘浓度为0 006μg/ml,0 03μg/ml,0 15μg/ml时 ,其细胞的超微结构无明显变化。当碘浓度为0 75μg/ml时 ,细胞出现微绒毛增加 ;核变形 ,核膜凹陷 ,核仁增大 ,双核仁 ;线粒体和粗面内质网增加。当碘浓度达到3 75μg/ml时 ,出现线粒体肿胀 ,粗面内质网扩张。当碘浓度为18 75μg/ml时 ,大部分细胞溶解 ,残余的细胞出现层状小体。[结论]高碘可使甲状腺细胞增殖活跃 ,功能增强 ,当碘浓度进一步增高时 ,则出现细胞损伤 ,继而出现功能抑制 ,说明高碘在甲状腺机能亢进症 ,甲状腺炎以及甲状腺癌的发病过程中起重要作用。

贴壁细胞培养过程中支原体污染的几种救治方案疗效比较研究

支原体是细胞培养中最常见、不易被察觉和干扰实验结果的污染物，约有30．3％～50．5％的细胞培养物中有支原体污染。培养细胞中支原体污染的来源包括：所使用的动物来源的一些产品如血清或已被支原体污染的细胞株系。细胞培养上清液中支原体的浓度可达10^7个/ml,而培养的细胞看起来很正常．在肉眼观察或普通光学显微镜下观察。受污染的细胞可无明显变化日。

大鼠附睾上皮细胞的体外培养与研究

目的：对体外培养的大鼠附睾上皮细胞进行动态观察与鉴定，了解体外条件下精子与附睾上皮细胞共同培养后精子活动力的变化。方法：用酶消化法对大鼠附睾上皮细胞进行培养，观察与体尾部上皮细胞复合培养的精子鞭毛摆动与前向直线运动能力变化的情况。结果：培养的细胞呈多角形态并保持其形态１２ｄ以上；电镜证实细胞表面存在微绒毛，有丰富的滑面内质网；复合培养的精子运动能力明显增加。结论：体外条件下培养的细胞具有明显上皮细胞特征，精子在复合培养后，能逐渐获得授精所必需的运动能力。

细胞盖玻片培养法及其在实验细胞学研究中的应用

体外细胞培养作为重要的实验细胞学手段在生命科学研究的众多领域被广泛应用。以往的体外细胞学研究多以不同规格的培养皿/瓶为单位进行。在实验中,虽可通过设立多种形式的对照来消除各种因素造成的差异,但仍有一定的不足和弊端。这主要表现在:(1)多皿培养的细胞间存在着皿间差异;(2)培养皿内的细胞只能供单项指标观察;(3)

兔角膜缘干细胞的体外低钙原代培养研究

目的:探讨获取较纯的体外培养的兔角膜缘干细胞的方法,为角膜缘干细胞的临床移植奠定实验基础。方法:采用低钙培养法对兔角膜缘组织行体外培养,观察培养细胞的分化状态,并将培养的细胞行AE5免疫荧光染色。结果:体外培养的细胞以未分化的角膜缘干细胞为主。结论:取用角膜缘基底组织进行培养,将无钙培养液与低钙培养基结合,可获得较纯的、未分化的角膜缘干细胞。

锌盐对培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的 探讨硫酸锌盐对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生及Caspase-3表达的影响。方法 采用MTT法检测不同浓度硫酸锌盐对RPE细胞生长的影响,用TUNEL技术检测RPE细胞凋亡,免疫细胞化学染色观察Caspase-3表达。结果 锌盐浓度高于0.001μmol/L就可抑制RPE细胞的增生;当锌盐浓度高于10μmol/L后对RPE细胞的增生抑制率与药物剂量成正比。不同浓度锌盐均可诱导RPE细胞表达Caspase-3增加,且当锌盐浓度高于0.01μmol/L就可诱导RPE细胞凋亡。结论 锌盐可诱导RPE细胞表达Caspase-3增加,从而可引发RPE细胞的凋亡。因此对于不缺乏锌的年龄相关性黄斑变性(age-related macular degen-eration,ARMD)患者锌剂治疗未必有益。