46,XY性发育异常基因诊断专家共识

46,XY性发育异常(disorders/differences of sex development,DSD)是一组核型为46,XY,染色体、性腺和表型不匹配的先天性疾病,约占所有DSD患者的50%[1-3]。该类疾病表型谱复杂,可从轻度男性化不全到完全女性表型,如尿道下裂、小阴茎、隐睾、女性化外生殖器、第二性征不发育等。DSD病因复杂,既包括外源性因素,如母体因素、化学制剂及环境干扰物等;又有内源性因素.

基于基因诊断的鞍旁高分化软骨肉瘤一例并文献复习

目的:报道鞍旁软骨肉瘤的临床特点,探讨本病的特征性影像学表现及基因检测在其临床诊治中的价值。方法:回顾1例鞍旁高分化软骨肉瘤患者的临床资料并复习相关文献。结果:本例报道的鞍旁高分化软骨肉瘤患者以头痛为主要表现,MRI检查示右侧蝶鞍部团块状异常信号,神经导航下手术分块全切肿瘤,术后行病理组织免疫组化及基因检测。患者术后恢复良好,随访6个月无复发。结论:对于病理特征不明显的软骨肉瘤,标本的基因检测非常重要,往往可以发现明确的基因突变或融合。诊疗过程中需加强对其的认识,及时给予治疗。

1例罕见ADGRG1-ALK融合突变肺腺癌的基因诊断与治疗

目的回顾性分析1例罕见ADGRG1-间变性淋巴瘤激酶(ALK)融合突变肺腺癌的诊治资料,旨在为此类疾病的基因诊断和治疗提供参考。方法回顾1例肺腺癌患者的病历资料,并对其肺穿刺活检标本进行基因检测,结合基因检测结果选择相应的ALK酪氨酸激酶抑制剂(ALK-TKIs)治疗。结果患者女,61岁,因“咳嗽、咯血丝痰10天”入院。CT检查提示,右肺下叶肿物疑似肺癌,锁骨上淋巴结、纵隔淋巴结肿大及双肾上腺结节疑似转移,右肺中叶不张。经肺穿刺活检病理回报为腺癌,最终诊断为右肺下叶腺癌(T1cN3M1b,ⅣA期)。二代测序技术(NGS)基因检测提示ADGRG1-ALK融合突变,予阿来替尼600 mg口服、2次/天,疗效明显。但治疗期间发生药物性肝炎伴肝功能衰竭、溶血性贫血、肺部感染等不良反应,经对症支持治疗好转。停药45天后半量予阿来替尼口服仍然有效,且未再出现新的严重药物不良反应。结论本研究发现了1例新型罕见ALK融合突变的晚期肺腺癌患者,NGS基因检测属于ADGRG1-ALK融合突变,阿来替尼可获得显著治疗反应。但治疗期间要密切监测血常规和肝功能。

长三角地区奶牛乳房炎致病菌的基因诊断与药敏分析

本研究共采集了长三角地区39个牧场中938头临床型乳房炎患牛乳样1082份,利用PathoProof乳房炎PCR诊断技术和药敏检测对样品进行了诊断和分析,以期为长三角地区奶牛乳房炎防控提供参考。样品共检出致病菌样品2369个,致病菌检出种类共有12种,检出率较高的5种致病菌分别为金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)、凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)、无乳链球菌、乳房链球菌和大肠杆菌,平均检出率分别为9.55%、48.79%、58.63%、23.14%和61.23%。金葡菌在浙江地区的样品中检测率为最高,达到了13.87%。在上海、江苏和浙江地区,均以大肠杆菌为主,其中浙江地区的大肠杆菌检出率达到了85.40%。安徽地区以无乳链球菌为主,检出率达到了59.64%。药敏结果显示,金葡菌对庆大霉素、头孢喹肟、环丙沙星、恩诺沙星和林可霉素较为敏感,敏感率在80%以上,但对链霉素、青霉素、阿莫西林、头孢噻呋和四环素有较强的耐药性。CNS对庆大霉素、青霉素、阿莫西林、头孢噻呋、头孢喹肟、环丙沙星和恩诺沙星较为敏感,敏感率在80%以上,但对链霉素、林可霉素和四环素有不同程度的耐药性,其中安徽地区的菌株对链霉素和林可霉素的耐药率最高,分别为97.5%和100%。无乳链球菌对庆大霉素、青霉素、阿莫西林、头孢喹肟、环丙沙星、恩诺沙星、林可霉素和四环素均敏感,敏感率几乎均在90%以上,但对头孢噻呋和链霉素耐药性较大,耐药率约为40%。乳房链球菌对庆大霉素、头孢喹肟、环丙沙星、恩诺沙星和林可霉素较为敏感,其中对头孢喹肟的敏感率最高,达到了100%,但均对四环素表现出较强的耐药性,几乎达到100%。大肠杆菌对头孢噻呋和头孢喹肟几乎100%敏感,但对青霉素、阿莫西林、林可霉素和四环素均表现出较强的耐药性,特别是对四环素,耐药率几乎达到100%。各地区致病菌主要类型和致病菌对常用抗生素的敏感性表现不同,牧场防控和用药需要有针对性,以减少耐药产生。

G6PD基因非热点突变基因诊断

目的分析3例(其中2例常见12个热点突变检测结果呈阴性)葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症患儿及母亲的G6PD基因,明确G6PD基因突变情况,为用药和饮食指导提供分子依据。方法采集外周血提取DNA,用DNA双脱氧链终止法(Sanger)测序技术对3例患儿G6PD基因编码区进行检测,继而对患儿母亲行相应点突变检测。查询常用人类基因突变数据库(HGMD)、突变数据库Mutation、ClinVar等分析检测结果,并根据美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)制定的遗传变异分类标准与指南,对基因突变结果进行致病性评级。结果检测出3个患儿分别为G6PD基因c.208T>C半合子突变、c.440A>G半合子突变、c.1376G>T半合子突变,3位母亲相应位点均呈杂合突变。G6PD基因c.440A>G突变在常用突变数据库HGMD和ClinVar未见收录报告,可能为新发突变。根据ACMG遗传变异分类标准与指南,将检测到的3个患者G6PD基因c.1376G>T、c.208T>C及c.440A>G突变分别评级为致病突变、可能致病突变及意义不明。结论对G6PD基因常见热点突变检测呈阴性结果的G6PD缺乏症患者,可用Sanger测序技术检测其G6PD基因编码区,查明基因突变情况,这有助于临床用药治疗及饮食指导。

血常规联合血红蛋白电泳在临床地中海贫血基因诊断中的应用价值

目的探讨血常规联合血红蛋白(Hb)电泳检测在临床地中海贫血基因诊断中的应用价值。方法将67例确诊为地中海贫血的患者纳入观察组,将同期67例排除地中海贫血的健康者纳入对照组。所有研究对象均进行血常规、(Hb)电泳检测。比较两组血常规检验红细胞参数[红细胞计数(RBC)、Hb、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)]、血红蛋白A(HbA)、血红蛋白A2(HbA2)水平;比较对照组及不同基因类型地中海贫血患者红细胞参数水平;以基因检测(基因突变检测结果)为筛查金标准,分析不同检测方式在地中海贫血基因诊断中的效能。结果观察组RBC(5.22±0.79)×1012/L、Hb(116.88±18.32)g/L、HCT(36.67±5.54)%、MCV(71.07±8.05)fl、MCH(22.56±2.99)pg、MCHC(317.01±13.51)g/L、HbA(93.02±0.92)%、HbA2(2.15±0.36)%均低于对照组的(5.88±0.39)×1012/L、(136.21±9.30)g/L、(40.18±2.54)%、(80.25±3.17)fl、(30.14±1.71)pg、(336.92±13.22)g/L、(96.75±0.25)%、(3.05±0.26)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。经检测,α型地中海贫血、β型地中海贫血患者的RBC、Hb、HCT、MCV、MCH、MCHC、HbA、HbA2水平均低于对照组,α复合β型地中海贫血患者RBC、Hb、MCH、HbA、HbA2水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。应用MCV+MCH+HbA+HbA2联合检测的灵敏度(98.51%)、特异度(97.01%)、阳性预测值(97.06%)、阴性预测值(98.48%)、准确度(97.76%)高于MCV检测[灵敏度(83.58%)、特异度(94.03%)、阳性预测值(93.33%)、阴性预测值(85.14%)、准确度(88.81%)]、MCH检测[灵敏度(89.55%)、特异度(92.54%)、阳性预测值(92.31%)、阴性预测值(89.86%)、准确度(91.04%)]、HbA+HbA2联合检测[灵敏度(88.06%)、特异度(88.06%)、阳性预测值(88.06%)、阴性预测值(88.06%)、准确度(88.06%)],但差异无统计学意义(P>0.05)。结论血常规红细胞参数指标、Hb电泳检测在健康人群、地中海贫血患者中差异显著,且不同基因分型差异不一。血常规联合Hb电泳指标检测在地中海贫血诊断中具有可靠的诊断效能,对地中海贫血的筛查和诊断具有积极意义。

儿童癫痫基因诊断提升精准诊疗水平

癫痫是一种常见的慢性脑部疾病,探讨其发生机制一直是脑科学研究的重要方向之一。神经遗传学是一个快速发展的领域。随着基因检测研究和技术的不断进步与更新,遗传因素在癫痫发生机制中的作用越来越受到重视,通过基因检测寻找其致病机制可以为个体化的精准诊疗提供依据。癫痫是最常见的儿童神经系统疾病之一。近年来儿童癫痫基因检测技术在基因发现、基因筛查、分析策略,以及不同类型的遗传变异研究方面取得了巨大进展。首都医科大学宣武医院儿科依托于首都医科大学宣武医院神经学科的优势,以治疗儿童神经疾病为主,儿科病房里80%为癫痫患者。

单基因遗传病基因诊断技术的临床应用效果

解析单基因遗传病基因诊断方法的应用价值。方法 选择本院在2023年1月-2023年12月的60例接受治疗的单基因遗传病患者为对象,这些患者均经临床确诊,以此为金标准;在确诊之前对全部入选者进行单基因遗传病基因诊断技术鉴别诊断,分析其诊断结果和金标准的差异性。结果 在本研究中有60例单基因遗传病患者经临床随访后最终均确诊,且这些患者在确诊前均实施了单基因遗传病基因诊断技术,60例患者均获得确诊,和金标准的诊断相符率达到100.00%。在60例单基因遗传病患者中,22例遗传代谢疾病,占比36.67%;8例遗传性神经系统疾病,占比13.33%;7例遗传性免疫系统疾病,占比11.67%;9例遗传性血液疾病,占比15.00;8例遗传性皮肤疾病,占比13.33%;6例遗传学肌肉骨骼疾病,占比10.00。结论 在单基因遗传病上运用单基因遗传病基因诊断方法更具应用价值,诊断符合率较高,且风险低、创伤小,可作为临床诊断的一个重要技术,提供有效指导和依据。

β-地中海贫血的基因诊断及产前基因诊断

目的 减少 β -地中海贫血重症患儿的出生。方法 对 10 6例经血液学筛查疑为 β -地中海贫血的杂合子携带者行PCR -RDB法进行基因诊断及产前基因诊断。结果 共筛出 β -地中海贫血阳性患者 5 2例 ;19例产前基因诊断中 ,确定正常胎儿 9例 ,重症胎儿 2例 (纯合子 1例 ,双重杂合子 1例 ) ,重症 β -地中海贫血胎儿诊断后采取引产术终止妊娠。结论 PCR -RDB法进行基因诊断及产前基因诊断有效避免了重症患儿的出生 。

脆性X综合征的基因诊断与产前诊断

为了探讨简便、快速、准确、价廉的脆性X综合征的诊断方法,对6个智能低下家系进行了细胞遗传学检查,以及PCR直接扩增FMR15′端(CGG)n重复序列、RT-PCR扩增FMR1基因的cDNA序列的分子遗传学检查。A家系先证者脆性X染色体高表达(35 273),分子遗传学检查证实为脆性X综合征全突变患者;B家系先证者及其母亲无脆性X染色体表达,分子遗传学检查证实为非脆性X综合征患者;C家系的男性胎儿脆性X染色体表达(5 93),先证者及其母亲未发现脆性X染色体,分子遗传学检查证实男性胎儿为脆性X综合征全突变患者,其母亲为前突变携带者,哥哥为嵌合体患者;D家系先证者脆性X染色体高表达17%,其姐姐脆性X染色体5%,分子遗传学检查证实先证者为脆性X综合征全突变患者,其姐姐为嵌合体患者;E家系先证者及其母亲,F家系先证者发现可疑脆性X染色体,分子遗传学检查证实为非脆性X综合征家系。结论:PCR直接扩增FMR1基因(CGG)n重复序列联合RT-PCR扩增FMR1基因cDNA序列简便、快速、价廉。可用于脆性X综合征的筛查、诊断及产前诊断,有推广应用价值。

地中海贫血的产前筛查和基因诊断

目的分析孕妇血液学指标与地中海贫血（简称地贫）各基因型的关系，探讨地贫产前筛查的可靠依据。方法在本院所有产前检查人群中广泛开展地贫的血液学筛查，进行阳性病例基因检测，确诊后筛查配偶，夫妇患同型地贫者进行产前诊断；疑似β地贫夫妇行β基因突变热点测序、比对，探查未知突变。结果疑似地贫孕妇115例，确诊73例，夫妇同患α地贫1对、β地贫3对，产前诊断重型地贫患儿3例。Hb、MCV、RBC、RDW、HbA2在α、β、α／β与β/β间差异有统计学意义（P〈0．01）。疑似β地贫的样本大多呈2-5个SNP杂合状态。结论重庆为β地贫的高发区，红细胞参数和定量血红蛋白电泳是筛查地贫的重要指标，gap-PCR、PCR-RDB、基因测序可明确诊断，切实干预地贫的出生缺陷。

线粒体tRNA^（Leu（UUR））基因突变糖尿病──患病率估测、临床特点及基因诊断途径

用基因诊断技术在２０７例无亲缘关系的非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者中，筛查线粒体ｔＲＮＡＬｅｕ（ＵＵＲ）基因突变糖尿病，２例基因诊断阳性。本病在具不常见临床表现的ＮＩＤＤＭ亚群中占２．４％～１１．１％。对２例阳性者的家系进行临床及基因分析，检测２５个家系成员中，１０个基因诊断阳性。提出对于起病早、对口服降糖药继发失效需改用胰岛素治疗、有胰岛β细胞功能明显减退、消瘦、神经性耳聋、有糖尿病及／或听力障碍家族史且符合或不能除外母系遗传一种或多种情况的ＮＩＤＤＭ者应疑及本病。可用方法简便、易于判断的等位基因特异引物扩增（ＡＳＰＡ）或ＰＣＲ２０６ｂｐ／ＡｐａＩ或ＨａｅⅢ技术进行临床基因诊断。

中国人St14/TaqⅠRFLPs及其在甲型血友病基因连锁分析与产前基因诊断中的应用

St 14(DXS 52)是人X染色体长臂远端的一段基因外DNA序列,与FVⅢ基因紧密连锁。我们分析了95个中国人的St 14/Taq I RFLPs,在44条无遗传关系的X染色体中,St14/Taq 13.6 kb片段出现的频率为31％而4.5kb、4.1kb片段出现的频率则相对较低,与国外报道明显不同。以此RFLPs作为FVⅢ基因的遗传标志,我们分析了8个甲型血友病家系。3个家系中有缺陷FVⅢ基因的可以用此RFLPs进行连锁分析,其中1例为首次应用这一RFLPs连锁分析完成的产前基因诊断。

重型血友病甲基因诊断新技术的研究及其应用

运用长距离ＤＮＡ扩增技术（ＬＤ－ＰＣＲ）成功地检测出凝血八因子ＦⅧ基因倒位缺陷患者，并检出该倒位的女性携带者。在建立并完善上述技术之后，对５３份ＨＡ患者及家系成员的ＤＮＡ标本进行了双盲试验，检出ＦⅧ倒位者２３份，野生型２７份，携带者３份。结果与用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术检测的结果完全一致，说明运用本ＬＤ－ＰＣＲ技术检测ＦⅧ基因倒位的灵敏度与准确率均达到百分之百。运用这一新技术，完成了５个重型血友病甲家系的基因诊断。共检出３例基因倒位者，４位女性倒位基因的携带者。该技术较Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ印迹杂交法简便、快速、高效直观、灵敏准确，便于推广应用，达到国际先进水平。

南宁地区14096例儿童地中海贫血筛查与基因诊断分析

目的了解南宁地区儿童地中海贫血(TM)发生情况、基因突变类型及频率。方法通过全血细胞分析、血清铁蛋白检测对南宁地区14 096例儿童进行TM初步筛查,对筛查结果阳性者进行α-TM或(和)β-TM基因突变检测。结果初步筛查阳性2 594例,阳性率18.40%,进一步经基因分析确诊TM 1 878例,检出率13.32%,其中α-TM和β-TM分别为1161例(8.24%)和855例(6.07%),其中包括α-TM合并β-TM 138例(0.98%),中间型、重型TM 334例(2.37%)。检出α-TM基因型共22种,以--sea/αα为主,占49.79%;β-TM基因型共28种,以CD41-42(-TCTT)/N和CD17(A→T)/N为主,分别占40.70%和25.73%。6种α-等位基因1410个,以--sea为主,突变率为2.84%;10种β-突变位点967个,以CD41-42(-TCTT)和CD17(A→T)为主,突变率为1.59%和0.98%。结论南宁地区儿童TM发生率高,TM基因突变类型多,应加强育龄人群及新生儿期TM筛查,以降低TM相关出生缺陷率,早期干预治疗。

脊髓性肌萎缩症的基因诊断

我们运用错配 PCR- RFLP方法对脊髓性肌萎缩症 ( SMA)患者和对照组进行了基因诊断的研究。结果发现临床诊断为 SMA的患儿 10例中有 9例出现端粒 SMN基因缺失而确认为阳性 ,1例阴性 ;正常家系成员 2 0例及正常对照组 2 0例均为阴性。此与国外报道相符。该法特异性高、敏感性好 ,实用可靠 ,适用于

改良的PEP方法在无创性产前基因诊断中的应用

应用显微操作技术获取孕妇外周血中的单个有核红细胞 ,改良的PEP方法扩增单个有核红细胞的全基因组DNA ;在此基础上 ,应用荧光标记聚合酶链反应扩增 9个微卫星片段 ,进行基因型分析判定单个有核红细胞来源。综合性别和DMD基因内的数个STR位点连锁分析进行DMD基因诊断 ,应用PCR -STR连锁分析进行PKU基因诊断。结果显示 ,对 10例DMD高危胎儿中的 6例成功地进行了无创性产前基因诊断。同时对 1例PKU也成功地进行了无创性产前基因诊断。改良的PEP方法扩增单个细胞的全基因组可以满足基因诊断的要求 。

二核苷酸重复多态性的非同位素检测及其在基因诊断中的应用

本文报道了一种检测二核苷酸重复多态性的简便的非同位素法，利用重复序列两侧的特异引物进行ＰＣＲ扩增，产生的等位片段在薄层变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上分离，再用灵敏的银染法显色。该方法不需要标记ＰＣＲ产物，简便、快速，分辨率可达１ｂｐ，并可用多对引物同时进行多重ＰＣＲ分析。用此方法对ＤＭＤ家系成员ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因的５＇－脑型外显子上游区和３＇－非翻译区的两个（ＣＡ）ｎ位点进行了扩增片段长度多态性分析，表明它是连锁分析和基因诊断的一种方便有效的新技术。

新生儿听力筛查未通过者的基因诊断

目的进行新生儿听力筛查未通过者的基因诊断,探讨临床应用的价值。方法对110例42天OAE复筛双耳未通过的儿童进行GJB2基因,SLC26A4 c.919-2A>G、H723R,mtDNA1494和1555突变分析。结果发现和耳聋基因突变有关者23例,占检测者的20.9%(23/110),其中纯合或者复合杂合者6例,线粒体突变1例。发现GJB2致病纯合突变和复合杂合突变4例,杂合突变10例,发现出SLC26A4基因纯合突变和复合杂合突变2例,杂合突变6例,发现1555A>G突变1例。结论新生儿听力筛查未通过者的基因诊断在儿童感音神经性耳聋的早期诊断和干预方面有一定作用。