基质性毒物对厌氧氨氧化富集培养物的单独和联合抑制效应

采用分批培养试验和连续培养试验研究了基质性毒物(氨和亚硝酸)对厌氧氨氧化富集培养物的单独和联合抑制效应.试验结果表明,分批培养时,氨和亚硝酸对厌氧氨氧化富集培养物的半抑制浓度及95%可信限分别为1670.3(1518.3~1832.4)mg·L^(-1)和565.3(239.0~916.3)mg·L^(-1),亚硝酸毒性大于氨;氨和亚硝酸对厌氧氨氧化富集培养物的联合抑制效应为独立作用,二者各自对厌氧氨氧化富集培养物产生毒害.在中性环境和高浓度基质条件,高浓度的游离氨和游离亚硝酸会抑制厌氧氨氧化富集培养物,防止游离态基质浓度过高是解决基质自抑制的重要手段.连续培养时,随着氨浓度的上升,反应器效能和联氨含量基本稳定;随着亚硝酸浓度的上升,反应器效能急剧下降,联氨快速累积.基质亚硝酸对厌氧氨氧化富集培养物的抑制源于联氨脱氢步骤受阻,细胞能量代谢不畅,所积累的中间产物联氨作为抑制物可能会进一步加剧抑制效应.

不同促透剂对脂溶性基质制剂脐中穴经皮给药作用研究

目的:研究三种促透皮吸收剂即脂溶性氮酮、水溶性氮酮、二甲基亚砜对脂溶性基质脐中穴经皮给药制剂吸收的促透作用。方法:制备含不同浓度的促透皮吸收剂的脂溶性基质的制剂,将昆明小鼠脐部皮肤剥离,进行预处理,采用Franz扩散池体外透皮试验,于不同时间取样,用高效液相色谱法测定接收池中制剂主要成分的含量。结果:加入促透皮吸收剂的最适宜水平组与空白组透过量有显著性差异,P<0.05;脂溶性氮酮组、水溶性氮酮组1%～5%、二甲基亚砜用量在30%～35%均有较好的促透作用,其中脂溶性氮酮组2%为最优,经皮吸收量与时间呈正相关性;与氮酮浓度无相关性;脂溶性氮酮组高于相应水溶性氮酮组。结论:加入促透皮吸收剂的最适宜水平组与空白组透过量有显著性差异(P<0.05);经皮吸收量与时间呈正相关性;脂溶性氮酮组高于相应水溶性氮酮组。

基质细胞源性生长因子1α和血管内皮生长因子在退变椎间盘组织中的表达及意义

背景:在正常情况下成人椎间盘组织中含有很少量的小血管,但在突出的椎间盘中却出现了明显的血管化,基质细胞源性生长因子1α在人类出生后成人组织血管发生的启发过程中起到了非常重要的作用,但在椎间盘中的表达少见报道。目的:检测基质细胞源性生长因子1α和血管内皮生长因子在腰椎间盘中的表达,进而评估两者在椎间盘的血管化中的作用。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/2007-01在中国医科大学组织工程实验室完成。材料:48份椎间盘突出标本及14份非椎间盘突出标本。椎间盘突出标本分突出型、脱出型、游离型。方法:采用SABC免疫组织化学技术对实验组48份腰椎间盘突出标本及对照组14份非腰椎间盘突出标本进行抗SDF-1α和抗VEGF单克隆抗体染色。主要观察指标:腰椎间盘中基质细胞源性生长因子1α及血管内皮生长因子的表达。结果:实验组椎间盘标本中基质细胞源性生长因子1α和血管内皮生长因子的表达均高于对照组标本,实验组标本中游离型及脱出型的基质细胞源性生长因子1α和血管内皮生长因子蛋白表达均比突出型高,游离型与脱出型之间的表达无差异。结论:腰椎间盘组织中基质细胞源性生长因子1α和血管内皮生长因子的表达可能与腰椎间盘血管新生有关。

利用月经血建立的经血源性基质干细胞系

背景:经血源性基质干细胞被证实是一种新型的成体干细胞,目前国内关于其系统的建系方法报道极少。目的:建立经血源性基质干细胞系,并鉴定其表型和多能性。方法:收集健康成年女性的月经血,通过密度梯度离心法分离出经血源性基质干细胞进行培养,观察细胞的形态及增殖特性;采用CCK-8法检测各株细胞的增殖能力,定期收集细胞进行核型分析,采用流式细胞术检测细胞表面抗原CD34,CD38,CD44,CD45,CD73,CD90,CD105,Oct-4的表达,对细胞进行体外成脂和成骨诱导分化并鉴定。结果与结论:成功从6名健康志愿者的经血中分离获得4株经血源性基质干细胞系。细胞呈现典型的梭状结构,具有46,XX核型,能在体外稳定迅速增殖,传代后大约48 h进入对数生长期,表达CD44,CD73,CD90,CD105及Oct-4,不表达CD38,CD34,CD45;成脂诱导22 d后油红O染色阳性,成骨诱导2周后茜素红染色阳性。实验表明经血源性基质干细胞具备扩增迅速、核型稳定、多潜能性等优点,通过建立经血源性基质干细胞系,为进一步的临床治疗应用以及科学研究奠定了基础。

实验性肝纤维化形成及逆转过程中膜性基质金属蛋白酶-1 mRNA表达的动态研究

目的探讨 MT—MMP mRNA在实验性肝纤维化形成及逆转过程中的动态变化。方法采用CCL_4皮下注射Wistar大鼠诱导肝纤维化形成,停药后让其自然逆转。应用原位杂交观察MT_1-MMP mRNA在肝维化形成逆转过程中的动态表达。结果 MT_1-MMP mRNA主要表达在间质细胞(肝星状细胞等),部分肝细胞也有表达。随着肝纤维化的进展,MT_1-MMP mRNA表达逐渐增强;而在肝纤维化的逆转过程中MT_1-MMP mRNA表达逐渐减弱。结论 MT_1-MMP在肝纤维化形成及逆转过程中可能具有较重要的作用。

纳米左旋聚乳酸/聚己内酯复合骨髓基质源性软骨细胞修复犬膝关节软骨缺损

目的探讨纳米左旋聚乳酸/聚己内酯(纳米PLLA-b-PCL)复合骨髓基质源性软骨细胞修复犬膝关节软骨缺损的可行性。方法将纳米PLLA-b-PCL支架/骨髓基质源性软骨细胞复合物植入犬膝关节软骨缺损,其为实验组;另一组膝关节造成缺损后旷置,作为空白对照。术后12周,24周取材,行大体及组织学观察,组织学评分。结果术后12周、24周大体形态学和组织学观察均表明实验组得到较好修复,而对照组缺损未修复。结论骨髓基质细胞源性软骨细胞是修复关节软骨缺损较理想的种子细胞;纳米PLLA-b-PCL在新生软骨形成的同时,逐渐降解吸收,是组织工程修复关节软骨缺损的适宜支架材料,其具有良好的应用前景。

原发性虹膜基质囊肿的病理分型及临床特点

背景 原发性虹膜基质囊肿是临床上罕见的眼部病变,近年来组织病理学检查的发现与以往的文献报道有所不同,了解其病理学特点对该病发病机制的研究和精准治疗具有重要意义.目的 对原发性虹膜基质囊肿进行病理分型,并归纳各型的病理特征和临床特点.方法 对1979年1月至2012年12月于天津市眼科医院收治的经病理学检查证实的14例原发性虹膜基质囊肿患者的病理标本进行回顾性研究和分析,依据苏木精-伊红染色、过碘酸希夫染色和免疫组织化学染色特点对原发性虹膜基质囊肿进行病理分型并总结其临床特点.结果 14例原发性虹膜基质囊肿根据其组织病理学表现分为鳞状上皮型9例、晶状体上皮型3例和睫状体上皮型2例.鳞状上皮型囊肿壁由非角化性鳞状上皮细胞组成,部分病例上皮间可见散在的杯状细胞;晶状体上皮型囊肿壁由晶状体囊膜样组织和晶状体上皮细胞组成,囊肿与发育异常的晶状体相连续,2例伴晶状体囊膜不完全闭合和晶状体发育异常;睫状体上皮型囊肿壁由睫状体上皮样细胞组成,1例伴有虹膜睫状体发育异常和前房角组织异常.裂隙灯显微镜下可见鳞状上皮型虹膜基质囊肿多位于颞上方,囊肿呈棕色或灰白色半透明状;晶状体上皮型虹膜囊肿位于颞上方,囊肿呈灰白色半透明状,或弥漫棕色,可伴有晶状体发育异常和白内障;睫状体上皮型虹膜囊肿呈弥漫性隆起,可伴有房角发育异常,早期出现婴幼儿型青光眼,预后较差.结论 原发性虹膜基质囊肿可以分为鳞状上皮型、晶状体上皮型和睫状体上皮型,各型病理形态学表现不同,临床特点和预后也不尽相同.

动物性基质中多西环素的高效液相色谱残留检测研究进展

多西环素是四环素类药物的一种,抑菌效果好,在动物生产上应用广泛。高效液相色谱法是目前多西环素残留检测中应用较多的方法,本文对动物性基质中多西环素的高效液相色谱检测方法进行综述。

MALDI-MS反应性基质选择性检测啤酒中低聚糖的创新实践

糖类是啤酒中含量最丰富的营养物质之一,对啤酒泡沫的稳定性起着十分重要的作用。通过大学生创新训练项目开发并优化了MALDI-MS反应性基质用于选择性检测啤酒中低聚糖的新方法,具有响应信号强、特异性检测等优点。利用贴近生活的实验研究,激发了学生的学习热情和实验兴趣,提高了学生的创新能力和科研素养。

人脂肪源性基质细胞体外培养的实验研究

目的:探索人脂肪源性基质细胞(hADSCs)原代培养方法。方法:取成人脂肪,采用原代消化细胞培养法培养,对培养细胞进行形态学研究,测定生长曲线,对第2代细胞进行免疫细胞化学染色,鉴定其表面分子CD44。结果:成人脂肪组织中含有大量间充质干细胞,约70%～80%的细胞表达CD44。结论:建立了一种人体脂肪组织分离、培养hADSCs的简便方法。

联合诱导兔脂肪源性基质细胞的成肌潜能

背景: 成肌种子细胞是构建工程化成肌复合物的基础,如何优化其扩增是过渡到临床应用的核心。目的: 分析将MyoD、转化生长因子β1及5-氮杂胞苷不同模式下联合诱导兔脂肪源性基质细胞体外成肌潜能的变化。方法: 取兔腹部脂肪,采用胶原酶消化法分离获取脂肪源性基质细胞,分别以不同方式进行成肌细胞诱导:5-氮杂胞苷诱导组;MyoD+转化生长因子β1诱导;5-氮杂胞苷+MyoD+转化生长因子β1联合诱导组;并设空白对照。于诱导第1,4,8,12,16,20,24,28天观察细胞形态学特点,行MTT比色法、流式细胞仪和免疫组织化学检测鉴定细胞,检测Ⅲ型胶原含量。结果与结论: 联合诱导组与其他组相比,细胞生长迅速,16d增殖达高峰,20d肌管数量增多,体积增大,排列规则,呈结蛋白强阳性表达,细胞周期显示联合诱导组脂肪源性基质细胞的DNA复制期细胞比例增加,间隙期细胞减少,Ⅲ型胶原含量明显增高,差异有显著性意义。结果提示,多因子联合5-氮杂胞苷模式能有效促进脂肪源性基质细胞向成肌细胞定向分化,细胞增殖显著,是成肌细胞体外诱导的理想方法。

基质相容性溶胶-凝胶固相微萃取涂层直接萃取柑橘中农药残留

为了开发新的可利用的基质相容性固相微萃取(solid phase microextraction,SPME)涂层,促进活体SPME采样技术的发展。本研究评价了溶胶-凝胶聚二甲基硅氧烷萃取头在柑橘基质中的基质相容性,建立了直接SPME-气相色谱法检测柑橘果浆中有机磷农药的方法。结果表明:在柑橘果肉匀浆并添加同样质量的水,调节pH至1.84、50℃萃取60min、搅拌速度为1200r/min条件下,5种有机磷农药在线性范围内具有良好的线性关系,R2≥0.999,检测限为0.002~0.046μg/kg,加标回收率为71.0%~125.3%,相对标准偏差为0.5%~15.6%。该萃取头在柑橘活体基质中可以连续使用50次以上。

前列腺素E1对人类脂肪源性基质细胞体外增殖的影响

背景:近年来脂肪源性基质细胞成为研究与应用的热点之一,但前列腺素 E1 对脂肪源性基质细胞增殖的作用影响尚未见报道。目的:观察前列腺素 E1 对人类脂肪源性基质细胞体外增殖的影响。方法:从人正常脂肪组织分离培养脂肪源性基质细胞,用 5 种不同浓度的前列腺素 E1 处理培养的细胞,其中 3×10-6,6×10-6,9×10-6,12×10-6 mol/L 作为实验组,0×10-6 mol/L 作为对照组,观察经不同浓度前列腺素 E1 处理后细胞的增殖情况。结果与结论:不同浓度实验组的细胞数量与对照组相比均显著升高,差异有显著性意义(P<0.05),各实验组内相比,细胞数量增殖无显著性差异(P>0.05)。提示前列腺素 E1 具有促进脂肪源性基质细胞的增殖作用,且前列腺素 E1 的影响效果无剂量依赖性。

伴有软骨基质分泌的乳腺化生性癌临床病理学观察

目的分析伴有软骨基质分泌的乳腺化生性癌的临床病理学特征、免疫组化标记特点及其组织起源。方法收集5例伴软骨基质分泌的乳腺化生性癌的临床及随访资料，观察组织病理形态学及免疫组化标记，并对相关文献进行复习。结果5例患者年龄37～48岁，组织标本切面灰黄或灰褐色，结节状，界限尚清。镜下见肿瘤细胞围绕软骨粘液样或透明软骨样基质呈巢状，条索状排列，密集的瘤细胞可聚集于周边，中央区细胞稀疏，周边肿瘤细胞向基质移行中无梭形细胞肉瘤样成份。免疫组化结果显示，5例均同时表达CK、Vim及S-100，但不表达ER、PR、Her-2。结论伴有软骨基质分化的乳腺化生性癌是一种罕见肿瘤，具有特征性的病理组织形态和免疫表型，临床过程与普通非特异性浸润性乳腺癌无异。

不溶性基质中天冬氨酸丰富的蛋白在珊瑚的钙质骨片形成中的重要作用

一般认为,酸性蛋白在控制矿物的形成和发展中发挥重要作用。因此,在不溶性有机基质中鉴定酸性蛋白对于理解珊瑚中个体蛋白的功能是非常重要的一步。在短指多型软珊瑚(Sinularia polydactyla)的可溶性和不溶性基质层中分析蛋白组分表明,在不溶性基质和可溶性基质层中天冬氨酸的含量分别是61%和29%。利用体外分析法发现,基质蛋白诱导碳酸钙形成非晶态析出相先于其形成钙质的结晶态。利用X-射线衍射来鉴定骨片上结晶态的碳酸钙,结果表明钙质的多晶态呈现强反射。傅利叶变换红外光谱分析表明珊瑚基质中富含天冬氨酸的蛋白和多醣的结构。在不溶性基质组分中用钙离子结合分析显示一个分子量为109kD的蛋白质可以与形成骨片的钙离子结合,这一过程对骨片形成非常重要。在对生物钙化过程中起重要作用的碳酸酐酶的分析中显示了此酶的新颖的活性。以上结果显示珊瑚中不溶性基质内的富含天冬氨酸的蛋白在生物矿化调控过程中起重要作用。

液相色谱-串联四级杆质谱方法检测动物源性基质中的β_2—受体激动剂

利用安捷伦6410高效液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)方法快速、准确地测定多种β2—受体激动剂的残留量。串联质谱在电喷雾(ESI+),多反应监测(MRM)模式下,进行质谱定性和定量分析,比液相检测方法灵敏、快速。该方法的定量检测限(LOQ)大多在0.5μg/kg以下,完全可以达到欧盟和日本对β2—受体激动剂残留限量的要求。

可注射性甲基丙烯酸酐改性明胶/软骨源性基质微粒复合水凝胶支架的制备及生物相容性

背景:关节软骨的再生修复目前仍是充满挑战的医学难题,构建可仿生细胞生长微环境的可注射水凝胶支架对关节软骨的再生具有重要意义。目的:制备可注射甲基丙烯酸酐改性明胶/软骨源性基质微粒(gelatin-methacryloyl/cartilage-derived matrix particles,Gel MA/CDMPs)复合水凝胶支架,并评价其生物相容性。方法:(1)通过物理粉碎和化学酶法制备软骨源性基质微粒,通过甲基丙烯酸酐接枝明胶制备甲基丙烯酸酐改性明胶,并以两者为原料,制备5种不同质量浓度的Gel MA/CDMPs复合水凝胶支架(其中软骨源性基质微粒的质量浓度分别为0,5,10,20,30 g/L),通过力学测试确定力学性能最佳的软骨源性基质微粒质量浓度用于细胞实验;(2)将兔骨髓间充质干细胞接种至Gel MA/CDMPs复合水凝胶支架中,置于成软骨培养基中共培养(实验组);将兔骨髓间充质干细胞接种至甲基丙烯酸酐改性明胶水凝胶支架中,置于成软骨培养基共培养(对照组),通过细胞死活染色和CCK-8细胞增殖实验评估两组支架内的细胞活性及细胞增殖能力;通过细胞骨架荧光染色观察支架内细胞的形态和伸展扩散能力;通过组织学染色和糖胺多糖定量评估支架促进细胞分泌软骨基质的能力。结果与结论:(1)力学测试表明,Gel MA/CDMPs 10 g/L复合水凝胶支架的压缩模量高于其他组(P<0.05),后续实验选择该质量浓度;(2)活死染色显示,两组支架内培养1,5 d的细胞活性均在90%以上;CCK-8细胞增殖实验显示,实验组培养3,5 d的细胞增殖快于对照组(P<0.05);(3)培养7 d的细胞骨架荧光染色显示,对照组的细胞为球形形态,只有少部分细胞形成丝状伪足,实验组的细胞呈伸展的不规则多边形;(4)培养21 d的组织学与免疫组化染色显示,两组支架内的细胞形态与软骨细胞相似,实验组可见更多的软骨基质分泌;(5)实验组培养7,21 d的糖胺多糖含量高于对照组(P<0.05);(6)结果表明,Gel MA/CDMPs复合水凝胶支架可更好地模拟软骨细胞生长微环境,进而促进骨髓间充质干细胞的生长、增殖和成软骨分化。