双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p抗体

目的建立一种检测马尔尼菲青霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法利用毕赤酵母系统表达重组马尔尼菲青霉特异性甘露糖蛋白Mp1p,并利用改良过碘酸钠法标记Mp1p,经棋盘滴定法建立一种可检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并检测100例健康人群对照血清、21例血培养确诊其他真菌感染病人血清和15例血培养确诊马尔尼菲青霉病人血清,联合本实验室前期建立的马尔尼菲青霉抗原检测方法评价其临床应用价值。结果成功建立一种检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,经健康人群对照及其他真菌感染病人血清评价特异度为100%(121/121),检测15例马尔尼菲青霉病人血清,Mp1p特异性抗体2例阳性,Mp1p特异性抗原12例阳性,Mp1p抗体与抗原联合检测可明显提高灵敏度,达到93.3%(14/15)。结论双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体具有高度的特异性,联合抗原检测可提高马尔尼菲青霉感染诊断率。

双抗夹心ELISA法检测血浆HSP70的建立及初步应用

[目的]建立双抗体夹心法检测血浆中热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)水平。[方法]制备兔抗HSP70抗体 ,建立双抗体夹心法标准曲线 ,鉴定其最小检出限、精确度、回收率 ,并初步应用于检测40例男性健康成人血浆样本的HSP70水平。[结果]双抗夹心ELISA法检测HSP70的最小检出限为10ng/ml,标准曲线在10～100ng/ml范围内线性良好。3份同批血清标本分别重复8次测定 ,平均批内变异系数为7.6 % ;3份不同批血清分别重复6次测定 ,平均批间变异系数为12.7 %。血清中加入已知量的标准抗原 ,测得回收率为85.5 %。对40例男性健康成人(20.0±0.9)岁血浆样本检测 ,其HSP70浓度均值为 (151.0±13.8)ng/ml。[结论]本方法检测HSP70的可测范围广 ,灵敏度和精密度较高变异系数较小 ,表明其灵敏、特异。

双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体

目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察。用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较。结果双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗原1∶4 000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8%、7.4%和5.9%;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1%、9.6%和12.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2%。通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209。检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6%(93/114)和94.4%(356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6%vs 76.1%)。结论建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值。

双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原(Cag).方法采用两株抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,应用双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫CAg,并摸索该法的最佳实验条件.对感染大鼠、小鼠、疑似和确诊广州管圆线虫病病例血清进行检测,评价方法的敏感性;对日本血吸虫、肺吸虫、旋毛虫、囊虫病人血清进行交叉反应试验,评价方法的特异性.结果 10μg/ml单抗包被,酶标记单抗1∶1 600稀释为最佳工作浓度.利用该法检测不同血清广州管圆线虫循环抗原的敏感性为84.2%～87.2%,特异性为100%.结论建立的双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原具有敏感性高、特异性强和经济、简便易行等优点.

曲霉抗原双抗体夹心ELISA法特异性检测

目的用2组曲霉单克隆抗体(mAbs)建立特异性识别不同种类曲霉抗原的检测方法。方法采用天然烟曲霉抗原免疫,获得广谱针对曲霉抗原的单克隆抗体;采用重组烟曲霉抗原获得特异性针对烟曲霉抗原的单克隆抗体,用间接免疫荧光鉴定,并分别建立2种双抗体夹心ELISA法,对19种常见的环境和临床分离曲霉株、马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液进行检测。结果间接免疫荧光显示,用天然烟曲霉抗原免疫获得的单克隆抗体(mAbs-1)可广谱识别多种曲霉分离株,而重组烟曲霉抗原获得的单克降抗体(mAbs-2)仅能特异性结合临床和环境分离的烟曲霉抗原。用mAbs-1建立的双抗体夹心ELISA法可检测19种常见曲霉株培养液;用特异性针对烟曲霉抗原单克降抗体(mAbs-2)建立的双抗体夹心ELISA法可特异性检测临床和环境分离株烟曲霉培养液;与其他曲霉株无交叉反应;2种双抗体夹心ELISA法与马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液均无交叉反应。结论2种曲霉单克降抗体双抗体夹心ELISA法,除可广谱检测环境和临床分离曲霉株,还可以区分烟曲霉与其他曲霉,可作为监测环境、农产品、食品中的曲霉污染和早期诊断曲霉病的新技术手段。

血清促红细胞生成素的双抗体夹心ELISA法和ELISA试剂盒的建立及其方法学研究

目的建立血清促红细胞生成素(EPO)的ELISA试剂盒及一种检测血清EPO的双抗体夹心ELISA方法,并对其临床检测方法学进行研究。方法EPO抗体用缓冲液稀释,150μL/孔滴加到96孔板,用以包被。以正常人血清和临床血清为标本,用ELISA法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。结果最佳包被抗体浓度为1∶600,最佳抗原工作浓度为1∶100,酶标抗体工作浓度为1∶5000。标准曲线的回归方程为:y=0.017x+0.3002,r=0.9710,P<0.05。灵敏度为0.46U/L,高、低浓度样品平均回收率分别为106.74%、104.78%。血清标本20、80U/L批内变异分别为3.044%、7.964%,批间变异分别为1.379%、12.915%。结论双抗体夹心ELISA法检测血清EPO,其敏感性、特异性、准确度均良好,为临床快速、准确、方便检测EPO提供了实验依据。

双抗原夹心ELISA法检测登革病毒感染患者血清中的EDⅢ抗体

目的建立一种检测登革病毒(dengue virus,DENV)特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法利用毕赤酵母系统表达4个血清型登革病毒包膜蛋白Ⅲ区(envelope protein domainⅢ,EDⅢ),并采用改良过碘酸钠法对EDⅢ蛋白标记辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP),建立一种可同时检测4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白特异性抗体的双抗原夹心ELISA法。并对2014年广州珠江医院门诊和住院确诊的登革热患者血清标本进行检测,并与澳洲Panbio MAC ELISA检测的敏感性进行比较。结果本研究成功建立了一种检测4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,该方法能同时检测到4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白免疫的小鼠血清和Ⅰ型登革病毒EDⅢ蛋白免疫的兔血清,而与烟曲霉AF-MP蛋白免疫的小鼠血清和兔血清均无交叉反应。对184份健康人血清标本检测全为阴性,而对168份确诊为登革病毒感染患者血清标本检测结果表明,两种诊断方法检测结果差异无统计学意义,P<0.001(57.1%vs 57.7%),联合NS1抗原检测方法,其敏感性提高到97.6%。结论双抗原夹心ELISA法检测登革病毒EDⅢ特异性抗体具有高度的特异性,但如果能同时联合抗原检测可明显提高登革热的早期诊断率。

应用双抗体夹心ELISA法定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体中的IgG含量

采用山羊抗人IgG作为包被抗体 ,辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG作为标记抗体 ,建立一种双抗体夹心法用于定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体的IgG含量。以纯化的IgG作标准 ,用平行线法测得亲和层析纯化的人源破伤风毒素单克隆抗体G2的含量为 0 .5 12 μg/ml,与分光光度法测得的结果基本一致。因而样品检测采用纯化G2作参考标准 ,制作标准曲线 ,测定了已知样品和未知样品的抗体含量。结果表明本法重复性好 ,特异性强 。

双抗体夹心ELISA法检测肾综合征出血热汉滩病毒糖膜蛋白

用双抗体夹心ELISA法检测肾综合征出血热 (HFRS)汉滩病毒LR1株糖膜蛋白 (GP) ,并用SDS PAGE电泳对ELISA检测结果进行验证 ,实验结果显示 ,双抗体夹心ELISA法特异性强 ,重复性好 ,简便易行 ,是HTN病毒糖膜蛋白较为理想的检测方法 。

双抗体夹心ELISA法检测肾综合征出血热汉滩病毒糖膜蛋白

用双抗体夹心ELISA法检测肾综合征出血热（HFRS）汉滩病毒LR1株糖膜蛋白（GP），并用SDS－PAGE电泳对ELISA检测结果进行验证，实验结果显示，双抗体夹心ELISA法特异性强，重复性好，简便易行，是HFRS汉滩病毒糖膜蛋白较为理想的检测方法，对HFRS疫苗的生产和质量控制有重要意义。

双抗体夹心ELISA法检测海产蟹血卵涡鞭虫方法的初步建立

以针对血卵涡鞭虫的特异性单克隆抗体为捕获抗体,纯化的抗血卵涡鞭虫的兔抗血清为检测抗体,初步建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法。方阵滴定确定最佳反应条件:包被的单克隆抗体浓度为10μg/mL,多抗兔血清工作浓度为14.3μg/mL,待检样品稀释度为1:800;HRP-羊抗鼠IgG按1∶20 000稀释。用建立的ELISA方法对86份已知背景样品进行检测,阳性检出为97.6%,血卵涡鞭虫抗原检测的灵敏度为100 pg/mL;与蟹血淋巴细胞、假丝酵母菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等样本均无交叉反应。结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法灵敏度高、特异性强,可用于诊断梭子蟹乳化病血卵涡鞭虫病的检测。

多克隆与单克隆抗体夹心ELISA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原

[目的 ]检测血吸虫病患者的循环抗原。 [方法 ]用多抗与单抗夹心 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原。 [结果 ]用于检测 15 0例血吸虫病患者的循环抗原 ,其敏感性平均为 84.7% (72 .0 %～ 91.0 % ) ,40例正常人未出现假阳性反应 ,74例其他寄生虫感染者中 ,有 2例并殖吸虫病患者阳性 ,其余均未出现交叉反应。 [结论 ]多抗与单抗夹心 EL ISA法是一种较为理想的循环抗原检测方法。

双抗体夹心ELISA法测定食物中虾过敏原成分

本文通过双抗体夹心ELISA法的建立,对食物中虾过敏原成分进行测定,为预防和诊断食物过敏提供理论基础。

应用双抗原夹心ELISA法筛查献血员梅毒螺旋体抗体

目的 :优选一种适宜于献血员梅毒筛查的试验方法。方法 :采用检测梅毒特异性抗体的双抗原夹心ELISA法对献血员进行抗体检测 ,并与RPR检测结果进行比较 ,对两种方法检测结果不一致的标本 ,再用TPHA法进行确证。结果 :ELISA法阳性检出率 0 36 % (41/ 112 71)、RPR法阳性检出率 0 2 6 % (2 9/ 112 71)。ELISA法与TPHA法总符合率 97 5 % (40 / 4 1)、RPR法与TPHA总符合率 6 3 4 1% (2 6 / 4 1)。结论 :ELISA法优于RPR法 ,具有较高的灵敏度和特异性 ,适宜于献血员的筛查 。

双抗原夹心ELISA法与间接ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体对比分析

目的分别探讨双抗原夹心酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)与间接ELISA法对丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)抗体(抗-HCV)的临床检测价值。方法回顾性分析2016年1月～2019年2月期间在本院进行无偿献血的100人次(100份标本)的临床资料,其中包括抗-HCV阴性标本79份,抗-HCV阳性标本21份,上述所有标本均需接受双抗原夹心ELISA法与间接ELISA法检测,分析不同检测方法的阳性检出率、特异度与准确度。结果双抗原夹心ELISA法的阳性检出率为97.47%,间接ELISA法的阳性检出率为86.08%,不同检测方法阳性检出率对比,差异有统计学意义(P <0.05);双抗原夹心ELISA法的准确度与特异度分别为98.00%、100.00%,间接ELISA法为85.00%、80.95%,不同检测方法对比,差异有统计学意义(P <0.05)。结论与间接ELISA法相较而言,双抗原夹心ELISA法为检测抗-HCV阳性标本的有效手段,且阳性检出率与特异度均较高,利于临床应用。

双抗原夹心ELISA法检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶抗体

目的:建立检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase GliT,TR)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,同时对其临床应用进行评价。方法:利用基因工程技术制备重组TR作为包被抗原和酶标记抗原,采用棋盘滴定法优化双抗原夹心ELISA法的反应条件,并考察ELISA法的敏感性、特异性以及重复性。用双抗原夹心ELISA法测定273例住院患者(侵袭性曲霉病50例、侵袭性念珠菌病46例、念珠菌定植82例、细菌感染95例)以及200例健康人血清,并与实验室前期建立的间接ELISA法检测TR抗体的结果进行比较。结果:双抗原夹心ELISA法工作条件为TR抗原包被浓度为1.0μg/mL,酶标抗原1∶500稀释;封闭液含50 g/L脱脂奶粉溶液的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,高、中、低3份血清批内变异系数(CV)分别为11.2%、11.8%和12.3%;不同批次重复测定6次,其批间CV分别为10.9%、12.1%和13.5%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为94.4%。通过ROC曲线确定吸光度的cut-off值为0.126。检测侵袭性曲霉病的敏感性和特异性分别为80.0%(40/50)和95.5%(404/423),敏感性高于检测TR抗体的间接ELISA法(83.3%vs. 72.2%)。结论:建立了双抗原夹心ELISA法检测烟曲霉TR特异性抗体,可提高侵袭性曲霉病的诊断率,具有临床应用价值。

夹心ELISA法快速检测肝病患者血清中金属蛋白酶组织抑制剂-1

目的：建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的双抗体夹心ELISA，了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系．方法：以不同浓度的抗人TIMP-1单克隆抗体（mAb）为包被抗体，加入待测抗原以及辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1mAb作为标记抗体进行方阵滴定，建立双抗体夹心ELISA，并用于临床检测408例肝病患者血清TIMP-1的水平．结果：方阵滴定的结果表明包被抗体浓度为1mg／L，血清稀释倍数1：100，HRP标记mAb的最佳工作浓度为1：400．

应用双抗原夹心ELISA法筛查献血员梅毒螺旋体抗体

目的：优选一种适宜于献血员梅毒筛查的试验方法。方法：采用检测梅毒特异性抗体的双抗原夹心ELISA法对献血员进行抗体检测，并与RPR检测结果进行比较，对两种方法检测结果不一致的标本，再用TPHA法进行确证。结果：ELISA法阳性检出率0．36％(4l，11271)、RPR法阳性检出率0．26％(29／11271)。ELISA法与TPHA法总符合率97．56％(40／41)、RPR法与TPHA总符合率63．41％(26／41)。结论：ELISA法优于RPR法，具有较高的灵敏度和特异性，适宜于献血员的筛查，有利于控制和减少梅毒的输血传播。

夹心ELISA法检测脂肪酸结合蛋白的评价

心脂肪酸结合蛋白(H-FABP)是一种分子量较小的蛋白.以较高浓度存在于心肌细胞浆中,因此,H-FABP被认为是心肌缺血性损伤有效的指标。本文评价了一种商品化的H-FABP为ELISA检测方法(MARKIT-M)。