北京市宋内氏志贺菌脉冲场凝胶电泳图谱研究

目的研究北京市2005～2006年分离的30株宋内氏志贺氏菌进行脉冲常凝胶电泳图谱特征。方法参照美国疾病预防控制中心PulseNet USA的统一方法进行脉冲常凝胶电泳,并对带型进行命名。采用BioNumerics图像分析软件做聚类分析。结果30株宋内氏志贺氏菌被分成17个带型,主要带型J16N11BJ0001到J16N11BJ0009的聚类相似性为92%,含概菌株占实验菌株总数的67%。结论建立北京市宋内氏志贺氏菌脉冲常凝胶电泳分析方法和初步带型数据库,获得了宋内氏志贺氏菌的主要克隆系。

爆发性宋内氏痢疾杆菌型食物中毒的流行病学与临床特征分析

目的探讨爆发性宋内氏痢疾杆菌致食物中毒大便培养阳性患儿的临床与流行病学特征。方法对245例住院患儿依照《全国细菌性痢疾监测方案》进行病原学、流行病学、临床表现、细菌学检查、毒力基因鉴定结果、药敏试验分析。结果从食堂凉拌肉标本以及患儿大便标本中均培养出宋内氏痢疾杆菌，经鉴定均含有ipa毒力基因，药敏结果显示对第三代头孢菌素敏感。此次暴发性起病急进展快，有93．1％的患儿在初次暴露后2—3天内发病，无死亡病例。结论宋内氏痢疾杆菌是本次爆发流行的病原菌，传染源是变质的凉拌菜，传播途径是直接进食凉拌菜，没有第二代患者的产生，但是有患者的大便培养由阴性转为阳性。

一起宋内氏志贺氏菌污染学校饮用水源引起的菌痢暴发的实验室分析

目的 茶陵县某乡中学发生了一起感染性腹泻暴发流行 ,为查明病因及时控制疫情 ,及时组织人员进行了流行病学调查和实验室检查。 方法 在开展流行病学、卫生学调查的同时 ,采集了患者肛拭子 48份 ,炊事员肛拭子 5份 ,井水样 1份 ,食堂生活用水 1份 ,餐具 10份用增菌培养基培养检测病原体及药敏试验。 结果 病原体为宋内氏志贺氏菌。为饮用水源污染所致的细菌性痢疾暴发流行。 结论 病原体对多种抗生素敏感。

一起学校中由宋内氏志贺菌引起的细菌痢疾暴发流行

目的:对两个小学腹泻病的住院病人病因进行细菌学检验。方法:按常法进行检验。结果:共检查住院病人、密切接触者等各类肛拭标本2 507份,阳性296份;各种相关饮用水37份,阳性4份;饮水机35台,阳性6份;餐具6份、菜肴3份均系阴性。结论:该校师生员工在早期系因被宋内志贺氏菌污染的饮水机和/或饮用水,而导致该两校的痢疾暴发流行。

宋内氏痢疾杆菌O-SP-TT结合疫苗的制备及其免疫学特性的研究

宋内氏痢疾杆菌 (S .Sonnei)的一个重要保护性抗原是菌体抗原 (O抗原 )即细菌细胞壁中的脂多糖 (LPS)成分 ,已证实血清中足够水平的抗LPSIgG抗体即能对该菌提供免疫保护作用。本文选用Westphal热酚法提纯宋内氏痢疾菌LPS ,经酸水解法进一步脱毒处理后得到无毒但却具弱免疫原性的O 特异性多糖 (O SP) ,然后采用化学方法即通过连接剂己二酸二肼 (ADH)将其共价结合到破伤风类毒素 (TT)上 ,共制备得到了三批宋内氏痢疾杆菌O SP TT结合疫苗。经生化和免疫学方法检测证实我们提纯的LPS、OSP及其合成的O SP AH衍生物、O SP TT结合物均具有宋内氏痢疾杆菌O抗原特异性 ,同时其核酸和杂蛋白质含量低 (≤ 2 % ) ,表明纯度较高。同时经小鼠免疫原性试验证实三批结合物免疫小鼠后产生的抗LPSIgG抗体滴度均比单一O SP免疫后产生的要高出 10倍以上 ,且结合物再次注射后存在加强应答。补体介导的体外杀菌力试验表明结合物免疫小鼠后诱导产生的血清抗LPSIgG抗体对宋内氏痢疾杆菌具特异性杀菌活性。本文结果表明宋内氏痢疾杆菌O SP TT结合疫苗可望作为一种有效的侯选痢疾疫苗做进一步的大规模人体观察。

质粒拷贝数对宋内氏菌I相O-抗原表达的影响

试图通过提高质粒拷贝数来提高宋内I相O 抗原的表达水平 ,先将宋内I相O 抗原基因亚克隆至高拷贝的pUC18和pGEM3Z ,但没能找到相应的阳性转化子 ,可能O 抗原基因在高拷贝质粒上表达水平太高对宿主产生毒性效应。再将其亚克隆至中等拷贝的pAT15 3,虽能找到阳性转化子 ,但表达水平仍不能满足以后实验的需要 ,表明质粒拷贝数与I相O 抗原的表达水平密切相关 ,要有效地表达宋内I相O 抗原 。

甘肃省宋内氏志贺氏菌的监测分析

目的了解志贺氏茼属在甘肃省的流行、变迁及耐药状况，给防治工作提供铱据。方法2005年5月-2007年10月对分离的宋内氏志贺氏菌株，依据细菌性痢疾、阿米巴痢疾诊断标准及处理原则进行血清学鉴定、生化试验及药幸喊验。结果共检测宋内氏志贺氏茼140株，分离菌株为多重耐药，耐药种类达8种。结论甘肃省2007年宋内氏志贺氏菌成为优势茼，耐药率逐年增加。

宋内氏痢疾菌无毒株S7表达Vi抗原工程菌的构建

将含有编码Ｖｉ抗原ＶｉａＢ基因片断的质粒转导进入宋内氏痢菌无毒株Ｓ７中，组建了重组菌株Ｓ７Ｖｉ。质粒电泳图谱显示重组菌株Ｓ７Ｖｉ中存在被转入的外源质粒带。重组株的生化特性没有改变。菌体凝集及Ｖｉ抗血清标记的ＳＰＡ菌液凝集反应证明在重组株的菌体表面，同时表达了Ｖｉ抗原和内氏痢疾菌的Ｏ抗原。以５×１０＾８ＣＦＵ、１０×１０＾８ＣＦＵ的重组株免疫近交系的ＬＩＢＰ小鼠。

宋内氏志贺菌在学校食物中毒中检出及分析

目的:调查几起宋内氏志贺菌在学校中引发的食物中毒。方法:采集剩余食物、病人大便或肛拭等可疑标本,按GB/T4789.5-2003,参照《食品卫生检验方法注解微生物学部分》对发生在遂宁市大、中学校四起食物中毒进行检测。结果:2005.7～2007.4连续4例发生在市大、中学校食物中毒突发事件中,均检出宋内氏志贺菌。结论:在近3年发生在遂宁市学校由细菌引起的食物中毒事件中,主角全由宋内氏志贺菌担任。

应用脉冲场凝胶电泳技术对宋内氏志贺菌引起食物中毒的研究

目的运用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对一起细菌性痢疾暴发分离株进行分析,了解分离株之间的遗传相关性,追溯传染源。方法对该起食物中毒中分离出的62株宋内氏志贺菌,用XbaI酶切进行PFGE分子分型,结果用BioNumerics软件UPGMA方法进行聚类分析,观察引起食物中毒的菌株是否为同源株。结果64株测试菌用XbaI酶切后产生7个PFGE带型,其中从病人分离45株和生肉分离1株带型完全相同,占分析菌株的70.31%。且流行病学资料显示有相关性,推测此食物为感染的主要来源之一;另外有病人分离11株带型完全相同,占分析菌株的17.19%,可能为感染的第二来源。结论食用未加工熟的猪肉菜肴是引发此次细菌性痢疾暴发的主要来源。

宋内氏痢疾菌侵袭相关基因的克隆与表达

用粘粒PJB8为载体,构建了宋内氏痢疾茵I相大质粒基因库,用菌落原位杂交,Western blot方法从文库中筛选到1株表达IpaA,B,C,D 4种蛋白的重组子,经重组质粒酶切和Southern blot等方法对宋内氏菌和福氏2a痢疾菌的侵袭相关基因片段作了初步比较分析。

1株与宋内氏志贺氏菌血清发生交叉凝集的类志贺邻单胞菌

目的对引起食物中毒的病原菌进行分离鉴定,为疫情的防控提供依据。方法采取腹泻患者水样便直接划线平皿上获纯培养菌、血清学试验、系统生化鉴定的方法。结果分离到一株与宋内氏志贺氏菌诊断血清发生强凝集的类志贺邻单胞菌。结论在细菌的分离鉴定中,如果仅仅以血清学反应做出判定,容易产生错误的结论,还必须做系统的生化鉴定,以保证细菌鉴定的准确性,为疫情的防控提供科学、正确的依据。

口服福氏2a和宋内氏痢疾双价活菌苗FS的研究

细菌性痢疾(菌痢)是世界范围内严重的卫生问题,据推算全世界每年约有两亿人染患痢疾,死亡人数约65万人左右.在我国,痢疾的发病率一直高居24种法定传染病之首,全国至少有200万例菌痢发生,(实际发病数为报告发病数的3～5倍),且以儿童、青壮年和老年人为主,因此,菌痢是严重危害人民健康的重要疾病.从痢疾菌流行菌型看,国内近年来一直以福氏2a型和宋内氏痢疾菌为优势流行菌,两种群型的痢疾菌引起的菌痢约占总菌痢的70%以上,因此如果能研制出同时预防福氏2a和宋内氏痢疾菌感染的菌苗,即可以显著降低和控制菌痢的发病率.

一起幼儿园宋内氏志贺菌食物中毒调查

目的查明事件的发生经过,分析引起食物中毒的原因。方法结合现场流行病学调查、现场卫生调查以及实验室检测方法,对中毒事件的原因进行分析。结果此次事件罹患率为27.56%;由于幼儿园的特殊性及未及时采集到样品,未查找到中毒食物;疾控中心实验室检出5株同源宋内氏志贺菌,医院检出1株宋内氏志贺菌。结论根据流行病学分析结果,结合实验室结果,判定此事件是一起由宋内氏志贺菌引起的食物中毒。

一起宋内氏志贺菌引起食源性痢疾爆发的耐药性分析

细菌性痢疾是肠道传染病发病较高的一种传染病,发病季节多在夏秋季,易造成痢疾爆发流行,给人民健康带来危害.通过对我市一起由宋内氏志贺菌引起的食源性痢疾爆发状况以及菌株的耐药性变化鉴定,为临床合理地适用抗菌药物和卫生防疫工作提供科学依据.

牛病毒性腹泻病毒、宋内氏痢疾杆菌混合感染致仔鹿腹泻的研究

为了分离鉴定引起吉林省某规模化梅花鹿养殖场仔鹿腹泻而死亡的病原体,试验采用病理剖检、RT-PCR检测、基因序列分析、细菌分离培养、16S rRNA测序和药敏试验等方法对引起仔鹿腹泻的病毒和细菌进行了研究。结果表明:仔鹿肺脏气肿出血,肠胀气溃疡,肾脏皱缩,脾脏和肝脏出血。经RT-PCR扩增,在7份样品中均检出牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)Ⅰ型和Ⅱ型。7份样品中检测得到的BVDVⅠ型毒株之间和Ⅱ型毒株之间的同源性均达到100%;BVDVⅠ型与标准毒株1-CP7的同源性最高,为96.9%,与其他BVDVⅠ型标准毒株的同源性在84.3%~95.3%之间;BVDVⅡ型与标准毒株125c的同源性达到100%,与其他BVDVⅡ型标准毒株的同源性在80.7%~93.9%之间。分离菌的形态学特征及16S rRNA测序显示与宋内氏痢疾杆菌一致。分离菌高度耐药,对多种抗生素均不敏感,仅对新霉素、多黏菌素B和呋喃唑酮敏感。说明引起该鹿场仔鹿严重腹泻并导致仔鹿死亡的主要原因是BVDV和宋内氏痢疾杆菌混合感染,并且两种病原体混合感染给仔鹿腹泻的防控增加了难度,造成了严重的经济损失。

抗宋内氏志贺菌脂多糖单克隆抗体对小鼠免疫保护作用的初步研究

本文用宋内氏志贺菌加热致死后的菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以纯化脂多糖筛选，获得２株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并以小鼠腹腔感染作为实验动物模型，进行单克隆抗体被动保护实验。结果表明，在攻击前输入单克隆抗体，对同型菌感染有显著保护作用，保护率随抗体剂量增加而增高。提示识别脂多糖分子上某一抗原决定簇的抗体，能够对感染起到良好的保护作用。脂多糖是志贺菌毒力相关因子之一。