岩黄连总碱下调miR-223表达调控人牙龈成纤维细胞增殖与凋亡的分子机制研究

目的:探讨岩黄连总碱对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其可能作用机制。方法:体外培养人牙龈成纤维细胞,分为对照组(NC组)、Pg-LPS组、5μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS组、10μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS组、20μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS组、miR-NC+Pg-LPS组、miR-223+Pg-LPS组、anti-miR-NC+Pg-LPS组、anti-miR-223+Pg-LPS组、20μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS+miR-NC组、20μg/ml岩黄连总碱+Pg-LPS+miR-223组。采用EDU、流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡;RT-qPCR法检测miR-223的表达量;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)、pro-caspase-3、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)蛋白表达。结果:岩黄连总碱(5、10、20μg/ml)和下调miR-223表达可显著升高Pg-LPS诱导的人牙龈成纤维细胞增殖活力和pro-caspase-3蛋白表达水平,降低细胞凋亡率、IL-1β和TNF-α水平以及Cleaved-caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平(均P<0.05)。过表达miR-223可逆转岩黄连总碱对Pg-LPS诱导的人牙龈成纤维细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的作用。结论:岩黄连总碱可通过下调miR-223表达而抑制PI3K/AKT信号通路从而促进Pg-LPS诱导的人牙龈成纤维细胞增殖,并抑制细胞凋亡和炎性反应。

岩黄连总碱抑制Tca8113细胞及其端粒酶活性的实验研究

目的:研究中草药岩黄连总碱(yanhuanglian total alkalions,YHL-TA)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响及其抗癌机制。方法:采用噻唑蓝比色法(MTT法)检测YHL-TA浓度分别为0.200、0.100、0.050、0.025g/L和空白对照组Tca-8113细胞增殖的情况,同时用以PCR为基础的TRAP-ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性的改变。所有数据采用SPSS13.0进行统计学分析。结果:岩黄连总碱能明显抑制Tca8113细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性。72h时,0.200、0.100、0.050、0.025g/L岩黄连总碱组细胞增殖抑制率分别为(66.0±4.0)%、(57.5±3.2)%、(45.3±3.3)%、(37.9±5.5)%。72h时,0.100、0.050g/L组端粒酶活性低于空白对照组(P<0.05)。结论:岩黄连总碱可以明显抑制Tca8113细胞株的增殖及其端粒酶活性,抑制端粒酶活性可能是岩黄连总碱抗舌癌的机制之一。

岩黄连总碱对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用研究

目的:研究岩黄连总碱对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:腹腔注射给予CCl4致小鼠急性肝损伤,通过灌胃给药观察岩黄连总碱对其保护作用。结果:岩黄连总碱可明显降低CCl4因素所致急性肝损伤小鼠血清AST、ALT的含量。结论:岩黄连总碱对CCl4所致小鼠急性肝损伤具有保护作用。

岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖和凋亡作用的影响

目的:观察岩黄连总碱对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测不同浓度的岩黄连总碱分别处理体外培养的Tca8113细胞24、48和72 h后的细胞增殖抑制情况,Hochest33258染色及DNA ladder检测细胞凋亡,并用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)原位检测细胞凋亡及细胞凋亡率。结果:岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01),且呈现出一定的时间和浓度依赖性;Hochest33258检测发现岩黄连总碱作用48 h后可见凋亡细胞;DNA ladder检测可见凋亡特有的180～200 bp整数倍DNA条带;TUNEL结果显示岩黄连总碱处理组细胞凋亡率呈时间和浓度依赖性。结论:岩黄连总碱能抑制Tca8113细胞增殖,呈时间和浓度依赖性;同时能诱导Tca8113细胞凋亡,且诱导凋亡的作用也呈时间和浓度依赖性。

岩黄连总碱对Tca8113中Bcl-2表达活性的影响

目的:研究中草药岩黄连总碱(YHL-TA)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞中Bcl-2表达活性的影响,并进一步探讨其抗癌机制。方法:采用PCR法和Western印迹法检测经YHL-TA作用后的Tca8113细胞中Bcl-2核酸水平以及蛋白水平的表达活性。结果:YHL-TA能促进Tca8113细胞凋亡,并在核酸水平和蛋白水平抑制Bcl-2的表达活性,且随作用时间的延长和药物浓度的增高,抑制作用增强。结论:YHL-TA可以明显促进Tca8113细胞的凋亡,并显著降低其Bcl-2的表达,这可能是岩黄连抗癌作用机制之一。

岩黄连总碱和脱氢阿卟卡维丁对Tca8113中NF-kappa B表达活性的影响

目的:研究中草药岩黄连总碱(YHL-TA)和脱氢阿卟卡维丁(YHL-2)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞中NF-kappaB表达活性的影响,并进一步探讨其抗癌机制。方法:采用PCR法和Western-blotting法检测经YHL-TA和YHL-2作用后的Tca8113细胞中NF-kappa B核酸水平以及蛋白水平的表达活性变化。结果:YHL-TA和YHL-2均能抑制Tca8113细胞增殖,并在核酸水平和蛋白水平抑制NF-kappa B P50、P65亚基的表达活性。其中YHL-2抑制作用最强;并且随作用时间延长和药物浓度的增高,抑制作用增强。结论:YHL-TA和YHL-2可以明显抑制Tca8113细胞的增殖,并显著降低其NF-kappa B的表达,其中YHL-2作用最明显。这可能是岩黄连抗癌作用机制之一。

岩黄连总碱对巨噬细胞M1型分化的抑制作用

目的:研究岩黄连总碱(CSBTA)对巨噬细胞M1型分化的影响。方法:THP-1细胞经佛波脂(PMA)刺激48 h诱导分化为巨噬细胞(Mφ)。倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测巨噬细胞表面分子CD11b、CD14;加入脂多糖(LPS,1μg/mL)、γ干扰素(IFN-γ,20 ng/mL)刺激48 h诱导Mφ巨噬细胞分化为M1型巨噬细胞。不同浓度(0.0025 g/L-0.02 g/L)CSBTA干预M1型巨噬细胞24 h。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6 mRNA相对表达量,Western blotting法检测M1型巨噬细胞CD86蛋白表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液中IL-1β的含量。结果:0.02 g/L的CSBTA对M1型巨噬细胞活力产生明显的毒性作用(P<0.05)。在0.0025 g/L、0.005 g/L CSBTA的干预下,M1型巨噬细胞IL-6和TNF-αmRNA相对表达量、CD86蛋白表达量及IL-1β含量均显著降低(均P<0.05)。结论:CSBTA可以有效抑制THP-1源性巨噬细胞M1型的分化,并改善炎症环境。

岩黄连总碱药效物质基础及药理作用机制研究进展

岩黄连作为一种传统的民间中药,具有清热、解毒、止痛、止血之功效。目前针对岩黄连药理作用及其作用机制的研究主要涉及保肝、镇痛、抗肿瘤、抗菌等方面。岩黄连发挥药理作用的化学成分主要是生物碱类成分,统称为岩黄连总碱(Corydalis saxicola Bunting total alkaloids,CSBTA),而关于岩黄连总碱中发挥药理作用的物质基础的研究较少。本文就岩黄连总碱的药效物质基础、药理作用及其机制的研究进展进行综述,为该药物的临床合理应用与基于新剂型以及新适应证等的进一步开发提供参考。

岩黄连总碱对牙龈卟啉单胞菌的体外抑菌活性研究

目的探究不同浓度岩黄连总碱(CSBTA)对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)体外生长的影响。方法检测CSBTA对P.gingivalis的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。用不同浓度(0.01 g/L、0.02 g/L、0.04 g/L、0.08 g/L、0.16 g/L、0.32 g/L)CSBTA溶液对P.gingivalis进行处理,检测其对P.gingivalis的相对生长抑制率;用1/4MIC、1/2MIC、MIC的CSBTA溶液对P.gingivalis进行处理,观察并检测其对P.gingivalis生长的影响,并绘制生长曲线。结果CSBTA对P.gingivalis的MIC为0.08 g/L,MBC为0.16 g/L。CSBTA浓度为0.02 g/L时,50%以上细菌生长受到抑制[相对生长抑制率为(55.36±7.39)%];CSBTA浓度为0.08 g/L时,90%以上细菌生长受到抑制[相对生长抑制率为(93.21±3.38)%]。0.02 g/L、0.04、0.08 g/L CSBTA溶液对P.gingivalis生长均有不同程度的抑制,且呈浓度依赖性趋势,0.02 g/L、0.04 g/L CSBTA溶液处理时P.gingivalis缓慢生长,而0.08 g/L CSBTA溶液处理时P.gingivalis生长几乎完全受到抑制。结论CSBTA对P.gingivalis的体外生长具有较强的抑制作用。

岩黄连总碱在抑郁模型大鼠体内的药代动力学分析

目的:探讨岩黄连总碱对脂多糖(LPS)诱导抑郁大鼠模型的影响,以及其中8种主要成分的药代动力学特征。方法:将雄性24只SD大鼠随机分成正常组、模型组、氟西汀组(10 mg·kg^(-1))、岩黄连总碱组(210 mg·kg^(-1)),每组6只。除正常组外,其他大鼠经腹腔注射LPS建立抑郁症炎症模型,造模1周后开始给药,各给药组按相应剂量灌胃药液,正常组及模型组灌胃等体积蒸馏水,边造模边给药。连续给药2周后,通过糖水偏好、强迫游泳及旷场试验测试岩黄连总碱对抑郁大鼠行为学的影响,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马组织病理学变化。末次给药后,按设定时间经眼眶取血,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法(UPLC-QqQ-MS)检测其中脱氢卡维丁、延胡索乙素、黄连碱、巴马汀、药根碱、小檗碱、小檗红碱、表小檗碱的血药浓度,绘制药-时曲线,通过DAS 2.0软件对各成分药代动学参数进行分析。结果:与正常组比较,模型组糖水偏好率降低、旷场总路程减少、游泳不动时间延长,血清中炎症因子表达升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠糖水偏好率增加、旷场总路程增加,游泳不动时间缩短,岩黄连总碱组血清中炎症因子表达降低(P<0.05,P<0.01)。HE染色结果显示,模型组大鼠海马区神经元缺失、排列紊乱且有残留空泡,岩黄连总碱组大鼠海马区神经元增多且排列整齐、胞浆清楚。药代动力学结果显示,经连续灌胃岩黄连总碱后,8种活性成分的达峰时间(t_(max))为0.19~2.06 h,半衰期(t_(1/2))为3.71~8.70 h,其中延胡索乙素的药时曲线下面积(AUC_(0-∞))最高且t_(1/2)最短,黄连碱、巴马汀、药根碱、小檗碱、小檗红碱、表小檗碱的AUC_(0-∞)均较低。脱氢卡维丁、黄连碱、巴马汀、小檗碱和表小檗碱药时曲线出现明显的双峰现象。结论:岩黄连总碱能够改善大鼠抑郁样行为,抑制血清中炎症因子的表达,改善海马区病理损伤,具有抗抑郁作用;同时,该有效部位在抑郁模型大鼠体内吸收较快,消除较慢,药效维持时间长。

UPLC-Q-TOF-MS/MS法定性与HPLC法定量分析岩黄连总碱成分

目的:定性分析岩黄连总碱化学成分,并对其中8个含量较高的生物碱类成分进行定量分析。为研究岩黄连总碱的药效物质基础提供依据,也为岩黄连总碱质量控制提供参考。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)定性分析岩黄连总碱化学成分,并用高效液相色谱法(HPLC)同时测定岩黄连总碱中原阿片碱、非洲防己碱、延胡索乙素、黄连碱、脱氢卡维丁、巴马汀、小檗碱和白屈菜红碱的含量。结果:岩黄连总碱提取物中共鉴定出38个生物碱类成分,其中原小檗碱类13个,小檗碱类9个。此外,定量分析的8个成分在各自范围内线性良好(r>0.999 2),加样回收率96.70%~103.8%,RSD 0.68%~1.97%。结论:该方法专属性好,准确性高,可用于岩黄连总碱提取物的定性、定量分析。

高效液相色谱法测定岩黄连总碱胶囊中3种生物碱含量

岩黄连中主要有效成分是以脱氢卡维丁为代表的生物碱类化合物[1],这类化合物具有潜在的抗HBV活性和肝保护活性[2]。有文献[3]报道使用高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氢卡维丁的含量。但未见采用高效液相色谱法同时测定3种生物碱含量的文献报道。

岩黄连总碱胶囊在健康受试者体内的药动学研究

目的:建立LC-MS/MS法测定人血浆中脱氢卡维丁的浓度,研究不同剂量岩黄连总碱胶囊在中国健康受试者多次给药后的药动学。方法:采用随机、开放、多剂量给药设计的方法。16名健康志愿者随机分为2个剂量组(2400 mg和3200 mg),男女各半,每组8例,分别多次口服岩黄连总碱胶囊,每日1次,连续7 d,第7天在给药前及给药后不同时间点采取血样本。血浆样品以乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C_(18)(3.0 mm×100 mm,3.5μm),流动相为0.2%甲酸水溶液(含1 mmol·L^(-1)甲酸铵)∶乙腈(30∶70,V/V),ESI离子源,正离子扫描,MRM检测模式。检测离子:m/z 350.3→334.3(脱氢卡维丁);m/z 272.2→171.3(右美沙芬)。利用WinNonlin 8.0软件计算药动学参数。结果:脱氢卡维丁线性范围为0.015~3 ng·mL^(-1),定量下限为0.015 ng·mL^(-1),方法学的各项指标均符合要求。2个剂量组(2400 mg和3200 mg)多次给药后的主要药动学参数分别为t_(max):(1.75±1.04),(2.06±0.98)h;t_(1/2):(31.59±17.32),(35.98±14.46)h;AUC_(0-t):(2.637±0.504),(3.150±0.485)ng·h·mL^(-1);AUC_(0-∞):(5.512±1.792),(7.649±3.306)ng·h·mL^(-1)。结论:本研究建立的LC-MS/MS测定法简便、灵敏,可用于岩黄连总碱胶囊的人体药动学研究。

岩黄连总碱对长期灌胃大鼠生化指标及肝组织抗氧化能力的影响

目的研究长期服用岩黄连总碱对大鼠生化指标及肝组织抗氧化能力的影响。方法大鼠给予岩黄连总碱450、300和150mg/kg,连续26周,禁食12h后用乌拉坦麻醉动物,取各个脏器称重并计算脏器系数,光学显微镜下做病理组织学检查,测定血清生化指标和肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)。结果岩黄连总碱各剂量组天冬氨酸转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)含量与对照组比较含量升高,葡萄糖(GLU)含量下降并呈一定的剂量依赖性。岩黄连总碱高、中剂量组MDA含量下降,SOD活力显著升高。病理组织学检查各组均未见有明显病变。结论在本试验条件下,长期给予岩黄连总碱各剂量组对肾脏有一定毒性影响但未见器质性损伤。岩黄连总碱可通过减少MDA含量和增加SOD活性而增强大鼠肝脏抗氧化能力,对大鼠肝脏有很好的保护作用。

壳寡糖促进岩黄连总碱提取物中原小檗碱型生物碱成分肠道吸收的研究

目的:考察壳寡糖对岩黄连总碱提取物中原小檗碱型生物碱活性成分肠道吸收的促进作用。方法:采用大鼠在体肠单向灌流模型,研究添加不同浓度壳寡糖后岩黄连总碱中脱氢卡维丁、盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的吸收动力学参数变化,评价壳寡糖对药物成分肠道吸收的促进作用。结果:壳寡糖的浓度对3个活性指标成分在大鼠肠道的吸收速率常数(Ka)和有效渗透系数(Peff)具有不同程度的影响,在0.5%壳寡糖溶液中活性指标成分的Ka和Peff增加明显,呈现较强的吸收促进作用。结论:壳寡糖对岩黄连生物碱中原小檗碱型生物碱活性成分的肠道吸收有一定促进作用。

岩黄连总碱对代谢相关脂肪性肝病小鼠的治疗作用及分子机制研究

目的研究岩黄连总碱对高糖高脂饮食诱导的代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠的治疗作用。方法随机取C57BL/6小鼠7只设置为对照组,喂以正常饲料;造模小鼠给予高脂饮食和高糖饮水(含20%果糖水),连续喂养10周;将造模小鼠按体质量随机分为模型组、盐酸二甲双胍(阳性药,200 mg/kg)组和岩黄连总碱低、高剂量(25、100 mg/kg)组,继续饲以高脂高糖饮食,连续ig给药5周。记录小鼠体质量,取肝脏并拍照,测定小鼠肝脏质量,计算肝脏指数;应用血糖仪测定小鼠空腹血糖(FBG)及口服糖耐量(OGTT);试剂盒法测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及游离脂肪酸(NEFA)的水平;取肝组织进行HE染色、油红O染色和Masson染色;Western blotting检测肝组织中AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组小鼠体质量、肝脏指数显著升高;给药后小鼠体质量及肝脏指数显著下降(P<0.05、0.01)。与模型组比较,岩黄连总碱显著降低小鼠的FBG及OGTT水平(P<0.01);显著降低血清TC、TG、LDL-C及NEFA水平(P<0.01);显著改善小鼠肝组织脂肪变及纤维化;显著上调MAFLD小鼠肝组织p-AMPK、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.01)。结论岩黄连总碱对MAFLD发挥显著治疗作用,其作用机制可能与通过激活AMPK/PI3K/Akt信号通路,减轻肝脏脂质沉积有关。

基于InsR/PI3K/Akt通路研究岩黄连总碱纠正高脂喂养小鼠糖代谢紊乱的作用机制

目的 研究岩黄连Corydalis saxicola总碱对胰岛素抵抗小鼠的影响及作用机制。方法 高脂饮食喂养诱导胰岛素抵抗小鼠,造模成功后给予岩黄连总碱4周,观察岩黄连总碱对胰岛素抵抗小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清胰岛素、口服糖耐量(oral glucose tolerance test,OGTT)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、糖化血清蛋白(glycosylated serum protein,GSP)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、瘦素、脂联素(adiponectin/ADPN,ADP/Acrp30)及肝糖原水平的影响;利用Western blotting检测肝组织中磷酸烯醇式丙酮酸激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)、叉头框蛋白O1(Forkhead box protein O1,FoxO1)、p-FoxO1、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、p-GSK-3β、胰岛素受体(insulin receptor,InsR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt蛋白表达情况。结果 岩黄连总碱可以显著降低胰岛素抵抗指数(P<0.01),改善糖耐量(P<0.01),降低血清中TCH、TG、GSP、LDL-C、瘦素水平(P<0.01),升高HDL-C、ADP/Acrp30水平(P<0.05),促进肝糖原合成(P<0.01),激活InsR/PI3k/Akt通路(P<0.05)。结论 岩黄连总碱可以改善高脂诱导的小鼠胰岛素抵抗,其作用机制可能与激活InsR/PI3K/Akt通路有关。

岩黄连提取物的药理学研究现状

岩黄连为罂粟科紫堇属植物,文献研究其具有抗肝炎病毒、抗菌消炎、止痛镇静、提高免疫能力、抗肿瘤等作用,其注射液临床上用于急慢性肝炎、肝硬化、肝腹水、肝癌及其他肿瘤的辅助治疗。岩黄连的药理作用机制有待进一步研究,以期能更广泛、更安全地应用于临床。