归脾丸对粪菌移植造模的孤独症谱系障碍大鼠行为学及脑5-HT含量的影响

目的验证归脾丸改善孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)子代大鼠核心症状的疗效,观察其对脑5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量的影响,并探讨其疗效与脑5-HT水平的相关性。方法将10只SPF级SD孕鼠随机分为正常孕鼠组(3只)和粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)孕鼠组(7只),FMT孕鼠组通过FMT法进行造模。子代鼠出生第28天时,通过行为学检测筛选符合ASD疾病模型的雄鼠30只,随机分为模型组(等体积生理盐水)、归脾丸低剂量组(0.75 g/kg)、归脾丸中剂量组(1.5 g/kg)、归脾丸高剂量组(3 g/kg)、双歧杆菌组(0.5 g/kg),每组6只;正常雄鼠6只,设置为正常组(等体积生理盐水)。各组连续灌胃14 d,1次/d。记录大鼠体质量;采用行为学检测评估疗效;采用ELISA法测定大鼠前额5-HT含量;等级相关分析法分析子代大鼠社交能力及社交新颖性与5-HT的相关性。结果与正常孕鼠组比较,FMT孕鼠组子代鼠睁眼时间延长(P<0.05)、体质量下降(P<0.05)。用药前,与正常组比较,模型组社交能力降低(P<0.05)、社交新颖性降低(P<0.05)、焦虑程度增加(P<0.05)。用药2周后,与正常组比较,模型组社交能力降低(P<0.05)、社交新颖性降低(P<0.05)、焦虑程度加重(P<0.05)、体质量及5-HT含量下降(P<0.05)。与模型组比较,各用药组社交能力增强(P<0.05)、社交新颖性增强(P<0.05)、焦虑状态减轻(P<0.05)、5-HT含量增加(P<0.05);归脾丸中、高剂量组,双歧杆菌组体质量增加(P<0.05)。与归脾丸高剂量组比较,归脾丸低剂量组社交能力降低(P<0.05)、社交新颖性降低(P<0.05),体质量及5-HT含量下降(P<0.05),归脾丸中剂量组5-HT含量下降(P<0.05),双歧杆菌组社交新颖性降低(P<0.05)。相关新分析显示,ASD大鼠社交偏好系数及新颖偏好系数与5-HT含量呈显著正相关(P<0.05)。结论归脾丸可显著改善FMT子代大鼠的ASD样行为,其机制可能与上调脑内5-HT含量有关。

归脾丸合并丹栀逍遥丸联合盐酸舍曲林治疗对高血压病合并抑郁症患者HAMD17、SF-36及血压达标率的影响

目的 分析归脾丸合并丹栀逍遥丸联合盐酸舍曲林治疗高血压病合并抑郁症患者的临床效果及对抑郁评分、生活质量及血压达标率的影响。方法 选取河南中医药大学第一附属医院2019年5月至2022年6月期间收治的105例高血压病合并抑郁症患者作为研究对象,按照治疗方案的不同,将患者分为观察A组(n=52)与观察B组(n=53),其中观察A组采用盐酸舍曲林治疗,观察B组采用归脾丸合并丹栀逍遥丸联合盐酸舍曲林治疗,对比两组患者临床疗效、抑郁情况、生活质量、血压达标率、血浆5-羟色胺、去甲肾上腺素水平以及不良反应。结果 观察B组总有效率为96.23%,观察A组总有效率为82.69%,观察B组高于观察A组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后抑郁评分均降低,且观察B组低于观察A组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后SF-36评分均增高,且观察B组高于观察A组,差异有统计学意义(P<0.05);观察B组血压达标率为73.58%,观察A组血压达标率为53.85%,观察B组高于观察A组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后血浆5-羟色胺水平均升高,去甲肾上腺素水平均降低,且观察B组血浆5-羟色胺水平高于观察A组,去甲肾上腺素水平低于观察A组,差异有统计学意义(P<0.05);两组总不良反应率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 归脾丸合并丹栀逍遥丸联合盐酸舍曲林能有效缓解患者抑郁症状,降低血压指数,提高临床疗效,且用药安全性高,值得临床推广使用。

UPLC-MS/MS法同时测定归脾丸中14种成分

目的建立UPLC-ESI-MS/MS法同时测定归脾丸中斯皮诺素、远志口山酮Ⅲ、党参炔苷、甘草苷、甘草素、黄芪甲苷、细叶远志皂苷、异甘草素、木香烃内酯、去氢木香内酯、藁本内酯、白术内酯Ⅰ、甘草次酸、茯苓酸的含量。方法该药物甲醇提取液的分析采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.25 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。再进行系统聚类分析、主成分分析、偏最小二乘判别分析。结果14种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9995),平均加样回收率93.0%~103.9%,RSD 0.51%~1.9%。19批样品聚为3类,藁本内酯、去氢木香内酯、木香烃内酯、细叶远志皂苷为差异性成分。结论该方法稳定可靠,可用于归脾丸的质量控制。

UPLC-MS/MS同时检测人参健脾丸和人参归脾丸中非法添加西洋参

目的:建立一种可同时测定人参归脾丸和人参健脾丸中非法添加西洋参的超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测方法。方法:用80%甲醇回流提取制备供试品溶液,使用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.35 mL·min^(-1),柱温为40℃,采用电喷雾离子源、多反应监测模式、负离子方式进行扫描。结果:拟人参皂苷F_(11)在5.025~100.500 ng·mL^(-1)线性关系良好(r=0.9985),重复性RSD为1.4%,拟人参皂苷F_(11)在人参归脾丸和人参健脾丸中的回收率分别为97.71%、97.64%,检出限为1 ng·mL^(-1),定量限为3 ng·mL^(-1)。结论:建立的方法灵敏度高、实用性强,可作为人参归脾丸和人参健脾丸中非法投入西洋参的补充检验方法。

归脾丸对D-半乳糖致衰老小鼠的免疫调节作用研究

目的研究归脾丸对D-半乳糖(D-gal)致衰老小鼠的免疫调节作用。方法运用网络药理学方法筛选归脾丸发挥免疫作用的相关靶点和相关通路,并通过药效学实验进行验证。将105只雄性ICR小鼠随机分为空白对照(CON)组、模型对照(MOD)组、阳性对照(POS)组、归脾丸低剂量(GD)组和归脾丸高剂量(GG)组,除CON组皮下注射生理盐水外,其余各组小鼠皮下注射400 mg/kg D-gal以复制衰老模型;CON组与MOD组灌胃蒸馏水,POS组灌胃300 mg/kg匹多莫德口服溶液,GD组和GG组分别灌胃300 mg/kg和600 mg/kg的归脾丸水溶液,每日1次,共计8周。给药结束后,采集血清及脾脏组织,检测小鼠血清中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量以及免疫球蛋白G(IgG)、IgM和IgA含量;计算脾脏指数并观察脾脏组织病理学改变;检测小鼠脾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)活性和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量;检测除POS组外小鼠脾脏组织中TNF/磷酸肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3k-Akt)途径中相关蛋白的表达情况。结果网络药理学分析结果显示,TNF、IL-6、Akt1为核心靶点。药效学研究结果显示,与MOD组比较,归脾丸各剂量组小鼠血清中IL-2、IL-4、IgG、IgM、IgA含量均显著升高,TNF-α、IL-6含量均显著降低,脾脏指数均显著升高(P<0.05或P<0.01);淋巴细胞弥漫性增生的现象改善,脾细胞紧密排列,白髓和红髓之间界线清晰;脾脏组织中SOD、GSH-Px活性均显著升高,MDA活性和8-OHdG含量均显著降低,TNF-α、PI3K、p-Akt蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论归脾丸能够调节D-gal致衰老小鼠的免疫功能,其作用可能与调控TNF/PI3k-Akt途径进而减轻小鼠脾脏组织氧化应激损伤以及调节TNF-α、PI3K、p-Akt蛋白水平的表达有关。

归脾丸(散)与其有效成分抗抑郁作用机制研究进展

抑郁症是一种严重影响人类工作和生活的精神类疾病,就治疗总费用和生产力损失而言,抑郁症居世界疾病负担首位,严重影响社会和人类健康。近几年的研究表明,中医药在治疗抑郁方面具有一定优势,以归脾丸作为干预抑郁症的经典方剂其抗抑郁作用已被临床反验证,但归脾丸及其有效成分的抗抑郁作用机制尚不清楚,本文通过对以往国内外研究的文献进行系统梳理,发现其主要是从调节下丘脑–垂体–肾上腺(HPA)轴,影响单胺类神经递质分泌,调节脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的水平,抑制炎症反应,调节肠道菌群的结构,影响氨基酸类神经递质的分泌,影响雌激素的水平等方面发挥抗抑郁作用的。其有效成分主要包括抗炎抗凋亡的黄芪甲苷,以提高BDNF水平为主的酸枣仁皂苷和茯苓多糖,以调节HPA轴为主的远志皂苷,多通路调节的主要包括调节HPA轴,BDNF,单胺神经递质,抗炎抗氧化等途径的人参皂苷、阿魏酸和甘草酸等。

归脾丸辅治妇科恶性肿瘤术后并发抑郁症疗效观察

目的:观察归脾丸辅治妇科恶性肿瘤术后并发抑郁症的效果。方法:80例随机分为研究组和对照组各40例。两组均予以常规西医治疗,研究组加用归脾丸治疗。结果:治疗2个月后,两组HAMD评分低于治疗前,且研究组较对照组更低(P<0.05)。研究组情志抑郁、胸部满闷、腹胀纳呆评分较对照组更低(P<0.05),总有效率研究组高于对照组(P<0.05)。结论:归脾丸辅治妇科恶性肿瘤术后并发抑郁症疗效较好。

归脾丸“异病同治”的临证举隅

归脾丸出自《济生方》,方以参、芪、术、草益气健脾;当归、远志、枣仁、茯神、龙眼肉养血补心宁神,且甘草、远志还有交通心肾之功;木香行气醒脾,使之补而不腻。许子春主任医师是全国基层名老中医药专家,杭州市级名中医,浙派中医许氏妇科第三代传人,临诊中使用归脾丸频率诚多且广。现将许老临床应用归脾丸的三则验案介绍如下。1经间期出血案患者,女,41岁,2020年12月9日初诊。主诉:阴道少量出血3 d。

推拿手法结合人参归脾丸治疗老年人气血亏虚型便秘 32 例

研究采用推拿手法联合人参归脾丸治疗老年人气血亏虚型便秘,观察其临床疗效,方法:选取2020年09月~2022年03月来我院就诊的便秘(气血亏虚型)32例患者,根据数字表法将其随机分为研究组和对照组,各16例,对照组患者单独给予人参归脾丸治疗、研究组在此基础上联合推拿手法加以治疗,观察两种方案在临床的疗效,结果:研究组总有效率为93.75%,明显高于对照组的62.50%(P<0.05);研究组患者生活质量改善效果优于对照组(P<0.05)。结论:推拿手法联合人参归脾丸治疗老年人气血亏虚型便秘安全有效,且容易操作,值得推广。

测定天王补心丸和归脾丸中细叶远志皂苷的含量

目的:建立含远志中成药中细叶远志皂苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,AlltimaC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.05%磷酸溶液(65∶35),检测波长202 nm,流速1.0 mL.min-1。结果:细叶远志皂苷的理论塔板数为2 500。回归方程Y=5.239×106X-6.247×105(r2=0.999 4),线性范围10～500μg.mL-1,平均回收率为97.5%(RSD均小于3.0%),最低检出浓度为5.50μg.mL-1。结论:检测含远志中成药中细叶远志皂苷含量方法简便,结果准确,重现性好,可作为含远志的复方制剂质量控制标准。

高效液相色谱-线性指纹定量法评价人参归脾丸的三波长指纹图谱

以样品指纹向量与对照指纹向量的多元化学组分间存在线性函数关系为基础,引入相关系数r、斜率a、截距b及线性定性相似度SL、线性定量相似度ML等概念,建立线性指纹定量法(linearly quantified fingerprint method,LQFM)模型以定性、定量控制中药质量。用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)同时测定了10批人参归脾丸(Renshen Guipi Wan,RSGPW)分别在203、228和326 nm下的高效液相色谱指纹图谱,运用LQFM理论模型,鉴定RSGPW质量。LQFM能显著区别不同来源的产品,同一厂家产品质量控制一致。鉴定结果与已知的系统指纹定量法评价结果对比,LQFM对中药多元化学成分的复杂系统能实现客观的定性、定量评价。多波长指纹图谱能最大限度地兼顾中药各成分的紫外吸收特征,对中药质量控制具有更全面和可靠的特点。

逍遥丸、归脾丸治疗老年期阈下抑郁症疗效观察

目的:初步探索逍遥丸、归脾丸对肝郁脾虚型、心脾两虚型老年期阈下抑郁症的影响。方法:本研究采用前瞻性研究方法收集样本,通过DSM-IV、HAMD-17、CES-D以及中医辨证筛选出肝郁脾虚型、心脾两虚型老年期阈下抑郁症患者,并随机选取30例纳入空白对照组,将余下样本根据证型分类分别纳入归脾丸组和逍遥丸组,每组30例,最后观察归脾丸、逍遥丸对老年期阈下抑郁症的疗效。结果:1)12周末归脾丸组和逍遥丸组的总有效率均明显高于对照组,而归脾丸组与逍遥丸组的总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2)归脾丸、逍遥丸从干预4周末开始,才开始与同时期对照组HAMD-17评分比较,差异有统计学意义(P<0.05),同时期归脾丸组与逍遥丸组之间评分变化比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1)逍遥丸和归脾丸能够治疗老年期阈下抑郁症,从第4周开始有明显疗效。2)用归脾丸、逍遥丸治疗期阈下抑郁症,能够预防老年期抑郁症,符合中医"治未病"理论。

紫外和红外光谱指纹谱与燃烧热谱联合定量评价人参归脾丸质量

目的建立人参归脾丸紫外光谱指纹图谱(UVFPs)、红外光谱指纹图谱(IRFPs)及其燃烧热谱(Q),以UVFPs-IRFPs-Q联合评价其真实质量。方法采用空心聚四氟乙烯管(650mm×0.12mm)装入高效液相色谱仪,用DAD采集190～400nm区间UV光谱数据建立UV指纹图谱;将RSGPW甲醇提取液涂于溴化钾晶片上测定IR光谱指纹图谱;采用氧弹式量热计测定其燃烧热值。之后对UV-IR-Q等权融合综合评价RSGPW质量。结果 10批样品中S2、S9和S10质量极好,其余质量很好或好。结论紫外指纹图谱能表征药物组分中π→π*,n→π*及n→σ*的化学键信息,红外指纹图谱表征的是饱和单键振动或转动的化学键信息,燃烧热值Q从能量角度反映化学物质整体含量,紫外-红外光谱指纹图谱联合燃烧热能展现中药质量全貌而更好地用于中药质量控制。

HPLC法同时测定归脾丸中甘草酸与藁本内酯

目的以多项测定指标控制制剂质量,对归脾丸(当归、木香、党参、白术、炙黄芪、炙甘草、茯苓、远志、酸枣仁、龙眼肉、大枣)中的甘草酸与藁本内酯进行了定量测定研究。方法以乙腈-甲醇-0.1%磷酸(37∶18∶45)为流动相,采用高效液相法,同时测定了归脾丸中甘草酸和藁本内酯。结果通过方法学考察,甘草酸的进样量在0.069 5～1.39μg(r=0.999 98);藁本内酯的进样量在0.083～0.664μg(r=0.999 99),与峰面积呈良好的线性关系。甘草酸的平均回收率为98.89%,RSD为0.68%(n=9);藁本内酯的平均回收率为98.96%,RSD为0.75%(n=9)。结论该方法测定归脾丸中甘草酸与藁本内酯简便、快捷、实用。

归脾丸中阿魏酸含量测定的方法优化

目的用HPLC测定归脾丸中阿魏酸含量,建立一套完整可行的HPLC检测方法。方法以归脾丸为试药,采用不同方法和溶剂提取,改变HPLC不同色谱条件来测定阿魏酸的含量。最佳提取条件:以酸醇为溶剂,超声提取1 h,滤液蒸干,稀酸溶解,乙醚萃取,挥干乙醚,酸醇定容;HPLC色谱条件:C18色谱柱,流动相甲醇-水-冰乙酸(28∶71∶1),流速0.8 ml/min,室温,检测波长320 nm,保留时间22 min。结果归脾丸中阿魏酸的含量为0.066 3 mg/g原药,RSD值0.53%。结论该方法简便稳定,能准确检测归脾丸中阿魏酸含量。

归脾丸对苯中毒小鼠骨髓细胞周期的影响

目的观察归脾丸对苯中毒小鼠骨髓细胞周期的影响,并探讨其造血调控作用的可能机制。方法 72只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、西药组以及归脾丸大、中、小剂量组,每组12只。将小鼠置于人工模拟高苯浓度环境每天8h,连续14天,复制苯中毒模型。造模后,归脾丸大、中、小剂量组分别给予归脾丸溶液8、4、2mg/(kg·d)灌胃;西药组给予利血生1.5mg/(kg·d)和鲨肝醇5mg/(kg·d)混悬液灌胃;正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,均每天1次,连续3周。应用流式细胞仪检测小鼠骨髓有核细胞计数及骨髓细胞周期。结果与正常对照组比较,模型组骨髓有核细胞计数明显减少(P<0.05);与模型组比较,归脾丸大、小剂量组及西药组骨髓有核细胞计数均明显增加(P<0.01)。与正常对照组比较,模型组S期细胞比例和细胞增殖指数(proliferation index,PI)增加,G0/G1期细胞比例下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,归脾丸大剂量组G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例和PI增加,归脾丸中剂量组S期细胞比例下降,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与西药组比较,归脾丸大剂量组在G2/M期细胞比例和PI增加而在G0/G1期细胞比例下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论归脾丸可能通过调节苯中毒小鼠骨髓细胞周期的G1或G2期检查点,而使细胞进入细胞增殖周期,加速骨髓G0/G1期细胞向S期细胞、S期细胞向G2/M期细胞的转化,促进骨髓造血细胞增殖,提高外周血象,促进骨髓造血功能的恢复。

归脾丸(浓缩丸)质量标准研究

目的建立归脾丸(浓缩丸)的质量标准。方法用薄层色谱法(TLC法)对归脾丸(浓缩丸)中黄芪甲苷、远志、木香进行定性鉴别;用高效液相色谱法(HPLC法)测定归脾丸中甘草酸的含量,色谱柱为C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水-乙酸(65∶30∶5),流速为1.0mL/min,柱温40℃,检测波长250nm。结果TLC法色谱斑点清晰,空白无干扰;HPLC法的甘草酸平均回收率为100.18%,RSD为1.22%。结论方法准确,重现性好,可用于归脾丸(浓缩丸)的质量控制。

归脾丸改善血液透析患者贫血及对炎症因子的影响

目的探讨归脾丸对血液透析患者贫血及炎症因子的影响。方法 60例西医诊断为慢性肾脏病（CKD）5期、CKD贫血,中医诊断为脾虚、血虚证等维持性血液透析（MHD）患者随机分成2组,每组30例。对照组采用促红细胞生成素（EPO）干预治疗,治疗组在对照组基础上加用归脾丸,共治疗60d,2组治疗前后分别检测血红蛋白（Hb）、血清超敏C-反应蛋白（hsCRP）、白细胞介素6（IL-6）的变化。结果与治疗前比较,2组治疗后Hb明显升高（P〈0.05～0.01）,治疗组优于对照组（P〈0.05）;与治疗前相比,2组患者hs-CRP、IL-6皆有明显下降（P〈0.05～0.01）,治疗组低于对照组（P〈0.05～0.01）。结论归脾丸具有改善血液透析患者贫血及抗炎作用。

人参归脾丸高效液相色谱数字化指纹图谱研究

目的建立人参归脾丸(Renshen Guipi Wan,RSGPW)HPLC数字化指纹图谱,为其整体质量控制提供评价方法。方法采用Centurysil C18BDS柱(200mm×4.6mm,5μm),以0.1%磷酸溶液(A)-0.1%磷酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱:0～80min,10%～90%B,;80～90min,90%B,流速1.0mL.min-1,检测波长203nm,柱温(35.0±0.15)℃,进样量5μL。用"中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统3.0"软件对RSGPW进行数字化评价,并对制剂化学指纹成分归属。结果用16个数字化指数鉴别出2批样品不合格;用系统指纹定量法鉴别出3批样品质量极好,2批样品质量很好,5批样品质量好,2批质量劣;从化学指纹贡献率来说白术为该复方主要药味。结论所建立的RSGPW-HPLC数字化指纹图谱能反映RSGPW质量变化,用数字化指纹图谱控制RSGPW质量可行。

康复新液保留灌肠加口服人参归脾丸治疗溃疡性结肠炎142例

目的观察以康复新液保留灌肠加口服人参归脾丸治疗溃疡性结肠炎(UC)的疗效。方法选取266例UC患者,分为治疗组142例和对照组124例,对其临床疗效和给药时间进行对比观察。结果总有效率康复新组为91.55%,对照组为83.87%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论康复新液保留灌肠加口服人参归脾丸治疗UC临床疗效较好,以康复新液保留灌肠加口服人参归脾丸治疗UC值得临床推广。