当归多糖对再生障碍性贫血小鼠骨髓Th17/Treg细胞平衡及相关炎性因子蛋白表达的影响

目的探究当归多糖(Angelica polysaccharide,APS)对再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)小鼠骨髓Th17/Treg细胞平衡及相关炎性因子蛋白表达的影响。方法50只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、环孢素A组、APS低、高剂量组,利用射线照射联合异源淋巴细胞输注的方法制备再生障碍性贫血小鼠模型。建模后灌胃给药28 d,观察小鼠一般情况、体重变化、脾指数,检测外周血基本血液学参数变化,HE染色评价小鼠骨髓组织病理变化;ELSIA法检测骨髓TGF-β1、IL-10、IL-17A、IL-6等蛋白表达水平;FCM检测骨髓Th17、Treg细胞比例及Th17/Treg细胞平衡变化。结果与正常组相比,模型组小鼠活动笨拙,精神萎靡,眼睑唇色耳廓颜色苍白,进食饮水量减少;体重及脾指数均明显下降;外周血红细胞、白细胞、血小板计数及血红蛋白浓度均明显降低;骨髓组织结构紊乱,造血组织增生度明显减低;IL-17A、IL-6蛋白表达明显上调,TGF-β1、IL-10蛋白表达明显下调;骨髓Th17细胞比例明显增高,Treg细胞比例明显降低,Th17/Treg细胞比值显著升高(P<0.01)。与模型组相比,APS低、高剂量组一般状况均改善,进食量及饮水量增加,体重、脾指数明显升高,外周血红细胞、白细胞、血小板计数及血红蛋白浓度明显升高(P<0.05),骨髓组织结构改善,造血组织增生度升高(P<0.05);IL-17A、IL-6蛋白表达明显下调,TGF-β1、IL-10蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);骨髓Th17细胞比例明显降低,Treg细胞比例明显升高,Th17/Treg细胞比值显著下降(P<0.01)。结论当归多糖能改善AA小鼠骨髓造血功能,其机制可能是通过调节Th17/Treg细胞平衡来实现。

当归多糖促进骨髓移植重建受体小鼠造血功能

目的探讨当归多糖(ASP)调控骨髓基质细胞(BMSCs)促进供体骨髓移植(BMT)重建受体小鼠造血功能的机制。方法分离纯化8~10周龄雄性C57BL/6J小鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs),移植给同龄同种雌性受体小鼠,第9天取受体鼠BMMNCs,再次移植给雌性受体小鼠。移植受体鼠分为对照组:假照射;辐射组:8.0 Gy X射线全身一次性照射;骨髓移植组:照射同辐射组,经尾静脉移植雄性供体BMMNCs(5×10^(6)个细胞);骨髓移植ASP组:同骨髓移植组,从移植的第1天起连续腹腔注射ASP[100 mg/(kg·d)×9]。模型构建期间记录小鼠体重与生存变化,模型构建结束后采集受体小鼠BMMNCs检测Y染色体性别决定区(SRY)基因,测定外周血血常规指标,计算股骨BMMNCs数,观察骨髓组织病理学;分离培养受体鼠BMSCs,观察细胞贴壁生长,5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测BMSCs增殖;分析细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;检测BMSCs培养上清液中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干细胞因子(SCF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平,检测BMMNCs与各组BMSCs共培养48 h,形成造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)数量;Real-time PCR分析受体BMMNCs的Notch信号通路相关基因(Notch1、Jagged1、Hes1)表达。结果单纯辐射组小鼠全部死亡,骨髓移植ASP组受体鼠体重下降不明显;在受体雌鼠BMMNCs中检测到SRY基因;骨髓移植ASP组受体鼠外周血血常规和BMMNCs总数下降幅度不显著,骨髓组织病理学损伤减轻;ASP能促进BMSCs增殖,降低BMSCs中ROS、MDA含量,提高SOD活性;促进BMSCs分泌SCF、GM-CSF及IGF-1,提高BMMNCs与受体BMSCs共培养后的CFU-Mix产率;提高受体小鼠BMMNCs中Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA表达。结论ASP促进受体小鼠造血功能重建机制与减轻造血微环境氧化应激损伤,提高BMSCs分泌造血生长因子,调控Notch信号通路有关。

当归多糖对低氧环境中骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的影响

目的探讨当归多糖对低氧环境中骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化潜能的影响。方法将BMSC随机分为空白组、低氧组、当归多糖组。使用OriCellTM成人BMSC成骨诱导分化完全培养基对3组细胞进行培养,其中当归多糖组的培养基含有50μg/mL的当归多糖。对空白组BMSC进行常规培养(21%氧浓度),将低氧组与当归多糖组BMSC置于6%氧浓度环境中进行培养。培养14 d后,观察3组的BMSC形态学变化和钙盐沉积情况,检测3组BMSC的成骨分化相关蛋白(骨桥蛋白和骨钙素)表达水平,以及成骨分化关键转录因子RUNT相关转录因子2(RUNX2)表达情况。结果与空白组相比,低氧组BMSC的骨钙素、骨桥蛋白、RUNX2的表达水平均降低(P<0.05),高密度钙结节及钙盐沉积减少。与低氧组相比,当归多糖组BMSC骨钙素、骨桥蛋白、RUNX2的表达升高(P<0.05),高密度钙结节及钙盐沉积增多。结论低氧环境可以抑制BMSC的成骨分化潜能,而当归多糖能够有效维持低氧环境中BMSC成骨分化潜能的稳定。

当归多糖对结直肠癌细胞顺铂耐药性的影响及作用机制

目的 探讨当归多糖对结直肠癌细胞顺铂耐药性的影响及作用机制。方法 将人结直肠癌细胞HT-15、顺铂耐药细胞株HT-15/DDP仅使用30μmol/L浓度的顺铂干预设为对照组,使用对应质量浓度1.0、1.5、2.0 mg/mL的当归多糖干预12 h后再加入30μmol/L浓度顺铂设为当归多糖组。通过脂质体细胞转染技术分别将miR-10b-5p inhibitor、TGFBR2 mimics转染至HT-15/DDP细胞中,再加入2.0 mg/mL当归多糖干预48 h,然后将其分为当归多糖(2.0 mg/mL)+miR-10b-5p inhibitor组、当归多糖(2.0 mg/mL)+TGFBR2 mimics组。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室试验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力。RT-PCR检测miR-10b-5p、TGFBR2 mRNA表达水平;Western blot检测TGFBR2蛋白表达水平。结果 单独顺铂干预的对照组HT-15/DDP细胞增殖率、细胞迁移个数明显高于HT-15细胞(P<0.01);经不同质量浓度当归多糖预处理12 h后,可明显增强HT-15/DDP细胞对顺铂的敏感性,HT-15/DDP细胞增殖率、细胞迁移个数明显降低(P<0.01)。单独顺铂干预的对照组HT-15/DDP细胞凋亡率明显低于HT-15细胞(P<0.01);经不同质量浓度当归多糖预处理12 h后,明显增强了HT-15/DDP细胞对顺铂的敏感性,HT-15/DDP细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。HT-15/DDP细胞miR-10b-5p、TGFBR2表达水平在各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.01);不同剂量当归多糖组中HT-15/DDP细胞miR-10b-5p表达水平明显低于对照组,TGFBR2表达水平明显高于对照组(P<0.01),随着当归多糖剂量的增加miR-10b-5p表达水平逐渐降低,TGFBR2表达水平逐渐升高(P<0.01)。使用生物信息学数据库(TargetScan、miRanda)预测miR-10b-5p的靶基因,结果显示,TGFBR2是miR-10b-5p的候选靶基因。miR-10b-5p表达下调后,HT-15/DDP细胞中TGFBR2相对表达量明显高于对照组HT-15/DDP细胞中TGFBR2相对表达量(P<0.01)。当归多糖(2.0 mg/mL)+miR-10b-5p inhibitor组、当归多糖(2.0 mg/mL)+TGFBR2 mimics组的HT-15/DDP细胞增殖率、细胞增殖迁移个数明显低于当归多糖组(2.0 mg/mL),HT-15/DDP细胞凋亡率明显高于当归多糖组(2.0 mg/mL)(P<0.05)。结论 当归多糖可通过下调miR-10b-5p表达、上调TGFBR2表达逆转结直肠癌细胞顺铂耐药性,进而抑制肿瘤细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡。

基于miR-148a-3p/SMAD2轴探讨当归多糖对高糖诱导RGC凋亡的影响

目的探究当归多糖(APS)对高糖诱导视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响,及其基于微小RNA-148a-3p/Smad家族成员2(miR-148a-3p/SMAD2)轴的作用机制。方法将分别转染miR-148a-3p模拟物(mimics)、miR-148a-3p抑制剂(inhibitor)及其对照品mimics-NC、miR-NC的RGC,分为对照组(CG)、模型组(MG)、APS低剂量(APS-L)组、APS高剂量(APS-H)组、APS-H+miR-148a-3p对照品组(APS+miR-NC)、APS-H+miR-148a-3p抑制剂组(miR-148a-3p inhibitor),分别以相应的高糖和APS处理,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-148a-3p和SMAD2 mRNA表达水平,检测细胞活力、凋亡情况和氧化应激指标水平,Western Blot法检测SMAD2蛋白表达水平,双荧光素酶实验检测miR-148a-3p和SMAD2的靶向关系。结果(1)miR-148a-3p/SMAD2表达:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组中miR-148a-3p表达水平均高于MG组(t_(APS-L)=6.564、t_(APS-H)=10.542、t_(APS-H+miR-NC)=9.945,均P=0.000),SMAD2 mRNA表达水平低于MG组(t_(APS-L)=4.147,P=0.004;t_(APS-H)=6.464、t_(APS-H+miR-NC)=6.586,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组miR-148a-3p表达水平低于APS-H+miRNC组(t=7.558,P=0.000),SMAD2 mRNA表达高于APS-H+miR-NC组(t=4.513,P=0.001),差异均有统计学意义。(2)细胞活力和凋亡率:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组细胞活力高于MG组(t_(APS-L)=8.105、t_(APS-H)=11.509、t_(APS-H+miR-NC)=11.996,均P=0.000),细胞凋亡率低于MG组(t_(APS-L)=8.729、t_(APS-H)=15.690、t_(APS-H+miR-NC)=14.709,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组细胞活力低于APS-H+miR-NC组(t=10.212,P=0.000),细胞凋亡率高于APS-H+miR-NC组(t=12.247,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)氧化应激:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)均低于MG组(LDH:t_(APS-L)=11.257、t_(APS-H)=18.770、t_(APS-H+miR-NC)=18.364,均P=0.000;MDA:t_(APS-L)=11.121、t_(APS-H)=17.139、t_(APS-H+miR-NC)=17.768,均P=0.000),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)均高于MG组(SOD:t_(APS-L)=9.408、t_(APS-H)=14.833、t_(APS-H+miR-NC)=13.240,均P=0.000;GSH:t_(APS-L)=5.616、t_(APS-H)=12.080、t_(APS-H+miR-NC)=12.642,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组LDH和MDA均高于APS-H+miR-NC组(t_(LDH)=15.121、t_(MDA)=14.613,均P=0.000),SOD和GSH均低于APS-H+miR-NC组(tSOD=12.278、tGSH=8.912,均P=0.000),差异均有统计学意义。。(4)凋亡蛋白:APS-L组、APS-H组和APS-H+miR-NC组SMAD2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达低于MG组(SMAD2:t_(APS-L)=4.565、t_(APS-H)=8.042、t_(APS-H+miR-NC)=7.390,均P=0.000;Bax:t_(APS-L)=4.916、t_(APS-H)=8.763、t_(APS-H+miR-NC)=8.336,均P=0.000;Caspase-3:t_(APS-L)=4.214、t_(APS-H)=10.201、t_(APS-H+miR-NC)=9.536,均P=0.000),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达高于MG组(t_(APS-L)=3.713,P=0.001;t_(APS-H)=10.108、t_(APS-H+miR-NC)=10.314,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组SMAD2、Bax、Caspase-3表达均高于APS-H+miR-NC组(t_(SMAD2)=5.651、t_(Bax)=6.840、t_(Caspase-3)=8.205,均P=0.000),Bcl-2表达低于APS-H+miR-NC组(t=9.283,P=0.000),差异均有统计学意义。(5)靶向关系:miR-148a-3p与SMAD2的3'非翻译区存在结合位点。miR-148a-3p mimics和野生型SMAD2共转染组荧光素酶活性低于mimics-NC和野生型SMAD2共转染组,差异有统计学意义(t=12.781,P=0.000)。结论当归多糖可能通过上调miR-148a-3p、下调SMAD2,改善高糖诱导的RGC凋亡和氧化应激损伤。

当归多糖调节骨髓造血微环境治疗再生障碍性贫血的机制

背景:如何改善造血微环境是目前再生障碍性贫血治疗的热点问题。目的:结合GEO测序分析、网络药理学与实验验证当归多糖改善骨髓造血微环境治疗再生障碍性贫血的作用机制。方法:借助GEO数据库获得了再生障碍性贫血相关差异表达基因并进行GO和GSEA分析。结合文献与PubChem、SwissTargetPrediction、PharmMapper数据库获取当归多糖活性成分和靶点。取交集靶点后利用STRING和Cytoscape构建蛋白相互作用网络,并进行GO和KEGG富集分析。构建再生障碍性贫血小鼠模型,利用血细胞分析仪、流式细胞术、ELISA、免疫组化、免疫荧光染色、Western blot方法验证当归多糖对再生障碍性贫血的疗效与作用机制。结果与结论:(1)共筛选出834个差异表达基因,参与细胞发育、造血、髓系细胞分化等生物学过程;(2)检索得到当归多糖相关347个靶点并筛选出77个潜在治疗基因,其中VEGFA、EGLN1、BCL2、干扰素γ、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素6等血管生成、凋亡及免疫相关因子度值显著;(3)KEGG通路富集分析治疗靶点主要富集在Th17细胞分化、NK相关细胞毒性、细胞黏附因子等干扰素γ、白细胞介素2、白细胞介素4相关信号通路;(4)动物实验表明,当归多糖能够显著改善再生障碍性贫血小鼠骨髓造血,增加外周血细胞及骨髓单个核细胞计数,提高小鼠存活率;与模型组相比,当归多糖组小鼠Th1/Th2细胞比例显著下降(P<0.01),干扰素γ水平显著降低(P<0.01),白细胞介素4水平升高(P<0.05),VEGFA表达显著升高(P<0.01),EGLN1表达显著降低(P<0.01),骨髓单个核细胞凋亡率、活性氧水平显著降低(P<0.01),Cleaved Caspase-3蛋白表达显著增高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01);(5)结果表明:当归多糖能够通过调节异常T细胞亚群,促进血管生成以改善造血微环境,并抑制骨髓单个核细胞凋亡,以改善再生障碍性贫血小鼠的造血功能。

当归多糖抗衰老的研究进展

当归是传统经典中药材,药用价值大,具有多种有效成分,不同成分的药理学作用各异。当归中提取的当归多糖为补血类中药多糖,是一种具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎等多种生物活性的化合物。中药多糖一直是抗衰老领域的研究热点,本文将从抗氧化、减少细胞凋亡、增强免疫功能、抗炎、调控端粒系统5个方面阐述当归多糖抗衰老的作用机制。

当归多糖对崇明白山羊冷冻精液质量与DNA甲基化的影响

为了解决崇明白山羊精液冷冻后总体质量偏低的问题,试验采集8只24~26月龄体型匀称的崇明白山羊精液,检测合格后混匀以消除个体差异,分别用未添加当归多糖(ASP)和添加150,300,600,1200μg/mL ASP的基础稀释液稀释后进行冷冻,解冻后评估精液的质量参数(活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性)、相关抗氧化指标[丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)、一氧化氮(NO)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)]及DNA甲基化5-MC水平,最终确定ASP的最适宜添加浓度,并分析了精液DNA甲基化5-MC水平与精液质量参数的相关性。结果表明:与未添加ASP相比,添加600μg/mL ASP的精子活率、活力、质膜完整率和线粒体活性都显著升高(P<0.05);添加300μg/mL ASP的精子顶体完整率显著升高(P<0.05);添加600μg/mL ASP的精子SOD、CAT活性及T-AOC水平都显著升高(P<0.05);添加600μg/mL ASP的精子ROS、MDA含量都显著降低(P<0.05);添加300,600μg/mL ASP的精子DNA甲基化5-MC水平显著降低(P<0.05)。精液DNA甲基化5-MC水平与精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性均呈现极显著负相关(P<0.01),R分别为-0.983,-0.892,-0.992,-0.732,-0.825。说明在本试验条件下,基础稀释液中添加600μg/mL ASP最利于崇明白山羊精液的冷冻保存。

当归多糖对M2型巨噬细胞分化和功能的影响

目的探讨当归多糖(angelica polysaccharide,APS)对M2型巨噬细胞分化、功能的影响及其分子机制。方法诱导小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDM)和M2型巨噬细胞,加入APS处理(0、80、160、320μg/mL);分离小鼠腹腔巨噬细胞,加入APS处理(0、160μg/mL)。流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测M2型巨噬细胞和腹腔巨噬细胞甘露糖受体(mannose receptor,MR)、CD11b、F4/80、CD163、ARG-1表达水平、凋亡情况以及吞噬能力。根据随机数字法将小鼠分为2组,即APS灌胃组(n=5)和对照组(n=5),FCM检测外周血和脾脏中巨噬细胞MR表达水平。荧光显微镜观察BMDM分化的M2型巨噬细胞形态;RT-qPCR检测M2型巨噬细胞MR、ARG-1的mRNA表达水平;免疫荧光检测M2型巨噬细胞分化和功能的分子机制。结果与0μg/mL APS组相比,在一定浓度(80~320μg/mL APS)范围内,随着APS浓度的升高,M2型巨噬细胞的MR表达水平降低(P<0.01);160μg/mL APS组腹腔巨噬细胞MR表达水平也降低(P<0.01)。与对照组相比,APS灌胃组小鼠外周血和脾脏中巨噬细胞MR的表达水平也明显下降(P<0.05)。与0μg/mL APS组相比,80~320μg/mL APS组巨噬细胞CD11b、F4/80、CD163表达水平升高(P<0.01);巨噬细胞形态发生变化,由大多呈梭形且有伪足变为大多为类圆形或不规则且少数细胞有伪足;APS可诱导M2型巨噬细胞凋亡(P<0.05)。与0μg/mL APS组相比,160μg/mL APS组M2型巨噬细胞吞噬荧光微球的能力升高(P<0.01),但ARG-1的表达水平降低(P<0.01);M2型巨噬细胞MR和ARG-1的mRNA表达降低(P<0.05);160μg/mL APS组M2型巨噬细胞的磷酸化的信号转导子和转录激活子6(phosphate acidified-signal transducers and activators of transcription 6,p-STAT6)阳性信号的平均荧光强度明显减低(P<0.05)。结论APS对M2型巨噬细胞的分化和功能均具有双向调控作用,这可能与APS可下调信号转导子和转录激活子6(signal transducers and activators of transcription 6,STAT6)信号通路相关。

当归多糖调控肠道菌群对脑缺血再灌注小鼠的影响

目的 探讨当归多糖(Angelica Sinensis Polysaccharide,ASP)改善小鼠肠道微生态对脑缺血再灌注(Ischemia/reperfusion injury,I/R injury)的影响。方法 将雄性SPF级昆明小鼠随机分为假手术组(Sham组),大脑中动脉栓塞组(MCAO组),当归多糖灌胃组(ASP组),粪菌移植组(Fecal microbiota transplantation,ASP-FMT),每组16只。连续给药7 d后建立MCAO模型,24 h后使用mNSS法检测小鼠神经功能缺陷评分;TTC染色法检测脑梗死相对面积;试剂盒法测定右侧大脑缺血半暗带组织SOD、MDA、GSH含量;Western blot测定炎症因子IL-1β、IL-5、IL-6、IL-10表达量;盲肠内容物16s rRNA测序分析肠道微生物多样性。结果 与MCAO组相比,ASP干预后小鼠神经功能明显改善(P<0.001),脑梗死相对面积明显减少(P<0.01),氧化应激水平下降(P<0.05);与MCAO组相比,ASP降低了脑组织IL-1β、IL-5及IL-6表达、上调IL-10表达量(P<0.05);MACO后小鼠肠道菌群丰富度明显减少,益生菌比例下调,当归多糖灌胃或菌群移植均可部分恢复菌群丰富度,上调益生菌比例;肠道菌群的变化与脑组织损伤程度具有相关性。结论 当归多糖通过改善肠道微生态,降低氧化应激水平,下调炎症因子水平,减轻脑缺血再灌注后神经功能损伤,减少梗死范围。

正交设计与Box-Behnken响应面法优化当归多糖抗疲劳饮料制备工艺

目的比较不同原料配方对当归多糖抗疲劳饮料感官指标的影响、不同复合稳定剂配方对当归多糖抗疲劳饮料稳定性的影响,分别利用正交设计与Box-Behnken响应面法优化当归多糖抗疲劳饮料的原料配方及稳定剂配方。方法以当归多糖为原料,研制当归多糖抗疲劳饮料。利用单因素实验和正交试验,考察当归多糖、甜菊糖苷、柠檬酸添加量的原料配比对当归多糖抗疲劳饮料感官指标的影响;采用Box-Behnken响应面优化果胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠添加量的复合稳定剂对当归多糖抗疲劳饮料稳定性的影响。最终确定该饮料的优选配方参数。结果在当归多糖添加量10.0%,甜菊糖苷添加量0.035%,柠檬酸添加量0.20%时获得了感官评分为(66.333±3.055)分的饮料原料;在此基础上果胶添加量0.015%,海藻酸钠添加量0.080%,羧甲基纤维素钠添加量0.20%时获得了沉淀率预测值为2.272%,实际值为(2.339±0.111)%的当归多糖抗疲劳饮料。结论回归模型的预测值与实测值接近,采用单因素实验、正交试验和响应面法共同优化的当归多糖抗疲劳饮料工艺合理可行,并成功制备出了棕色、澄清、酸甜适宜的当归多糖抗疲劳饮料。

基于中国知网2000-2022年当归多糖的研究热点及发展趋势分析

目的分析2000—2022年当归多糖研究领域的科学产出特征、研究热点及前沿动态,为该领域科研工作者与研究机构提供方向性参考。方法以中国知网数据库为数据来源,采用可视化工具VOSview1.6.18软件对纳入的2000—2020年当归多糖领域中的374篇文献进行研究热点与前沿动态分析。结果当归多糖研究的发文量整体呈现波浪式前进,所涉及的学科领域较广,基金支持相对较多,随着当归多糖众多药理活性被发现并应用于临床,该领域的研究热度有所回升。当归多糖的研究热点与研究前沿主要集中在药理作用方面,特别是当归多糖在延缓脑衰老、防护肝脏与肾脏损伤、保护缺氧心肌细胞、抗肿瘤与贫血、免疫调节等方面的作用颇受关注。结论2000—2022年当归多糖研究领域取得较大进展,尤其对当归多糖药理作用的大量研究,推动当归多糖新药理作用的发现与应用。

当归多糖改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的体内外观察及其机制探讨

目的建立大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的体内、体外模型,观察当归多糖(ASP)对大鼠MIRI的改善作用并探讨其机制。方法在体内研究,成年SD大鼠随机分为假手术组、MIRI组、ASP低剂量组、ASP高剂量组,除假手术组外,均采用冠状动脉左前降支结扎再灌注的方法建立MIRI模型,ASP低、高剂量组在建模后分别给予50、100 mg/kg的ASP灌胃,假手术组及MIRI组给予等量生理盐水灌胃,持续4周;采用ELISA法检测各组血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β;Western blotting法检测各组心肌组织凋亡蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、裂解的半胱胺酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)及toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路相关蛋白TLR4、磷酸化核蛋白(p-p65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)表达。在体外研究,将大鼠心肌细胞分为对照组、H/R组、H/R+ASP低剂量组、H/R+ASP高剂量组,对照组正常培养不做处理,其他3组均建立体外心肌细胞缺氧复氧(H/R)模型,建模后H/R+ASP低、高剂量组分别加入浓度为5、10µg/mL的ASP,H/R组不做处理;采用MTT比色法检测各组心肌细胞活性,ELI-SA法检测各组心肌细胞炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β,Western blotting法检测各组心肌细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3及TLR4/NF-κB通路蛋白TLR4、p-p65、p-IκBα表达。结果在体内研究,血清心肌损伤标志物LDH、CK-MB水平及血清炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平MIRI组>ASP低剂量组>ASP高剂量组>假手术组(P均<0.05);心肌组织Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达MIRI组>ASP低剂量组>ASP高剂量组>假手术组,心肌组织Bcl-2蛋白表达假手术组>ASP高剂量组>ASP低剂量组>MIRI组(P均<0.05);心肌组织TLR4/NF-κB通路相关蛋白TLR4、p-p65、p-IκBα表达MIRI组>ASP低剂量组>ASP高剂量组>假手术组(P均<0.05)。在体外研究,心肌细胞活性对照组>H/R+ASP高剂量组>H/R+ASP低剂量组>H/R组(P均<0.05);心肌细胞炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平H/R组>H/R+ASP低剂量组>H/R+ASP高剂量组>对照组(P均<0.05);心肌细胞Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达H/R组>H/R+ASP低剂量组>H/R+ASP高剂量组>对照组,心肌细胞Bcl-2蛋白表达对照组>H/R+ASP高剂量组>H/R+ASP低剂量组>H/R组(P均<0.05);心肌细胞TLR4/NF-κB通路相关蛋白TLR4、p-p65、p-IκBα表达H/R组>H/R+ASP低剂量组>H/R+ASP高剂量组>对照组(P均<0.05)。结论ASP在体内、体外缺血再灌注模型中均可改善大鼠MIRI,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路激活、减轻炎症反应、减少细胞凋亡有关。

当归多糖通过Akt/GSK-3β通路增强Nrf2信号传导对高糖诱导视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨当归多糖对高糖诱导的视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用及其可能机制。方法:采用不同浓度当归多糖干预视网膜神经节细胞RGC-5,MTT法检测细胞存活情况并筛选合适浓度。培养RGC-5细胞并添加50 mmol/L葡萄糖建立高糖损伤模型后,分为高糖组、当归多糖组和当归多糖+Nrf2信号通路抑制剂(ML385)组,另设对照组。当归多糖组使用100μmol/L的当归多糖处理,当归多糖+ML385组使用100μmol/L的当归多糖联合20μmol/L的ML385处理,高糖组使用50 mmol/L葡萄糖处理,对照组加入等量完全培养基。CCK-8法检测细胞存活情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测各组细胞中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物岐化酶(SOD)含量;实时定量PCR法检测细胞中蛋白激酶B(Akt)mRNA、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA和核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA表达情况;Western blotting检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达情况。结果:当归多糖组细胞活力、GSH-Px含量、SOD含量、Nrf2 mRNA相对表达量、Bcl-2蛋白相对表达量均高于高糖组,细胞凋亡率、MDA含量、Akt mRNA相对表达量、GSK-3βmRNA相对表达量、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量、Caspase-9蛋白相对表达量均低于高糖组(P<0.05)。当归多糖+ML385组细胞活力、GSH-Px含量、SOD含量、Nrf2 mRNA相对表达量、Bcl-2蛋白相对表达量均低于当归多糖组,细胞凋亡率、MDA含量、Akt mRNA相对表达量、GSK-3βmRNA相对表达量、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量、Caspase-9蛋白相对表达量均高于当归多糖组(P<0.05)。结论:当归多糖能抑制高糖诱导的RGC-5细胞凋亡,降低细胞内氧化应激水平,可能机制为通过阻滞Akt/GSK-3β通路,提高细胞内抗氧化Nrf2表达水平。

当归多糖锌复合物的自组装形貌及抗氧化活性研究

以当归多糖为原料制备当归多糖锌复合物,研究锌离子对当归多糖在溶液中的自组装形貌及固体结构的影响,并且对当归多糖锌复合物的抗氧化活性进行评价。采用傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、热重分析(TG)、X射线衍射(XRD)等手段对组装结果进行确认,通过扫描电子显微镜(SEM)、倒置荧光显微镜、透射电镜(TEM)、刚果红实验等手段对当归多糖锌复合物在溶液中的自组装形貌进行分析,通过对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS)的清除率综合评价多糖锌复合物的抗氧化能力。实验结果表明:在溶液中,当归多糖锌能够自组装成囊泡结构,固态时形成有序的层状结构,扫描电镜和刚果红证实了Zn 2+掺入当归多糖高分子柔性链中,改变了多糖的构象。当浓度为1 g/L时,当归多糖锌复合物对DPPH自由基和ABTS自由基的清除率分别达到40.20%和86.18%。因此可以得出结论:锌离子的引入,改变了当归多糖在溶液中自组装的形貌,但是并没影响其固体层状结构。当归多糖锌复合物有较好的体外抗氧化活性。复合物在溶液中的形貌特征以及其抗氧化等实验结论可为开发兼具有当归多糖生物活性和抗氧化活性的药用补锌剂提供基础数据。

当归多糖促进lncRNA MEG3表达调控视网膜上皮细胞焦亡改善糖尿病视网膜病变作用机制研究

目的探究当归多糖对糖尿病视网膜病变(DR)模型大鼠长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)表达调控细胞焦亡的影响及其作用机制。方法选取DR模型构建成功SD大鼠52只,应用随机数字表法分为对照组、研究1组、研究2组及抑制组,每组13只,分别给予生理盐水,低剂量当归多糖(15 mg/kg)、高剂量当归多糖(30 mg/kg)和高剂量当归多糖(30 mg/kg)+lncRNA MEG3抑制剂(2.5 mg/kg)干预,每天1次。观察各组大鼠视网膜病理学改变,定量逆转录PCR检测lncRNA MEG3、补丁蛋白(PTCH)、平滑受体蛋白(SMO)、GLI家族锌指蛋白3(GLI3)、蛋白激酶B(PKB)mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,Western blot检测PTCH、SMO、GLI3、PKB、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-4(Caspase-4)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-5(Caspase-5)蛋白表达。结果对照组大鼠病理学检测显示,视网膜细胞破裂增加,细胞焦亡增多,视网膜神经节细胞结构完整性被破坏,细胞质基质密度降低,细胞核染色质稀疏,细胞质内形成空泡;研究1组视网膜细胞破裂及细胞焦亡减少,视网膜神经节细胞结构完整性较对照组改善;研究2组神经节细胞结构完整,视网膜细胞破裂、焦亡进一步减少;抑制组在增加lncRNA MEG3抑制剂后逆转了当归多糖作用,显示病理表现与对照组相近。研究1组、研究2组lncRNA MEG3、PTCH mRNA[lncRNA MEG3:(1.59±0.16)、(2.13±0.22)比(1.04±0.11)、(1.02±0.10);PTCH:(1.41±0.15)、(1.82±0.19)比(1.15±0.13)、(1.17±0.13);P<0.05]和PTCH蛋白[(1.45±0.16)、(1.81±0.20)比(1.11±0.11)、(1.09±0.10);P<0.05]相对表达显著高于对照组和抑制组,研究2组显著高于研究1组(P<0.05);研究1组、研究2组SMO、GLI3、PKB mRNA[SMO:(2.48±0.25)、(2.10±0.22)比(2.94±0.31)、(3.01±0.33);GLI3:(1.56±0.16)、(1.13±0.11)比(1.95±0.20)、(1.99±0.21);PKB:(1.43±0.14)、(1.05±0.11)比(1.92±0.19)、(1.91±0.19);P<0.05]和蛋白[SMO:(2.55±0.26)、(2.07±0.21)比(2.95±0.30)、(2.93±0.29);GLI3:(1.63±0.17)、(1.14±0.12)比(1.99±0.21)、(2.02±0.23);PKB:(1.52±0.16)、(1.07±0.11)比(2.04±0.21)、(2.01±0.21);P<0.05]相对表达显著低于对照组和抑制组,研究2组显著低于研究1组(P<0.05)。研究1组、研究2组MDA水平显著低于对照组和抑制组[(18.03±4.09)U/mg、(11.25±3.41)U/mg比(25.76±4.34)U/mg、(25.32±4.31)U/mg;P<0.05],研究2组显著低于研究1组(P<0.05);研究1组、研究2组SOD、GSH-Px水平显著高于对照组和抑制组[SOD:(121.48±11.07)U/mg、(149.35±12.14)U/mg比(94.31±10.13)U/mg、(95.12±10.17)U/mg;GSH-Px:(131.48±11.62)U/mg、(159.07±12.25)U/mg比(99.07±10.25)U/mg、(100.24±10.31)U/mg;P<0.05],研究2组显著高于研究1组(P<0.05)。研究1组、研究2组Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5蛋白表达水平显著低于对照组和抑制组[Caspase-1:(3.01±0.32)、(2.49±0.26)比(3.59±0.38)、(3.51±0.36);Caspase-4:(3.29±0.83)、(2.51±0.71)比(4.13±1.02)、(4.06±1.01);Caspase-5:(2.70±0.59)、(2.24±0.51)比(3.23±0.68)、(2.17±0.66);P<0.05],研究2组显著低于研究1组(P<0.05)。结论当归多糖能促进DR大鼠lncRNA MEG3表达,减少其视网膜上皮细胞焦亡,其作用机制可能与调控SMO/PKB通路从而减少Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5蛋白表达有关。

当归多糖促进5-氟尿嘧啶作用后小鼠应激性红细胞发生

目的探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)拮抗5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对小鼠脾脏应激性红细胞发生的影响及其相关机制。方法选取6~8周龄的C57BL/6J小鼠,雌雄各半,分为对照组、ASP组、5-FU组、ASP+5-FU组。记录建模时期小鼠体质量,血细胞计数仪分析外周血常规;观察脾脏组织切片病理学改变;计算脾指数;台盼蓝染色法计数小鼠股骨骨髓单个核细胞及脾细胞数;分离培养及计数脾脏单个核细胞爆氏红系集落形成单位;流式细胞术检测F4/80+脾巨噬细胞数量;qRT-PCR检测脾脏黏附分子基因Emp,铁转运基因Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR以及核内吞基因Tim4、MerTK表达水平。结果ASP部分逆转5-FU致伤小鼠体质量、红细胞数量、血红蛋白含量和红细胞压积、骨髓单个核细胞数量下降;ASP增大脾脏体积、提升脾指数、红髓面积、脾细胞数量,促进脾脏BFU-E形成;ASP拮抗5-FU,维持F4/80+脾巨噬细胞数量,促进Emp、Hmox-1、Trf、Fpn、TrfR、Tim4及MerTK基因表达。结论ASP通过保护脾脏幼红细胞岛中央巨噬细胞数量及功能,促进小鼠脾脏应激性红细胞发生。

当归多糖对糖尿病KK-Ay小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨当归多糖对糖尿病KK-Ay小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将KK-Ay小鼠随机分为模型组、二甲双胍组(200mg/kg)和当归多糖高、中、低剂量组(400、200、100 mg/kg),C57BL/6J小鼠作为空白组,每组8只,各组小鼠每日灌胃相应药液或生理盐水1次,连续4周。末次给药后,检测小鼠的空腹血糖、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、胰岛素(INS)水平,心肌组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化的胱天蛋白酶(cleaved-caspase-3)、凋亡信号调节激酶1(ASK1)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)、磷酸化需肌醇酶1α(p-IRE1α)蛋白表达以及心肌细胞凋亡情况。结果与模型组比较,二甲双胍组和当归多糖中、高剂量组小鼠空腹血糖、TC、LDL-C含量和心肌细胞凋亡率以及p-JNK、p-IRE1α、ASK1、cleaved-caspase-3蛋白表达水平均显著降低,INS水平和Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论当归多糖可改善糖尿病KK-Ay小鼠的血糖和血脂水平,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制IRE1/ASK1/JNK信号通路有关。

当归多糖抗肿瘤作用机制研究现状

当归多糖是当归的主要活性成分,通过多种信号通路以及靶点发挥其细胞毒性,抑制肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭迁移,诱导肿瘤细胞凋亡、周期阻滞、分化等。还可作为载体联合其他中药单体或化疗药制成纳米颗粒,靶向杀死肿瘤细胞。综述了当归多糖抗肿瘤作用的基础研究和分子机制,并对其在肿瘤防治中的应用前景进行展望。当归多糖由于其多种生物活性及低毒高效的抗肿瘤作用,有望成为一种新型抗癌药物。参考文献38篇。

当归多糖通过调控miR-148a-3p抑制高糖诱导的视网膜神经节细胞氧化应激损伤及凋亡研究

目的观察当归多糖对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGC)氧化应激损伤及凋亡的影响,并探讨可能机制。方法取对数期RGC-5细胞,分为对照组(常规培养基培养)、高糖组(含葡萄糖30 mmol/L的培养基培养)及高糖+低、中、高剂量组(分别用含葡萄糖30 mmol/L与当归多糖100、200、400 mg/L的培养基培养)。另取对数期RGC-5细胞,将细胞分为高糖+mi R-NC组、高糖+mi R-148a-3p mimics组、高糖+mi R-148a-3p inhibitor组、高糖+当归多糖+mi R-148a-3p mimics组、高糖+当归多糖+mi R-148a-3p inhibitor组。ELISA法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平;Annexin V/PITC双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量降低,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量升高(P<0.05);与高糖组比较,高糖+低剂量组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05);与高糖+低剂量组比较,高糖+中剂量组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05);与高糖+中剂量组比较,高糖+高剂量组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05)。与高糖+mi R-NC组比较,高糖+mi R-148a-3p mimics组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05),高糖+mi R-148a-3p inhibitor组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量降低,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量升高(P<0.05);与高糖+mi R-148a-3p mimics组比较,高糖+当归多糖+mi R-148a-3p mimics组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05);与高糖+mi R-148a-3p inhibitor组比较,高糖+当归多糖+mi R-148a-3p inhibitor组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05)。结论当归多糖可减轻高糖诱导的RGC氧化应激损伤,减少细胞凋亡,且表现为剂量依赖性,其作用机制可能与上调mi R-148a-3p表达有关。