转录因子PAX5在儿童急性白血病细胞中的表达

为了观察了解儿童急性白血病细胞中转录因子PAX5的表达特性,采用实时定量RT-PCR方法测定了6个血液肿瘤细胞株以及6例正常儿童、58例初发和4例复发急性白血病儿童(其中包括39例B-ALL,10例T-ALL和13例AML)骨髓细胞中PAX5和CD19mRNA的表达水平。结果表明:在Namalwa(B细胞系)细胞株中,PAX5和CD19mRNA相对表达量分别为2.35%和2.52%;而在T-和髓系细胞株中几乎不表达。在临床样本中B-ALL组比T-ALL组和AML组的PAX5mRNA表达高(P=0.029和P=0.013)。T-ALL组和AML组的PAX5mRNA表达水平均低于正常对照组,而T-ALL组与AML组之间的表达差异无显著意义。在B-ALL患儿中,PAX5mRNA表达的个体差异很大。此外还发现,初发治疗前组和复发组的B-ALL患儿PAX5mRNA表达高于化疗完全缓解组(P=0.011和P=0.006)。由于在CD19基因的启动子上有B细胞特异性激活蛋白的结合位点,研究发现在B-ALL中PAX5表达水平与同样用实时定量RT-PCR检测的CD19表达水平之间存在明显的相关性。结论:运用实时定量RT-PCR方法能快速准确地在B-ALL的临床标本中检测和定量PAX5基因的表达。研究中发现部分B-ALL中PAX5mRNA表达明显升高,因此它可将其作为进一步研究B-ALL发病机理的另一个切入点。

NF-κB抑制剂PDTC对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响

目的:探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响。方法:用PDTC 0、25、50、100μmol/L处理HL-60细胞24、48、72 h,CCK-8实验检测细胞增殖抑制率,Hoechst染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase 3)、cleaved caspase 8及NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞24、48、72 h后,同一时间点下随着PDTC浓度升高,细胞增殖抑制率越高(r=0.924,P<0.01),在同一PDTC浓度下,随着时间推移,细胞增殖抑制率增高(r=0.952,P<0.01)。在25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞48 h后,与对照组比较,PDTC能显著提高HL-60细胞凋亡率,并使细胞周期阻滞在G1期(P<0.01);PDTC能显著下调HL-60细胞BCL-2,cyclinD1、p-NF-κB p65表达(P<0.05),上调BAX、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 8表达(P<0.01);50、100μmol/L PDTC能显著下调HL-60细胞p-NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)表达(P<0.01)。结论:PDTC能显著抑制急性白血病细胞HL-60的增殖,并诱导细胞凋亡。

血管内皮生长因子在急性白血病细胞株的表达

目的 探讨血管内皮生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及其受体 (VEGFR)KDR ,Flt - 1在急性白血病细胞株NB4、K56 2、HEL ,Jurkat、HL - 6 0 ,THP的基因表达情况 ,为进一步研究急性白血病治疗的抗肿瘤靶点提供思路。方法 采用RT -PCR和酶联免疫吸附法 ,对 6种急性白血病细胞系肿瘤细胞进行VEGF及其受体的基因型和表型检测。结果 6种白血病细胞系均 ( 1 0 0 % )检测到VEGF基因表达 ,强度不同 ,其中 3种细胞株 ( 50 % )检测到受体Flt- 1基因表达 ,所有细胞株均未检测到受体KDR基因表达 ;6种急性白血病细胞株上清液中VEGF浓度都明显高于对照。结论 VEGF及其受体在白血病细胞表达 ,说明VEGF及其受体在白血病的发生、发展中起重要作用 ,是急性白血病特征之一。

急性白血病细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达及意义

为研究原代急性白血病 (AL)骨髓单个核细胞 (MNCs)端粒酶逆转录酶 (hTERT)mRNA表达及其意义 ,采用半定量RT PCR方法检测骨髓MNCshTERTmRNA表达 ,用TRAP PCR ELISA法检测骨髓MNCs端粒酶活性。结果发现 :30例初发AL患者骨髓MNCshTERTmRNA表达量 (0 .71± 0 .34)明显高于 12例AL获CR的患者 (0 .4 3± 0 .2 5 )及 6例正常志愿者 (0 .2 2± 0 .2 1)。 30例初发AL患者骨髓MNCs端粒酶活性 (0 .2 35± 0 .395 )明显高于 12例AL获CR的患者 (0 .0 12± 0 .0 15 )。初发AL患者骨髓MNCshTERTmRNA表达量与端粒酶活性呈正相关 (r=0 .4 2 1,P <0 .0 1)。初发AL患者骨髓液常规涂片中原始细胞百分率与骨髓MNCs的hTERTmRNA表达量和端粒酶活性均呈正相关 (r =0 .4 5 7,P<0 .0 5和r =0 .4 11,P <0 .0 5 )。结论 :初发AL患者骨髓MNCs的hTERTmRNA表达与端粒酶活性相关。推测hTERTmRNA表达可能代表白血病细胞的一种高增殖状态。

BCL-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸对原代急性白血病细胞选择性抑制作用

为探讨BCL-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(AS-PS-ODN,ASPO)对急性原代白血病细胞和正常或良性血液病骨髓细胞的作用是否存在差别。应用台盼蓝拒染试验测定细胞存活力;用造血祖细胞集落培养:粒—单系祖细胞集落(CFU-GM),多向祖细胞集落(CFU-Mix),后红系祖细胞集落(CFU-E)、前红系祖细胞集落(BFU-E)和白血病祖细胞集落(CFU-AML,CFU-ALL)培养检测细胞增殖能力;免疫细胞化学染色检测细胞BCL-2蛋白表达变化。结果发现(1)正常或良性血液病骨髓细胞经10μmol/L ASPO处理一周,同对照组比较:细胞生长数、CFU-GM、CFU-Mix、CFU-E、BFU-E及BCL-2蛋白表达均无显著差别(P<0.05)。(2)急性原代白血病细胞经5μmol/L ASPO处理一周,同对照组比较:细胞生长数显著减低;CFU-AML或CFU-ALL显著降低(P < 0.05),而CFU-GM明显增高(P< 0.05);对照组BCL-2蛋白表达率为77.92％±22.50％,ASPO组于培养的第3天为54.05％±20.20％(P<0.01)和第6天为55.35％±22.74％(P<0.05)均显著低于对照组。因此认为BCL-2ASPO具有选择性地抑制白血病细胞的增殖和BCL-2蛋白的表达的作用。

急性白血病细胞DNA指数、DNA倍体变化的临床意义

目的观察不同病期急性白血病患者外周血白血病细胞DNA指数及DNA倍体的变化,探讨其与预后的关系,指导临床诊断和治疗。方法应用流式细胞术(FCM)检测58例急性白血病患者DNA指数和DNA倍体。结果急性白血病完全缓解(CR)者DNA指数、DNA非整倍体率均明显低于复发者,初治CR者明显低于初治非CR者。结论初诊时表现为DNA整倍体及低DNA指数的急性白血病患者具有较好的治疗效果。DNA指数和DNA非整倍体率可作为制定急性白血病患者化疗方案时的重要参考指标。

PLK-1在急性白血病细胞中的表达及意义

为了探讨急性白血病细胞中plk-1基因及其蛋白的表达情况和意义,并初步了解PLK-1蛋白在急性白血病细胞中的分布情况,通过抽取急性白血病患者、骨髓良性增生者及正常人的骨髓或外周血单个核细胞作为研究对象,应用RT-PCR技术及流式细胞术检测plk-1mRNA和PLK-1蛋白在急性白血病细胞中的表达,用荧光显微镜观察PLK-1蛋白在急性白血病细胞中的分布。结果表明:急性白血病细胞plk-1在基因水平及蛋白质水平上表达均明显增高;荧光显微镜检查显示细胞分裂间期PLK-1蛋白较高浓度地、均匀地散在分布于急性白血病细胞内,在有丝分裂过程中,姊妹染色单体拉开至细胞两极时PLK-1蛋白主要分布在姊妹染色单体之间。而正常骨髓细胞和良性增生骨髓细胞plk-1在基因水平和蛋白质水平几乎均不表达。结论:PLK-1蛋白对急性白血病细胞的异常增殖可能起重要作用,其表达的高低与恶性程度有关。PLK-1蛋白或其基因有可能作为抗瘤药物新的靶点,并可作为判断急性白血病疗效及预后的有效指标之一。

急性白血病细胞体外对Jurkat细胞凋亡的影响

为探讨白血病细胞凋亡相关基因 (Fas)的功能性表达情况 ,将 2 7例白血病患者的白血病细胞与 Jurkat细胞体外孵育后 ,用原位末端标记法 (TUNEL )测定单纯 Jurkat细胞 (对照组 )、不加和加入不同浓度抗凋亡相关基因配体 (Fas L)的 Jurkat细胞凋亡率。结果显示 ,不加抗 Fas L 急性非淋巴细胞白血病组 (ANL L 组 )与对照组比较 ,凋亡率明显增高 (P<0 .0 1) ,急性淋巴细胞白血病组 (AL L 组 )与对照组比较仅轻度增高 (P<0 .0 5 ) ,两者均随细胞浓度的增加而凋亡率增高 ;ANL L组加与不加抗 Fas L 相比凋亡率明显减少 (P<0 .0 1) ,随抗 Fas L浓度的增加而凋亡率减少 ,AL L 组加与不加抗 Fas L 相比凋亡率轻度减少 (P<0 .0 5 ) ,也随抗 Fas L 浓度的增高而减少 ,但不如 ANL L组凋亡率变化明显。提示急性白血病细胞存在 Fas L的功能性表达 ,ANL L较 AL L的 Fas

急性白血病细胞bcl-2、Bax和Fas/Apo-1基因表达的研究

目的 研究bcl 2、Bax、Fas/Apo 1基因在急性白血病 (AL)细胞中的表达及其与AL的分型、临床特征、疗效及预后因素的关系。方法 采用免疫组化方法检测 5 4例初治AL骨髓细胞bcl 2、Bax、Fas/Apo 1蛋白表达情况。结果 AL骨髓细胞中bcl 2基因的表达显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,而Bax、Fas/Apo 1基因的表达显著低于正常对照组(P <0 .0 5 )。bcl 2、Bax、Fas/Apo 1基因表达在急性髓系白血病 (AML)与急性淋巴细胞白血病 (ALL)无显著差异 ;在AML亚型中 ,bcl 2在M4及M5中的表达高于M1、M2和M3(P <0 .0 5 ) ;而Bax及Fas/Apo 1的表达在各亚型中无显著性差异 (P >0 .0 5 )。bcl 2的表达与初诊时的白细胞数呈正相关 (r=0 .4 4 ,P <0 .0 5 ) ,与疗效呈负相关 (r=- 0 .4 0 ,P <0 .0 5 ) ,Bax的表达与骨髓白血病细胞数呈负相关 (r=- 0 .39,P <0 .0 5 ) ,与髓外浸润呈负相关 (r =- 0 .4 5 ,P <0 .0 5 ) ,急性淋巴细胞白血病中Fas/Apo 1的表达与疗效呈正相关 (r =0 .34,P <0 .0 5 ) ,与骨髓原始细胞数呈负相关 (r =- 0 .71,P <0 .0 5 )。结论 bcl 2、Bax、Fas/Apo 1基因的紊乱可能在AL的发病中起着重要作用 ,还与白血病的某些临床特征、疗效及预后因素密切相关。

急性白血病细胞化学染色法的进展

细胞化学染色对血液病的诊断及鉴别诊断具有极其重要的价值。近来有不少进展,现就细胞化学染色法在急性白血病鉴别诊断中的应用作一简要综述。

81例小儿急性白血病细胞遗传学与临床及预后关系的研究

报道８１例初诊及复发的小儿急性白血病（ＡＬ）骨髓染色体的检查结果，发现异常核型４８例，检出率为５９．２６％。对３０例患儿进行了不同时期染色体核型的动态观察，并对本文ＡＬ染色体改变的特点与临床及预后的关系进行了讨论。结果表明，小儿急性白血病骨髓染色体检查对诊断分型、观察病情及判断预后都有一定的价值。

DC-CIK细胞对急性白血病细胞体外杀伤作用的研究

目的探讨DC-CIK细胞对急性白血病细胞的体外杀伤作用。方法选取2017年9月—2019年4月本院收治的急性白血病患者98例,随机分为CIK组和DCCIK组各49例。选择健康人外周血单个核细胞诱导的CIK和DC细胞一同培养,将CIK细胞单独培养作为对照组。比较DC—CIK细胞免疫表型变化、DC-CIK细胞对白血病细胞的杀伤活性、DC-CIK细胞和CIK细胞分泌细胞因子水平。结果单独培养CIK细胞会随着时间的增加而导致CD3+CD56+、CD8+、CD3+双阳性细胞比例随之增加(P<0.05);CIK细胞和DC细胞一同培养时CD3+CD56+、CD8+、CD3+的双阳性细胞均高于同条件没有进行培养的CIK细胞和DC细胞组(P<0.05);培养后的DC-CIK细胞对ANLL细胞以及ALL细胞的杀伤活性均高于CIK细胞组(P<0.05),对ANLL、ALL的杀伤率差异无统计学意义(P>0.05);在40:1-5:1效靶中,效靶和杀伤作用呈现正相关(P<0.05);CIK细胞单独培养组IFN-γ、IL-12的分泌量低于DC-CIK细胞共同培养组(P<0.05)。结论DC-CIK细胞的抗急性白血病的活性以及增值能力都高于CIK细胞,DC-CIK细胞抵抗急性白血病治疗具有一定的作用。

儿童急性白血病细胞周期蛋白D1表达的研究

目的 探讨细胞周期蛋白D1 (cyclinD1 )的表达与儿童急性白血病 (AL)的关系。方法 采集 50例初发或复发的儿童AL患者 (AL组 )和 2 6例完全缓解AL(AL-CR组 )患者作为病例组 ,2 3例非肿瘤性疾病患者作为对照组。运用超敏SP免疫组织化学法 ,检测骨髓细胞中cyclinDl的表达情况。结果 cyclinD1阳性率在AL、AL-CR和对照组中分别为 56 %、3 85%和 0 ,AL组明显高于AL -CR组和对照组 (P <0 0 1 ) ;AL组中的高危AL和标危AL阳性率分别为 86 36 %、32 1 4 % ,两者有显著差异 (P <0 0 1 )。结论 cyclinD1在儿童AL患者的表达率较高 ,它可能与AL的发病有关 ,而且可作为预后和疗效观察的指标。

生存素在各型急性白血病细胞表达及与细胞凋亡、增殖的关系

目的:了解抗凋亡基因产物———生存素在各型急性白血病细胞的表达情况及与细胞增殖、凋亡的关系。方法:收集32例急性白血病患者的外周血标本,分离单个核细胞;采用免疫细胞化学链霉亲和素生物素过氧化酶技术(SABC)检测生存素、增殖细胞核抗原(PCNA)表达和细胞凋亡,计算增殖、凋亡指数。结果:本组生存素蛋白表达阳性21例(其中急性淋巴细胞白血病8例,急性非淋巴细胞白血病13例),阳性率65.6%。凋亡指数(6.73±2.40)与生存素蛋白表达积分呈负相关(r=-0.253,P<0.05)。生存素阳性组的增殖指数(41.25±4.30)高于阴性组(28.37±7.20)(r=0.441,P<0.05)。结论:多数急性白血病细胞均表达生存素蛋白,急性淋巴细胞白血病细胞阳性率高于急性非淋巴细胞白血病细胞。生存素表达率与PCNA表达率呈正相关,与凋亡指数呈负相关。

基质衍生因子-1与急性白血病细胞的相互作用

基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)是一种由骨髓基质细胞释放的趋化因子,是趋化因子CXC亚家族的成员之一。近年的研究表明,SDF-1不仅与正常机体造血功能的维持及造血干/祖细胞的回髓定位和植入有密切的关系,同时与各种白血病细胞的移动和功能之间也存在着复杂的相互作用。本文重点就SDF-1与急性白血病细胞之间的相互作用的研究现状作一综述。

环氧化酶-2抑制剂塞莱昔布对急性白血病细胞VEGF、b-FGF和TGF-β mRNA表达的影响

本研究旨在探讨环氧化酶-2(COX-2)特异性抑制剂塞莱昔布(celecoxib)对急性白血病细胞血管新生因子血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子-β(TGF-β)mRNA表达的影响及其意义。采用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测30例急性白血病细胞经塞莱昔布干预前、后VEGF、b-FGF和TGF-βmRNA表达及变化。结果表明,急性白血病细胞存在VEGF、b-FGF和TGF-βmRNA的表达。VEGFmRNA与b-FGF mRNA表达存在正相关(r=0.559,P=0.001),VEGF mRNA与TGF-βmRNA表达存在负相关(r=-0.4,P=0.029)。经塞莱昔布(80μmol/L,48 h)处理后急性白血病细胞的VEGF、b-FGF和TGF-βmRNA表达较对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:塞莱昔布通过下调血管新生因子的表达而抑制血管增生,对急性白血病治疗具有辅助作用。

熊果酸联合Wnt信号通路抑制剂影响急性白血病细胞增殖和凋亡的实验研究

目的采用前瞻性研究探讨熊果酸联合Wnt信号通路抑制剂对急性白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的熊果酸作用急性白血病细胞U937后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,计算半数抑制浓度。U937细胞分为对照组、熊果酸组、抑制剂组和联合组,联合组细胞用半数抑制浓度的熊果酸和Wnt信号通路抑制剂FH-535共同处理,熊果酸组用半数抑制浓度的熊果酸处理,抑制剂组用Wnt信号通路抑制剂FH-535处理,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路下游靶基因(c-myc)蛋白水平。结果 0、4、8、16、32μmol/L的熊果酸作用后的U937细胞存活率依次降低。熊果酸组、抑制剂组、联合组细胞存活率、β-catenin和c-myc表达水平明显低于对照组,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。联合组细胞存活率、β-catenin和c-myc表达水平明显低于熊果酸组和抑制剂组,而凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于熊果酸组和抑制剂组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论单纯使用熊果酸或者Wnt信号通路抑制剂均能够抑制白血病细胞增殖,促进急性白血病细胞凋亡,并且熊果酸和Wnt信号通路抑制剂联合使用对白血病细胞增殖抑制作用和凋亡促进作用更大。

Ph染色体阳性急性白血病细胞遗传学及临床研究

为分析79例成人Ph染色体阳性急性白血病(Philadelphiachromosomepositiveacuteleukemia,Ph+AL)的细胞遗传学和相关临床表现及预后,联合应用细胞形态学、免疫分型,骨髓细胞染色体G显带技术(morphology,immunology,cytogenetics,MIC),对1991年10月-2003年12月住本院的79例Ph染色体阳性急性白血病进行了随访。结果表明:Ph+AL总的检出率为6.9%,其中Ph染色体阳性急性淋巴细胞性白血病(Philadelphiachromosomepositiveacutelymphoblasticleukemia,Ph+ALL)56例,检出率18%,Ph染色体阳性急性髓细胞性白血病(Philadelphiachromosomepositiveacutemyeloidleukemia,Ph+AML)10例,检出率1.2%。Ph染色体阳性急性混合细胞性白血病(Philadelphiachromosomepositivemixedacuteleukemia,Ph+MAL)13例。56例Ph+ALL中52例免疫表型为B细胞型。10例AML中,包括M14例,M2、M4和M7各2例。13例Ph+MAL中12例混合表达髓系和B淋巴细胞系表型,另1例为髓系、T淋巴细胞系混合型。总的染色体附加异常检出率为54.4%,附加异常较多涉及到的染色体包括:7号、双Ph染色体、+8等。Ph+ALL组和Ph+MAL组缓解率为57.0%,Ph+AML组无1例达到缓解。Ph+ALL完全缓解率明显低于同期正常核型ALL对照组(P<0.05)。Ph+ALL、Ph+MAL组总的中位生存期均为10个月。

急性白血病细胞免疫治疗的研究进展

急性白血病是儿童时期最常见的血液系统恶性肿瘤,由于化疗药物的开发应用和化疗方案的不断改进,长期预后已经获得明显改善。然而对于高危及复发难治性患儿仍缺乏有效的治疗方法。随着对白血病发生、发展、肿瘤免疫及分子技术研究的进展,白血病免疫治疗日益受到重视,并初步显现出良好的应用前景,有望成为白血病治疗的又一新模式。其中细胞免疫治疗的进展尤其引人瞩目,不少已进入临床Ⅰ、Ⅱ期试验。本文就供者淋巴细胞输注(DL I)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、细胞因子诱导的杀伤细胞(C IK)、树突状细胞(DC)、血液肿瘤抗原特异性细胞毒T细胞(CTL)等细胞免疫疗法在急性白血病中的应用及研究进展作一综述。

基于激光拉曼光谱技术鉴别四种急性白血病细胞系的方法研究

急性白血病的诊断基于一系列检测方法,细胞遗传学和荧光原位杂交方法旨在鉴定涉及白血病发生过程的特定基因和染色体改变,通过流式细胞术和分子生物学进行的免疫表型分析也是目前可用于明确诊断的检查手段。这些检查的侵入性和时效性方面的不足促使人们寻找以拉曼光谱技术为代表的新的方法和技术,以减少假设和诊断结论之间的时间间隔,有利于患者获得更好的预后。拉曼光谱技术可用来非标记识别血液中存在的血细胞和生化元素的光谱信息,例如氨基酸、蛋白质、脂质、核酸和类胡萝卜素,并且该技术在使用细胞系、血涂片和血清样本进行的不同类型血液学疾病的诊断中变得愈为重要,具有广阔的应用前景。实验研究了人急性T细胞白血病细胞系(Jurkat)、人急性骨髓性白血病细胞系(KG-1α)、人急性早幼粒细胞白血病细胞系(NB4)和人急性单核细胞白血病细胞系(THP-1)的拉曼光谱特征,建立使用拉曼光谱非标记鉴别四种白血病细胞系的新方式,为临床实验研究提供科学基础。分别培养并收集四种急性白血病细胞系细胞,使用Horiba Xplora拉曼光谱仪获取拉曼光谱,每种细胞系捕获25~30个白血病细胞光谱。联合运用主成分分析法、偏最小二乘判别分析和聚类分析等光谱分析方法,对四种细胞系细胞的光谱展开深入分析和建立鉴别模型,联合两两组合分析,对细胞光谱进行甄别。四种细胞的拉曼光谱具有差异,主要通过769, 826, 844, 957, 1 048, 1 141, 1 255, 1 313, 1 415, 1 539和1 575 cm^(-1)等峰位进行区分,反映了jurkat细胞活跃的增殖代谢, KG-1α细胞活跃的与核酸相关的能量代谢以及NB4细胞较强的细胞呼吸等生物学信息。结果表明:依据PLS-DA建立的拉曼光谱辨别模型能准确甄别四种急性白血病细胞,模型具有良好的拟合稳定性、预判能力和应用前景。