武汉城市圈献血人群戊型肝炎病毒流行情况调查

目的了解武汉城市圈无偿献血人群戊型肝炎病毒(HEV)流行情况,为献血人群HEV筛查策略的制定提供数据支撑。方法随机收集2021年1—12月武汉城市圈内实施集中化检测的4个地区(鄂州、天门、仙桃、潜江)的献血者血液标本3329份,其中ALT正常的无偿献血者合格血样2737份(ALT正常组),ALT升高的血样592份(ALT升高组)。采用ELISA检测抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和HEV Ag;采用Real-time PCR对ALT升高的血样和抗-HEV IgM阳性的ALT正常血样进行HEV RNA单人份检测。采用χ^(2)检验或Fisher精确检验来评估不同地区、不同ALT水平组抗-HEV IgG和抗-HEV IgM阳性率的差异。结果4个地区3329份血液标本的抗-HEV IgG、抗-HEV IgM和HEV Ag总阳性率分别为21.63%(720/3329)、1.29%(43/3329)和0%。不同地区献血者抗-HEV IgG阳性率有差异(P<0.05)。抗-HEV IgG阳性率最高的是天门29.44%(136/462),其次分别是潜江22.69%(236/1040)、仙桃22.66%(230/1015)、鄂州14.53%(118/812)。ALT升高组献血者抗-HEV IgG阳性率和抗-HEV IgM阳性率显著高于ALT正常组献血者(25.68%vs 20.75%,2.53%vs 1.02%,均为P<0.05)。ALT水平升高组的所有血样和抗-HEV IgM阳性的合格血样均未检测到HEV RNA。结论HEV在武汉城市圈献血人群中存在流行,但现症感染率极低,且不同地区抗-HEV抗体血清流行率存在差异。ALT升高献血者抗-HEV抗体流行率显著高于ALT正常献血者。

戊型肝炎病毒研究进展

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)是一种单链、非包膜的RNA病毒,目前可分为8个基因型。作为一种人兽共患病原体,HEV能引起人的急性病毒性肝炎和动物的感染,其主要的传播途径为粪-口传播,也可通过输血和母婴传播。HEV主要在发展中国家流行,而欧美等发达国家也有散发的病例。目前,检测HEV的常用方法是实时荧光定量RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA),也有学者利用反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)和CRISPR系统等新型检测方法进行HEV检测。在药物治疗方面,可用利巴韦林、干扰素或多烯磷脂酰胆碱(PPC)等化合物治疗HEV引起的感染,也可使用中药单味或复方改善临床症状并作协同治疗。接种疫苗被认为是预防和控制HEV感染的有效手段,但目前仍无有效的HEV体外细胞培养系统,传统的灭活苗和减毒苗无法批量制备。当前HEV疫苗的研究方向主要有基因重组蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗和口服疫苗等。接种疫苗是预防戊型肝炎的重要措施,采用切断传播途径为主的综合性预防措施也可控制该病的流行。笔者主要通过对HEV的检测方法、药物治疗和疫苗免疫等方面的研究进展进行归纳和总结,并对HEV的防控研究进行展望,以期为HEV的预防与控制提供新的思路。

人、猪和鸡血清中抗禽戊型肝炎病毒抗体的检测与鉴定

通过对人、猪和鸡血清中的抗禽戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）ORF2抗体的检测以及对阳性血清抗体特异性的鉴定,本研究结果表明,人、猪和禽血清中抗禽HEVORF2抗体阳性率为0.91%~62.5%。因为禽与哺乳动物HEV ORF2抗原具有共有的抗原表位,而阳性血清中抗禽HEV ORF2特异性抗原表位抗体的阳性率为41.3%~92.1%,提示人、猪和鸡都有感染禽HEV的可能性,这为进一步验证禽HEV可能造成的人兽共感染提供新的科学依据。

戊型肝炎病毒感染状态下兔粪便菌群的变化探究

本研究旨在探究HEV感染状态下兔粪便菌群的变化差异。本研究收集粪便HEV RNA阳性与阴性兔粪便各4份,分为P组(n=4,P1~P4)和N组(n=4,N1~N4),对粪便16S rDNA基因序列中的V3V4区域进行高通量测序,并对所得数据进行了生物信息学分析。α多样性及PCoA分析结果显示2组间的粪便菌群组成存在明显差异;与阴性对照组相比,HEV感染组的拟杆菌门、酸杆菌门、绿弯菌门等显著增多(P<0.05),瘤胃球菌属、拟杆菌属等丰度显著减少(P<0.05)。HEV感染后兔粪便菌群的构成、丰度等均存在一定差异,粪便菌群有可能成为HEV感染的潜在生物标志物。

肝移植受者戊型肝炎病毒感染

戊型肝炎病毒感染是急性病毒性肝炎的常见病因。近年来,戊型肝炎发病率呈上升趋势,逐渐成为世界范围内急性病毒性肝炎的重要病因。年龄、性别、免疫抑制强度、经济社会因素均是戊型肝炎病毒感染的危险因素。肝移植受者术后需长期应用免疫抑制药进行抗排斥反应治疗,处于免疫抑制状态,易感染戊型肝炎病毒且有引起肝纤维化及肝硬化的风险。因此,在临床工作中应重点关注肝移植受者,同时应进一步明确相关危险因素,以便辅助诊断和采取更严格的预防措施。本文根据现有文献对戊型肝炎病毒病原学特点以及肝移植受者戊型肝炎病毒感染的流行病学特征、临床表现、诊断及治疗进行综述,以期在临床上更好地对肝移植受者戊型肝炎病毒感染进行监测、治疗及预防,改善肝移植受者的预后。

戊型肝炎病毒感染的实验室诊断研究进展

[背景]戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV),是全球范围内病毒性肝炎重要病原体之一.HEV感染可以导致急性、慢性戊型肝炎以及许多肝外症状.研究者们开发了HEV RNA、HEV抗原、HEV IgM和HEV IgG等多种实验室检测方法用于诊断HEV感染.[进展]不同HEV指标都有其独特的诊断价值,尤其是HEV抗原.HEV抗原检测的主要靶标为分泌型HEV抗原,而非传统的病毒衣壳蛋白.HEV抗原检测可用于急性与慢性HEV感染的检测,也可用于HEV感染后临床结局的预测以及区分急性与慢性HEV感染,尿液HEV抗原检测为HEV感染提供了一种无创的检测方式.HEV RNA检测在急性与慢性HEV感染以及出现肝外症状的人群中都具有重要的价值,被认为是HEV感染诊断的金标准.HEV IgM和HEV IgG分别是HEV近期感染和既往感染指标,持续时间较长,对HEV现症感染的指示较弱.[展望]随着检测技术的进步和检测新靶标的发现,HEV RNA和抗原作为现症感染的指标越来越受到重视,而HEV IgM和IgG血清学检测作为间接检测指标由于较成熟,商品化试剂较丰富,目前依然在临床检测中广泛使用.了解HEV感染的实验室诊断研究现状和发展动态,可为临床中HEV感染的诊断提供思路和参考.

戊型肝炎病毒感染调控宿主抗病毒信号通路的研究进展

先天免疫是抵御病毒感染的第一道防线。戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)感染免疫健全人群导致急性自限性疾病,但免疫功能低下患者或孕妇感染HEV后会导致慢性化感染。HEV感染宿主细胞后,体内的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)将识别病毒基因组,进而诱导宿主多条抗病毒信号通路快速激活,使干扰素(Interferons,IFNs)和干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)表达,从而抑制病毒的复制。而HEV编码的蛋白参与了逃逸宿主的抗病毒先天免疫反应,抑制宿主细胞因子或趋化因子的产生,从而建立适宜病毒复制的环境。现将HEV感染对宿主信号通路的调控以及HEV逃逸宿主先天免疫的研究进行综述。

禽戊型肝炎病毒CaHEV-GDSZ01株ORF3蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

旨在对禽戊型肝炎病毒的ORF3蛋白进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为进一步研究aHEV ORF3蛋白生物学功能新型疫苗提供生物材料。通过RT-PCR方法扩增CaHEV-GDSZ01株ORF3基因,连接pET-32a(+)表达载体以构建重组原核表达质粒,并转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;利用SDS-PAGE凝胶电泳分析ORF3蛋白的表达形式后进行纯化,并免疫新西兰白兔以获得兔抗ORF3蛋白多克隆抗体,利用间接ELISA试验检测多克隆抗体的效价,利用Western Blot试验和间接免疫荧光试验(IFA)检测多克隆抗体特异性。结果显示,成功构建了pET-32a-ORF3重组原核表达质粒,并通过原核表达系统成功诱导表达了27 ku不可溶性的aHEV ORF3重组蛋白;Western Blot试验和IFA试验结果显示,制备的多克隆抗体可以特异性识别ORF3蛋白,ELISA结果显示,多克隆抗体效价为1∶51 200。成功表达CaHEV-GDSZ01株的ORF3蛋白,并制备了其多克隆抗体。

戊型肝炎病毒跨物种传播和防控技术研究进展

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是一种主要通过粪-口途径传播的人兽共患病病原,被认为是引起人类急性肝炎的主要原因之一。HEV可被分为8种基因型,各基因型的分布与地域和工业化水平有关,其中HEV-3与HEV-4具有人兽共患的传播能力,能造成人类和各种动物宿主的感染。除人类外,猪是HEV最常见的宿主,随着研究的深入,发现HEV的宿主呈现多样性,包括牛、羊、鹿、兔和骆驼等多种动物,且各动物宿主之间存在跨物种传播的可能。HEV的跨物种传播是在人类和动物宿主频繁交流的过程中,通过适应性进化而形成的,受到宿主细胞受体和细胞因子的特异性差异限制。HEV基因重组有利于适应宿主的新毒株出现,也可能促进新的传播途径,从而促进HEV跨物种传播。通过对HEV传播途径的研究发现,基因型不同,传播途径也有所差异,而食用携带HEV的动物产品,特别是未煮熟的动物产品是造成人类感染HEV-3和HEV-4的主要原因。此外,水源的污染、职业暴露、输血与器官移植同样是HEV的重要传播途径。针对各种潜在的传播途径,可采取相关的防控手段对HEV进行预防,包括对动物食品进行充分的加热以灭活HEV、对水源进行消毒和净化、做好职业防护和疫苗注射等。为更好地了解和掌握HEV的流行规律,各地应加强对HEV的监测,并制定相关的防控策略。笔者从HEV病原学、跨物种感染和防控技术等方面进行综述,以期促进人们对HEV跨物种传播的深入认识并为HEV的防控提供参考。

RNA依赖性RNA聚合酶作为抗戊型肝炎病毒药物作用靶点的研究进展

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是造成急性肝炎最常见的原因之一。HEV基因组由5′非编码区、3个开放阅读框(ORF1、ORF2、ORF3)和3′非编码区组成,仅在HEV-1中发现了ORF4,并与ORF1重叠。各种编码蛋白在HEV的复制和感染中发挥着不同的作用,而HEV的复制是由ORF1编码的RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)所介导的。HEV RdRp是由多个蛋白亚基组成的复合酶,具有7个保守基序,这些保守基序在RNA合成过程中发挥核苷酸识别、合成、延伸、修饰和稳定等作用,保证了RdRp的功能,在HEV的复制和转录中起到关键作用。因此,以RdRp作为抗HEV药物作用靶点的治疗方案具有很好的应用前景,是目前药物开发的一种主流思路。目前,已发现利巴韦林、索非布韦、2′-C-甲基胞苷(2CMC)等核苷类RdRp抑制剂和锌、GPC-N114等非核苷类RdRp抑制剂对HEV有较强的抑制作用,可作为潜在的抗HEV药物进行深入研究。笔者对HEV编码蛋白和HEV RdRp的结构与功能进行阐述,总结目前发现的对HEV有抑制作用的RdRp抑制剂,以期为HEV的药物开发提供一种新的思路。

二氢乳清酸脱氢酶抑制剂ASLAN003抗戊型肝炎病毒的研究

研究二氢乳清酸脱氢酶抑制剂ASLAN003对戊型肝炎病毒(HEV)复制的影响,为抗HEV治疗提供新型候选药物。用带有高斯荧光素酶的HEV复制子模型研究ASLAN003是否具有抗HEV作用,实时荧光定量PCR和间接免疫荧光检测ASLAN003对HEV RNA复制以及衣壳蛋白表达的抑制作用,细胞毒性试验和间接免疫荧光计算ASLAN003的半数毒性浓度(CC_(50))和半数抑制浓度(IC_(50))。结果表明,ASLAN003在0.2~50μmol/L浓度范围内能显著抑制HEV复制子在HEK 293T和Huh7细胞内的复制;ASLAN003在1μmol/L浓度能有效抑制HEV RNA复制,使其下降50%;在0.4μmol/L的浓度能够显著抑制衣壳蛋白ORF2的表达。通过对ASLAN003的细胞毒性和抑制HEV效果进行研究发现,其CC_(50)为294μmol/L,而IC_(50)为0.231μmol/L。说明ASLAN003能够有效抑制HEV复制,提示其可作为潜在抗病毒药物。

西藏藏猪戊型肝炎病毒全基因组生物信息学分析

为了解藏猪源戊型肝炎病毒(HEV)分子特性,选取1株西藏藏猪源HEV4d型(GenBank登录号OQ981960)进行全基因组克隆,并通过多种生物信息学工具对其非结构蛋白、衣壳蛋白和磷蛋白进行生物信息学分析。结果显示:非结构蛋白为不稳定、亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽,分别有27和29个T、B细胞抗原表位,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,三级结构包含锌离子受体、多个甲基化位点及多种解旋酶;衣壳蛋白为不稳定、亲水性蛋白,有跨膜区和信号肽,分别有14和29个T、B细胞抗原表位,二级结构以无规则卷曲和延伸链为主,三级结构包含推定的糖基水解酶、镁离子位点、合成酶、连接酶、异构酶等;磷蛋白为稳定、亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽,分别有7和15个T、B细胞抗原表位,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,三级结构包含多个转移酶、聚合酶、连接酶、分泌系统、甲基转移酶、金属离子结合蛋白等。本研究为进一步了解西藏藏猪源HEV基因组和蛋白功能奠定了基础。

戊型肝炎病毒感染对肝细胞癌发生、发展影响的研究进展

肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是原发性肝癌常见的病理类型之一,乙肝(Hepatitis B,HB)、丙肝(Hepatitis C,HC)与肝癌的发生、发展密切相关。目前,临床关于戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)与肝癌的发生、发展的相关性尚不清楚。近年来,由HEV导致的戊型病毒性肝炎(Hepatitis E,HE)的发病率呈逐年上升的趋势,严重影响患者生命健康。HEV在机体内持续感染和复制,导致慢性肝炎,增加肝纤维化、肝硬化的发病风险,与HCC的发生、发展具有相关性。目前,HEV导致HCC的观点尚存在争议,本研究对HEV感染与HCC发生、发展的相关性进行综述。

戊型肝炎病毒Ⅳ型中国恒河猴动物模型的建立

目的研究中国恒河猴是否是戊型肝炎病毒(HEV)Ⅳ型的敏感动物模型。方法用Ⅳ型HEV RNA阳性的人粪便提取液感染2只中国恒河猴,动态观察动物感染前后ALT和肝组织学改变及血清、粪便HEV RNA。结果2只恒河猴于感染HEVⅣ型后第5周出现血清ALT升高,持续6周恢复正常;肝组织出现急性肝损伤样改变;感染3周于血清中检出HEV RNA,分别于第32天和第40天粪便中检出HEV RNA。结论中国恒河猴是HEVⅣ型的敏感动物模型。

我国家禽戊型肝炎病毒感染情况的调查

目的了解我国家禽戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法自我国15个省份采集鸡和鸭血清共计1647份,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测血清中HEV抗原和抗体;通过Nested PCR对陕西、西藏和海南的全部血清样本及其它抗原阳性样本分别进行HEV及禽HEV核酸检测。结果 1507份鸡血清中有54份为HEV抗体阳性,26份为HEV抗原阳性,抗原和抗体的阳性率分别为3.58%和1.73%;140份鸭血清中10份为HEV抗体阳性,2份为HEV抗原阳性,阳性率分别为7.14%和1.43%;鸡和鸭HEV抗原、抗体阳性率无统计学差异。在鸡、鸭血清标本中没有检测到HEVRNA。结论我国家禽存在HEV感染,但还需要进一步研究以确定感染的病毒是否为禽HEV或1-4型HEV跨种感染。

安庆市戊型肝炎病毒感染情况调查分析

目的了解安庆市肝炎患者和非肝炎患者戊型肝炎病毒（HEV）感染状况和特点。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对本院2009年4~10月2019例非肝炎患者和2009年1~12月1019例肝炎患者血清进行HEVIgG抗体和IgM抗体检测。结果 2019例非肝炎患者中,抗HEV-IgG阳性377例,阳性率为18.67%,男性和女性的抗HEV-IgG阳性率分别为22.12%和14.52%,男女差异有统计学意义,抗HEV-IgM阳性8例,阳性率为0.4%;1019例肝炎患者中,抗HEV-IgG阳性245例,阳性率为24.04%,男性和女性的抗HEV-IgG阳性率分别为25.35%和21.04%,男女差异无统计学意义,抗HEV-IgM阳性35例,阳性率为3.43%。结论低年龄组HEV感染率和戊型肝炎发病率均很低,40岁以上年龄组HEV感染率和戊型肝炎发病率均较高。

戊型肝炎病毒总抗体与IgM、IgG单抗体检测结果一致性分析

目的比较戊型肝炎病毒总抗体(HEV-Ab)与IgG、IgM单抗体检测结果的一致性。方法采用HEV-Ab、HEV-IgG、HEV-IgM3种试剂盒分别对2070份献血者标本进行检测。总抗体阳性、IgG及IgM中至少有1种阳性,或总抗体阴性、IgG及IgM均阴性判为一致。结果总抗体HEV-Ab检测与IgG及IgM检测的一致性为96.9%(2006/2070);HEV-Ab总抗体S/CO值越高,阳性结果的一致性越好。HEV-AbS/CO值≥5、2≤S/CO<5和1≤S/CO<2时,检测结果的一致率分别为98.2%(493/502)、79.3%(46/58)和59.5%(22/37)。结论戊型肝炎病毒总抗体试剂盒(HEV-Ab)与IgG、IgM单抗体试剂盒(HEV-IgG、HEV-IgM)一致性好,HEV-Ab可用于HEV流行病学研究。

应用合成肽检测戊型肝炎病毒抗体的实验研究

本文利用多肽合成技术在戊型肝炎病毒(HEV)基因结构区内的开放读码框(ORF)-2和ORF-3区合成了P1、R2二条具有明确抗原表位的多肽,作为EIA法抗-HEV诊断试剂的固相抗原测定抗-HEV。在急性甲型肝炎中抗-HEV的检出率为7.8％,慢性乙型肝炎的检出率为2.9％,志愿献血员1.4％,急性输血性丙型肝炎为0％。抗-HEV诊断试剂检测的CV值为6.8％-9.1％,经162例血清标本的检测与Genelaps抗-HEV诊断试剂的结果对比,其符合率达98.8％。结果表明:本室抗-HEV诊断试剂的灵敏度、特异性检测结果满意,精密度(precision)检测优于部颁标准。

基因Ⅰ、Ⅳ型戊型肝炎病毒高灵敏度通用引物的设计和初步应用

设计针对国内流行的戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅰ、Ⅳ型,在这两型序列的保守区域设计了一套RT-PCR引物--E引物,并将E引物与目前较常用的3对通用引物(Meng、ConORF1和ConORF2引物)比较了检测基因Ⅰ、Ⅳ型HEV的灵敏度.对基因Ⅰ型HEV,E引物能检出的稀释度为105,参考引物能检出的稀释度为102～104;对基因Ⅳ型HEV,E引物能检出的稀释度为102,参考引物能检出的稀释度为101～102.在17份HEV-IgM阳性血清中,E引物检出5份,检出率为29.4%;参考引物只能检出1份或2份,检出率最高为11.8%.E引物在33份HEV-IgM阳性的隐性感染血清中检出6份,阳性率18.2%;在79份HEV-IgM阳性的临床肝炎血清中检出36份,阳性率45.6%.以上结果初步表明,对于在国内流行的基因Ⅰ、Ⅳ型HEV,E引物的检测灵敏度要高于目前常用的通用引物.

大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合现象研究

在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的a .a .394～a .a .6 0 4片段 ,得到的重组蛋白NE2在SDS PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在 ,二聚体对病人血清的反应性明显强于单体 ;质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的多种聚体 ;动态光散射测定表明平均分子半径约 4nm ,相当于四聚体 ,但分散度较大 ,提示为多种大小不一的聚合体的混合物。这些证据表明NE2蛋白可形成以同源二聚体为基本单位的多种聚合体形式 ,其中以二聚体间的结合最为紧密 ,并且以二聚体为基础可进一步装配出多种更高级结构 ,从而具有作为HEV疫苗及诊断试剂抗原的良好前景。