标准化饲料与普通饲料饲喂育成兔的试验观察

在相同环境条件下 ,对两组育成家兔 ,饲喂不同成分的颗粒饲料 6 0d,观察两组育成兔的体质量变化。其结果表明 ,饲喂标准化饲料组育成兔体质量增加速度、健康状况和体质量都高于饲喂普通饲料组育成兔。

胶原在胎兔、成兔正常发育及创伤愈合过程中的变化

目的 :为了探索胎兔及成兔在正常发育及创伤愈合过程中胶原合成特点 ,分析胎儿型及成年型创伤愈合差别的原因 .方法 :用胃蛋白酶对胎兔及成兔皮肤的胶原进行提取 ,用酸水解法使胶原水解 ,采用氯胺T法进行羟脯氨酸 (HP)测定 .结果 :①正常成兔的HP含量明显高于正常胎兔 ,而正常胎兔不同孕期之间却无差别 .②胎兔皮肤创伤后 (1～ 6d)与对应的正常胎兔相比 ,只表现出第 1dHP显著增高 .③成兔皮肤创伤后与正常成兔相比 ,除第 1日无差别外 ,后 5dHP显著增高 .④胎兔皮肤创伤后HP动态变化呈现线性下降趋势 ,而成兔呈现线性上升趋势 .结论 :成兔皮肤合成胶原的能力高于胎兔皮肤 ;创伤后 ,胎兔及成兔均表现出胶原合成增加 ,而前者持续短暂 ,预示着愈合迅速 ;而后者持续增高 。

幼兔、育成兔的饲养管理

一、幼兔的饲养管理 从断奶到3月龄的小兔,称为幼兔。幼兔阶段的特点是生长发育快,抗病力差,因此要特别注意护理。否则,生长发育不良,易患病而造成大批死亡。

幼兔和育成兔的饲养管理

1幼兔从断奶到3月龄的兔称为幼兔。幼兔阶段死亡率最高，这与幼兔的生理特点有关。幼兔处在身体生长发育的高峰期，同时又处在第一次年龄性换毛期。因此，对营养物质有很迫切的需求，经常可以看到幼兔贪吃。但是，幼兔的消化系统功能还不完善，消化力差，出现消化系统疾病后其肠壁变得通透性增大，一些大分子的有害物质也通过肠壁进入血液循环，所以幼兔得病后常表现十分严重，死亡率很高。断奶后的幼兔得不到奶中一种抗微生物的乳因子，这种乳因子是由母乳中的一种基质同仔兔胃内的酶发生反应产生的。断奶幼兔胃内胃酸的浓度达不到成年兔的酸度，故幼兔特别容易感染球虫病，幼兔的死亡率高达54.66%~82.50%，大部分幼兔死于消化系统疾病及球虫病等。所以，养好幼兔的关键是加强饲养管理，做好防病工作。

仔幼兔和育成兔的饲养管理

一、仔兔的饲养管理。自出生到断乳分窝的兔称为仔兔。仔兔出生6天即可增重1倍，21天大型兔增重265～470克。由此看来，对仔兔不同发育时期的饲养管理，直接影响到兔群的发展。

浙江牧医所研制成兔三联灭活疫苗

浙江省农科院畜牧兽医研究所鲍国连等,采用新的液体培养工艺,使兔波氏杆菌(Bb)和巴氏杆菌(Pm)含菌置稳定在186—230亿/ml、200—260亿/ml之间。用兔出血症(RHD)、Bb和Pm联合制成福尔马林三联灭活苗。免疫剂量1ml/只,经免疫试验测定,对RHD。

悬浮组织块法分离培养兔成纤维样滑膜细胞

目的:建立兔成纤维样滑膜细胞悬浮组织块分离培养法。方法:取正常兔膝关节滑膜组织,用悬浮组织块法分离培养兔成纤维样滑膜细胞,观察细胞生长状况及形态特征,取第3代对数期细胞,CCK-8法绘制其生长曲线,免疫荧光法检测波形蛋白的表达情况,并与组织块贴壁法进行比较。结果:两种方法体外培养得到的兔成纤维样滑膜细胞形态为长梭形纤维样,细胞生长力较旺盛,生长曲线为典型的"S"形,免疫荧光检测显示第3代细胞强表达波形蛋白。结论:悬浮组织块法可以分离培养出兔成纤样维滑膜细胞,方法简便,效率高,为体外分离培养兔成纤维样滑膜细胞提供了一种新的方法。

CCK-8法与MTT法检测兔成纤维细胞活性的比较研究

目的:探讨CCK-8法和MTT法检测兔成纤维细胞活性的最佳实验条件,并比较其优略。方法:以传至第3代的兔成纤维细胞为研究对象,分别用CCK-8法和MTT法检测兔成纤维细胞的增殖活性。结果:MTT法的最佳检测波长490nm,CCK-8法最佳检测波长为450nm,两法的最佳检测时间均为加入试剂后4h。适宜检测的细胞数量范围为2×103/ml～1×105/ml个。结论:CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测兔成纤维细胞增殖活性的方法。

改良组织块法分离培养兔成纤维样滑膜细胞

目的通过改良组织块细胞培养法,建立一种简单,可行的兔成纤维样滑膜细胞体外培养方法。方法无菌条件下取正常兔膝关节滑膜组织,剔净后剪成碎块,用灭菌滤纸吸掉组织上附着的水分,碎片接种于培养皿,观察细胞生长状况及形态特征。取第3代对数期细胞,用CCK-8法绘制其生长曲线,并用免疫荧光法检测波形蛋白的表达情况。结果体外培养的兔成纤维样滑膜细胞形态为长梭形纤维样,细胞生长力较旺盛,生长曲线为典型的"S"型,免疫荧光检测显示第3代细胞强表达波形蛋白。结论改良组织块法可以分离培养出兔成纤样维滑膜细胞,方法简便,成功率高,满足实验要求。

应用RNA干扰技术体外抑制兔成纤维细胞HGPRT的表达及其核移植研究(英文)

次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypoxanthine guaninephos phoribosyltransferase,HGPRT)的功能缺失与痛风、肾结石和雷纳综合症(Lesch-Nyhan Syndrome)等疾病相关.制作HGPRT基因表达降低的模式动物,将有利于人们对这种疾病的发病机理和治疗做进一步的研究.构建了针对HGPRT基因表达的shRNA干扰载体,并将质粒转染兔成纤维细胞,获得携带该干扰片段的转基因细胞系,经PCR鉴定转基因成纤维细胞克隆阳性率为83.3%.RT-PCR及Western blot检测结果表明转基因干扰成纤维细胞系HGPRT mRNA和蛋白质表达量明显降低.最后,以转基因成纤维细胞进行核移植,囊胚率为27.8%,与正常来源的成纤维细胞囊胚率相比较差异不显著.说明,通过RNAi可稳定干扰兔成纤维细胞HGPRT基因的表达,为进一步通过核移植技术建立HGPRT RNAi转基因兔模型创造条件.

电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的初步研究

目的采用电穿孔方法，介导质粒载体pEGFP-cl转入兔成体成纤维细胞，探讨建立电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的基本条件。方法电穿孔介导质粒载体pEGFP—cl转入7．10代兔耳成体成纤维细胞系GG，研究不同电压、电容、DNA剂量，孵育温度的条件下，观察细胞存活数，流式细胞仪测试GFP的含量。结果以PBS作为电击基础液、细胞浓度2×10^6个／ml，电压250V、电容700μF，DNA用量30μg时，兔耳成纤维细胞的转染率和存活率最佳。且电击前冰浴10min，电转染后37℃孵育10min有利于提高细胞的转染率和存活率。结论在合适电压、电容、DNA剂量条件下，电转染提供了外源基因转染兔耳成体成纤维细胞适用性；电转染前的一定时间冰浴和电转染后一定温度孵育可使电转染效率得到改善。

利用漂浮组织块获得高纯度兔成骨细胞的方法

建立了一种能够获得高纯度成骨细胞的简便可靠的培养方法,为成骨细胞的相关研究提供稳定的种子细胞来源。在常规培养方法的基础上进行改良,建立了组织块漂浮培养法,从新生兔颅骨分离、培养成骨细胞。观察细胞的生长状态及形态,绘制生长曲线并计算细胞倍增时间,并进行碱性磷酸酶染色和矿化能力的检测。该方法分离培养的细胞显示典型的成骨细胞生物学特性,获得的成骨细胞纯度高、性状稳定、增殖能力强。说明组织块漂浮培养法是一种可行的培养方法,能够为成骨细胞的相关研究提供稳定可靠的种子细胞来源。

兔皮肤成纤维细胞的体外培养和NESTED-PCR支原体污染检测

[目的]为动物细胞核移植、转基因操作等提供充足的供体材料。[方法]通过对兔皮肤成纤维细胞的体外原代、传代培养和冷冻复苏,检测支原体污染状况。[结果]结果表明:在含有15%FCS(Fetal Calf Serum)的DMEM中培养的细胞初期生长状态较10%FCS中的细胞长势好,后期则相反。用PCR法对培养至25代的兔皮肤成纤维细胞进行支原体检测,均没有发现支原体污染现象。[结论]PCR法检测细胞培养支原体污染具有灵敏、准确、简便、快速、特异性好的优点。

兔成骨细胞的体外培养及生物学行为观察

以一月龄幼兔的颅顶骨为材料 ,采用组织块法 ,进行细胞的原代培养并传代之 .结果显示 :(1)原代细胞具有成骨细胞的形态特征 ,经 6次传代后细胞形态变化不明显 ;(2 )细胞具有较强的碱性磷酸酶 (AL P)活性且稳中有升 ;(3)细胞培养液和细胞内均含有骨钙素 ;(4)连续培养 1个月后 ,成骨细胞有矿化结节形成 ;(5 )骨片经 4次贴壁仍有细胞爬出且细胞形态相同 .该结果表明所培养的细胞具有成骨细胞的生物学行为 。

3D生物打印兔肺成纤维细胞水凝胶结构体片段

目的通过三维(3D)生物打印兔肺成纤维细胞-海藻酸钠-明胶共混物,探讨3D生物打印技术构建肺成纤维细胞水凝胶结构体片段的可行性。方法用轻度Ⅳ型胶原酶消化结合组织块培养法分离纯化新生兔肺成纤维细胞,并对分离纯化的肺成纤维细胞进行原代和传代培养;制备海藻酸钠-明胶水溶胶,与兔肺成纤维细胞共混;用圆柱状微丝逐层交错堆积技术,进行兔肺成纤维细胞-海藻酸钠-明胶共混物的3D生物打印,获得三维结构体。用钙黄绿素-AM和碘化丙啶溶液对该结构体进行活/死细胞双荧光染色,评价打印后及培养后兔肺成纤维细胞的活性,计算细胞存活率。结果通过按照设计的参数,打印出含有兔肺成纤维细胞的网格状水凝胶结构体。该结构体的大小约为9 mm×9 mm×1.2 mm,微丝间的孔隙相互通连,孔隙大小约600μm×600μm。打印后的兔肺成纤维细胞在三维结构体中仍可增殖,活/死细胞荧光染色结果表明结构体中兔肺成纤维细胞的存活率约为84%±3%,兔肺成纤维细胞在结构体中分布均匀。结论本实验实现了兔肺成纤维细胞共混物结构体的3D生物打印,为构建类肺组织工程结构体片段提供新思路。

成体兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因的打靶研究

目的构建兔HPRT基因打靶载体。方法在已经筛选到含有兔全长次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase，HGPR乃基因BAC克隆（LBNL1—304M19）的基础上，利用Red重组系统，从此克隆上将一段12．5kb无启动子的HGPRT基因组片段克隆到pKS-质粒上，产生pKS-HGPRT质粒。然后基于pKS-HGPRT和pEGFP—C1-SD1211质粒，构建了含有绿色荧光蛋白（GFP）及新霉素（neo）筛选标记基因的打靶载体pKS-HGPRT-GFP—neo。结果将线性化的打靶载体通过脂质体转染的方法整合到成体兔成纤维细胞基因组中，利用G418及6-TG进行细胞克隆的抗药物筛选，共得到抗性细胞克隆20个。对细胞克隆进行PCR及测序初步鉴定，获得8个发生同源重组的细胞克隆，还需利用Southern blotting做进一步验证。结论成功快速地构建了且PR丁基因敲除型打靶载体，为下一步进行体细胞核移植制备HGPRT基因敲除转基因克隆兔奠定基础。

兔结膜成纤维细胞的体外培养

目的:探索兔眼结膜成纤维细胞体外培养的方法。方法:分别采用组织块培养法、机械分离法、消化培养法、细胞悬液法和混合消化组织块培养法培养兔结膜成纤维细胞,观察细胞形态和生长特性。结果:单纯机械分离和消化培养法都可以得到单层贴壁细胞,细胞消化后再培养可缩短生长周期。结论:混合酶充分消化的组织块连同细胞悬液一同培养的方法,步骤简便且周期短。通过差别消化法和多次传代可以得到较纯的成纤维细胞。

酶消化法原代培养兔结膜成纤维细胞及进行传代培养的体会

目的 用酶消化法原代培养兔眼结膜成纤维细胞并进行传代培养。方法 取兔眼结膜 ,加入胰蛋白酶及乙二胺四乙酸二钠直接消化后放入孵箱培养 ,并通过改进后的传代培养技术将原代培养成功的成纤维细胞进行传代 ,观察细胞的生长情况。结果 原代培养 7～ 9d成纤维细胞在培养基中长成单层且分布均匀。传代培养后 3～ 4d成纤维细胞铺满培养基 ,即可再传代。结论 酶消化法原代培养兔眼结膜成纤维细胞比常规的组织块培养法更快促使细胞长成单层 ,且贴壁细胞分布更均匀。

兔胎儿成纤维细胞的分离培养和鉴定

本研究旨在建立稳定传代的兔胎儿成纤维细胞系及其鉴定方法。取配种后14-15d的兔胎儿,0.25%胰酶消化胎儿皮肤获得兔胎儿成纤维细胞,体外传代培养;通过观察细胞形态、测定生长曲线、免疫荧光染色、核型分析等鉴定兔胎儿成纤维细胞,PCR扩增SRY基因鉴定2株细胞系性别。研究结果表明,兔胎儿成纤维细胞呈梭形,可在体外快速生长,符合＂潜伏期-对数期-平台期＂的生长规律;免疫荧光染色结果显示,波形蛋白与纤维连接蛋白染色为阳性,细胞角蛋白染色为阴性,表明兔胎儿成纤维细胞纯度高,活性好;染色体检测结果显示,在传至第5代时,80%的成纤维细胞核型正常,为2n=44,属正常范畴;PCR法检测的2株细胞系均来源于兔雄性胎儿。综上表明,本研究建立了兔胎儿成纤维细胞系体外培养、传代、鉴定及其性别鉴定方法,可为转基因兔、克隆兔、兔诱导性多能性干细胞等研究提供充足、可靠的成纤维细胞来源。