淫羊藿苷对成牙骨质细胞体外增殖及成骨分化能力的影响

目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对成牙骨质细胞(OCCM-30)体外增殖及成骨分化能力的影响。方法:通过体外培养OCCM-30细胞,加入不同浓度(10、20、40μmol/L)ICA,倒置显微镜下观察细胞形态。设置10μmol/L ICA实验组与空白对照组处理,MTT法连续7 d检测OCCM-30细胞增殖率。通过Real-time PCR研究10μmol/L ICA作用于OCCM-30细胞后(1、4、7 d)成骨相关因子OCN和Runx-2的表达。结果:与对照组相比,加入ICA后OCCM-30细胞形态无显著变化,MTT结果显示10μmol/L ICA明显促进OCCM-30细胞增殖(P<0.05)。Real-time PCR结果显示实验组中成骨相关因子OCN和Runx-2的表达显著增高,与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:适宜浓度的ICA可有效促进OCCM-30的体外增殖及向成骨分化。

重组人成纤维细胞生长因子21调节成牙骨质细胞矿化作用及其机制研究

目的探讨重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF21)对成牙骨质细胞增殖和矿化的作用及其机制。方法采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色和免疫荧光法检测成纤维细胞生长因子21(FGF21)在大鼠牙周组织和成牙骨质细胞OCCM-30中的表达和分布;采用CCK-8法检测经不同浓度rhFGF21处理OCCM-30的增殖情况;采用碱性磷酸酶染色和茜素红染色分别检测OCCM-30矿化诱导3、7 d后的矿化状态;通过实时定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成骨相关基因Runx2和Osterix的转录及蛋白表达情况;通过PCR阵列分析评估OCCM-30内转化生长因子β(TGFβ)/骨形态发生蛋白(BMP)信号通路基因的表达变化。结果FGF21在大鼠牙周组织和OCCM-30中存在表达;rhFGF21对OCCM-30的增殖能力无明显影响,但50 ng/mL rhFGF21能促进OCCM-30矿化能力增强(P<0.001);实时定量PCR结果显示Runx2和Osterix的转录水平在50 ng/mL rhFGF21矿化诱导3 d时上升,5 d时下降;Western blot结果显示,Runx2及Osterix的蛋白表达水平在矿化诱导过程中增强,rhFGF21上调细胞内Bmpr1b的表达。结论rhFGF21能够促进OCCM-30矿化,这与TGFβ/BMP信号通路的激活有关。

“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞凋亡中的作用

目的:初步研究“Sirt1-自噬”在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞OCCM-30凋亡中的作用。方法:体外培养小鼠成牙骨质细胞,随机分为对照组、低氧组、低氧+Sirt1激活剂白藜芦醇组、低氧+自噬抑制剂3-MA组、低氧+白藜芦醇+Sirt1抑制剂ex527组、低氧+白藜芦醇+3-MA组,MDC染色观察自噬溶酶体变化;LC3Ⅱ免疫荧光检测自噬体变化;透射电镜观察自噬体;Western blot检测Sirt1、LC3Ⅱ、p62等蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;不同组间结果数据采用单因素方差分析,组间采用LSD-t分析。结果:低氧组较对照组自噬溶酶体含量(P=0.000)及自噬体数量(P=0.000)明显增加,LC3Ⅱ蛋白表达明显增加(P=0.001),p62蛋白表达明显减少(P=0.000),细胞凋亡率增加(P=0.000);低氧+白藜芦醇组较低氧组自噬溶酶体(P=0.019)及自噬体数量(P=0.000)、LC3Ⅱ蛋白表达(P=0.049)、Sirt1蛋白表达(P=0.000)明显增加,p62蛋白表达明显减少(P=0.000),细胞凋亡率减少(P=0.021);低氧+白藜芦醇+ex527组较低氧+白藜芦醇组自噬溶酶体(P=0.000)及自噬体数量(P=0.000)、LC3Ⅱ蛋白表达(P=0.000)、Sirt1蛋白表达(P=0.000)明显减少,p62蛋白表达明显增加(P=0.000),细胞凋亡率增加(P=0.000);低氧+白藜芦醇+3-MA组较低氧+白藜芦醇组自噬溶酶体(P=0.000)及自噬体数量(P=0.000)、LC3Ⅱ蛋白表达明显减少(P=0.000),p62蛋白表达明显增加(P=0.000),细胞凋亡率增加(P=0.000),Sirt1蛋白表达减少(P=0.146),差异无统计学意义。结论:自噬相关分子可能是低氧环境下Sirt1的下游作用分子,自噬在低氧诱导小鼠成牙骨质细胞(OCCM-30)凋亡中起保护作用。

成牙骨质细胞分化调控分子的研究进展

牙骨质是包绕在牙根表面的骨样矿化结构,是牙周组织的重要组成部分,具有维持牙齿稳定、补偿与修复、保护牙本质等功能,牙骨质的形成和再附着是牙周组织再生的成功标志。成牙骨质细胞(CM)是牙骨质形成的功能细胞,成牙骨质细胞的分化调控机制对于认识牙骨质形成和牙周功能维护具有重要意义。本文对影响成牙骨质细胞分化的信号通路及调控分子进行综述。

成牙骨质细胞瘤的临床及影像表现分析

目的通过分析总结成牙骨质细胞瘤的临床及影像资料特征,以期提高临床医生对该病的诊断及鉴别。方法回顾性总结分析14例成牙骨质细胞瘤患者的临床及影像资料。结果 14例成牙骨质细胞瘤患者就诊年龄11~58岁,中位年龄21.0岁,平均年龄27.6岁;男女各7例;好发于下颌骨;最常见的症状是颌骨肿胀和疼痛。特征性影像表现：与病变牙根融合的类圆形包块影,可见完整的包膜影像,与周围骨质分界清晰。肿瘤实质一般为团块状高密度影。根据肿瘤实质密度不同可分为均质型和非均质型。此外病变周缘常可见骨质增生硬化,下颌下缘骨密质增厚。结论成牙骨质细胞瘤在临床及影像表现上有其较明显特征性,临床医生应充分认识这一病变以免误诊。

Wnt5a在小鼠牙骨质发育中的表达特点及其对成牙骨质细胞分化的影响

目的:探讨Wnt家族5A蛋白(Wnt5a)在小鼠出生后牙骨质中的表达特点以及其对体外培养成牙骨质细胞分化的影响,阐明Wnt非经典通路调控牙根发育的机制。方法:选择出生后0.5、4.5、10.5、16.5、20.5、24.5、26.5和30.5d昆明小鼠并按以上相应时间点分组,每组3只;在相应时间点采用脱臼法处死小鼠,分离下颌第一磨牙及牙周组织。免疫组织化学染色法观察小鼠牙体和牙周组织中Wnt5a的表达特点。将小鼠成牙骨质细胞OCCM30分为实验组和对照组。实验组加入200μg·L^(-1)重组Wnt5a蛋白,对照组无添加;提取细胞总RNA。RT-PCR法检测2组OCCM30细胞中Ocn、Opn、Alp、Bsp、Wnt5a和Runx-2基因的相对表达水平。结果:小鼠出生后0.5d,第一磨牙牙胚中无Wnt5a阳性表达;出生后4.5d,成釉细胞和成牙本质细胞中Wnt5a阳性表达较强;出生后16.5d,可见成牙骨质细胞中Wnt5a呈阳性表达;出生后20.5~30.5d,成牙本质细胞和牙周膜细胞中Wnt5a呈阳性表达。与对照组比较,实验组成牙骨质细胞中Ocn和Alp基因相对表达水平降低(P<0.05)。结论:Wnt5a在牙根发育过程中的表达特点为从无到有,呈现规律性表达;Wnt5a下调分化基因的表达,在牙骨质发育中发挥重要作用。

张应力刺激下Wnt/β-catenin信号通路对成牙骨质细胞Runx2表达调控的体外研究

目的研究张应力刺激下Wnt/β-catenin信号通路对成牙骨质细胞Runx2表达的调控。方法以成牙骨质细胞样细胞OCCM30为研究对象,应用FX4000T应力加载装置对其加载张应力,时间为0、3、6、12 h,然后分别使用不同质量浓度的Dikkopf-1(DKK1)处理48 h,采用Western blot法检测β-catenin蛋白的表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-PCR)检测Runx2 mRNA的表达水平。选取最佳作用时间点(12 h)和最佳阻断剂质量浓度(150 ng·m L-1),将样本分为A、B、C、D共4组,A组不加力不加阻断剂,B组加力加阻断剂,C组加力不加阻断剂,D组不加力加阻断剂,测量β-catenin蛋白和Runx2 mRNA的表达水平。结果 1)张应力加载3、6、12 h后,Runx2 mRNA表达水平和β-catenin蛋白水平与对照组相比均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。2)不同质量浓度DKK1处理后,细胞内Runx2 mRNA的表达量呈下降趋势。3)未加载张应力的情况下,DKK1明显抑制了β-catenin蛋白的表达,Wnt/β-catenin通路被抑制;加载张应力情况下,DKK1处理组β-catenin蛋白表达低于未加DKK1处理组;不加阻断剂的情况下,张应力刺激增强了β-catenin蛋白的表达;阻断剂作用后,应力刺激组β-catenin蛋白表达相对较高。结论机械应力刺激下Wnt/β-catenin信号通路可正向调控成牙骨质细胞Runx2基因的表达。

信号素3A对成牙骨质细胞系OCCM-30增殖和矿化功能影响的实验研究

目的:初步探讨信号素3A(Semaphorin3A,Sema3A)对成牙骨质细胞增殖、矿化的影响。方法:采用不同浓度的重组人Sema3A(0、0.5、1mg/L)处理成牙骨质细胞OCCM-30。MTT法检测Sema3A对成牙骨质细胞增殖的影响,酶比活性法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的变化,实时荧光定量PCR法检测骨钙素(OCN),骨桥蛋白(OPN)和Runx2基因的表达,茜素红染色法检测矿化结节的形成。结果:Sema3A对成牙骨质细胞的增殖和ALP活性无明显影响。Sema3A抑制OCN和Runx2基因的表达(P<0.05),并抑制矿化结节的形成。结论:Sema3A对成牙骨质细胞的增殖无明显影响,但对细胞的矿化功能起到抑制作用。

体外培养的SD大鼠类成牙骨质细胞生物学性状初步探讨

目的 :对SD大鼠磨牙牙骨质的类成牙骨质细胞分泌碱性磷酸酶、骨钙素以及形成矿化结节的能力进行初步研究。方法 :对 12周龄SD大鼠第一磨牙类成牙骨质细胞进行骨钙素免疫组化染色和碱性磷酸酶活力测定 ,并利用茜素红S ,检测在条件培养基下细胞形成钙化结节的情况 ;利用计算机图像分析仪对细胞骨钙素免疫组化染色切片进行光密度定量分析。结果 :骨钙素在体外培养的类成牙骨质细胞中被强烈表达 ,而碱性磷酸酶在类成牙骨质细胞中几乎无活性。类成牙骨质细胞形成钙化结节茜素红S染色阳性。结论 :体外培养的类成牙骨质细胞表达矿化相关蛋白 ,但几乎没有碱性磷酸酶活性 ;钙化条件下 ,能在体外形成钙化结节。

SD大鼠类成牙骨质细胞体外培养的实验研究

目的:探讨体外培养源于SD大鼠磨牙牙骨质的类成牙骨质细胞的可行性。方法:仔细取得12周龄SD大鼠第一磨牙,使用组织块结合酶消化的二步法体外培养源于牙骨质的类成牙骨质细胞,进行形态观察,测定其生长曲线、贴壁率,并以牙周韧带成纤维细胞为对照进行骨钙素免疫组化染色测定。结果:SD大鼠的类成牙骨质细胞约在第14～18天从根面长出;生长曲线呈“S”形;接种后12小时约有94%的细胞贴壁。骨钙素在体外培养的类成牙骨质细胞中被强烈表达,在成纤维细胞中几乎不表达。结论:SD大鼠的类成牙骨质细胞可以在体外成功培养。

牛成牙骨质细胞中骨相关标志物的表达

目的 :探讨新生牛成牙骨质细胞 (cementoblast,CB)中几种矿化相关蛋白在不同水平的表达及CB在体外矿化的能力。方法 :体外分离培养CB ,免疫细胞化学及原位杂交检测几种矿化相关蛋白 :骨桥蛋白、骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原在CB中的表达 ;vonKossa染色观察它们在体外形成矿化结节的能力。均以大鼠成骨细胞 (osteoblasts,OB)UMR10 6为阳性对照。结果 :几种矿化相关蛋白在CB和OB中均呈阳性表达 ,在CB中的表达弱于OB ;OPNmRNA、BSPmRNA在CB与OB中阳性表达 ;CB在体外可形成矿化结节 ,CB形成的矿化结节较OB形成者少而且小。结论 :牛CB的生物学特性与OB相似 ,但其在体外形成硬组织的能力弱于OB。

良性成牙骨质细胞瘤12例临床病理分析

目的 分析12例良性成牙骨质细胞瘤的临床病理特征。方法 对12例良性成牙骨质细胞瘤分别从患者发病年龄、性别、发病部位、临床表现、X线特征，组织病理学表现及治疗方式等方面进行回顾性分析。结果12例良性成牙骨质细胞瘤患者，发病年龄13～58岁，平均33．8岁；好发于下颌骨（66．7％），后牙区较多见（91．7％）；最常见的症状是颌骨膨胀（75％）和疼痛（25％）。X线片特征是：肿瘤与牙根关系密切；肿瘤中央区为高密度阻射影，周围为环状低密度透射影。组织学上表现为不规则排列牙骨质样物体附着于牙根，有明显的嗜碱性反折线形成。采用摘除肿瘤并拔除受累牙的治疗方式可治愈。结论 良性成牙骨质细胞瘤好发于中青年，颌骨后牙区最常见，多表现为疼痛或颌骨膨胀，X线片特征与组织病理学表现结合有助于该肿瘤与骨母细胞瘤、化牙骨质纤维瘤和非典型骨肉瘤鉴别。

人重组白细胞介素-6对成牙骨质细胞的生长及分泌骨钙素能力的影响

目的 :了解rhIL 6对成牙骨质细胞 (cementoblasts,CBs)增殖活性及分泌骨钙素 (osteocalcin ,OC)能力的影响。方法 :试验所用的CBs为用组织块法联合酶消化法培养所得的新生牛CBs。实验组培养液为 10 % (体积分数 )FCS +RPMI16 40加不同 (质量 )浓度的rhIL 6 ,对照组不加rhIL 6。采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法观察CBs生长及存活状态 ;放射免疫分析法测定CBs培养上清液中OC的含量。结果 :rhIL 6对CBs的生长有抑制作用 ,并呈剂量依赖趋势 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;同一 (质量 )浓度rhIL 6在不同的培养时间段对CBs分泌OC的影响不同 ,除 0 .1μg·L- 1 IL 6组外 ,1、10、10 0 μg·L- 1 组上清液中的OC浓度在最初的 5d内有明显增高 ,以 10 0 μg·L- 1 组最显著 ,呈浓度依赖性 ,但在第 7天时 ,10 0 μg·L- 1 组的OC浓度明显下降至仅略高于第 3天的水平。 0 .1、1和 10μg·L- 1 组在第 3天和第 7天时 ,OC浓度均低于空白对照组。结论 :IL 6可能通过调节CBs的生长和OC的分泌而在CBs的代谢及牙骨质的形成、修复中发挥一定的作用。

熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞分化的促进作用

目的:探讨熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞分化的影响,为牙根吸收的修复提供理论依据。方法:将对数生长期的OCCM-30细胞分为对照组和不同浓度熊果酸组。其中熊果酸组OCCM-30细胞以3种浓度(0.625、1.250和2.500μmol·L^-1)的熊果酸处理,对照组不做任何处理。采用MTT法检测不同时间点(24、48和72h)各组OCCM-30细胞增殖抑制率,碱性磷酸酶(ALP)法检测细胞体外分化和矿化情况,实时定量PCR法检测24 h内骨桥蛋白(OPN)mRNA表达水平,Westernblotting法检测给药3和5d时OPN蛋白表达水平。结果:不同浓度熊果酸组与对照组OCCM-30细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,2.500 μmol·L^-1熊果酸组熊果酸处理3、5和7d后,OCCM-30细胞中ALP活性明显升高(P<0.05),不同浓度熊果酸组OCCM-30细胞中OPNmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:一定浓度熊果酸对小鼠成牙骨质细胞系OCCM-30细胞增殖无明显抑制作用,但可促进其分化并上调OPNmRNA和蛋白表达水平。

熊果酸对成牙骨质细胞增殖及矿化功能的影响

目的:观察熊果酸对鼠成牙骨质细胞系OCCM-30增殖、周期、凋亡及矿化功能的影响。方法:一定浓度熊果酸处理成牙骨质细胞后,cck-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,微量酶标法检测碱性磷酸酶活性,茜素红染色法定量及定性检测矿化结节量。结果:熊果酸组(2.5μmol/L)相比于对照组,细胞增殖率和细胞周期增殖指数升高,早期凋亡率降低,碱性磷酸酶活性和矿化结节量上调。结论:一定浓度熊果酸可促进成牙骨质细胞增殖,G1期百分比降低,抑制早期凋亡,增强碱性磷酸酶活性,促进矿化结节的形成。

甲状旁腺激素相关蛋白与成牙骨质细胞

成牙骨质细胞主要位于牙骨质表面,是由牙囊细胞分化而来。牙骨质覆盖于牙根表面,具有保持牙周组织平衡的作用。能否促进成牙骨质细胞形成新的牙骨质是评价牙周疾病治疗效果的重要方面。近年来一些研究对多肽类生长分化因子调控成牙骨质细胞生物活性的作用和机制进行了探讨,取得了新的进展,该文对甲状旁腺激素相关蛋白对成牙骨质细胞的调控作用进行综述。

成牙骨质细胞的研究进展

由成牙骨质细胞形成的牙骨质在牙周病治疗过程中意义重大,但迄今为止,我们对于牙骨质及形成牙骨质的成牙骨质细胞知之甚少。从成牙骨质细胞着手,建立体外培养的成牙骨质细胞系是进行这一领域研究的关键。本文就成牙骨质细胞目前的研究现状对其作一简要综述。

Emdogain诱导人牙周膜细胞群向成牙骨质细胞分化的研究

目的探讨人牙周膜细胞群(human periodontal ligament cell populations,hPDLPs)在Emdogain(EMD,商品化的猪釉基质蛋白)诱导下生物学特性的改变。方法组织块法分离培养牙周膜细胞,用含100 mg/L EMD的培养液诱导6 d,光镜下观察细胞形态改变,扫描电镜观察细胞在牙骨质片上的形态变化。免疫细胞化学检测成牙骨质细胞相关矿化蛋白:骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COLⅠ)的表达。结果EMD诱导后细胞由长梭形向多角形的类成牙骨质细胞分化。免疫组织化学检测结果显示诱导后BSP、COLⅠ的表达增强。结论EMD可以诱导人牙周膜细胞群向类成牙骨质细胞方向分化。

二甲双胍对成牙骨质细胞成骨作用的研究

目的:研究二甲双胍(metformin,MF)对成牙骨质细胞(cementoblasts,CB)增殖、分化、矿化能力的影响,为临床牙骨质缺损、牙根修复提供新的用药思路。方法:对成牙骨质细胞系OCCM-30分别给予不同浓度的MF培养,MTS法检测CB的增殖;实时荧光定量PCR法(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)及蛋白免疫印迹法检测骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx 2)在基因及蛋白层面的表达;碱性磷酸酶(alkaline ph osph atase,ALP)活性测定及茜素红染色法检测MF对CB矿化的影响。结果:不同浓度的MF作用于OCCM-30细胞24、48、72小时后,200μmol/L和400μmol/L MF组对细胞的增殖能力具有促进作用(P<0.05),高浓度1600μmol/L MF组在作用细胞72小时后对细胞增殖产生抑制作用(P<0.05)。与对照组相比,用200μmol/L MF处理OCCM-30细胞12、24、48小时后,Runx 2和BSP mRNA及蛋白的表达量明显增高(P<0.05)。200μmol/L MF作用OCCM-30细胞3天时ALP活性高于对照组(P<0.05),作用7天时则无统计学差异(P>0.05)。200μmol/L MF作用OCCM-30细胞21天后,矿化结节形成百分率明显高于对照组(P<0.01)。结论:一定浓度范围内的MF能促进CB的增殖、分化及矿化,提高CB的成骨能力。

机械应力刺激对成牙骨质细胞骨涎蛋白mRNA表达影响的体外研究

目的研究机械应力刺激对成牙骨质细胞矿化相关基因骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)mRNA表达的影响。方法利用四点弯曲细胞力学加载装置,以体外培养的成牙骨质样细胞OCCM-30为研究对象,运用实时荧光定量技术,比较2 000、4 000μstrain张应力和压应力加载组和不加力组OCCM-30在3 h、6 h、12 h、24 hBSP mRNA表达差异。结果和对照组相比,2 000、4 000μstrain的张应力和压应力在4个时间点均抑制OCCM-30 BSP mRNA的表达,且差异有统计学意义(F=5.614,P<0.05)。结论成牙骨质细胞是力学敏感性细胞,机械应力刺激通过影响其BSP mRNA的表达,进而可能影响成牙骨质细胞在牙根吸收和修复中的作用。