结缔组织生长因子增加TGFβ活化成肌纤维细胞的作用

探讨结缔组织生长因子 (CTGF)对转化生长因子 β1(TGFβ1)诱导成肌纤维细胞的影响及其与Smad信号通路的关系。细胞免疫组化检测成纤维细胞表型转化。Western免疫印迹法检测细胞α 平滑肌肌动蛋白 (α-SMA)及磷酸化Smad2的水平 ,免疫共沉淀检测Smad2 / 3与Smad4复合物的水平 ,提取核蛋白后再用Western免疫印迹法检测Smad2在细胞核内的聚积。结果显示CTGF不能使细胞表达α-SMA ,TGFβ1显著促进α- SMA表达 (p <0.0 1) ,CTGF加TGFβ1共同刺激又明显高于TGFβ1(p <0. 0 5 )。TGFβ1可明显诱导Smad2磷酸化、Smad2 / 3,4复合物形成以及Smad2在细胞核内的聚集 ,CTGF加TGFβ1联合刺激与TGFβ1相比没有明显变化。提示CTGF可以增强TGFβ1诱导的成肌纤维细胞生成 。

罗红霉素对哮喘大鼠气道重塑中成肌纤维细胞、TGF-β_1和IFN-γ的影响

目的:探讨成肌纤维细胞(myofibroblast,MF)、转化生长因子β1(transforming growth factor-be-ta1,TGF-β1)和IFN-γ在哮喘气道重塑中的作用,并观察罗红霉素对哮喘气道重塑的影响。方法:SD大鼠30只,随机分为哮喘组、生理盐水对照组、罗红霉素治疗组,每组10只。利用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)/Al(OH)3致敏与OVA雾化吸入激发建立大鼠哮喘模型。免疫组化测定支气管上皮下成肌纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达含量,并使用图像分析技术进行积分吸光度(integral optical density,IOD)定量分析测定。ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中TGF-β1和IFN-γ的浓度。结果:定量分析测定的IOD值显示哮喘组支气管上皮下成肌纤维细胞α-SMA表达含量较生理盐水对照组增加(P<0.01),罗红霉素治疗组表达含量较哮喘组减少(P<0.05)。ELISA法测定哮喘组BALF中TGF-β1浓度较对照组升高(P<0.01),治疗组较哮喘组浓度降低(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05)。哮喘组BALF中IFN-γ浓度较对照组降低(P<0.01),治疗组较哮喘组浓度高(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.05)。结论:成肌纤维细胞在气道重塑中起重要作用。罗红霉素可能通过减少TGF-β1,增加IFN-γ的产生,从而抑制成肌纤维细胞增殖和表达,起到抗哮喘气道重塑作用。

成肌纤维细胞在纤维化过程中的作用及其调控

成肌纤维细胞(myofibroblast)是伤口愈合和各种组织纤维化中起主要作用的细胞,成肌纤维细胞不能及时从病变处退出,使细胞外基质持续过量分泌,并发生重塑是组织纤维化的主要特征,这一病理过程受诸多因素的调控,研究成肌纤维细胞的分化增殖及凋亡的调控机制有助于寻找干预组织纤维化过程的关键环节,从而为延缓或逆转组织纤维化提供理论基础。

子宫肌瘤中成肌纤维细胞原代培养鉴定及意义

目的:观察子宫肌瘤与正常子宫肌层中成纤维细胞向成肌纤维细胞转分化的差异。原代培养人子宫肌瘤成肌纤维及鉴定。方法:(1)收集人子宫肌瘤、正常子宫肌层组织标本各30例;(2)采用免疫荧光三标鉴别正常子宫肌层与肌瘤组织中成肌纤维细胞的差异;(3)对人子宫肌瘤组织中的成肌纤维细胞进行原代分离培养,免疫细胞化学进行鉴定。结果:免疫荧光证实子宫肌瘤组织中成肌纤维细胞数较正常子宫肌层多,具有统计学意义(P<0.05)。子宫肌瘤组织成肌纤维细胞原代分离培养成功,免疫细胞化学结果显示所培养的细胞呈Vimentin、ASMA阳性表达,H-Caldesmon阴性表达,证实为成肌纤维细胞。结论:子宫肌瘤中成纤维细胞向成肌纤维细胞的转化较正常子宫肌层明显活跃,可能是子宫肌瘤发展过程中的关键因素之一。

血管紧张素Ⅱ诱导主动脉瓣成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化的机制

目的通过研究Wnt／β-catenin信号通路在心脏瓣膜成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化的凋控作用，探寻心脏瓣膜钙化的发病机制。方法以原代培养的猪主动脉瓣成肌纤维细胞作为研究对象，用与心脏瓣膜钙化有关的病理因素血管紧张素Ⅱ处理细胞，将细胞随机分为四组：对照组（Ctr）、血管紧张素Ⅱ组（AngⅡ10^-6mol／L）、血管紧张素Ⅱ＋缬沙坦组（AngⅡ10^-6mol／L＋Val10^-5mol／L）、缬沙坦组（Val10^-5mol／L）。通过检测骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein2，BMP2）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、Wnt／β-catenin信号通路中Wnt3a和β—catenin的蛋白表达，观察Wnt／β-catenin信号通路的变化以及细胞是否向成骨细胞样表型转化。结果AngⅡ能使成肌纤维细胞a—SMA的表达显著增加而成为活性细胞；骨相关蛋白BMP2、ALP蛋白和mRNA在对照组和缬沙坦组几乎没有表达，而在AngⅡ组表达显著增加（P〈0．01）；Writ／β-catenin信号通路中的配体Wnt3a在对照组和缬沙坦组几乎没有表达，AngⅡ组的Wnt3a和β—catenin基因表达显著上调（P〈0．01）；缬沙坦对AngⅡ的这种病理性影响可以起到-定的抑制作用（P〈0．05）。结论血管紧张素Ⅱ可能经由瓣膜间质细胞上的AngⅡ受体，通过激活Wnt／β-catenin信号通路，促使心脏瓣膜成肌纤维细胞激活、分化、增殖以及向成骨细胞样表型转化，进而导致心脏瓣膜的钙化。

氧化型低密度脂蛋白对心脏瓣膜成肌纤维细胞的增殖及骨相关蛋白表达的影响

目的通过观察猪主动脉瓣成肌纤维细胞在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作用下时,细胞的增殖变化以及是否表达骨相关蛋白,探讨心脏瓣膜钙化的病理机制。方法以原代培养的猪主动脉瓣成肌纤维细胞作为研究对象,用与心脏瓣膜钙化有关的病理因素ox-LDL处理细胞,将细胞随机分为4组:对照组(Ctrl)、氧化型低密度脂蛋白组(25μg/ml ox-LDL)、氧化型低密度脂蛋白+阿托伐他汀组(25μg/ml ox-LDL+50μg/ml Ator)、阿托伐他汀组(50μg/ml Ator)。采用流式细胞学技术测定各组细胞在24、48和72 h的增殖变化,利用Western blot和Real-time PCR检测72 h各组细胞的α-平滑肌蛋白(α-SMA)活性以及骨形成蛋白2(BMP2)、碱性磷酸酶(ALP)的基因表达;了解细胞是否异常激活以及是否向成骨细胞样表型转化。结果 ox-LDL分别处理成肌纤维细胞24、48和72 h后,细胞显示出时间依赖性的增殖加速(P<0.05);ox-LDL能使成肌纤维细胞α-SMA的表达明显增加(P<0.05)而成为活性细胞;骨相关蛋白BMP2、ALP的蛋白和m RNA在对照组和Ator组仅有低水平表达,而在ox-LDL组表达显著升高(P<0.01);Ator对ox-LDL的这种病理性影响可以起到一定的抑制作用(P<0.05)。结论 ox-LDL促使心脏瓣膜成肌纤维细胞激活、分化、增殖以及向成骨细胞样表型转化,进而导致心脏瓣膜的钙化。阿托伐他汀可能通过阻遏成肌纤维细胞的增殖起到对心脏瓣膜钙化的防治作用。

成肌纤维细胞在哮喘气道重塑中的作用及地塞米松对其的影响

目的:探讨成肌纤维细胞(MF)在哮喘气道重塑中的作用并观察地塞米松对其的影响。方法:SD大鼠30只,随机分为哮喘组(A组)、生理盐水对照组(C组)和地塞米松治疗组(D组),每组10只。利用卵白蛋白(OVA)/Al(OH)3致敏与OVA雾化吸入激发建立大鼠哮喘模型。免疫组化测定肺组织中支气管上皮下成肌纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达含量,并使用图像分析技术进行积分光密度(IOD)定量分析测定。ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1和IFN-γ的浓度。结果:①定量分析测定的IOD值显示A组支气管上皮下MF的α-SMA表达量较C组显著增加(P<0.01),D组表达量较A组减少(P<0.05)。②ELISA法测定结果:A组BALF中TGF-β1浓度较C组显著升高(P<0.01),D组较A组浓度降低(P<0.01),但仍高于C组(P<0.05)。A组BALF中IFN-γ浓度较C组显著降低(P<0.01),D组较A组浓度高(P<0.01),但仍低于C组(P<0.05)。结论:MF在气道重塑形成中起重要作用。地塞米松可能通过减少TGF-β1,增加IFN-γ的产生,抑制MF增殖和表达,起到抗哮喘气道重塑的作用。

TGF-β1诱导成肌纤维细胞形成在低氧性肺血管重塑中的作用

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导成肌纤维细胞形成在低氧性肺血管重塑中的作用。方法40只成年雄性Wistar大鼠随机分成:对照组、低氧3、7、14和21 d组,每组8只,测大鼠平均肺动脉压(mPAP)、血管形态学指标、右室肥大指数(RVHI);免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,原位杂交和免疫组化检测TGF-β1基因表达,透射电镜观察腺泡内血管壁细胞表型,细胞培养观察低氧和TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞是否发生表型转化。结果(1)低氧7 d后大鼠mPAP升高(P<0.05)。低氧14 d后出现肺血管重塑、右心室肥大。(2)从低氧7 d开始无肌型动脉、部分肌型动脉、肌型动脉的构成比分别是39%、46%和15%,与对照组60%、35%和5%比较差异显著(P<0.005)。(3)腺泡内肺动脉管壁α-SMA的表达随着低氧时间的延长逐渐增多。低氧14 dTGF-β1mRNA表达增高(P<0.01);TGF-β1蛋白在对照组呈弱阳性,低氧3 d表达增强(P<0.01),低氧7 d达高峰(P<0.01)。(4)透射电镜证实成肌纤维细胞含有特异性的微丝和丰富的粗面内质网。(5)细胞培养表明低氧能够刺激成纤维细胞发生表型转化,TGF-β1能够促进成纤维细胞表型转化的发生。结论转化生长因子β1诱导成肌纤维细胞形成是低氧性肺血管重塑的重要原因之一。

大鼠残余肾间质成肌纤维细胞激活与L-精氨酸的肾脏致纤维化作用

目的研究Ｌ精氨酸（Ｌａｒｇ）对５／６肾大部切除大鼠（ＳＮｘ）肾小管、间质αＳＭＡ表达的影响及其与细胞外基质合成、肾功能的关系。方法实验分４组：ｓｈａｍ；ｓｈａｍ＋Ｌａｒｇ；ＳＮｘ；ＳＮｘ＋Ｌａｒｇ。大鼠于术后即由饮水中给予１０ｇ·Ｌ－１Ｌａｒｇ。１ｍｏｎ后，大鼠处死，肾组织经免疫组化半定量分析肾小管间质αＳＭＡ以及ｃｏｌａｇｅｎⅢ、ｃｏｌａｇｅｎⅣ、ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ的表达程度。用ＭａｓｏｎＴｒｉｃｈｒｏｍｅ染色切片来判断肾小管、间质损害程度。结果Ｌａｒｇ明显增加ＳＮｘ大鼠肾小管、间质αＳＭＡ及ｃｏｌａｇｅｎⅢ、ｃｏｌａｇｅｎⅣ、ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表达，αＳＡＭ表达程度与上述细胞外基质成分之间呈显著的正相关（Ｐ分别＜００１）。更为重要的是αＳＭＡ表达程度尚与肌酐清除率呈负相关（Ｐ＜００１），而与小管、间质损害程度呈正相关（Ｐ＜００１）。结论Ｌａｒｇ可能激活ＳＮｘ大鼠肾小管、间质成肌纤维细胞（ＭＦＢ），并促进肾脏纤维化。

小儿炎性成肌纤维细胞瘤临床与病理分析

目的:探讨小儿炎性成肌纤维细胞瘤(IMT)临床病理特征和鉴别诊断。方法:对4例小儿IMT进行光镜和免疫组化染色观察。结果:4例均有较长时间的发热史,3例有反复腹痛发作史;年龄<7岁;肿瘤部位均位于腹腔大网膜及肠系膜;3例伴有贫血,血红蛋白(Hb)为101～105g/L;4例成肌纤维细胞瘤均为致密的梭形细胞型;免疫组化检查显示波形蛋白、平滑肌肌动蛋白、肌特异性蛋白阳性;肿瘤完整切除,随访4个月～2年无复发。结论:小儿IMT是一种罕见的软组织肿瘤,由增生的成肌纤维细胞和浸润的淋巴细胞、浆细胞组成。因其有局部浸润性生长和复发倾向的生物学特性,易与炎症性恶性纤维组织细胞瘤混淆,基质有黏液要与结节性筋膜炎鉴别,少细胞性纤维型与腹膜后纤维化和硬化性肠系膜炎等鉴别。IMT大多数发生在14岁以下。免疫组化和电镜对鉴别诊断十分重要。IMT预后良好,适当手术切除为宜,避免过度手术、放射治疗和强烈化疗。

大鼠胰腺癌模型及胰腺成肌纤维细胞计数

目的 建立大鼠胰腺癌模型，研究胰腺导管癌和非癌胰腺组织中成肌纤维细胞（MF）的分布和计数。方法 将二甲基苯并蒽（DMBA）直接置入大鼠胰腺被膜下实质内，并设立曲古霉素（TSA）干预组和空白对照组，3-5个月内处死，常规制作石蜡切片；Heidenhain染色，高倍镜下计数MF。结果 1）实验组癌发生率为48.7%（18/37），17例为胰腺导管癌，1例为纤维肉瘤；TSA组癌发生率为33.3%（12/36），11例为胰腺导管癌，1例为纤维肉瘤；实验组胰腺癌最大径均值大于TSA组（P〈0.05）。2）实验组和TSA组全部胰腺癌组织中的MF计数明显高于全部非癌胰腺组织（P〈0.01）；对照组无癌发生；非癌胰腺组织中正常细胞或导管上皮细胞轻度不典型增生组的MF计数明显低于中-重度不典型增生组（P〈0.05）。对照组MF计数明显低于实验组和TSA组的非癌胰腺组织或胰腺癌组织（P〈0.05或P〈0.01），癌组织中存在呈明显异型性的MF样癌细胞。结论 胰腺癌内的MF在胰腺癌的发生、发展中可能具有重要作用。

猪心脏瓣膜成肌纤维细胞的分离、鉴定与培养

背景:瓣膜间质细胞是心脏瓣膜中的主要细胞成分,成肌纤维细胞是一种能够表达平滑肌α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原纤维,并具有一定分化潜能的重要的瓣膜间质细胞,不仅在瓣膜的结构中起着支架作用,尤其在瓣膜的正常生理以及病理应答过程中发挥着重要的调控作用。目的:建立一套可靠的心脏瓣膜成肌纤维细胞分离、原代培养与鉴定的方法,为心瓣膜钙化等疾病的进一步研究奠定基础。方法:1从猪心中获取主动脉辨,分别用酶联和消化法、普通酶消化法以及组织块种植法提取猪主动脉瓣瓣膜成肌纤维细胞,进行原代培养;2显微镜观察3种方法培养出的成肌纤维细胞的活性和形态;3用光学显微镜和免疫细胞化学方法鉴定细胞。结果与结论:13种方法中,利用胰酶和胶原酶Ⅱ联合消化,然后迅速终止消化的方法获得成肌纤维细胞的活性更高,状态更好,纯度更高;2在荧光显微镜下,观察到获得的主动脉瓣成肌纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白染色阳性,抗血管性血友病因子染色阴性,提示培养的细胞为成肌纤维细胞。

胎兔皮肤创伤愈合中成肌纤维细胞的表达

为探讨胚胎兔伤口不收缩的原因,利用已建立的胚胎兔创伤模型,运用免疫组化和电镜方法观察胚胎兔和成兔创伤愈合过程中无成肌纤维细胞的表达。结果表明,在正常成兔和胚胎兔皮肤中未发现成肌纤维细胞;胚胎兔在创伤愈合过程中无成肌纤维细胞;成兔在创伤后存在成肌纤维细胞。结论:成肌纤维细胞在胚胎兔与成兔愈合过程中表达不同,这也许是胚胎兔创面愈合不同于成兔的原因之一。

纤溶酶系统在成肌纤维细胞凋亡、组织纤维化过程中的作用

成肌纤维细胞(myofibroblast,MF)是介于平滑肌细胞(smooth muscle)和成纤维细胞(fibroblast)之间的一种细胞。它被公认为在伤口愈合和各种组织纤维化的过程中起关键作用。该文从信号转导角度介绍了纤溶酶系统(plasminogensystem)与成肌纤维细胞细胞凋亡之间的联系,通过对纤溶酶系统的调节,可以影响到人体各处组织中MF的凋亡和分化,进而缓解甚至治疗相应的疾病。最新的研究结果表明,PAI-1的小分子抑制剂和他汀类药物可以通过纤溶酶系统来影响MF的凋亡,它们有望成为治疗组织纤维化的新药。

致敏大鼠成肌纤维细胞与Ⅲ型、Ⅴ型胶原表达关系的研究

目的 探讨致敏大鼠气道壁中成肌纤维细胞与Ⅲ型、Ⅴ型胶原的表达及成肌纤维细胞 (MF)在气道重建中的作用。方法 Wistar大鼠 3 2只 ,随机分为对照 4周组、8周组 ,致敏 4周组、8周组 ,每组 8只 ,并用卵白蛋白 (OVA)致敏并激发 ,制备致敏大鼠模型。对照组用生理盐水对照和激发。分别于激发 4周和 8周时取肺组织 ,用免疫组化法测定气道壁中Ⅲ型、Ⅴ型胶原和成肌纤维细胞、TGF β1的表达。结果 ①致敏 4周组和 8周组Ⅲ型胶原、Ⅴ型胶原和成肌纤维细胞的表达与对照 4周组和 8周组比较 ,差异均有显著性 (P均 <0 0 1) ;②致敏各组Ⅲ型、Ⅴ型胶原的表达与成肌纤维细胞的表达均呈显著正相关 (P均 <0 0 1) ;③致敏 8周组与 4周组比较 ,Ⅲ型、Ⅴ型胶原含量和成肌纤维细胞的表达显著增加 ,差异均有显著性 (P均 <0 0 1)。结论 哮喘气道重建过程中 ,有Ⅲ型、Ⅴ型胶原增生 ,成肌纤维细胞的过度表达 ,表明成肌纤维细胞促进了细胞外基质的形成 。

成肌纤维细胞分化过程中肌动蛋白细胞骨架的形成及其作用

成肌纤维细胞是活化的成纤维细胞,在组织的损伤修复以及许多纤维化疾病过程中都具有重要的作用。其特征性改变是表达α平滑肌肌动蛋白,形成肌动蛋白细胞骨架,并且分泌大量的细胞外基质成分。肌动蛋白细胞骨架参与细胞的收缩、黏着斑的形成、细胞外基质的重构以及相关基因转录与翻译的调控,促进成肌纤维细胞的分化及组织的纤维化过程。研究肌动蛋白细胞骨架在成肌纤维细胞中的形成及其功能有助于更好地了解成肌纤维细胞的活化机制及其在相关疾病发生、发展过程中的作用。

成肌纤维细胞在大鼠低氧性肺动脉高压发病中的作用

目的 探讨低氧性肺动脉高压 (HPH) 无肌性肺动脉肌化的细胞来源。方法 雄性 Wistar大鼠 40 只, 分为对照组和低氧 (3、7、14、21d组), 每组8只, 低氧组复制HPH大鼠模型。测定各组平均肺动脉压 (mPAP), 右心室肥大指数 (RVHI), 肺小动脉病理及其形态计量学; 免疫组化测定各组肺微血管α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA) 表达; 透射电镜观察微血管的超微结构改变。结果 (1) 低氧 7d起大鼠 mPAP、管壁面积/管总面积 (WA%)、管腔面积/管总面积(LA%) 分别为 (18 41±0 37) mmHg、 (52. 2±0. 8)%、 (47. 8±0. 8)%与对照组 (14 .02±0 .41) mmHg、 (64. 5±1 .3)%、(35. 5±1 .3)%比较差异有显著性 (P<0 .05), 低氧 14 天起稳定于高水平; 低氧 14d RVHI为 (25. 0±1. 8)%与对照组 (23. 6±0. 5)%比较差异也有显著性 (P<0. 05)。(2) 从低氧 7d开始无肌型动脉、部分肌型动脉、肌型动脉的构成比分别是39%、46%、15%与对照组60%、35%、5%比较差异有显著性 (P<0. 005)。(3) 免疫组化发现, 腺泡内肺动脉管壁α SMA的表达随着低氧时间的延长, α SMA表达量逐渐增多。(4) 透射电镜观察 21d组增厚的重塑血管壁, 位于内外弹性膜之间的细胞为成肌纤维细胞表型, 外层具有与它紧密联系的成纤维细胞。结论 在低氧性肺动脉?