鹿茸粗提液对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用

目的 :观察鹿茸粗提液 (PAE)对大鼠成骨肉瘤细胞系UMR 10 6增殖的影响 ,从而为研究鹿茸强筋健骨的分子机理以及筛选鹿茸防治骨质疏松的生物活性成分提供实验依据。方法 :通过SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱对PAE进行初级分离 ,用MTT法检测不同分离组分对UMR 10 6细胞增殖的影响。结果 :发现SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱第 2峰P2次组分 ,当其蛋白质浓度高于 0 .972mg·L - 1并低于 97.2mg·L - 1时 ,对UMR 10 6细胞增殖活性的影响表现为抑制 ;若浓度达到 97.2mg·L- 1后则会促进细胞的增殖 ,且增殖效应随蛋白质浓度的增加而明显上升。当样品蛋白质浓度达到 9.72g·L- 1时 ,相应的细胞增殖率为 477.92 % ,接近PAE的增殖水平 (499.62 % )。经SDS PAGE电泳分析第 2峰分子量集中于 59kDa左右。此外 ,发现第 3、第 4和第 5峰对UMR 10 6细胞增殖有显著的抑制作用。结论 :鹿茸蛋白中含有多种双向调控UMR 10 6细胞增殖的生物活性因子 ,既有剂量双向效应 ,也有与分子量相关的不同调控蛋白 。

丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用

应用细胞培养、台盼蓝拒染计数、光学显微镜观察、流式细胞仪检测及免疫细胞化学等技术研究中药有效成分丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制作用.实验结果显示,丹参酮ⅡA处理MG-63细胞后,细胞增殖活动受到抑制,抑制率为52.10%,细胞倍增时间由对照组的48 h延长至65 h;细胞发生G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞比例由对照组的47.5%上升到59.5%,S期细胞比例则由对照组的20.0%下降至9.0%;并出现细胞形态规则、大小趋于一致、细胞体积增大、核质比例减小等变化;MG-63细胞增殖分化调控相关的癌基因c-fos和c-myc表达活性降低.结果表明,丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖有显著抑制作用,其作用可能与干预c-fos和c-myc等癌基因表达从而调控细胞周期有关.

人参皂苷Rg1组合诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中Prohibitin的表达与定位变化

选择性抽提经人参皂苷Rg1组合(RCT)诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质,对prohibitin在核基质中的存在、分布及其与相关基因产物在RCT处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究.蛋白质组学分析结果显示,prohibitin存在于人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在RCT处理后细胞核基质中表达下调;蛋白质印迹杂交确证了prohibitin在MG-63细胞核基质中的存在及其在RCT处理后下调变化;免疫荧光显微镜观察进一步证实prohibitin定位在核基质上,经RCT处理后出现分布位置与表达水平变化;激光共聚焦显微镜观察可见prohibitin与c-Fos、c-Myc、p53和Rb基因产物均存在共定位关系,并在RCT处理后共定位分布区域出现变化.本研究证实了prohibitin是一种新发现的核基质蛋白,其在核基质上的定位与表达在RCT诱导分化前后发生显著变化,并与相关癌基因、抑癌基因产物存在共定位关系.实验表明RCT处理引起的prohibitin的变化与人成骨肉瘤MG-63细胞的诱导分化与调控具有密切关系,为深入揭示RCT等中药有效成分诱导肿瘤细胞分化的机理提供了重要科学依据和深入探索的新方向.

丹参酮IIA对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

目的:观察中药有效成分丹参酮IIA(Tan IIA)对人成骨肉瘤MG-63细胞形态与超微结构和相关终末分化指标的影响,以鉴定其对肿瘤细胞终末分化的诱导作用。方法:0.5μg/mL丹参酮IIA处理MG-63细胞,光镜、电镜观察和免疫细胞化学检测系统研究MG-63细胞处理前后细胞形态、超微结构变化和成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化。结果:光镜与电镜观察结果显示经Tan IIA处理细胞产生了核质比例减小、异染色质减少、常染色质增多、细胞器丰富发达、细胞表面微绒毛减少等显著变化;免疫细胞化学检测显示处理后MG-63细胞Ⅰ型胶原蛋白、骨粘素和骨钙蛋白的表达呈阳性,并观察到钙化糖原颗粒增多和典型骨结节的形成。结论:丹参酮IIA能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并促进与成骨细胞相关的终末分化指标的表达变化,从而对人成骨肉瘤细胞的终末分化具有明显的诱导作用。

Stathmin基因在人成骨肉瘤细胞中的表达及意义

背景与目的:Stathmin作为细胞信号转导分子在细胞分化及恶性肿瘤发生、发展上发挥重要作用。本研究旨在探讨Stathmin基因在人成骨肉瘤细胞中的表达,并探讨阻断其表达对该肿瘤细胞的生物学行为的影响。方法:RT-PCR及原位杂交法检测2个人成骨肉瘤细胞系及45例人成骨肉瘤组织中Stathmin基因表达情况;以高表达Stathmin基因的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607为靶细胞、反义Stathmin(ASODN)为阻断剂,通过MTT实验观察ASODN对该细胞系的生长抑制作用,并用流式细胞仪分析其对细胞增殖周期的影响。结果:Stathmin基因在2个成骨肉瘤细胞系高表达,45例成骨肉瘤组织中24例呈阳性表达(阳性率为53.3%),10例正常组织中2例呈弱阳性表达,Stathmin在人成骨肉瘤组织的表达与正常组织中的表达有显著性差异(P<0.05)。ASODN明显抑制成骨肉瘤细胞的生长(P<0.05)。SOSP-9607在ASODN作用下,细胞分裂阻滞在分裂期的中期,并诱导细胞发生凋亡。结论:Stathmin基因在人成骨肉瘤中高表达,该基因有望成为成骨肉瘤生物治疗中的重要靶点。

HMBA诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中hnRNP A2/B1的表达与定位

背景与目的:核基质蛋白的差异表达与细胞癌变和增殖分化调控关系密切。本研究观察了hnRNP A2/B1在诱导分化处理前后人成骨肉瘤MG-63细胞核基质中的存在和分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系。方法:选择性抽提经环六亚甲基双乙酰胺(hexamethylene bisacetamide,HMBA)诱导处理前后的MG-63细胞核基质,并运用双向电泳、质谱分析、蛋白质印记杂交、免疫荧光、激光共聚焦等技术检测hnRNP A2/B1在核基质中的表达与定位变化,及其与相关蛋白的共定位关系。结果:双向电泳及蛋白质印迹杂交结果证实了hnRNP A2/B1存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在HMBA处理后细胞核基质中表达下调;免疫荧光显微镜观察显示hnRNP A2/B1定位在核基质上,经HMBA处理后hnRNP A2/B1表达减弱。激光共聚焦显微镜观察结果显示,hnRNP A2/B1与细胞核基质蛋白组分Actin、细胞增殖相关调控因子Prohibitin具有共定位关系,但在诱导处理后细胞内的共定位关系减弱。结论:hnRNP A2/B1在MG-63细胞诱导分化过程中的表达分布,及其与Actin、Prohibitin的共定位关系的改变对MG-63细胞分化具有重要影响,值得进一步探索和研究。

1株人成骨肉瘤细胞系的建立及特性观察

引言成骨肉瘤是人类最常见的原发性恶性骨肿瘤，死亡率、致残率很高．建立该肿瘤的细胞系，有助于对其深入研究，我们新建立了１株人成骨肉瘤细胞系，体外已传１２０余代，现报告如下．１方法１．１组织来源标本取材于１７岁男性患者１９９６－０７－１６的截肢，病理诊断...

紫杉醇诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的 :探讨紫杉醇对成骨肉瘤细胞的杀伤作用及机制。方法 :应用形态学观察 ,MTT分析法 ,DNA梯状电泳 ,流式细胞术检测术 ,研究紫杉醇对成骨肉瘤细胞系SOSP - 96 0 7的细胞毒效应。结果 :紫杉醇作用后成骨肉瘤细胞形态改变明显 ,存活率明显下降。形态学观察 ,DNA梯状电泳 ,流式细胞术检测术证实紫杉醇可诱导成骨肉瘤凋亡。结论 :紫杉醇在体外对成骨肉瘤细胞株SOSP - 96 0 7有较强的杀伤作用 。

微波固化保肢术后成骨肉瘤患者红细胞免疫功能的变化

研究微波固化保肢术提高患者生存率的免疫学机制。方法：应用色散比浊法检测患者血清Ｃ３、Ｃ４含量，应用红细胞Ｃ３ｂ受体花环（Ｃ３ｂＲＲ）、免疫复合物花环（ＣＩＣＲＲ）及直接肿瘤花环（ＴＲＲ）检测红细胞免疫功能。结果：２０例微波固化保肢组患者及２０例截肢组患者术前Ｃ３ｂＲＲ、ＴＲＲ降低，ＣＩＣＲＲ升高（Ｐ＜０．０５），Ｃ３、Ｃ４变化不明显；术后１４天时，微波组较截肢组Ｃ３ｂＲＲ、ＴＲＲ升高（Ｐ＜０．０５），ＣＩＣＲＲ变化不明显，２８天时两组各项指标恢复正常（Ｐ＜０．０５）。结论：微波固化保肢术可提高患者的红细胞免疫功能。

caspase-6基因诱导成骨肉瘤细胞凋亡

目的:探讨caspase-6对成骨肉瘤细胞株的凋亡诱导作用。方法:应用RT-PCR方法检测成骨肉瘤细胞株SOSP-9607中caspase-6基因的表达水平。以腺病毒adv5作载体,构建含caspase-6基因的转基因载体,用脂质体包裹法转染SOSP-9607细胞株,用RT-PCR方法检测转染后SOSP-9607细胞中caspase-6基因的表达。用MTF法检测转染caspase-6对SOSP-9607细胞株生长的影响。结果:成骨肉瘤细胞株SOSP-9607中未检出caspase-6表达。RT-PCR法证实转染。caspase-6后SOSP-9607中caspase-6表达显著增强,MTT检测显示对SOSP-9607细胞的生长有抑制作用,形态学观察及DNA电泳证实转染后的细胞株存在细胞凋亡特征。结论:caspase-6对成骨肉瘤细胞的生长有抑制作用,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡。

原位分离插入式微波天线阵列诱导高温治疗四肢成骨肉瘤肢体关节功能学结果评价

目的评价原位分离插入式微波天线阵列诱导高温治疗四肢成骨肉瘤功能学结果。方法从手术技术、肢体关节功能等方面全面综合评价此方法临床应用后肢体关节功能学结果。结果平均随访4.9年。16例术后8个月～2年内因肿瘤转移死亡。72例存活,生存率为74%。72例肢体成骨肉瘤存活者中,5例因局部复发截肢,3例局部复发行瘤段切除大段异体骨融合术治愈。72例肢体关节功能,优良50例,可7例(包括3例大段异体骨融合术患者),5例佩戴义肢患者功能为差。优良率为70%。结论该法治疗后肢体关节功能优良,优良率70%,方法创新、安全有效、临床效果显著。

HMBA对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响

研究了环六亚甲基双乙酰胺对人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖和相关基因表达的影响.实验结果表明HMBA可明显抑制MG-63细胞的增殖,细胞生长抑制率达50.69%,分裂指数抑制率达58.8%,增殖细胞核抗原的表达降低,细胞周期被阻滞在G0/G1期.免疫细胞化学染色结果显示,经HMBA处理之后,与增殖分化调控有关的癌基因c-myc、c-fos、c-erbB-2、mtp53的表达降低、抑癌基因p21WAF1/CIP1、p16、rb的表达升高.研究结果表明,HMBA能够有效抑制人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖活动,其对细胞增殖的抑制作用与HMBA下调c-myc、c-fos、c-erbB-2、mtp53等癌基因以及上调p21WAF1/CIP1、p16、rb等抑癌基因的表达,从而调控细胞周期有重要关系.

Stathmin基因反义核酸对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用

目的 探讨 Stathmin基因的反义核酸 (AS- ODN)对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 ,并观察与化疗药物合用后的协同作用 .方法 以高表达 Stathm in的人成骨肉瘤细胞系 SOSP- 96 0 7为靶细胞、反义 Stathmin(AS- ODN)为阻断剂 ,通过 MTT试验观察 AS- ODN对成骨肉瘤细胞的生长抑制作用及与紫杉醇 (PTX)的协同作用 ,流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响 .结果 AS- ODN及 AS- ODN与 PTX联合应用均明显抑制成骨肉瘤细胞的生长 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) .SOSP- 96 0 7在 AS- ODN作用下 ,细胞分裂阻滞在分裂期的中期 ,并诱导细胞发生凋亡 .结论 Stathmin基因的反义核酸(AS- ODN)对成骨肉瘤细胞的生长可能起十分重要的作用 ,它有望成为成骨肉瘤治疗的新靶点 。

人成骨肉瘤MG-63细胞分化特性及分化过程中的基因表达

观察人成骨肉瘤MG 6 3细胞分化特性及分化过程中的基因表达。在细胞培养的不同时间 ,用α 磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶 (ALP)活性 ;放射免疫法测定骨钙素 (BGP)含量 ;半定量逆转录聚合酶链反应测I型胶原、基质金属蛋白酶 (MMP) 1和基质金属蛋白酶抑制因子 (TIMP) 1基因mRNA表达 ;VanGieSon氏苦味酸酸性复红染色法染色细胞I型胶原。结果表明MG 6 3细胞接种培养第 7d后I型胶原基因表达较高。MMP 1表达量随时间推移逐渐增加 ,至第 2 4d达到高峰。第 1～ 9dTIMP 1表达量逐渐增加 ,其后基本恒定。ALP活性第 0～ 12d逐渐增高 ,至第 12d达最高 ,其后逐渐下降。第 18d后 ,细胞有许多大小不等的结节形成 ,I型胶原结节染色较无结节处深。MG 6 3细胞具有成骨细胞表型特征。MG 6 3细胞生长分为细胞增殖、骨基质成熟、骨基质矿化阶段 ,且I型胶原 ,MMP 1,TIMP 1基因表达及ALP活性呈时间特异性。

人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

为了研究人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞(以下简称"MG-63细胞")形态与超微结构及终末分化指标的影响,鉴定其对MG-63细胞的诱导分化作用,以50μg/mL人参皂甙Rg1处理MG-63细胞,光学显微镜与电子显微镜观察MG-63细胞形态、超微结构变化,免疫细胞化学方法检测成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化,并同步以HMBA处理MG-63细胞作为阳性对照.光学显微镜与电子显微镜观察结果显示细胞形态与超微结构产生了细胞形态规则、大小一致、细胞铺展体积增大,核质比例减小、核内核仁数目减少、细胞器丰富发达等与正常细胞相似的恢复性变化.观察到MG-63细胞终末分化指标I型胶原、骨粘素、骨钙蛋白的阳性表达及钙化糖原颗粒的增多与典型骨节结的形成,其变化结果与HMBA处理细胞类似.本研究证实人参皂甙Rg1能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并增强成骨细胞相关的终末分化指标的表达,从而对MG-63细胞的终末分化具有一定的诱导作用.

化岩胶囊对成骨肉瘤细胞生长抑制作用的实验研究

目的 :观察化岩胶囊对成骨肉瘤细胞的生长抑制作用。方法 :将对数生长期的成骨肉瘤细胞以 5× 10 4 /ml浓度接种于 2 5ml培养瓶 ,每瓶 4ml,每组设 3瓶 ,37℃、 5 %CO2 温箱中培养4 8小时 ,分别加入浓度为 1mg/ml、 5mg/ml、 10mg/ml的化岩胶囊 ,药物作用 8、 16、 2 4、 4 8小时 ,空白对照组仅更换培养液 ,收集细胞 ,计算坏死细胞率。结果 :空白对照组和 1mg/ml、5mg/ml、 10mg/ml化岩胶囊处理 2 4小时 ,细胞坏死率分别为 2 2 %、 8 5 %、 33 6 %、 93 2 % ,5mg/ml化岩胶囊处理 8、 16、 2 4、 4 8小时 ,细胞坏死率分别为 4 1%、 11 1%、 33 6 %、87 4 %。结论 :化岩胶囊对人成骨肉瘤细胞有明显的抑制作用 。

凋亡素诱导人成骨肉瘤细胞多药耐药株凋亡的研究

目的 :研究凋亡素对人成骨肉瘤细胞OS 732多药耐药株R OS 732的作用。方法 :凋亡素基因VP3 经酶切后克隆入质粒 pIRES1,获得重组质粒pIRVP3,通过脂质体法 pIRVP3转染R OS 732细胞 ,RT PCR检测凋亡素在细胞中的表达 ;光镜及电镜下观察瘤细胞 ;提取瘤细胞基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳 ;流式细胞仪检测凋亡率。结果 :凋亡素基因已在转录水平表达 ;光镜及电镜下 2组细胞形态变化明显 ;电泳见转染组DNA呈梯状条带 ,对照组为单一条带 ;转染组凋亡率明显高于空白对照组 (P <0 .0 1)。结论 :凋亡素可有效诱导R OS 732细胞凋亡。

MDP-阿霉素脂质体交联物治疗大鼠成骨肉瘤的药效学研究

目的 :制备出 MDP-阿霉素脂质体交联物 (MDP-L ADM) ,观察 MDP-LADM治疗大鼠成骨肉瘤 UMR10 6模型的疗效 ,并与游离阿霉素 (ADM)及阿霉素脂质体 (L ADM)作比较。方法 :建立 SD大鼠 U MR10 6成骨肉瘤模型 ,将磷脂修饰后用1,4-二异氰基甲苯酯 (TDI)与 MDP交联 ,用改良的逆向蒸发法将其制备成阿霉素脂质体 -MDP交联物。将荷瘤大鼠随机分为五组 ,即生理盐水组、ADM组、游离 ADM+空白脂质体组、LADM组及 MDP-L ADM组 ,观察它们对大鼠的抑瘤作用。用高效液相色谱测定阿霉素在骨组织及其它器官中的含量。结果 :MDP-阿霉素脂质体交联物对阿霉素包裹率为 92 .3 % ,MDP交联率为 70 .2 % ,对 SD大鼠 UMR10 6成骨肉瘤模型的抑瘤作用明显高于阿霉素 (P<0 .0 1)和阿霉素脂质体 (P<0 .0 5 ) ,治疗后大鼠生存期明显延长 (P<0 .0 1) ,阿霉素在骨组织中的含量明显增加。结论 :MDP-阿霉素脂质体交联物可明显提高阿霉素脂质体对骨肿瘤的治疗作用 。