牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。

基于Penton蛋白禽腺病毒血清4型间接ELISA抗体检测方法的建立

Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,Penton蛋白最佳包被质量浓度为2μg/mL,血清稀释倍数为200倍,酶标抗体稀释倍数为1∶5000,阳性临界值为0.222,敏感性可达到1∶6400,与鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒均无交叉反应,特异性良好,批间批内重复性变异系数均<10%,在100份临床血清中阳性检出率为77%,与商品化试剂盒检出符合率可达98%。综上,建立的ELISA抗体检测方法可以用于禽腺病毒4型临床抗体检测。

三种不同方法对肺炎支原体抗体检测价值分析

探讨与分析三种不同方法对肺炎支原体(mycoplasm pneumonia,MP)抗体检测价值。方法 2023年8月到2023年9月选择在医院诊治的呼吸道感染患者82例作为研究对象,抽取患者的血液,采用被动凝集法(passive agglutination method,PA)、酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和量子点荧光免疫层析法检测肺炎支原体抗体情况。结果 在82例患者中,被动凝集法、酶联免疫法、量子点荧光免疫层析法检测的肺炎支原体抗体阳性率分别为52.44%、62.20%、74.39%,对比差异有统计学意义(P<0.05)。肺炎支原体快速培养为肺炎支原体抗体阳性60例,被动凝集法、酶联免疫法、量子点荧光免疫层析法对肺炎支原体检测的敏感性分别为68.33%(41/60)、81.67%(49/60)、100.00%(60/60)、特异性分别为90.91%(20/22)、90.91%(20/22)、95.45%(21/22),量子点荧光免疫层析法检测的敏感性显著高于被动凝集法、酶联免疫法检测(P<0.05),三种方法检测的特异性对比无统计学意义差异(P>0.05)。结论 被动凝集法、酶联免疫法、量子点荧光免疫层析法对肺炎支原体抗体的检测都有很好的应用可行性,量子点荧光免疫层析法对肺炎支原体抗体的检测具有更高的敏感性。

血清中新型冠状病毒抗体检测技术的研究进展

抗体检测与核酸检测的联合诊断方式在新冠疫情早期流调溯源、感染确诊等方面发挥着重要作用。目前国内外针对新型冠状病毒抗体检测产品的开发主要基于酶联免疫吸附技术、免疫层析技术及化学发光免疫分析技术进行研究,每种检测方法各有优势与不足,在检测性能上也各有差异,相关检测产品相继问世并不断更新优化。本文介绍相关检测方法的检测性能、研究进展等,为临床方法选择、新型抗体检测产品的研究与发展提供参考,推进新型冠状病毒抗体检测产品的应用与研发。

血小板抗体检测在评估反复血小板输注患者血小板输注效果的应用分析

目的:探讨血小板抗体检测在反复血小板输注患者血小板输注效果评估中的应用.方法:选取2020年9月至2023年9月漯河医学高等专科学校第二附属医院收治的70例反复血小板输注患者为研究对象.对患者进行血小板抗体检测,依据血小板抗体检测结果,将其分为阳性组(n=28)和阴性组(n=42).采用统计学方法,比较两组患者血小板校正计数增加值(CCI)、输注无效率及非溶血性输血反应(NHTR)发生率.结果:阳性组患者血小板输注后1h、1d时的血小板CCI值均低于阴性组,输注无效率、NHTR发生率均高于阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:血小板抗体检测对于反复血小板输注患者的血小板输注效果评估具有重要意义,血小板抗体阳性会影响血小板输注效果.

2016-2020年云南省部分猪场猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体检测分析

为了解2016年-2020年云南省部分地区猪场猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫情况,采集了云南省9个州市188个健康猪场的4179份血清样品,应用ELISA方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测,分析不同州市、不同年份的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率。结果显示,4179份血清样品中,阳性样品2932份、阴性样品1247份,总体抗体阳性率为70.16%;2016-2018年云南省部分地区抗体阳性率分别为76.97%、76.32%、75.75%,达到我国农业农村部要求的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率70%的标准;2019-2020年抗体阳性率分别为63.68%、56.50%,未达到农业农村部规定的标准。9个州市中,保山、楚雄、红河、普洱、版纳、玉溪的抗体阳性率分别为84.85%、70.75%、76.46%、80.67%、76.82%、81.39%,达到农业农村部规定标准;大理、昆明、曲靖抗体阳性率分别为61.89%、67.42%、57.88%,未达到农业部规定标准。结果表明,云南省部分地区总体猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率呈现下降趋势,各州市抗体阳性率也存在差异性。为了降低猪繁殖与呼吸综合征疫情发生风险,建议定期做好猪繁殖与呼吸综合征病毒血清学、病原学监测,优化猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫策略,制定更加科学合理的综合防控方案,从而进一步保障云南省生猪养殖业高质量发展。

血清4型禽腺病毒Fiber蛋白的原核表达及其在抗体检测中的应用

为建立特异的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)血清学抗体检测技术,试验将FAdV-4纤突蛋白基因fiber-2克隆至载体pET-28a中,构建原核表达载体pET-28a-Fiber-2,获得纯化的重组蛋白His-Fiber-2,以纯化的His-Fiber-2作为包被抗原建立检测Fiber-2抗体的间接ELISA方法,对该方法进行特异性、重复性、稳定性、灵敏性试验,并与BioChek FAdV商品化ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果显示:建立的ELISA仅与抗FAdV-4阳性鸡血清发生反应,与检测的抗其他病原的血清以及SPF鸡血清均无反应性,批间重复性与批内重复性良好,其变异系数分别在4.345%~6.983%和4.326%~9.391%之间,包被酶标板保存12个月后,变异系数为4.4%~10.0%,其检测灵敏度是间接免疫荧光检测技术的8~32倍,是基于包被GST-Fiber-2蛋白ELISA的2倍;建立的ELISA对FAdV-4灭活疫苗免疫的鸡血清检出率高于BioChek试剂盒,两者对临床感染FAdV-4的鸡血清的检测结果一致。研究表明,试验构建的基于重组蛋白His-Fiber-2的检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法为临床上FAdV-4感染监测以及疫苗的免疫评价提供了技术,具有良好的应用前景。

H7亚型禽流感病毒荧光微球抗体检测方法的建立

为建立一种简便、快速、特异的H7亚型禽流感病毒抗体检测方法,将荧光微球偶联标记鼠抗鸡IgG,并将羊抗鼠IgG和重组H7亚型禽流感病毒HA蛋白分别作为质控线(C线)和检测线(T线),喷涂于硝酸纤维素膜上。采用单一变量分析法对反应体系进行了优化,随后对该方法的敏感性、特异性、重复性及符合率进行了评估。结果显示:本研究建立的H7亚型禽流感病毒荧光微球抗体检测方法比参照国标建立的血凝抑制试验灵敏度高2倍;特异性较好,对H5亚型禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病病毒和鸡减蛋综合征病毒等常见禽病病原阳性血清的检测结果均为阴性;重复性试验结果的变异系数为3.13%~8.46%,具有较好的重复性;本研究方法和血凝抑制试验血清抗体检测结果的总体符合率为95.67%,两种方法具有较高的一致性。结果表明,本研究建立的H7亚型禽流感病毒荧光微球抗体检测方法性能稳定、结果可靠,为H7亚型禽流感快速检测提供了新方法。

酶联免疫法与胶体金层析法对HIV抗体检测结果的比较

目的评估酶联免疫法与胶体金层析法对HIV抗体的检测性能。方法2021—2022年对3423份血液样本同时用酶联免疫法和胶体金层析法检测,以免疫印迹法为金标准确证结果。结果酶联免疫法检出有反应样本5份,胶体金层析法检出有反应样本9份,经免疫印迹实验确证阳性4份。酶联免疫法假阳性1份,假阳性率0.03%;胶体金层析法假阳性5份,假阳性率0.15%,2种方法差异无统计学意义(χ^(2)=2.64,P=0.26)。2种方法检测HIV抗体的灵敏度均为100%,酶联免疫法的特异度(99.97%)略高于胶体金层析法(99.85%),Kappa值均≥0.6,检测一致性较好。结论酶联免疫法和胶体金层析法均可用于HIV抗体检测,酶联免疫法的假阳性率更低,胶体金层析法操作更为简便,可结合实际需要选择合适的方式进行HIV筛查。

猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光层析抗体检测方法的建立

为了给临床诊断提供准确便捷的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测方法,本试验以镧系快速高敏荧光定量检测系统为基础,通过研制PRRSV(美洲型)抗体荧光微球检测卡,建立具备简便、快速、定量等优势的荧光层析抗体检测方法。试验结果:特异性试验中5份特异性质控血清的检测结果均为阴性;敏感性试验中同一批次试纸的阳性检出率均为100%(20/20),阴性检出率均为100%(20/20);临床试验中共检测482份血清,与市售试剂盒的阴性符合率为84.7%,阳性符合率为91.3%,符合率为91.07%。结论:本试验建立的荧光层析抗体检测方法在PRRSV(美洲型)的检测中表现出较好的特异性和敏感性,对PRRSV(美洲型)的快速诊断和检测具有重要临床意义。

分泌表达柔嫩艾美耳球虫EtMIC2重组枯草芽孢杆菌的构建与抗体检测

鸡球虫病是一种严重危害养鸡业生产的流行性肠道寄生原虫病,可造成严重的经济损失。目前,应用抗球虫药是防治球虫病的主要手段,但随着抗药性和环境污染等问题的出现,抗球虫疫苗的研究成为防控球虫病的热点。柔嫩艾美耳球虫是鸡球虫病的主要病原,因此,研究旨在通过芽孢杆菌表达系统,构建能够分泌表达柔嫩艾美耳球虫微线体蛋白2(Eimeria tenella isolate microneme protein 2,EtMIC2)重组枯草芽孢杆菌菌株,为研发新型鸡球虫疫苗奠定基础。首先,采用PCR及质谱分析方法鉴定食用性及饲用性菌株,然后从柔嫩艾美耳球虫基因组中扩增EtMIC2基因,通过无缝克隆技术将其克隆至pBE2-R质粒中,构建重组质粒pBE2-R-EtMIC2,并采用冰浴转化将重组质粒分别整合至两株枯草芽孢杆菌中,最后采用PCR、SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。将重组菌株饲喂雏鸡,免疫7 d后初步检测抗体效价。结果表明:EtMIC2基因克隆成功,且成功整合于饲用性枯草芽孢杆菌基因组,目的蛋白正确表达,并分泌至胞外,将重组菌株饲喂给雏鸡后,血液中检测出EtMIC2抗体。研究成功构建了分泌表达柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的重组枯草芽孢杆菌,且重组菌株能刺激动物产生抗体,可用于后续的抗球虫免疫保护性试验。

2022-2023年新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体检测及分析

研究旨在了解2022—2023年新疆部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平,以期为该病的科学防控提供参考。试验采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对来自3个地区11个猪场的296份血清样品进行PCV2抗体检测。结果显示,PCV2抗体平均阳性率为85.47%(253/296),高于国家规定标准(70%);在调查的11个规模化猪场中,除A场和C场的PCV2抗体水平未达到国家规定标准外,81.82%(9/11)的猪场PCV2抗体水平均达到群体免疫的抗体水平和免疫标准。研究表明,新疆地区猪场PCV2的整体免疫效果较好,但部分猪场的PCV2抗体水平较低,需要对现有免疫程序进行调整和完善,确保各猪群健康。

妊娠期妇女血小板抗体检测结果的影响因素分析

目的 检测血小板(PLT)抗体在妊娠期妇女血清中的表达情况,探讨分析该人群PLT抗体阳性的相关影响因素。方法 选取2 790例妊娠期妇女为研究对象,采用红细胞固相凝集法进行PLT抗体筛查,抗体阳性者进一步检测血小板抗-人类白细胞抗原(HLA)与抗-人类血小板抗原(HPA),分别按有无输血史、有无既往妊娠史、民族、孕周进行分组,分析妊娠期妇女PLT抗体阳性的影响因素。结果 2 790例妊娠期妇女中检出PLT抗体367例(总阳性率13.15%),其中抗-HLA、抗-HPA和抗-HLA+抗-HPA占比分别为47.96%、39.24%和12.80%;有无输血史组间、有无既往妊娠史组间PLT抗体总阳性率分别比较,差异有统计学意义(P<0.05);汉族与少数民族组间PLT抗体总阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);按孕周分组发现,随着孕周增加,抗-HLA阳性率随之升高(P<0.05),且有9例孕早期PLT抗体阴性孕妇,孕晚期PLT抗体转阳;其中输血史和既往妊娠史是PLT抗体产生的危险性因素。结论 妊娠期妇女PLT抗体阳性分型结果以抗-HLA为主,PLT血型抗体的产生与既往妊娠史和输血史密切相关,根据输血史和妊娠史,可对妊娠期妇女PLT抗体进行更有效的动态监测。

两种梅毒抗体检测方法在梅毒早期诊断中的应用

目的分析梅毒早期诊断中两种梅毒抗体检测方法的应用效果。方法从梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验为阳性患者中选择117例,另选择健康体检者113例,所有研究对象均接受梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验和甲苯胺红不加热血清试验进行检验,以梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验结果为金标准,分析甲苯胺红不加热血清试验的检查结果及诊断敏感性和特异性。结果梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验检出阳性117例,阴性113例。以梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验结果为金标准,甲苯胺红不加热血清试验检出阳性患者99例、占比43.04%,阴性患者131例、占比56.96%,诊断敏感性、特异性分别为84.62%(99/117)和100.00%(113/113)。结论梅毒传染性较强,对身体危害大,因此需尽早筛查尽早治疗,避免延误治疗时机。梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验灵敏性较高,可以提升诊断质量,减少误诊,但该检测方式费用更高,操作较为复杂,因此在实际检测过程中可以使用甲苯胺红不加热血清试验进行筛查,联合两种检测方式效果更优。

猪伪狂犬病毒抗体检测方法的研究进展

伪狂犬病,也称阿氏病(Aujeszky'sdisease),是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种高度传染性疾病。在没有特定宿主的情况下,伪狂犬病毒可以侵入多种哺乳动物,包括猪、牛、羊等,从而导致易感动物发生严重的临床症状和急性死亡。我国于20世纪50年代首次报道猪伪狂犬病,且自2011年以来,部分地区出现新的猪伪狂犬病变异株,致使养猪业遭受严重的经济损失。尽管科学家们一直在致力于诊断方法的设计和相关疫苗的开发,但伪狂犬病仍在养猪业广泛存在,近些年发现其对人类的健康也存在着潜在威胁,从而引起了世界范围内的强烈关注。目前我国的猪场普遍实行伪狂犬疫苗免疫,因此检测免疫后疫苗产生的抗体水平至关重要。本文总结目前对PRV的抗体检测方法,针对其优缺点进行对比分析,以对猪场临床上选择抗体检测方法提供参考。

2023年湖南部分地区猪场CSFV、PRRSV、PRV的抗体检测与分析

为研究我国湖南部分地区猪场猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)的疫苗免疫状况和病毒感染状况,2023年上半年,对湖南不同猪场随机采集的221份血清样品,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)分别对该三种疫病进行抗体检测。结果表明,CSF、PR的免疫情况较好,抗体阳性率均高于农业农村部规定的70%的标准;猪瘟病毒(CSFV)平均抗体阳性率为89.1%;猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)平均抗体阳性率为65.2%;猪伪狂犬病毒(PRV)gB的抗体阳性率为87.3%、gE的抗体阳性率为10.4%,存在野毒感染的情况;综上所述,建议定期合理地对猪群进行抗体检测,并通过检测结果来调整免疫程序,进而提高猪群疫病的防控水平。

2023年江西部分地区猪场CSFV、PRRSV、PRV的抗体检测与分析

为了解我国江西不同地区的中小型猪场猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)的疫苗免疫水平和病毒感染状况,2023年上半年通过酶联免疫吸附(ELISA)对采自江西四个地区的中小型猪场的234份血清样品进行抗体检测。结果表明,CSF、PR的免疫情况较好,PRRS的免疫情况较差;猪瘟病毒(CSFV)平均抗体阳性率为96.2%;猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)平均抗体阳性率为51.3%;猪伪狂犬病毒(PRV)gB的抗体阳性率为90.2%、gE的抗体阳性率为0.4%,存在野毒感染的情况,本研究旨在为江西部分地区猪CSFV、PRRSV、PRV的科学防控提供一定参考。

食物特异性IgG抗体检测在儿童功能性腹痛中的价值研究

研究食物特异性IgG抗体检测在儿童功能性腹痛中的价值。方法 选取2022年6月至2023年6月柳州市工人医院儿科所诊治的功能性腹痛病例,进行食物特异性IgE、IgG检测,研究对象是食物特异性IgE结果阳性(n=30)、食物特异性IgG结果阳性(n=30)、食物特异性IgG、IgE结果均为阴性(n=15),并且对入组的IgE阳性病例,分为IgE治疗组(n=15,根据食物特异性IgE阳性结果进行食物回避免),IgE对照组(n=15,正常饮食,未进行食物回避免);对入组的IgG阳性病例,分为IgG治疗组(n=15,根据食物特异性IgG阳性结果进行食物回避),IgG对照组(n=15,正常饮食,未进行食物回避);对IgE、IgG结果均为阴性病例,作为空白对照组(n=15,正常饮食),根据检测结果进行饮食回避治疗的有效性。结果 食物特异性IgE检测中,鸡蛋、牛奶的阳性率最高,其中鸡蛋阳性检出有25例、占比83.3%,牛奶阳性检出有23例、占比76.7%。食物特异性IgG检测中,鸡蛋、牛奶、小麦的阳性率最高,其中鸡蛋阳性检出有24例、占比80.0%,牛奶阳性检出有25例、占比83.3%,小麦阳性检出有24例、占比80.0%;IgE治疗组、IgG治疗组的腹痛需药物治疗次数及用药时间、疼痛视觉模拟评分优于IgE对照组、IgG对照组,p<0.05;经过八周干预后复查,食物特异性IgE阳性中有20例得以好转、比例是66.7%;IgG阳性中有22例得以好转、比例是73.3%。即治疗干预效果显著,缓解患儿功能性腹痛症状。结论 食物特异性IgG抗体检测的应用价值显著,食物过敏是引起儿童有功能性腹痛的关键因素,需要以食物特异性IgG抗体检测为指导加以健康饮食干预,缓解功能性腹痛患儿腹痛症状或者预防食物过敏所致功能性腹痛。

湖南省某育肥猪场4种主要疫病的病原和抗体检测及分析

【目的】对湖南省某育肥猪场新引仔猪进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的血清学和病原学调查,旨在了解猪群中各病毒的抗体水平和病原感染情况,为猪场的疫病防控和净化提供科学依据。【方法】采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对采集的81份血清样本进行抗体检测;并随机抽取30份抗凝全血样本提取核酸后使用商业化qPCR检测试剂盒进行病原检测。【结果】血清学调查结果显示,81份血清样本中CSFV抗体阳性率为13.58%(11/81),PRRSV抗体阳性率为95.06%(77/81),PRV-gE抗体阳性率为0.00%(0/81),PCV2抗体阳性率为93.82%(76/81);病原调查结果显示,CSFV病原阳性率为0.00%(0/30),PRRSV病原阳性率为90.00%(27/30),PRV病原阳性率为0.00%(0/30),PCV2病原阳性率为80.00%(24/30)。批次猪群CSFV抗体水平未达到国家规定标准(> 70.00%),且存在PRRSV和PCV2感染。对该批次猪群紧急补免CSF(猪瘟)活疫苗,接种疫苗2周后再次随机抽取81份血清样本进行抗体检测,CFSV抗体阳性率为27.16%(22/81),仍未达到国家规定标准(> 70.00%)。【结论】该批次猪群中存在PRRSV和PCV2的感染,这可能导致猪只免疫抑制,导致CSF疫苗的免疫失败。结果提示该猪场需做好PRRSV和PCV2的防控与净化,定期监测猪场常见疫病的抗体水平和病原感染情况,优化免疫方案,加强生物安全,保障猪场正常生产活动的开展。

泰安市部分地区产蛋鸡群高致病性禽流感抗体检测分析与防控

为了解泰安地区产蛋鸡群高致病性禽流感的免疫情况及感染风险,本研究采用血凝及血凝抑制试验对从泰安市三个地区共九家规模化蛋鸡场产蛋鸡群采集的144份血清样本进行抗体检测。检测结果显示,144份血清样本中,H5-14亚型抗体滴度在6~12之间,平均滴度8.17,场和样品合格率均为100%;H7-4亚型抗体滴度在4~12之间,平均滴度7.10,场合格率为77.78%,样品合格率95.14%,其中H5-14亚型禽流感的抗体滴度平均值较H7-4亚型高。上述结果表明,泰安部分地区产蛋鸡群高致病性禽流感免疫效果较好,未见抗体水平过高及离散度过大的疑似感染鸡群。但个别鸡场H7亚型抗体水平存在偏低的情况,应加强抗体水平检测,评估鸡群免疫状态及感染风险,以期为疫苗选择及免疫程序制定提供参考依据。