抗独特型抗体在CD47单抗治疗患者抗体筛查和配血中的应用

目的 对接受CD47单克隆抗体治疗的受试组患者使用CD47抗独特型抗体(CD47 anti-idiotypic antibody, CD47 AID)中和法(方法1)与缺乏抗IgG4抗人球蛋白法(方法2)进行输血前抗体筛查和主侧配血,比较经此两种方法配血后的输注效果,以评估CD47 AID中和法的可行性。方法 对本院接受CD47单克隆抗体治疗的18位临床受试者用药物后标本,使用方法1与方法2进行抗体筛查和主侧配血,比较输血后血红蛋白差值ΔHb(输血后Hb-输血前Hb)是否有差异;比较使用方法1进行配血的受试组患者与对照组患者(使用普通微柱凝胶法配血且未使用CD47单抗)输血后ΔHb是否有差异。结果 使用方法1与使用方法2进行配血的患者输血后ΔHb比较,两者之间无统计学差异(8.40±0.71 vs 7.36±0.94,P>0.05);使用方法1进行配血的受试组患者与未使用CD47单抗的对照组患者输血后ΔHb比较,两者之间无统计学差异(8.40±0.71 vs 6.59±0.77,P>0.05)。结论 受试组患者采用方法1配血具有与方法2配血相同的输注效果,且具有操作简单、结果客观准确的特点,推荐使用方法1对使用CD47单抗的患者进行输血前抗体筛查及主侧配血。

抗独特型抗体在半抗原免疫检测中的应用

小分子半抗原的检测在食品药品检验、环境检测和疾病诊断等领域具有重要意义,但目前针对半抗原的免疫检测在灵敏度方面表现欠佳。抗独特型抗体(anti-idiotypes,Ab2)发现于20世纪初,主要分为3种亚型:Ab2α、Ab2β和Ab2γ。Ab2除了可以用于预防和治疗疾病外,在免疫检测中也有潜在的应用价值。概述了Ab2在竞争性、非竞争性及基于噬菌体免疫分析中的应用,包括检测模式及效果。无论是在竞争法中采用合适的Ab2替代半抗原衍生物,还是在非竞争法中采用针对一抗和半抗原复合物的抗伴型抗体,都能提高检测灵敏度,改善交叉率。Ab2的应用是未来体外诊断试剂盒开发的一个重要思路。此外,还对目前Ab2的几种开发方法进行了分析,较之传统抗体开发技术,天然纳米抗体库可能是获取Ab2更为实用的一种方式。

卵巢癌单克隆抗-抗独特型抗体32F2的制备及其特性研究

目的6B11是可模拟卵巢癌抗原的鼠源性抗独特型单克隆抗体,为了深入探讨其作为肿瘤疫苗的主动免疫机制,制备抗6B11的IgG型抗-抗独特型单克隆抗体并对其特性进行研究。方法以卵巢癌抗独特型抗体6B11作为免疫原,与载体钥孔槭血兰蛋白(KLH)偶联并辅以福氏佐剂,多次免疫同系Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合;采用酶联免疫吸附实验(EL1SA)筛选杂交瘤细胞,经克隆化后建立稳定分泌鼠源性抗-抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株。秋水仙素法确认杂交瘤细胞染色体数目及形态,ELISA法鉴定抗体类型,采用非竞争酶免疫结合实验测定抗体亲和力,EL1SA、免疫组织化学方法检测抗-抗独特型单克隆抗体特异性结合抗原的性质。结果制备出一株能稳定分泌抗-抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为32F2。其染色体数目平均为103条,并有端着丝点和亚中部着丝点染色体,符合小鼠杂交瘤细胞特点。抗体类型为IgG1型,抗体亲和力约为2.3119×107L/mol,能够竞争抑制卵巢癌单克隆抗体COC166-9与原始抗原OC166-9的结合,免疫组织化学染色证实32F2鼠腹水与84.6%卵巢浆液性乳头状囊腺癌呈阳性染色,与COC166-9类似,表明32F2可与OC166-9抗原产生特异性结合。结论通过杂交瘤技术建立了分泌IgG1亚型的卵巢癌抗-抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对抗体的初步研究显示其能特异性结合初始抗原OC166-9,并能竞争抑制COC166-9与OC166-9的结合,属Ab1样Ab3,间接证实6B11为抗原内影像型抗体,具有模拟抗原作用。32F2的制备成功为进一步研究卵巢癌抗独特型疫苗6B11的作用机制打下了基础,并且该抗体具有潜在的临床治疗卵巢癌的价值。

钙纳米颗粒作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的研究

目的 探索钙 (Ca)纳米颗粒作为日本血吸虫病抗独特型抗体 NP30疫苗佐剂的可行性。方法 将钙纳米颗粒与 NP30制备成 Ca- NP30结合物 (Ca- NP30 ) ,主动免疫 BAL B/ c小鼠 ,观察其对小鼠的保护性作用并探讨其免疫保护机制。结果 Ca纳米颗粒可增强 NP30对宿主的保护性作用 ,减虫率明显提高 ,从单用 NP30的 30 .4%提高到 5 7.8% ;血清特异性抗体 Ig G水平较对照组显著升高 ;足垫试验可引发迟发型变态反应。结论 Ca纳米颗粒可作为血吸虫病抗独特型抗体 NP30疫苗的佐剂 ,其作用机制与同时引起宿主体液免疫和细胞免疫应答增强有关。

封闭抗体的抗独特型抗体在反复自然流产中的应用价值

为了观察在反复自然流产（ＲＳＡ）中独特型抗体－抗独特型抗体网络的作用，分别测定正常生育组、原发性ＲＳＡ、继发性ＲＳＡ的封闭抗体效率（Ａｂ１）和抗独特型抗体（Ａｂ２），以及原发性ＲＳＡ免疫治疗前后Ａｂ２的变化。结果发现：正常生育组的Ａｂ１和Ａｂ２分别为７．５３％和１０．７０％；而原发性ＲＳＡ分别为－５５．５１％和－４２．６８％；继发性ＲＳＡ则分别为２９．９８％和－３０．００％，免疫治疗前后，原发性ＲＳＡ患者体内的Ａｂ２水平有明显差异，并随着免疫次数的增多，Ａｂ２水平有逐渐增高趋势。结果表明：原发性ＲＳＡ主要是因为体内缺乏ＴＬＸ的封闭抗体及其抗独特型抗体，而继发性ＲＳＡ仅显示封闭抗体的抗独特型抗体缺乏。因此封闭抗体的Ａｂ２可区分ＲＳＡ临床型并作为ＲＳＡ诊疗措施的重要指标。

酶标记抗独特型抗体NP30的Dot-ELISA检测血吸虫抗体

本文报道用辣根过氧化物酶标记抗独特型抗体NP_(30)进行Dot-ELISA直接法,检测人血清中的日本血吸虫抗体。急性血吸虫病人粪检阳性符合率88.9％:慢性病人74.1％;正常人的假阳性率为3％。与常规ELISA方法相比,均无显著的差别。提示用酶标记NP30的Dot-ELISA同样可以用于检测日本血吸虫抗体,且方法简便易行,便于现场应用。

黄曲霉毒素B_1抗独特型抗体的制备和应用研究I 抗独特型抗体的制备和性质研究

以黄曲霉毒素B1(AFB1)与牛血清蛋白(BSA)的连接物AFB1-BSA注射免疫兔子获得抗AFB1抗血清,经(NH4)2SO4沉淀、酶切处理与亲和层析分离纯化后,得到抗AFB1独特型抗体Ab1及其酶切片段Fab1,然后再将Fab1注射免疫BALB/c小鼠,得到抗(抗AFB1)独特型抗体Ab2及其酶切Fab2。研究了Ab2和Fab2的性质,结果表明,Ab2和其Fab2都仅与Ab1及其Fab1反应,而不和抗桔霉素等其他抗体反应,有较好的特异性。以AFB1与卵清蛋白(OV)的连接物AFB1-OV为包被抗原,Fab1为反应抗体,Ab2和Fab2为竞争抗原,达到50%的竞争抑制率时,Ab2和Fab2的浓度分别为3.98ug/ml和1.12ug/ml;而以Ab2和Fab2为包被抗原,Fab1为反应抗体,AFB1为竞争抗原,达到50%的竞争抑制率时,AFB1的浓度分别为44.67ug/L和6.31ug/L,这表明无论是Ab2还是Fab2都和AFB1有很好的内影像关系,可以作为AFB1的替代品用于AFB1的免疫学检测。但是相对而言,由于Fab2的分子量小,反应时的空间位阻小,所以Fab2更适合于用作AFB1的替代品。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对虫卵肉芽肿免疫调节作用的研究

目的研究日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对虫卵肉芽肿的影响。方法 ＮＰ３０腹腔注射主动免疫ＩＣＲ小鼠，对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水，分别在尾蚴攻击感染后第４、８、１２、１６、２０、２４周处死，观察和比较肝内虫卵肉芽肿的形成和演变。应用计算机图像分析技术，测量虫卵肉芽肿大小。结果尾蚴攻击感染第 １２周以后， ＮＰ３０免疫组虫卵肉芽肿的直径明显低于 ＳＰ２／０对照组，虫卵肉芽肿的演变时相提前，并出现２种特殊类型的肉芽肿。结论ＮＰ３０能减轻日本血吸虫对宿主造成的免疫病理损害。

抗独特型抗体NP30对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的调节作用

目的 研究单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的影响。方法 实验组ICR小鼠腹腔注射NP30 10 0 μg/次 ,连续免疫 3次 ,对照组腹腔注射SP2 / 0腹水。尾蚴攻击感染后第 4、8、12、16、2 0和 2 4周分别处死小鼠剖取肝脏 ,用VG(VanGieson)组织化学染色 ,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白 (FN)免疫组织化学染色 ,应用计算机图像分析系统对肝脏虫卵肉芽肿体积和虫卵肉芽肿内的胶原沉积进行定量测定。结果 尾蚴攻击感染第 12周后 ,实验组虫卵肉芽肿的体积明显小于对照组 ,虫卵肉芽肿细胞组分与对照组明显不同 ,出现两种不典型肉芽肿。VG染色显示实验组虫卵肉芽肿内胶原的平均光密度值明显小于对照组。免疫组织化学显示实验组虫卵肉芽肿内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及FN含量均比对照组低。结论 NP30接种可能诱导体液和细胞两种保护性免疫 ,对血吸虫病虫卵肉芽肿具有负调节作用 。

日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区应用效果的评价

目的评价日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区血吸虫病流行现场的应用效果。方法对云南大山区血吸虫病流行区的506位居民进行粪检,同时用NP30抗体检测法和血吸虫抗体ELISA检测试剂盒(SEA-ELISA)分别对其血清进行检测,评价NP30抗体检测法的敏感性;同时检测非流行区的100份血清确定其特异性。结果NP30抗体检测法和SEA-ELISA法的粪检阳性符合率分别为87.80%(144/164)和84.76%(139/164);两者的特异性分别为96.00%(96/100)和94.00%(94/100),差异均无显著性(P均>0.05),但在粪孵阴性人群血清样本中,NP30抗体检测法和SEA-ELISA法的检出率分别为44.15%(151/342)和70.47%(241/342),差异有显著性(P<0.05)。结论NP30抗体检测法可用于云南大山区血吸虫病筛查。

噬菌体抗体库技术筛选结肠癌单抗MC3的抗独特型抗体

目的 :获得结肠癌单抗MC3的噬菌体呈现型抗独特型抗体 (anti Id)。方法 :分离经单抗免疫鼠脾脏的mRNA ,经RT PCR分别扩增抗体VH和VLDNA ,进而连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7挽救后获得噬菌体呈现型ScFv文库。以MC3对文库进行四轮筛选后 ,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现anti IdScFv的噬菌体单克隆。结果 :VH、VL和ScFvDNA分别约为 34 0、32 0和 75 0bp。抗体ScFv文库经四轮筛选后 ,在随机筛检的 5 0个克隆中得到 15个呈现anti IdScFv的噬菌体单克隆。结论 :用噬菌体抗体库技术成功地获得了单抗MC3的anti IdScFv,从而为进行结肠癌重组anti

大容量天然人源Fab抗体库的构建及日本血吸虫抗独特型抗体的筛选、鉴定

目的:构建大容量天然人源Fab抗体库,筛选全人源日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:采集15位健康成人的骨髓淋巴细胞,构建天然人源Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了2×109大容量天然人源Fab抗体库,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过6轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取80个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(C12、C19、D1、D2),其中C12经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了大容量天然人源Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体C12,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。

鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答

目的探讨抗独特型抗体(Ab2)2H4和5D3模拟抗原诱导免疫应答的能力。方法用Ab2免疫Balb/c小鼠获得抗血清 ,以ELISA检测其Ab3,WesternBlot分析其识别抗原的分子质量。用迟发型超敏反应(DTH)和淋巴细胞增殖试验 ,检测Ab2诱发细胞免疫反应的能力。结果2H4,5D3免疫同系动物产生的含有抗抗独特型抗体(Ab3)的抗血清 ,可特异性地与靶细胞结合。FC2(Ab1)和经2H4免疫的Ab3可识别相对分子质量(Mr)相同约68000的抗原 ,且不同于HNL5(Ab1)和5D3免疫的Ab3所识别的抗原(Mr80000)。在DTH试验中 ,所致小鼠足垫肿大的程度 ,2H4和5D3实验组均显著高于对照组。而在淋巴细胞增殖试验中 ,Ab2免疫鼠脾T细胞在体外对靶细胞或Ab2的再次刺激呈现明显的细胞增殖反应 ,而无关肿瘤细胞或抗体的刺激则不能引起细胞增殖。结论抗独特型抗体2H4和5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,能模拟不同分子质量的鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫应答。

抗独特型抗体在食用农产品危害物监控中的应用研究

食用农产品质量安全危害物来源广、种类多,从产地环境到农业投入品再到收储运环节,生物、化学污染物危害风险几乎伴随整个产供链。对危害物的高效监测,以及探索更为安全的危害物(特别是高毒投入品)替代功能效应物是食用农产品质量安全监控可持续发展的必然要求。基于“免疫网络学说”的抗独特型抗体,因具有模拟抗原表位构象乃至生物活性的特性,已被证实可以用于免疫原功能效应物创制,这为食用农产品质量安全危害物检测或功能替代材料研发提供了新思路。系统梳理了食用农产品产供过程中可能涉及的危害物及其安全风险;全面整理并介绍了抗独特型抗体技术及其在食用农产品质量安全危害物监控中的应用状况;结合作者及所在团队近年科研成果,探讨了抗独特型抗体在食用农产品质量安全危害物监控中的应用前景、存在问题以及拟解决对策。

抗人膀胱癌抗独特型抗体的制备和鉴定

目的 制备抗人膀胱癌抗独特型抗体 (Ab2 )并进行体外实验和鉴定 ,探讨通过免疫效应治疗或预防膀胱癌术后复发的可能性。方法 提取膀胱癌抗原 (Ag) ,应用膀胱癌抗原通过杂交瘤技术制备抗人膀胱癌单克隆抗体 (Ab1 )。 Ab1 经胃蛋白酶水解制备 Ab1 的 F(ab') 2片段 ,以 F(ab') 2片段免疫新西兰白兔 ,其血清经凝胶纯化后获抗人膀胱癌抗独特型抗体 (Ab2 )。采用 ELISA等方法进行鉴别。结果 Ab2 与 Ab1 呈阳性反应 ,与 BALB/ C小鼠γ球蛋白呈阴性反应 ;Ab2 与 Ag竞争结合 Ab1 ;Ab2 抑制 Ab1 与 Ag的结合。结论 Ab1 是针对膀胱移行细胞癌的单克隆抗体 ;Ab2是具有膀胱癌抗原内影像的抗独特型抗体。

噬菌体呈现技术制备结肠癌抗独特型抗体

以纯化的鼠抗人结肠癌细胞单克隆抗体 (简称单抗 )MC5与钥孔血蓝素 (KLH)的交联物经腹腔免疫Balb c小鼠 ,取脾分离mRNA .RT PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因片段 (VH 和VLcD NA ,大小分别约为 340bp和 32 0bp) ,二者经linkerDNA连接形成ScFv(singlechainvariablefragment)DNA(约 75 0bp) .将ScFvDNA与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7感染后 ,获得重组噬菌体抗体ScFv文库 .以单抗MC5对ScFv文库进行 4轮亲和筛选后 ,随机挑取 80个克隆经酶联免疫吸附实验 (ELISA)筛选出 2 2个呈现ScFv形式抗独特型抗体(抗 IdScFv)的噬菌体单克隆 .竞争抑制实验表明 ,在 2 2个阳性克隆中有 4个克隆所呈现的抗 IdScFv属β或γ型 .针对单抗MC5的噬菌体呈现型抗 IdScFv的制备 ,为筛选新的结肠癌重组抗

乙酰胆碱酯酶抗独特型抗体的研制

目的 研制乙酰胆碱酯酶 (Acetylcholinesterase ,AchE)抗独特型抗体并测定酶活性。方法 AchE单克隆抗体是一种IgG1抗体 ,先用木瓜蛋白酶酶切 ,然后采用AchE Sepharose 4B和SPA亲和层析柱进行提取纯化 ,获得纯化的单克隆抗体Fab段。以Fab作为抗原 ,免疫小鼠 ,制备抗Fab独特型抗体 ,采用酶催化ELISA法研究该单克隆抗体的乙酰胆碱酯酶活性。结果 制备出高效价抗乙酰胆碱酯酶抗体Fab段的独特型抗体 ,该抗体具有乙酰胆碱酯酶活性。结论 AchE单克隆抗体的独特型抗体具有AchE活性。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体基因的构建和表达

目的 构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体 (scFv)基因。 方法 通过PCR方法体外扩增并经测序验证的重链、轻链可变区 (VH、VL)基因先后重组入原核表达质粒 pTHA90相应的位点上 ,中间通过一连接肽 (Gly4 Ser) 3基因连接构建成单链抗体基因 (scFv) ,连接产物转化相应受体菌Top1 0 ,提取质粒 ,酶切鉴定重组克隆。表达产物经ELISA方法测定活性。 结果 重组克隆经酶切鉴定可见预期大小的片段 ,表明重组成功。表达产物经ELISA检测 ,OD4 92 值为 1 .0 6 ,高于阴性对照 3倍以上 ,证实具有与相应抗原结合的能力。 结论 成功地构建了scFv基因 。