竹叶黄酮对鸡胚接种新城疫疫苗免疫效果的影响

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C疫苗株)和BLF+TS组(注射0.1 mL含2%BLF和103.0 EID 50/0.1 mL的NDV TS09-C疫苗株的混合液),每组36枚种蛋。试验期间,统计种蛋的孵化率和雏鸡的存活率,在雏鸡7、14、21、28日龄时,每组随机选取3只进行屠宰,采集脾脏、法氏囊、胸腺组织,统计免疫器官指数;采集雏鸡翅下静脉血液,测定血清抗体和细胞因子水平;在雏鸡28日龄时使用NDV强毒株F48E9进行攻毒保护试验,攻毒后每天观察试验雏鸡状态,记录体重变化情况,并于攻毒后第3天每组随机选取3只雏鸡进行屠宰,取十二指肠、肺脏和气管组织并检测雏鸡不同组织病毒载量。【结果】鸡胚接种后,BLF+TS组雏鸡孵化率为100%,存活率为97.22%。与TS组相比,21~28日龄时BLF+TS组雏鸡的脾脏、法氏囊和胸腺指数以及血清中白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量均显著升高(P<0.05)。攻毒试验结果显示,攻毒后BLF+TS组雏鸡存活率为100%,攻毒后2~4 d BLF+TS组雏鸡体重增长速度显著低于健康对照组(P<0.05);攻毒后3~7 d时BLF+TS雏鸡体重增长速度显著高于TS组(P<0.05)。BLF+TS组雏鸡攻毒后呼吸道和消化道组织的病毒载量显著低于TS组(P<0.05)。【结论】BLF作为免疫佐剂可安全进行鸡胚接种,而且能够帮助雏鸡建立早期免疫保护,进一步提高ND疫苗免疫效果,研究结果为开发高效鸡胚免疫疫苗佐剂提供借鉴和参考。

黄芪多糖联合新城疫疫苗胚胎免疫对雏鸡免疫器官发育的影响

为了探究黄芪多糖(APS)联合新城疫(ND)疫苗进行胚胎免疫对雏鸡免疫器官发育的影响,试验将300枚SPF种蛋置于孵化箱中孵化,在18.5胚龄时用APS佐剂联合ND疫苗进行胚胎免疫(APS+NDV组),同时设置APS组(注射APS)、NDV组(ND疫苗)、对照组(注射生理盐水),雏鸡出壳后在3,7,14,21,28日龄测定脾脏、法氏囊、胸腺三种免疫器官的器官指数并观察其形态学变化。结果表明:APS+NDV组脾脏指数在3,7,14,21日龄显著高于对照组(P<0.05),在7,14,21日龄均显著高于NDV组(P<0.05),7,14日龄显著高于APS组(P<0.05);APS+NDV组法氏囊指数在3,7,14,21,28日龄显著高于对照组(P<0.05),在3,7,14日龄均显著高于NDV组(P<0.05),14,21日龄显著高于APS组(P<0.05);APS+NDV组胸腺指数3,7,14日龄均显著高于对照组和NDV组(P<0.05)。14,21日龄时,APS+NDV组脾脏生发中心总面积占视野的比例、法氏囊小结髓质面积与皮质面积的比值显著高于NDV组与对照组(P<0.05);3,7,14日龄时,APS+NDV组胸腺小叶皮质直径与髓质直径比值显著低于对照组和NDV组(P<0.05);14日龄时,APS+NDV组胸腺皮质直径与髓质直径比值显著低于APS组(P<0.05)。说明用APS联合ND疫苗进行胚胎免疫可促进雏鸡免疫器官的发育,提高ND疫苗的免疫效果。

板蓝根多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

150只14日龄蛋公鸡随机均分成3组,用新城疫传染性支气管炎二联(Newcastle disease-infectious bronchi-tis,ND-IB)弱毒苗点眼滴鼻免疫的同时,2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的板蓝根多糖(Isatis root polysaccha-ride,IRPS)溶液,对照组注射生理盐水,每天注射1次,连续注射3次。分别于免疫后7、14、21、28、354、2 d各组随机抽取8只鸡翼下静脉采血,分离血清,用微量法测定新城疫血凝抑制(HI)抗体效价;于免疫后10、20、30、40、50 d每组随机抽取5只鸡心脏采血,分离淋巴细胞,用流式细胞仪双染色法检测CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞含量,并放血致死称取体质量和胸腺、脾脏、法氏囊的质量,计算器官指数。结果表明,板蓝根多糖高、低剂量组的HI抗体效价、CD4+/CD8+比值和免疫器官指数均明显高于对照组;提示板蓝根多糖对新城疫疫苗的免疫效果有明显的增强作用。

硫酸化香菇多糖对新城疫疫苗免疫效果的影响

试验Ⅰ:免疫应答试验:取450只雏鸡随机均分为9组,在14日龄用新城疫Ⅳ系疫苗免疫,同时分别肌肉注射高、低剂量的3种硫酸化香菇多糖(sLNT_1、sLNT_2、sLNT_3)和香菇多糖(LNT)。分别于首免前和首免后连续6周检测血清HI抗体效价和外周血T淋巴细胞增殖的动态变化。试验Ⅱ:免疫保护试验:取350只雏鸡随机均分为7组,除非免疫组外其余组用新城疫Ⅳ系疫苗免疫,同时3个sLNT组和LNT组分别注射sLNT_1、sLNT_2、sLNT_3和LNT。于免疫后第21天,除无佐剂对照组第2组外各组鸡均肌肉注射NDV强毒攻毒,观察保护效果,并分别于攻毒前和攻毒后第3、6、9、12和15天测定血清HI抗体效价和外周血T淋巴细胞增殖的动态变化。结果表明:3种sLNT在首免后28 d内比LNT显著提高血清抗体效价最高2个滴度(高剂量的效果优于低剂量),促进淋巴细胞增殖(低剂量的效果强于高剂量);攻毒鸡发病率和死亡率降低,保护率提高最多达17.5%,加速攻毒后血清抗体生成和T淋巴细胞增殖,病鸡最快可以在攻毒后6 d恢复正常。综合评价以sLNT_2的效果最好。揭示:硫酸化修饰能显著提高LNT的免疫增强活性,增强新城疫疫苗的免疫效果。

鸡IL-18真核表达载体的构建及其对新城疫疫苗免疫增强作用的研究

利用首次从鸡新城疫疫苗接种的鸡胚脾细胞中扩增出的鸡IL 18 全基因,构建IL 18 真核表达载体(pcDNA3 IL18),并观察其对新城疫疫苗的免疫增强作用。结果表明,同时接种pcDNA3 IL18 质粒和活疫苗的免疫鸡在接种后35 d内,特别是15 d之后所产生的HI抗体效价和T、B淋巴细胞增殖反应均高于单纯疫苗免疫组及pcDNA3 空白质粒和疫苗联合免疫组。其中,HI抗体效价在15 d 时差异显著(P<0 05),在30 和35 d时差异极显著(P<0 01); T淋巴细胞增殖反应在15 d后均表现为差异显著(P<0 05〉或极显著(P<0 01);而单纯疫苗组与空白质粒和疫苗联合免疫组之间的各测定指标则无明显的差异(P>0 05)。在35 d时进行攻毒, pcDNA3 IL18和疫苗联合免疫组的保护率为83.3%,而单纯疫苗免疫组、空白质粒和疫苗联合免疫组鸡的保护率则分别只有61.5%和66.7%。说明该pcDNA3 IL18真核表达质粒在鸡体内得到了表达,表达产物不仅能够显著增强新城疫疫苗所诱导的细胞免疫和体液免疫反应,而且还可以明显提高疫苗的保护率。

母源抗体对鸡新城疫疫苗免疫的影响

该试验旨在通过在不同日龄分别选用不同的疫苗组合 ,对有鸡新城疫母源抗体的雏鸡进行免疫 ,探讨不同疫苗组合克服母源抗体的效果。结果表明 :有 ND母源抗体的雏鸡用弱毒疫苗免疫后 ,母源抗体对弱毒疫苗免疫干扰较大 ,只有当 ND母源抗体降到较低水平 (小于 3log2 ,一般要到 1 5～ 2 0日龄后 )时 ,对弱毒疫苗免疫影响才非常小 ,方可产生较为可靠的免疫力 ;用ND弱毒疫苗 +油乳剂疫苗进行免疫 ,可有效地克服母源抗体的干扰 ,获得理想的免疫效果。但母源抗体对 ND油乳剂疫苗免疫的影响在日龄越小的雏鸡越明显 ,因此于 8～ 1 0日龄之后用 ND弱毒疫苗 +油乳剂疫苗进行免疫是最佳选择 。

重组鸡IL-18对新城疫疫苗免疫增强作用的研究

将200只1日龄鸡随机分为4组,每组50只鸡,分别为空白对照组,新城疫疫苗组,新城疫疫苗+重组IL-18组,新城疫疫苗+空载体对照组。所有免疫组鸡均于8日龄免疫接种相应疫苗,并分别于免疫后的第3,7,14,21,28天和第35天对各组鸡随即抽取4只,对其血清的抗体效价、外周血的T淋巴细胞转化水平和γ干扰素含量进行测定。免疫18 d后每组鸡随机取20只进行动物攻毒保护试验。结果表明重组鸡IL-18蛋白不仅能够显著增强新城疫疫苗所诱导的细胞免疫和体液免疫反应。

香菇多糖对肉仔鸡生产性能及新城疫疫苗免疫效果的影响

为研究香菇多糖对肉仔鸡生产性能与新城疫疫苗(LaSota株)免疫效果的影响,试验选择300只1日龄非免疫AA+肉仔鸡,随机分为5组,分别为空白对照组(不进行免疫及不添加香菇多糖)、免疫对照组(不添加香菇多糖)、低剂量组(香菇多糖添加量为200 mg/kg)、中剂量组(香菇多糖添加量为350 mg/kg)和高剂量组(香菇多糖添加量为500 mg/kg),每组3个重复,每重复20只鸡;饲养至7日龄时,称各组肉仔鸡平均体质量,测定新城疫母源抗体效价,进行为期35 d的饲养试验。结果表明:在肉仔鸡日粮中添加香菇多糖对肉仔鸡的生产性能有促进作用,各试验组肉仔鸡在14、21、28和35日龄时血清中的新城疫HI抗体水平均高于免疫对照组和空白对照组,且在28和35日龄时,中剂量组和高剂量组新城疫HI抗体水平显著高于低剂量组(P<0.05),表明香菇多糖具有提高肉仔鸡新城疫HI抗体水平的效果,且以香菇多糖添加量为350 mg/kg时效果最佳。

车前草多糖对雏鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

为研究车前草多糖对雏鸡新城疫疫苗免疫效果的影响,将350只雏鸡随机分为7组,于8日龄、22日龄进行新城疫疫苗首免和二免,同时给予车前草多糖,并以黄芪多糖和铝胶盐佐剂作为对照,分别在首免后第7、14天,二免后第7、14、21天进行血清抗体效价和淋巴细胞增殖率的测定,于二免后第21天用新城疫病毒进行攻毒,连续观察10d内鸡的发病及死亡情况。结果显示,车前草多糖能显著提高雏鸡新城疫疫苗的免疫抗体效价、增强雏鸡的淋巴细胞增值率,与黄芪多糖的作用无显著性差异(P>0.05),但车前草多糖提高抗体效价作用较黄芪多糖、铝胶盐佐剂的维持时间长;在新城疫病毒攻毒后10 d,未免疫组雏鸡全部死亡,车前草多糖高、中剂量组的攻毒保护率为100%,车前草多糖低剂量和黄芪多糖的保护率为90%,而铝胶佐剂和ND疫苗免疫组的保护率仅为70%。试验结果表明,车前草多糖能提高新城疫疫苗的抗体效价水平和增强T淋巴细胞的增殖率。

黄芪多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

为研究黄芪多糖在鸡新城疫疫苗免疫过程中增强免疫的效果,选择120只1日龄非免疫健康AA蛋鸡随机分为3组:黄芪多糖试验Ⅰ组、黄芪多糖试验Ⅱ组和氯化钠注射液对照组,每组40只。从4日龄开始,试验Ⅰ组注射0.5 m L/只黄芪多糖注射液,试验Ⅱ组注射1.0 m L/只黄芪多糖注射液,氯化钠注射液对照组注射0.75 m L/只灭菌氯化钠注射液,每天1次,连续3 d。7日龄时用新城疫Lasota疫苗进行滴鼻和点眼免疫。免疫前1 d和免疫后1、2、3、4、5和6周采血测定抗体效价和T淋巴细胞百分率,试验结束时测定免疫器官指数。结果表明:黄芪多糖试验Ⅰ组和Ⅱ组的抗体水平、T淋巴细胞百分率和免疫器官指数均高于对照组,差异显著(P<0.05),黄芪多糖试验Ⅰ组和Ⅱ组之间差异不显著(P>0.05),但试验Ⅱ组的各项指标略高于试验Ⅰ组,表明黄芪多糖在鸡新城疫Lasota疫苗免疫过程中能够提高抗体水平(体液免疫指标)、T淋巴细胞百分率(细胞免疫指标)和免疫器官指数,可以作为鸡新城疫Lasota疫苗的免疫增强剂。

复方中药多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

为探究前期研究效果显著的最佳纯度多糖对人工免疫新城疫疫苗的雏鸡抗体滴度和抗氧化能力的影响,将350只雏鸡随机分为7组(空白对照组,免疫对照组,盐酸左旋咪唑组,黄芪多糖组,最佳纯度复方中药多糖高剂量、中剂量、低剂量组),除空白组外,其余雏鸡在7日龄用新城疫活疫苗La sota株免疫,在27日龄用新城疫活疫苗CS2株进行二次免疫,8至14日龄给药,各组雏鸡在15、22、29、36、43和50日龄采集血样,测定鸡新城疫疫苗抗体滴度和超氧化物歧化酶浓度。结果显示:最佳纯度复方中药多糖中低剂量均可极显著提高新城疫抗体滴度(P<0.05),其中以中剂量效果最好;黄芪多糖和最佳纯度复方中药多糖高中低剂量均可显著提高鸡超氧化物歧化酶含量(P<0.05),其中以最佳纯度复方中药多糖中剂量效果最好(P<0.01)。

不同新城疫疫苗及免疫程序对蛋鸡免疫效果的影响

新城疫是世界动物卫生组织规定的A类传染病，是我国规定的二类传染病，在国际贸易和动物养殖业中具有重要地位。目前针对新城疫的防制手段比较成熟，其中疫苗程序化免疫是预防的主要措施。但随着各种新型新城疫疫苗的出现，选用不同的疫苗及免疫程序将对其免疫效果产生较大影响。为此，我们选取了新城疫灭活苗、弱毒苗以及2种新城疫禽流感二联苗，设计了不同的免疫程序进行免疫效果的对比试验。

LT粘膜佐剂对鸡新城疫疫苗的免疫增强作用研究

研究大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白(heat-labile enterotoxin,LTRG)对鸡新城疫(Newcastle disease virus,NDV)疫苗经不同途径接种效果的影响。以NDV LaSota株作为共免疫原,与LTRG重组蛋白经滴鼻、口服及肌肉注射三种途径接种雏鸡,通过血清IgG抗体、HI抗体及粘膜分泌型IgA抗体水平变化,评价不同途径接种LTRG对NDV疫苗的免疫效果的影响。结果显示:①三种途径接种,LTRG均能显著增强NDV疫苗的免疫抗体水平,免疫雏鸡血清抗体和粘膜抗体水平均高于NDV疫苗单独免疫组;②LTRG对NDV疫苗免疫增强作用,以滴鼻接种最显著:二、三免后LTRG+NDV滴鼻组与NDV组血清IgG、粘膜IgA差异均显著(P<0.01、P<0.05);LTRG+NDV口服与NDV组血清IgG差异不显著(P>0.05)、粘膜IgA差异极显著(P<0.01);LTRG+NDV肌注与NDV组IgG差异不显著(P>0.05)、粘膜IgA差异显著(P<0.05);③三种免疫途径比较:血清IgG抗体水平差异均不明显(P>0.05);滴鼻、口服免疫可诱导雏鸡产生较高的粘膜IgA抗体、血清HI抗体。由此可见:LTRG粘膜佐剂对NDV疫苗免疫增强作用,以粘膜(滴鼻、口服)途径接种效果最为显著,能诱导高水平的粘膜IgA抗体及血清抗体。

饲料中添加黄芪多糖对肉鸡生产性能及新城疫疫苗免疫效果的影响

黄芪是豆科植物，该属植物约有2000种，我国有130余种，其味甘，性温和，具有增强体质、抗氧化、延缓衰老、益气补虚等功效。黄芪多糖（Astmga．lus polysaccharin，APS）是黄芪的主要活性成分，是黄芪药理作用中起决定性因素的一类大分子化合物。它能促进T淋巴细胞、B淋巴细胞、

中草药对新城疫疫苗免疫效果的影响

为研究中草药对新城疫弱毒苗产生的免疫调节作用,将90只健康肉鸡随机分为3组(对照组、试验I组、试验II组),对照组正常饮水,试验I组、试验II组分别在饮水中添加中草药方剂50 mg/L和100 mg/L,通过测定新城疫抗体效价和免疫器官指数,比较分析中草药方剂对新城疫疫苗免疫效果的影响。试验结果显示,在新城疫抗体效价、腔上囊指数、胸腺指数、脾脏指数方面,试验Ⅰ、Ⅱ组与对照组相比,差异均显著(P<0.05),且试验Ⅰ组和Ⅱ组之间差异显著(P<0.05)。试验结果表明,饮水中添加50 mg/L和100 mg/L中草药均能够增加新城疫抗体效价和免疫器官指数,增强新城疫疫苗的免疫效果。

鸡IL-18基因的克隆表达及对新城疫疫苗诱导的HI抗体变化的研究

通过RT-PCR方法从新城疫Ⅰ系疫苗诱导的11日龄鸡胚脾脏细胞中扩增出鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)成熟蛋白基因的cDNA,并将其克隆到pMD18-T载体上。DNA序列测定表明,克隆得到ChIL-18全基因,其编码区大小为597bp,编码198个氨基酸多肽。将该基因片段克隆到原核表达载体pProEXTMHTb构建重组质粒pProEXTMHTb-ChIL-18转化大肠杆菌DH5α中,并用IPTG诱导。重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子量为28.6ku的重组蛋白。观察ChIL-18蛋白对新城疫疫苗诱导的HI抗体动态变化。结果表明,同时接种ChIL-18蛋白和活疫苗的免疫鸡在接种后,所产生的HI抗体效价高于PBS和活疫苗免疫组,并且,HI抗体效价在15d及热应激24h时表现差异显著(P<0.05)。表明ChIL-18蛋白对新城疫疫苗诱导的HI抗体有增强作用。

铅染毒和新城疫疫苗免疫对鹌鹑生长发育的影响

采用2×5因子设计,新城疫(ND)疫苗免疫分为免疫组和未免疫组,铅染毒按饮水中的醋酸铅浓度分为0、50、500、1000和2000mg/L5个组,将90只14日龄黄羽鹌鹑随机分组,实行自由饮水和采食,研究铅染毒和ND免疫对鹌鹑生长发育的影响。结果表明,ND免疫在1～2周内能显著降低鹌鹑的体重(P<0.01);ND免疫可导致肝脏指数增大,血清透明质酸含量升高;2000mg/L醋酸铅能显著降低试验期鹌鹑的体重(P<0.01),至试验第5周(7周龄)所有铅染毒组的鹌鹑体重均显著低于对照组(P<0.01)。铅能导致鹌鹑采食量下降、脱毛、性腺发育受阻和血清透明质酸含量升高。性腺发育不良是鹌鹑铅中毒的一个重要标志,透明质酸含量可作为检测鹌鹑群体是否经过ND疫苗免疫和遭受铅污染的指标。

不同鸡新城疫疫苗免疫鸡血清HI抗体的测定

将试验鸡分成3个试验组和1个对照组。A组鸡接种鸡新城疫系疫苗,B组鸡接种油乳剂灭活苗,C组鸡接种鸡新城疫系疫苗,并在接种疫苗后第3、4、5、6、7、9、11、13、15、20、25d采取各组鸡血并分离血清,检测HI抗体。结果表明,接种系疫苗的组,HI抗体效价均值从4.67log2上升到10log2,接种后第5d开始上升,接种后第11d达到峰值,持续6d保持高滴度抗体水平。接种系疫苗的组,HI抗体效价均值从4.67log2上升到7log2,接种后第4d开始上升,接种后第9d达到峰值。接种油乳剂灭活苗的组,HI抗体效价均值从4.67log2上升到9.33log2,接种后第5d开始上升,接种后第11d达到峰值,持续16d保持高滴度抗体水平。系疫苗HI抗体效价上升快,效价高,较适合于紧急接种,油乳剂灭活苗HI抗体效价可在高水平维持较长时间,较适合于预防接种。