连续计数法血小板功能检测的方法学评价及质量控制研究进展

血栓性疾病是临床多发病,抗血小板药物是预防及治疗血栓性疾病的重要手段。随着抗血小板药的广泛应用,用药过量导致患者出血事件的发生率逐年增高。通过血小板功能检测来评估用药效果、指导临床用药,可明显降低临床出血不良事件的发生率。连续计数法血小板功能检测是近年来开展的一项评价血小板聚集功能的新技术,无需离心,也无需提取贫、富血小板血浆等手工操作,可实现全血标本、全流程自动化检测需求。与其他传统血小板功能检测实验相比,具有操作简单、干扰因素少、自动化程度高、真正模拟体内全血环境等优势;但也有不足,如红细胞碎片影响血小板计数,采用固定时间点检测血小板数量,而非连续线性监测影响实验稳定性等。本综述将连续计数法与其他血小板功能检测方法进行比较,分析各自优势与不足,并对检测过程中的影响因素进行具体分析,提出优化方案与质量改进措施。

罗氏电化学发光检测系统检测泌乳素的方法学评价及参考范围建立

目的按美国病理家协会（CAP）对实验室的要求,对罗氏电化学发光系统检测泌乳素（PRL）的方法进行评估和建立本实验室的参考区间。方法取中、低值患者混合血清,分别进行批内20次和连续20 d检测,统计分析批内变异系数（CV）和日间CV;用不同浓度低值血清连续检测10 d,统计分析检测功能灵敏度;将高、低值血清按一定比例混合,检测PRL,回归分析确定测量范围;将中值血清按一定比例稀释后检测PRL,分析稀释后样本和原始样本结果的符合程度,得出临床可报告范围（CRR）;取292名健康人群样本检测PRL,统计分析建立参考范围。结果中、低值批内CV分别为0.95%、1.16%,日间CV分别为2.39%、3.14%;功能灵敏度为0.065μg/L;分析测量范围（AMR）为0.105-452.88μg/L;CRR为0.065-4 528.80μg/L;本实验室的参考区间男性为3.86-22.80μg/L,女性为4.61-30.74μg/L。结论本系统检测性能符合CAP要求,参考区间上限略高于厂家提供的参数,说明厂家提供的参考区间不可直接引用。

酶法测定血清β-羟丁酸的方法学评价及其临床应用

目的应用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的标准化评价方案对酶法测定血清β-羟丁酸进行初步评价,并探讨β-羟丁酸对糖尿病酮症酸中毒诊断及治疗监测的意义。方法分析酶法测定血清β-羟丁酸的精密度、准确性、线性范围和干扰因素。测定60例正常人、50例糖尿病DM患者和34例糖尿病酮症酸中毒DKA患者血清β-羟丁酸浓度。结果酶法测定β-羟丁酸具有良好的精密度(批内、日间及总变异系数均小于5%)和准确度(回收率为98.5%～104.1%),检测线性范围为0～4.00mmol/L,基本不受溶血、黄疸和脂血干扰。DKA患者血清β-羟丁酸明显升高(P<0.01),血清β-羟丁酸测定阳性率高于尿酮体测定(P<0.05)。结论酶法测定血清β-羟丁酸快速、准确、精密度高,可用于DKA的早期特异、快速诊断及治疗监测。

中医药系统综述报告规范及方法学评价

目前国内发表的中医药系统综述( SR) 数量逐渐增多,但质量参差不齐,对指导临床应用有较大的局限性,本文参照 Cochrane 手册和 PRISMA 声明,以如何提出研究问题、研究方法、结果报告以及讨论和结论四个部分,介绍 SR 的报告规范,解析已发表中医药 SR 存在的方法学问题,为今后的研究提供参考。

化学发光免疫分析测定EB病毒衣壳抗原IgM抗体的方法学评价

目的 对化学发光免疫分析法 (chemiluminescentimmunoassay ,CLIA)测定EB病毒衣壳抗原的IgM抗体 (EBV VCAIgM)进行方法学评价 ,同时将其对儿童传染性单核细胞增多症 (infectiousmononucleosis,IM)的诊断准确性与传统的ELISA测定相比较。方法 在全自动CLIA仪上测定 88例血清标本 ,同时用ELISA法测定。结果 CLIA测定EBV VCAIgM的灵敏度为 0 .6 4U/ml;低、中、高浓度时的批内CV分别为 4 .1%、1.7%和 1.4 % ,批间CV分别为 4 .9%、2 .8%和 2 .4 % ;回收率为 93%～ 10 7% ,理论值与实测值间的回归方程为Y =0 .0 96 7+1.0 0 93X ,相关系数r =0 .9996 (P <0 .0 0 0 1) ;ROC曲线显示CLIA测定敏感性和特异性均在 90 %以上 ,曲线下面积为 0 .992 ,显著高于ELISA(P <0 .0 5 )。结论 CLIA是目前测定EBV VCAIgM较好的方法 ,适用于临床检测 。

免疫透射比浊法在AU5800全自动生化分析仪检测降钙素原的方法学评价

目的在AU5800全自动生化分析仪上用免疫透射比浊法检测降钙素原（PCT）的方法学评价。方法通过AU5800全自动生化分析仪来检测PCT的精密度、线性、参考区间等指标,并与酶免疫荧光法试剂盒进行相关性比较,从而评价其性能。结果该方法批内和批间精密度分别小于8%和15%;0~80ng/mL范围内线性良好（Y=0.994 1 X＋0.124 5,R2=0.999）;正常人群的参考范围为小于0.5ng/mL;与酶免疫荧光法的相关性良好（Y=0.357 4 X＋0.284 2,R2=0.960 7）。结论本检测方法不仅实现了PCT检测的快速、全自动化,而且化学性能优良、操作简单,降低了临床试剂成本,适合临床推广使用。

罗氏公司Cobas E602电化学发光分析仪检测抗缪勒管激素的方法学评价

目的对罗氏公司Cobas E602电化学发光分析仪检测抗缪勒管激素（AMH）进行方法学评价。方法根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）的EP文件要求,制订定量检测方法的方法学评价方案,即通过在罗氏公司Cobas E602电化学发光分析仪检测AMH的精密度、准确度、分析测量范围和携带污染率来评价其性能。结果 AMH低、中和高浓度时,批内精密度CV分别是1.971%、1.540%和1.707%,批间精密度CV分别为3.508%、3.072%和3.199%,均符合要求;多个不同浓度定值校准品的检测结果与靶值的相对偏倚均在±5%之内,且将已知浓度的AMH标本加入到健康人血清中,测得的添加回收率为97.05%-102.52%,准确度满足判断标准;分析测量线性范围为0.083-22.398ng/mL,相关方程Y=0.987 7 X＋0.100 6（a值在0.95-1.05,r2≥0.95）;携带污染率为0.769%（≤2.0%）。结论罗氏公司Cobas E602电化学发光分析仪检测AMH的精密度高、准确度好,具有良好的线性测量范围及携带污染率低,验证和评价标准符合,可为临床检测工作提供准确的参考依据。

免疫透射比浊法检测尿微量白蛋白的方法学评价

近来年研究表明,尿微量白蛋白不仅是肾脏血管内皮损伤的标志,也是全身血管内皮细胞损伤的标志。一些调查研究认为,尿微量白蛋白阳性是心血管事件发生的独立危险因素[1]。因此,检测尿微量白蛋白对相关疾病的早期诊断和治疗有重要的参考意义。为了验证免疫透射比浊法（简称＂透射法＂）微量白蛋白诊断试剂用于尿微量白蛋白检测的准确性及实用性,本文以免疫散射比浊法（简称＂散射法＂）微量白蛋白诊断试剂作参比方法,对检测结果进行相关性分析和方法学评价。

循环酶法检测血清同型半胱氨酸方法学评价及其在肿瘤诊断中的应用

目的评估循环酶法试剂盒检测血清同型半胱氨酸(Hcy)的分析性能,探讨Hcy在肿瘤诊断中的临床应用价值。方法应用美国临床实验室标准化协会的标准化评价方案评价循环酶法测定血清Hcy的精密度、比对试验、回收试验、线性范围等。同时检测806例肿瘤患者,67例健康体检者(健康对照组)血清Hcy水平。数据分析采用方差分析、两独立样本t检验、相关性分析等。结果精密度:循环酶法测定血清Hcy低、高水平的批内变异系数(CV)分别为2.69%、3.35%,日间CV分别为1.87%、2.80%,精密度良好;Hcy水平2.00~40.00μmol/L,检测线性良好(r^2=0.997 3);比对试验:与西门子ADVIA Centaur XP检测系统比较,Hcy检测结果相关性良好(r^2=0.970 8,n=40),两种检测方法检测结果均值比较差异无统计学意义(P>0.05);平均回收率为95.2%~103.1%;肿瘤患者血清Hcy水平较健康对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论循环酶法测定血清Hcy方便、快速、准确可靠,其精密度和线性范围可满足临床需求,适合在临床实验室使用;肿瘤患者血清Hcy较健康对照组显著升高,与多种肿瘤相关,可作为肿瘤标志物用于肿瘤的早期筛查。

液相免疫胶体金技术用于检测血浆半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的方法学评价

目的评估液相免疫胶体金试剂盒应用于全自动生化分析仪检测半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cys C）的方法学性能及其与肾小球滤过功能的相关性。方法分别采用液相免疫胶体金试剂盒与颗粒增强散射免疫比浊法（PENIA）测定Cys C,评价的方法学指标为精密度、线性范围、抗干扰性、相关及偏倚。同时采用锝标记二乙烯三胺五乙酸（^99mTc-DTPA）肾动态显像测定97例慢性肾病患者肾小球滤过率（GFR）,并与血浆Cys C浓度进行相关性评估。采用受试者工作特征（ROC）曲线评价血浆Cys C对肾小球滤过功能减退的诊断价值。结果Cys C在低、中、高浓度水平总变异分别为5.27%、5.23%和2.81%。在0.54-8.65 mg/L范围内显示良好的线性。血红蛋白〈10 g/L、胆红素〈300 mg/L时对测定结果的干扰〈10%;三酰甘油（TG）≥20 mmol/L时对低浓度样本的影响度超过10%,对高浓度样本无明显干扰。液相免疫胶体金试剂盒与PENIA相关性良好（r=0.99,P〈0.01）,2种方法间的差异无统计学意义（P〉0.10）。液相免疫胶体金试剂盒测定结果较PENIA结果偏高,平均偏倚为0.27 mg/L。血浆Cys C浓度与GFR显著相关（r=-0.829,P〈0.001）;血浆Cys C诊断肾功能减退的ROC曲线下面积为0.826（95%可信区间：0.716-0.936）。以正确诊断指数最大处的观察值1.11 mg/L作为判断Cys C升高的依据,当GFR≥80 mL/（min·1.73 m^2）时,24.3%的患者血浆Cys C升高;GFR为50-80 mL/（min·1.73 m^2）,70%的患者血浆Cys C升高;GFR≤50 mL/（min·1.73 m^2）,所有患者血浆CysC升高。结论液相免疫胶体金试剂盒应用于全自动生化分析仪检测Cys C的精密度、抗干扰性能、线性范围符合临床要求,而且与PENIA有良好的相关性,但2种方法的测定结果存在一定的偏倚。血浆Cys C是评估肾小球滤过功能的理想指标。

高效液相色谱法检测糖化血红蛋白的方法学评价

目的采用高效液相色谱法(HPLC),评价全自动糖化血红蛋白分析仪HLC-723G8性能。方法根据美国国家实验室标准委员会EP5-A、EP9-A文件要求,通过对不同浓度糖化血红蛋白(HbA1c)样品含量的测定,对仪器精密度、准确度、携带污染率、线性进行评价。结果批内CV均小于1.0%,批间CV均小于1.3%;准确度满足判断标准;携带污染率小于2%;HbA1c在4.6%～18.1%范围内线性良好(a值在0.95～1.05,r2≥0.98)。结论该仪器主要指标精密度高、重复性好、结果准确、交叉污染小、线性范围宽,完全能满足临床检测要求。

Roche Cobas E601电化学发光分析仪检测降钙素原的方法学评价

目的:对Roche Cobas E601电化学发光分析仪检测降钙素原(PCT)进行方法学评价。方法:通过Roche Cobas E601测定PCT的精密度、准确度、分析测量范围和携带污染率来评价其性能。结果:低、高值批内精密度的变异系数(CV)分别为1.16%、0.51%,批间精密度的CV为2.98%、1.96%;测定4份定值校准品的检测结果与靶值的偏倚为-5.26%～3.16%;线性为0.039ng/mL～86.325ng/mL;携带污染率为0.019%。结论:该系统检测性能能够满足PCT的测定要求。

重视方法学评价教学提高临床生化检验教学质量

《临床生物化学和生物化学检验》是医学检验专业主要课程之一。在生化检验技术飞速发展的今天,检测新方法层出不穷。对方法进行正确评价,引进和开发可靠性更高的方法已成为检验工作者重要任务之一[1]。传统的教学方法忽视了学生正确选择检测方法的意识和能力的培养。作者在理论和实验教学中,将方法学评价教学贯穿始终。几年的实践证明,

针灸治疗原发性痛经的临床研究方法学评价

目的:评价国内针灸治疗原发性痛经临床随机对照试验(RCT)的质量,为改进和提高针灸临床治疗水平提供依据。方法:依据相关数据库中符合标准RCT文献32篇,进行临床研究方法学评价分析。结果:近年发表针灸治疗PD的RCT共计32篇,占所有针灸治疗PD文章的23.9%。其中29篇有明确诊断纳入标准,6篇有明确的排除标准,12篇描述了具体的随机分组方法;2篇提及盲法的运用;临床疗效多以症状改变评定,以总有效率表示;结果均作统计学处理,处理方法主要是t检验。结论:近年来针灸治疗PD数量不断增加,但RCT的比例及质量均需提高,有待针灸临床工作者的努力。

时间分辨荧光免疫分析方法学评价

目的 通过内质控的定量分析 ,对时间分辨荧光免疫分析的方法学进行客观评价。方法 以促甲状腺激素检测为例 ,对系统探测灵敏度 ,低、中、高质控血清的批内和批间精密度 ,批间稳定性参数Slope、ED2 0、ED50、ED80等 4项指标 ,系统探测的准确度 (回收试验 ) ,系统探测的有效性 (平行试验 ) ,受试者工作特性曲线 (receiveroperatorcharacteristic ,ROC)等进行定量测定和描述。结果 TSH的最小测定值为 0 .0 0 2 μU/mL。低、中、高 3种质控样品批内和批间变异系数均小于 5 % ,批间稳定性参数各变异系数均小于 5 % ,与统计学要求相一致 ,且符合标准曲线质控参数的重现性。回收试验满足临床要求 ,符合检验统计结果。理论值与实测值间作回归分析 ,相关系数r=0 .999。ROC显示 ,甲亢诊断的最佳阈值为 0 .3μU/mL ,甲低诊断的最佳阈值为 5 .0 μU/mL。甲亢敏感度为 89.3 % ,特异度为 93 .3 % ,准确度为 90 .1 % ,阳性似然比为 1 3 .4;甲低敏感度为 83 .8% ,特异度为 90 .9% ,准确度为 86 .4% ,阳性似然比为 9.2。结论 时间分辨荧光免疫分析方法是一种效果好、准确度高、灵敏度高、特异性强。

葡萄糖脱氢酶法测定血清葡萄糖的方法学评价

目的:通过方法学试验对葡萄糖脱氢酶法测定血清葡萄糖方法进行评价。方法:用已建立的方法进行重复性试验、回收试验、干扰试验、线性范围试验,并和HK法进行比较。结果:重复性试验批内CV值为1.33%,批间CV值为1.42%,总CV值为2.01%;回收试验中回收样品I、Ⅱ、Ⅲ的回收率分别为105%,93.5%和91.4%,平均为96.6%;干扰试验表明一般浓度的抗凝剂、防腐剂、尿酸、胆红素对葡萄糖的测定不产生干扰;比较试验,与HK法比较其相关性为Y=1.038X-1.172,r=0.994;线性范围试验表明葡萄糖浓度在20 mmol/L以下呈现良好的线性。结论:葡萄糖脱氢酶法是临床测定血清葡萄糖的较理想的方法。

ELISA法与TRUST法、胶体金法检测梅毒抗体的临床应用和方法学评价

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和胶体金免疫层析法(GICA)对梅毒(Syphilis)诊断的临床应用和价值。方法分别采用ELISA、TRUST及胶体金法3种不同的血清学方法对240例皮肤科门诊患者标本和术前患者标本进行检测,结果均以梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)进行确认,比较ELISA、TRUST和胶体金法对梅毒的诊断价值。结果在对79例阳性和161例阴性标本的检测中,TRUST、胶体金法、ELISA诊断梅毒的敏感度分别为64.6%、94.9%、98.7%,特异度分别为97.5%、98.8%、100%;TRUST法与TPPA法检测结果差异有统计学意义(P<0.01χ,2=16.53),而ELISA、胶体金法与TPPA法差异无统计学意义(ELISA:P>0.05,χ2=0.00;胶体金法:P>0.05,χ2=0.17)。结论 ELISA法检测梅毒螺旋体抗体具有较高的敏感度和特异度及TPPA法有较高的一致性,可用于临床大批量样本初筛和梅毒感染的确诊。

应用EP10-A2对胶体金免疫层析法测胃蛋白酶原Ⅰ进行方法学评价

目的用胶体金免疫层析法对胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)试剂盒进行方法学初步评价。方法由美国临床和实验室标准协会(CLSI)制定的《临床定量实验方法的初步评价:批准指南第二版(EP10-A2)》提供的方法,对低、中、高3个浓度水平血清连续检测5d,收集相关数据,分析其离散程度、线性、偏移、精密度等。结果将PGⅠ质控血清(浓度为25、50、100μg/L)按低,中,高3个浓度水平进行测定,分析得出其线性回归方程为Y=0.993 9 X+0.743 3,R2=0.999 2;决对偏移分别为0.37、0.77、0.78μg/L,总不精密度分别为3.04%、1.17%、1.08%。结论 PGⅠ检测试剂盒胶体金免疫层析法的相关技术指标均达到EP10-A2文件的标准,检测结果准确、灵敏度高、稳定性好,符合临床应用的要求。

胶乳增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白的方法学评价

目的应用美国，旌床实验室标准化委员会的标准化评价方案对胶乳增强免疫比浊法测定HbAlc进行方法学评价。方法依据标准化文件要求，分析胶乳增强免疫比浊法测定HbAlc的精密度、线性范围、回收率和干扰因素，并考察其与高效液相色谱法的相关性。结果该法总变异系数为3．19％（低值），3．53％（中值）和4．11％（高值）。平均回收率100．2％，在4．4％～13．5％范围内线性良好。胆红素在884μmol／L，三酰甘油在13．5mmol／L时对测定存在干扰。试剂和样本在低温保存时可稳定10天。该法与HPLC法结果明显相关，r=0．994，但整体略高于HPLC法的结果。结论胶乳增强免疫比浊法测定HbAlc方法符合NCCLS标准要求，适应临床需要。临床实验室在建立或引进新的检验项目时需要进行系统的方法学评价以验证检测的有效性和完整性。

钒酸盐氧化法测定血清胆红素的方法学评价

[目的 ]寻找一种更简便、准确的测定血清胆红素的方法。 [方法 ]通过方法学试验对钒酸盐氧化法测定血清胆红素进行评价。 [结果 ]重复性试验批间CV值为 1.3% ;线性试验表明总胆红素在 5 81.2 μmol/L以下线性良好 ;回收试验得到回收率为 10 1.1% ;比较试验 ,与重氮法比较相关系数为 0 .998;以及干扰试验表明溶血、乳糜对本测定不产生干扰。以上试验均较理想。 [结论 ]钒酸盐氧化法测定血清胆红素是较理想的方法。