水敷散、硝矾散微生物限度方法学验证

目的 建立并验证水敷散、硝矾散微生物限度的检验方法。方法 按照《中华人民共和国药典》(四部)“非无菌产品微生物限度检查”对水敷散和硝矾散进行微生物限度检验方法验证。结果 水敷散和硝矾散需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数、控制菌采用无菌滤纸过滤后再薄膜过滤方法检查,其实验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值均在0.5~2的范围内。结论 两种制剂均可采用无菌滤纸过滤后薄膜过滤的方法进行微生物限度检查。

单抗药物还原毛细管电泳法方法学验证研究

目的对还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(reduced capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,rCE-SDS)用于单抗药物的纯度检测进行方法学验证,为业界此类质量控制方法的方法学验证提供参考。方法按照2020版《中华人民共和国药典》通则<3127>的方法检测样品,对该方法的专属性、线性、准确度、精密度、范围、定量限、耐用性进行验证。结果本方法专属性较好;线性拟合结果良好(均R^(2)>0.99)。各分析用样品主峰的准确性结果满足98%~102%,总杂质和非糖基化重链(non-glycosylated heavy chain,NGHC)的准确性结果均满足70%~130%;重复性和中间精密度的RSD均≤15%;主峰的范围为≥92.4%,总杂质范围为0.36%~7.6%,NGHC的范围为0.12%~3.8%;总杂质和NGHC的定量限分别为0.36%和0.12%。结论本方法验证各项指标均符合预设可接受标准,且该研究可以为此类方法学验证的科学性和合理性设计提供参考。

单抗药物非还原毛细管电泳法方法学验证研究

目的 对单抗药物的非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(nrCE-SDS)进行方法学验证,为业界相应质控方法的方法学验证提供参考。方法 按照2020版《中华人民共和国药典》三部通则3127单抗分子大小变异体测定法检测。2名实验员分别进行3 d实验,每天采用相同的检测方法分析受试样品,并进行全面的方法学验证。结果 该方法专属性良好,各分析用样品主峰的准确性为98%~102%,总片段和特定杂质的准确性为70%~130%;重复性和中间精密度的RSD≤15%;主峰≥89.9%,总片段范围为0.66%~10.10%,特定杂质的范围为0.36%~4.80%;本方法的定量限为0.33%。结论 对方法的准确性、精密度、线性、范围、定量限和专属性进行了全面的验证研究,为相应方法学验证的科学性和合理性设计提供了参考。

不同标准品溶剂对黄曲霉毒素B_(1)方法学验证的影响

在黄曲霉毒素B_(1)方法学验证时,对所使用的不同黄曲霉毒素B_(1)标准品溶剂对验证过程的影响进行研究。结果表明:以苯-乙腈为溶剂的黄曲霉毒素B_(1)样品加标回收率均为0,其检出限与定量限在国标要求下均无法测得。以乙腈为溶剂的黄曲霉毒素B_(1)标准溶液样品加标回收率为85.7%、91.2%、95.0%,检出限为0.005μg/kg,定量限为0.01μg/kg。溶剂置换组样品加标回收率分别为83.6%、88.1%、90.2%,检出限为0.007μg/kg,定量限为0.02μg/kg。以苯-乙腈为溶剂的标准溶液组在直接进行方法学验证及质控时,无法满足国标要求,乙腈溶剂组与溶剂置换组均符合国标要求。该发现在黄曲霉毒素B_(1)方法学验证过程以及黄曲霉毒素B_(1)日常检测的质控过程中对于标准品的选择均具有指导意义。

气相色谱法测定吡唑硼酸频哪酯及方法学验证

(目的)建立了测定吡唑硼酸频哪酯的气相色谱法方法,并进行了方法学验证。(方法)采用5%苯基-甲基聚硅氧烷色谱柱(30 m×∅0.25 mm,0.25μm)检测器:氢离子火焰检测器;载气:氮气;流速:1.0 mL/min;进样器温度:215℃;检测器温度:295℃;分流比:3∶1;进样量:0.1μL;柱箱温度:初始50℃,维持2 min,按10℃/min升温至150℃,维持0 min,按30℃/min升温至260℃,维持5 min;氢气流速:30 mL/min;空气流速:300 mL/min;氮气流速:25 mL/min。结果表明,方法的专属性、重复性、线性、中间精密度及溶液稳定性试验结果均符合要求。(结论)本法操作简单,方法准确,可用于吡唑硼酸频哪酯的测定。

基于响应面法的硫酸奎宁含量分析方法开发及方法学验证

为实现硫酸奎宁含量测定的高效性,文章根据化合物的理化性质初步确定HPLC分析方法,通过单因素试验获得对响应值(拖尾因子和保留时间)影响较大的三大因素后,以响应面法优化色谱参数。优化后的分析方法再经方法学验证,方法具有良好的精密度、耐用性、专属性和线性关系,适用于硫酸奎宁含量的检测。

恩格列净原料药含量的方法学验证

为了建立恩格列净原料药含量的HPLC测定方法,采用ACE Excel C18 (4.6×150mm, 5μm)色谱柱对恩格列净原料药的含量定量分析,以0.1%醋酸溶液为流动相A,甲醇为流动相B,流动相A-流动相B (75∶25)为流动相,流速为1.0 m L/min,温度为30℃,检测波长为220 nm。结果表明,系统适用性符合要求,空白溶剂不干扰恩格列净原料药含量的测定;恩格列净质量浓度在0.030 03~0.450 4 mg/m L范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9)。重复性实验中,供试品所含恩格列净含量的RSD值均<2%;稳定性试验中,24 h内恩格列净峰面积与初始0 h相比,均在98.0%~102.0%内;耐用性试验中,并且不同参数下恩格列净含量的RSD值<2.0%。结论:此方法专属性强,灵敏度高,重复性、耐用性良好,可作为恩格列净原料药含量的测定方法,并且为后续合成的恩格列净的质量和疗效提供可靠保障。

高效液相色谱法测定糕点和果汁中纳他霉素的方法学验证

为了验证宝鸡市食品药品检验检测中心是否有能力开展纳他霉素新方法《食品安全国家标准食品中纳他霉素的测定》(GB 5009.286—2022)的检测项目。本文使用高效液相色谱仪,对糕点和果汁中纳他霉素进行分析,外标法定量,验证了本方法的线性关系、方法检出限、精密度和回收率。结果表明,纳他霉素在0.5~10.0μg·mL^(-1)呈现良好的线性关系,方法检出限、精密度和回收率均能达到标准方法要求。因此,本实验室具备检测纳他霉素的能力。

HPLC法测定恶拉戈利钠中间体6有关物质及方法学验证

目的:建立了测定恶拉戈利钠中间体6有关物质的HPLC法,并进行方法学验证。方法:用WATREX Reprosil C_(18)(4 mm×250 mm×5μm)色谱柱,以0.1%磷酸水为流动相A,甲醇为流动相B,进行梯度洗脱,流速1.1 mL/min;用紫外检测器检测,波长215 nm;进样量15μL;柱温25℃。结果:恶拉戈利钠中间体6与其他各中间体分离度好,线性、溶液稳定性、重复性及中间精密度试验结果均符合要求,各中间体的控制限度均可达到定量限。结论:本高效液相色谱法专属性强、灵敏度高、精密度好、方法操作简单、准确,可用于恶拉戈利钠中间体6有关物质的测定。

食品中羊源性成分检测的方法学验证

本文主要依据SN/T 2051—2008标准对食品中羊源性成分检测进行特异性、灵敏度、稳定性等方法学验证,同时进行掺伪样和市售商品检测。结果表明,本方法灵敏度高(0.001%)、特异性强、稳定性好,适用于食品中羊源性成分检测。

奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂有关物质方法学验证

目的:对奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂有关物质方法进行验证。方法:HPLC法,紫外检测器,DAD检测器,梯度洗脱。结果:各已知杂质与奥美拉唑分离度均大于1.5,空白辅料不干扰各杂质的检测。结论:该方法各杂质的准确度良好,峰纯度良好,适合奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂的测定。

保健食品微生物限度检查的方法学验证

目的:确认对保健食品进行微生物限度检查时,昕采用的细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查方法是否适合于该保健食品的微生物限度检查。方法:按2005年版中国药典微生物限度检查法及方法学验证实验要求,对21种保健食品进行了方法学验证。结果:10个品种(血尔口服液、金舒通胶囊、事轻松胶囊、梦玉胶囊等)分别对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有明显的抑菌作用,阳性对照菌回收率均低于70%。结论:保健食品采用 GB/T4789-2003食品卫生微生物学检查法进行检查时,其检验结果可能不够科学,建议参照2005年版中国药典要求,通过方法验证实验建立合理的检验方法。

拉曼光谱在多组分定量分析中方法学验证的探讨

拉曼光谱在中国药典2010版第一次被收录于"附录XIX L拉曼光谱法指导原则"中,但该原则对拉曼多组分定量分析的方法学验证未作论述,对多组分复杂体系中采用拉曼数学模型定量分析时的方法学验证进行独创性的探索和研究,分别从仪器性能测试、线性、定量限、准确度等方面进行方法学验证研究;另外由于拉曼光谱定量数学模型样品为复杂成分样品,无须像传统方法提供空白样品和进行破坏实验等专属性实验验证。通过研究探讨,提出了拉曼多组分定量分析的方法学验证内容,为方法学验证的完善和标准的制定提供了基础和依据。

支原体检查的核酸检测方法及方法学验证的思考

支原体是生物制品的最常见外源因子污染物之一,《中国药典》2015年版收录的两种支原体检测方法虽然可灵敏地检测出活的支原体,但因检测时间较长,对实验室设置及实验室人员的技术均有一定要求,且对一些特定的样本及需要快速放行的样本有一定的局限性,如目前研究热点之一的CAT-T细胞治疗产品的过程或放行检验。因此,越来越多的新兴领域的研发者更倾向于采用支原体污染快速检测方法用于中间品放行检测,甚至作为CAR-T细胞等治疗产品的放行检验的补充或替代方法。由此,也带来了另一个药品监管机构所关注的重要问题安全性,即所用的方法是否具有与经典方法相同的灵敏度可以保证产品的安全性。本文总结了近年来我国生物制品采用药典方法检测的支原体污染的现状,分析了支原体核酸检测(NAT)方法的需求与研究现状以及国内外法规对支原体核酸检测方法使用的态度,简述了国外法规对支原体验证的相关要求,并针对目前我国支原体核酸检测法方法学验证的现状提出解决的思路,以期对我国支原体核酸扩增法检测的研发者及使用者提供借鉴。

硝酸甘油软膏的无菌检查方法学验证

目的建立硝酸甘油软膏的无菌检查方法,并对方法进行验证。方法取预热至45℃的供试品10支(15g/支),每支称取1g,加至含溶化的司盘80、聚山梨酯80无菌混合物和无菌玻璃珠的锥形瓶中,振摇混匀后,加入45℃的pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨水缓冲液至100ml,使供试品充分乳化。按薄膜过滤法,细菌、真菌每膜用300ml pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,消除抑菌活性。结果经方法验证,硝酸甘油软膏供试品组、阴性对照组均无菌生长,试验组各滤器中试验菌与相应对照组比较均生长良好,说明供试品在该检验量和检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计。结论薄膜过滤法有效可行,可用于硝酸甘油软膏的无菌检查。

妇科止带片微生物限度检查的方法学验证研究

目的建立妇科止带片微生物限度检查方法。方法采用薄膜过滤法进行细菌数计数,采用平皿法进行霉菌和酵母菌计数,采用常规法进行控制菌的检查。结果大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌回收率皆在80%以上;金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率皆在95%以上;阴性菌对照组均无生长。结论该法可以作为妇科止带片的微生物限度检查方法。

盐酸普萘洛尔凝胶的微生物限度检查方法学验证

目的:建立盐酸普萘洛尔凝胶的微生物限度检查方法。方法:利用氯化钙能与凝胶中的壳聚糖结合形成钙盐沉淀达到破胶目的的原理,用10%氯化钙溶液10 m L与盐酸普萘洛尔凝胶10 g混匀,加0.9%无菌氯化钠溶液至100 m L,得1∶10破胶供试液,取1 m L加0.9%无菌氯化钠溶液100 m L稀释后过膜,用300 m L 0.9%无菌氯化钠溶液分3次冲洗滤膜,每次100 m L,边冲洗边振摇,泵速为160 r/min。结果:经验证试验,采用上述方法加菌回收率均大于70%,盐酸普萘洛尔凝胶在此实验条件下无抑菌作用或抑菌作用弱。结论:盐酸普萘洛尔凝胶中的细菌、霉菌、酵母菌的检查可采用薄膜过滤法,控制菌检查可采用常规法,结果可靠。

熟地强筋丸微生物限度检查方法学验证

目的:建立熟地强筋丸的微生物限度检查方法。方法:按《中国药典》2010年版规定对3批熟地强筋丸进行微生物限度验证试验,并测算菌回收率。结果:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌以培养基稀释法(0.2 ml/皿)处理,白色念殊菌,黑曲霉菌以直接接种法处理,回收率均大于70%,控制菌以直接接种法处理试验组均为阳性。结论:该方法具专属性、准确可行,可作为熟地强筋丸微生物限度检查的方法。

快立洁手消毒凝胶的微生物限度检查方法学验证

目的建立快立洁手消毒凝胶的微生物限度检查方法。方法采用薄膜过滤法,按照《中国药典》2010年版二部有关微生物限度检查法的相关要求进行快立洁手消毒凝胶的微生物限度检查方法验证。方法学验证试验以枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、黑曲霉为试验菌,铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌为控制菌。验证试验进行3次独立的平行试验,并分别计算各试验菌每次试验的回收率。结果细菌、真菌和酵母菌计数方法验证试验中,试验菌的回收率、控制菌检查结果均符合要求。结论薄膜过滤法有效可行,可用于快立洁手消毒凝胶的微生物限度检查。