烯效唑对杂交兰苗期植株的矮化效应研究

为明确烯效唑(S_(3307))对杂交兰苗期植株生长的影响,以自育新品系GZ1-11为试材,采用不同浓度的S_(3307)进行灌根处理。结果表明,适宜浓度的S_(3307)可以有效抑制新苗株高、叶长和根长,增加叶宽和根粗,但不影响假鳞茎的纵径和与横径。随着S_(3307)施用浓度的增加,植株的矮化效应显著增强,其中30 mL 10.00 mg/L S_(3307)的矮化效果最强,但综合杂交兰植株高度、叶片形态等表型特征及成本,生产上施用30 mL 2.50 mg/L的S_(3307)为宜。

杂交兰ChCAO基因克隆及其在叶艺品系中的表达特征

【目的】叶绿素酸酯a加氧酶(CAO)是叶绿素b形成过程中的关键酶,对杂交兰CAO基因进行克隆及表达特征分析可为探究其在杂交兰叶艺形成中的调控作用奠定基础。【方法】以杂交兰‘紫妍氏’(K21)及其叶艺品系‘中透紫妍氏’(K21-3)为试验材料,用RT-PCR和RACE技术从叶片中克隆获得ChCAO基因,对ChCAO进行结构特征、理化性质、序列比对以及系统进化关系等分析;用qRT-PCR法对ChCAO在不同组织及叶艺品系叶片中的表达特性进行分析;并用VIGS技术对ChCAO进行沉默表达。【结果】ChCAO基因编码区长1608 bp,编码535个氨基酸,ChCAO与墨兰CAO亲缘关系最近,并与其他兰科植物CAO聚为一类。qRT-PCR结果显示,ChCAO基因表达具有组织特异性,在叶中相对表达量最高,根中相对表达量最低;此外,ChCAO在K21绿叶和K21-3绿叶区域叶片中的相对表达量显著高于K21-3叶艺区域叶片中的相对表达量。构建该基因的VIGS沉默载体转化烟草,发现沉默ChCAO后烟草叶片呈黄化状态,叶片中的叶绿素含量及ChCAO基因的相对表达量也显著降低。【结论】克隆获得了杂交兰ChCAO基因,并对其功能进行了初步鉴定,为进一步研究杂交兰叶艺形成机理提供重要依据。

秋水仙素诱导杂交兰四倍体及倍性鉴定

以杂交兰F1代无菌苗(2n=2x=40)为供试材料,分别用浓度为0.02%、0.05%、0.10%和0.20%的秋水仙素对其根状茎处理24、48和72h,成功获得了四倍体植株。试验结果表明,以0.10%的秋水仙素处理48h诱导效果最佳,变异率为36%。根尖染色体压片表明,四倍体染色体数为2n=4x=80,二倍体对照为2n=2x=40。加倍后的植株较二倍体植株粗壮,叶片变厚,颜色变深,茎基部粗壮,颜色深,生长势变缓,根系变粗,根状茎增粗,可作为新材料加以利用。

杂交兰‘黄金小神童'四倍体诱导技术研究

以杂交兰‘黄金小神童'根状茎为材料,采用安磺灵和EMS(甲基磺酸乙酯)为诱导剂进行多倍体材料诱导,分别用安磺灵浓度为0、0.001%、0.002%、0.003%对其根状茎浸泡处理24、48、72 h后,接种到含有EMS浓度为0、20、50、70 mg/L的固体培养基中继续诱导,培养1个月后转接到无EMS的分化培养基上培养,经筛选及植株稳定后获得四倍体植株。结果表明:以安磺灵浓度为0.002%处理48 h,EMS浓度为50 mg/L加入培养基培养,变异效果最佳,变异率为52%,死亡率仅为6%。筛选出的四倍体株系经稳定后,在形态上表现出植株粗壮,叶片增厚、带革质、叶色深绿、叶片扭曲等特征;经气孔显微观察,气孔单位面积显著增大;经染色体数目鉴定,二倍体株系染色体数目为2n=2x=40,四倍体株系染色体数目为2n=4x=80,较二倍体加倍。

杂交兰根状茎的增殖与分化成苗技术

以杂交兰种子萌发后形成的根状茎为材料,研究不同基本培养基、不同植物生长调节剂对其根状茎增殖、分化成苗以及幼苗生根移栽的影响。结果表明:1/2MS培养基较适合根状茎的增殖分化;较适宜的杂交兰增殖和分化培养基为1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L;杂交兰较适宜的生根培养基为1/2MS+IBA0.5 mg/L;闭瓶3 d后,再开盖炼苗3 d后可移栽,移栽基质为苔藓,25 d后成活率达95.6%。

施肥浓度与周期对杂交兰组培苗叶片生长的影响

为研究杂交兰组培苗炼苗移栽技术,设计了4种施肥浓度和3种施肥周期进行试验,以了解其对杂交兰组培苗叶片生长情况的影响。结果表明:当施肥浓度>3 000倍液时,叶片数、叶长和叶宽等3个指标的增长值随着施肥浓度的增加而增加;到第4个月时,施用复合肥(20-10-20)1 200倍液,组培苗叶片生长情况最好,与其他处理差异显著;以10 d为间隔的施肥是较为理想的施肥周期。

杂交兰原球茎增殖及分化研究

[目的]对杂交兰原球茎的增殖及分化进行研究。[方法]采用L9(34)正交试验设计,研究培养基、6-BAI、BA和AC对杂交兰原球茎增殖的影响;设置几种不同培养基对原球茎的分化进行探讨。[结果]培养基和6-BA对原球茎的增殖影响不大,IBA浓度为0.1 mg/L、AC浓度为1.0 mg/L时,原球茎增殖效果最好;1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L对原球茎的分化效果最好。[结论]在培养基中添加NAA有利于原球茎的分化。

高温胁迫对二倍体和四倍体杂交兰相关生理生化特征的影响

以二倍体杂交兰及其加倍后形成的四倍体为材料,研究了高温胁迫(40℃/30℃,光周期为12h/d)处理对二倍体及其四倍体杂交兰幼苗叶片叶绿素含量、膜损伤程度、渗透调节物质含量以及保护酶活性等生理生化特性的影响,以明确其抗热性差异。结果显示:高温胁迫后,各材料叶绿素含量均随胁迫时间延长呈下降趋势,且四倍体杂交兰的下降幅度小于二倍体;两种倍性杂交兰叶片丙二醛(MDA)含量均增加,O2.-释放速率总体呈下降的趋势,但四倍体MDA含量增幅和O2.-释放速率始终低于二倍体;四倍体叶片脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白质含量的增幅均大于二倍体,其SOD、CAT活性的增幅也均显著大于二倍体,但其POD活性的降幅则小于二倍体。研究表明,四倍体杂交兰具有较强的细胞渗透调节能力、蛋白质合成能力、蛋白质稳定性以及消除活性氧伤害的能力,耐热性强于二倍体。

杂交兰品种‘韩国小姐’与墨兰品种‘企剑黑墨’杂交坐果及无菌播种研究

以大花蕙兰与墨兰的杂交品种‘韩国小姐’为母本，墨兰品种‘企剑黑墨’为父本进行杂交，对其杂交坐果、落果情况及种子的无菌播种方法进行研究。结果表明：授粉后0～112d落果较为严重。150d时坐果率为62．1％。果荚采收时期及培养基对种子的无菌萌发影响显著，种子在授粉后194d采收，且于不添加植物生长调节剂的1／2MS培养基中培养时萌发最佳。

杂交兰种质资源遗传多样性的SRAP分析

采用SRAP技术对24份杂交兰种质资源的遗传多样性进行分析。筛选出的11对引物组合共扩增出119条谱带,其中102条为多态带,多态性比率86.1%,平均每对引物组合产生9.3个多态性位点。各种质之间的相似系数变化范围为0.43～0.98,平均为0.67。UPGMA聚类分析表明：在遗传相似系数0.69处将24份供试材料划分为5个类群,较好地揭示了杂交兰种质间的遗传多样性与亲缘关系,可为杂交兰种质资源利用、杂交育种亲本选择及杂种后代鉴定提供科学依据。

杂交兰‘紫妍氏’叶艺性状的生理生化与细胞结构分析

该研究以杂交兰‘紫妍氏’(K21)及其3个叶色变异(叶艺)新品系(K21-1、K21-2、K21-3)为材料,分析叶片光合色素含量、叶绿素合成前体物质含量、叶绿素合成相关酶活性及叶绿素荧光参数变化,并进一步观察叶片显微结构和叶绿体超微结构,以探讨其叶色变异的生理基础。结果表明:(1)3个叶艺品系叶片叶艺区域的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素含量均显著低于其相应的绿色区域和亲本绿叶;相较于相应的叶片绿色区域,K21-1、K21-2叶片叶艺区域的UrogenⅢ大量积累,K21-3叶片叶艺区域的PBG大量积累;3个叶艺品系叶片叶艺区域中的光系统Ⅱ最大光化学效率(Fv/Fm)和实际光化学效率[Y(Ⅱ)]均显著低于叶片绿色区域,三者的光化学淬灭系数(qP)则显著高于叶片绿色区域。(2)在显微结构和叶绿体超微结构比较中,相较于叶片绿色区域,叶片叶艺区域的细胞中含较少的叶绿体,且叶绿体的发育成熟程度较低,其中K21-3呈现出一种空腔化的结构。研究推测,叶绿素前体物质合成受阻、叶绿体结构发育不良和叶绿素含量下降是杂交兰3个叶艺品系叶艺形成的原因。该研究从生理和细胞层面初步解释了杂交兰叶艺形成的可能原因,为进一步开展相关分子机理研究及合理利用种质资源奠定了理论基础。

二倍体和四倍体杂交兰幼苗对低温胁迫的生理响应差异分析

为探究不同倍性杂交兰(Cymbidium hybrid)对低温胁迫的生理响应差异,对低温胁迫下(昼温10℃、夜温4℃)二倍体杂交兰以及四倍体杂交兰株系T1和T2幼苗叶片中脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白质、MDA和叶绿素含量,O-·2产生速率以及SOD、POD和CAT活性的动态变化进行了测定和分析;在此基础上,比较了二倍体和四倍体杂交兰的耐低温特性差异。结果显示:随着胁迫时间的延长,二倍体杂交兰和四倍体杂交兰株系T1和T2幼苗叶片中脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白质和MDA含量,O-·2产生速率以及POD和CAT活性总体呈逐渐增加的趋势;叶绿素含量呈逐渐下降的趋势;SOD活性呈先上升后下降的趋势,并分别在胁迫后第9天和第6天达到峰值。在常温(25℃)下恢复生长3d后,二倍体杂交兰和四倍体杂交兰株系T1和T2幼苗叶片中脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白质和MDA含量,O-·2产生速率以及SOD、POD和CAT活性均降低,而叶绿素含量升高。总体上,二倍体杂交兰叶片中脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白质含量以及SOD、POD和CAT活性的增幅明显小于四倍体杂交兰,MDA含量和O-·2产生速率的增幅则大于四倍体杂交兰,而叶绿素含量的降幅则明显大于四倍体杂交兰。综合分析结果表明:在低温胁迫下,四倍体杂交兰叶片中渗透调节物质含量和保护酶活性均较高,其对低温的耐性强于二倍体杂交兰。

杂交兰花期调控技术研究

[目的]研究高山和赤霉素处理对杂交兰(Hybrid Cymbidium)开花的影响,为其花期调控提供参考。[方法]以玉女杂交兰为材料。在惠州市象头山(海拔约600 m)进行高山处理;赤霉素浓度分别为50、200、400、600和800 mg/L,以清水为对照。[结果]花芽分化后,赤霉素和高山处理均可明显促进玉女杂交兰花序的生长,使花期提早,败花率降低;赤霉素处理可使玉女杂交兰的花朵变大,高山处理可使花横径明显增大。[结论]赤霉素和高山处理均可以调控杂交兰花期,但利用赤霉素调控杂交兰的花期时应注意处理浓度和时间,防止对花朵性状产生不利影响。

施肥浓度与周期对杂交兰组培苗根系生长的影响

在施肥浓度与周期对杂交兰组培苗叶片生长影响的研究基础上,进一步探讨了施用复合肥(20-10-20)对杂交兰根系生长的影响。结果表明:随着时间的推移,无论施肥浓度和周期如何变化,根数、根长都呈逐渐增加趋势,而根径与时间的关系不明显;相对较高的施肥浓度有利于根数、根长和根径的增大,较短的周期有利于根数和根径的增加,但对根长的影响不明显;杂交兰的根数、根长与叶片数间具有显著的相关关系;综合考虑施肥浓度、周期对叶片、根系生长的影响,施肥浓度1 200倍液、周期10d是较为理想的施肥方案。

杂交兰×蕙兰种间杂交后代的核型特征分析

以杂交兰品种"韩国桃花"(大花蕙兰×墨兰)为母本、蕙兰为父本杂交获得种间杂交F1代,对亲本及F1代株系的染色体数目和形态特征进行了分析。结果表明,亲本及F1代染色体数均为40,母本"韩国桃花"的核型为2n=2×=40=26m+14sm,属2B型;父本蕙兰的核型为2n=2×=40=26m+14sm,属2B型;杂种F1代核型出现了多种类型,分别为:14m+26sm、4m+36sm、22m+18sm、8m+32sm、10m+28sm+2st、24m+16sm、10m+24sm+6st、32sm+8st、12m+28sm、4m+34sm+2st、16m+24sm、40sm等类型,其中2B型占85%;3B型占15%。这可能为多亲本基因重组的结果。

不同栽培基质对杂交兰组培苗移栽的影响

以3种杂交兰组培苗为试材,采用5种不同栽培基质进行移栽试验,研究了不同栽培基质对组培苗的移栽成活率及生长的影响。结果表明:杂交兰A和C在基质1(杉木屑)中表现最佳,杂交兰B在基质5(杉木屑∶辣木屑∶桉树屑=1∶1∶1)中成活率最高,说明不同的杂交兰组培苗间的适应性不同,直接影响到小苗移栽的成活率。而从广谱性上来说,基质5均比较适合3种花卉的生长,成活率均达到90.00%以上。杂交兰A采用基质3移植的新叶率及根长生长优于其它基质,采用基质2的新根率最高,基质5最适合株高生长,基质1促进根长生长;杂交兰B除了新根增长是基质1最优之外,其余的新叶、株高、根长增长均是基质5最优;杂交兰C采用基质5移植的各项生长指标均优于其它基质,基质5更适合杂交兰C的初期培养。3种杂交兰组培苗对基质表现不一致,可能是由于亲本差异大,所以对环境的适应性也有所不同。另外对土壤的酸碱度、土壤肥力、及当地气候的适应性也不一致。

不同基质对西藏林芝地区杂交兰‘春蕙’品种光合和生理指标的影响

在西藏林芝地区,利用当地常见的腐熟牛粪和羊粪、柳树下采集的腐殖土、半腐熟的玉米和油菜秸秆以及碎石为材料,根据各种材料的特点设计出5个不同的基质配方,以单纯腐殖土作为对照,对杂交兰‘春蕙’品种进行盆栽试验。综合叶绿素含量、净光合速率、气孔导度、蒸腾速率和干物质的积累量等指标来看,腐殖土∶碎石=3∶1是‘春蕙’品种更适宜的基质配方,可在西藏林芝地区推广应用。

影响春兰杂交兰‘宋梅’ב集圆’组培苗生根的因素

以杂交兰‘宋梅’ב集圆’组培苗为试材,系统研究了基本培养基、植物生长调节剂、有机附加物、活性炭浓度4种因素对其芽生根的影响,以解决国兰传统繁殖方法繁殖速度慢的问题。结果表明:MS培养基为杂交兰芽生根的最佳培养基;植物生长调节剂浓度配比对芽生根率影响显著,在含NAA 3.0mg/L+6-BA 0.1mg/L的培养基上芽生根效果最好;有机附加物对芽生根有促进作用,椰汁对杂交兰生根效果最好;活性炭可以提高芽生根率,最佳浓度为3.0g/L。

杂交兰的组织培养与快速繁殖技术研究

以杂交兰的腋芽为材料,研究了杂交兰的组织培养和快速繁殖技术.结果表明:从诱导、增殖、分化到生根可以用同一种培养基,即MS+6-BA1mg/L+IBA0.5mg/L+活性炭5g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L(pH5.8),IBA对杂交兰的增殖和分化影响较大.

杂交兰的株型调控试验研究

[目的]为了调控杂交兰的株型。[方法]以杂交兰"醉美人"为研究对象,用正交设计法研究植物生长调节剂种类、施用浓度、灌根次数、灌根间隔对杂交兰新芽株高的影响。[结果]PP333+200 mg/L+灌根2次+间隔7 d处理的新芽株高最优,仅比前代株高低5.2%,比对照低24.5%。[结论]该研究为增加杂交兰生产者的市场竞争优势提供理论依据。