生酸枣仁拮抗条件性恐惧致焦虑大鼠作用及作用机制研究

目的探讨生酸枣仁拮抗条件性恐惧致焦虑大鼠的作用和作用机制。方法SD大鼠随机分为4组:空白组、模型组、地西泮组(3.6 mg/kg)和生酸枣仁组(5.0 g/kg)。利用条件性恐惧方法复制焦虑模型,模型复制后,经灌胃途径给药10d。于末次给药1h后,用旷场实验(OFT)和高架十字迷宫实验(EPM)评价条件性恐惧致焦虑大鼠的焦虑样行为;酶联免疫吸附法(ELisa)检测血清中皮质酮(CORT)含量,皮质、海马和杏仁核中CORT、脑源性神经营养因子(BDNF)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)和γ-氨基丁酸(GABA)含量并计算Glu/GABA的比值。结果在行为学实验中,与空白组相比,模型组大鼠在OFT实验中的跨格次数、中央格运动时间和进入中央格次数均减少(P<0.05或P<0.01);在EPM实验中开/总时间百分比和开/总次数百分比均减少(P<0.01)。与模型组相比,地西泮组大鼠在OFT中跨格次数及中央格运动时间均增加(P<0.01),生酸枣仁组在OFT中各指标均无显著性差异(P>0.05);地西泮组和生酸枣仁组大鼠在EPM中的总入臂次数、开/总时间百分比和开/总次数百分比均增加(P<0.05或P<0.01)。在Elisa法实验中,与空白组相比,模型组皮质、海马与杏仁核中的CORT、Glu的含量和Glu/GABA均增加、GABA的含量均减少(P<0.05或P<0.01),在皮质和海马中BDNF的含量均减少、5-HT、NE和DA的含量均增加(P<0.05或P<0.01),但杏仁核中仅DA的含量增加(P<0.01),BDNF、5-HT及NE的含量减少或增加(P>0.05)。与模型组相比,地西泮组和生酸枣仁组大鼠皮质、海马与杏仁核中的CORT、NE、Glu和GABA的含量均减少、Glu/GABA的比值均增加(P<0.05或P<0.01),皮质和海马中BDNF的含量均增加(P<0.01),皮质中5-HT和DA含量均减少(P<0.01)、但杏仁核中BDNF的含量增加、5-HT的含量减少和海马中DA的含量减少(P>0.05);地西泮组大鼠杏仁核中DA的含量减少(P<0.05),但海马5-HT的含量减少(P>0.05);生酸枣仁组海马中5-HT含量减少(P<0.05),但杏仁核中DA含量减少(P>0.05)。各组实验动物之间血清中CORT的含量变化均无显著性差异(P>0.05)。结论生酸枣仁能有效改善条件性致焦虑大鼠焦虑样行为,其抗焦虑作用机制可能与皮质、海马和杏仁核内CORT、BDNF及神经递质含量变化有关。

啮齿动物条件性恐惧模型建立与评价的研究进展

条件性恐惧模型是基于中性的条件刺激(CS)与厌恶性非条件刺激(US)配对并反射性激活非条件恐惧反应(UR)建立的一种恐惧学习和记忆的行为范式模型。而造模过程中动物品系和性别的选择、配对类型和次数、CS和US参数以及评估方法的不同均会影响模型的建立。因此,文章就条件性恐惧模型的构建方法和评价指标及其涉及的脑区和神经回路进行综述。

成骨细胞条件性视黄酸信号失活小鼠模型的构建与验证

目的·构建并验证可模拟维生素A缺乏症(vitamin A deficiency,VAD)导致的颅颌面骨畸形且出生后可存活的模型小鼠。方法·运用Cre-LoxP重组酶系统,通过将Osx^(Cre)与Rosa26dnRARα/dnRARα基因型的小鼠多代杂交,构建成骨细胞视黄酸受体α显性负突变体(dominant-negative retinoid acid receptorαmutation,dnRARα)条件性过表达小鼠Osx^(Cre);Rosa26^(dn/dn),实现成骨细胞视黄酸信号条件性失活以模拟VAD状态。取Osx^(Cre);Rosa26^(dn/dn)小鼠及其同窝对照小鼠股骨骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)与颅顶骨细胞,成骨诱导后,采用蛋白质印迹法(Western blotting)验证成骨细胞中视黄酸受体α(retinoid acid receptorα,RARα)蛋白的表达水平。取Osx^(Cre);Rosa26^(dn/dn)小鼠及其同窝对照小鼠颅顶骨细胞经诱导形成的成骨细胞,采用双荧光素酶报告基因技术验证视黄酸信号通路抑制程度。同时分别应用表达Cre、eGFP的腺病毒(Ad-eGFP与Ad-Cre)感染Rosa26^(dn/dn)小鼠股骨BMSC与颅顶骨细胞,成骨诱导后运用相同方法评价显性负突变蛋白表达水平与视黄酸信号通路抑制程度。取6周龄小鼠颅骨,运用Micro-CT及三维重建技术验证Osx^(Cre);Rosa26^(dn/dn)模型小鼠颅颌面骨畸形表型。结果·Western blotting结果显示,Osx^(Cre);Rosa26^(dn/dn)小鼠股骨及颅顶骨成骨细胞相较同窝对照小鼠表现出RARα蛋白水平上调。双荧光素酶报告基因实验结果显示Osx^(Cre);Rosa26^(dn/dn)小鼠成骨细胞的视黄酸反应元件(retinoid acid response element,RARE)活性相较同窝对照小鼠下调(P<0.05)。同时,Ad-Cre感染后Rosa26^(dn/dn)小鼠股骨及颅顶骨成骨细胞相较Ad-eGFP感染后表现出RARα蛋白水平上调,成骨细胞的RARE活性下调(P<0.05)。Micro-CT及三维重建结果显示,6周龄Osx^(Cre);Rosa26^(dn/dn)小鼠颅骨呈现长度缩短、骨发育不全等VAD样颅颌面骨畸形。结论·成功构建了成骨细胞条件性视黄酸信号失活小鼠模拟VAD所致颅颌面骨畸形,为未来VAD所致颅颌面骨畸形出生后致病机制与潜在靶点的研究提供了新的模型与途径。

基于CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法的Ddx3x肝脏条件性敲除小鼠模型的构建与鉴定

目的采用CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法构建DEAD-box RNA解旋酶3X连锁(DEAD-box RNA helicase 3X-linked,Ddx3x)肝脏条件性敲除小鼠。方法设计特异的sgRNA序列,在Ddx3x基因外显子4~10两端插入LoxP序列,构建Ddx3x-flox小鼠。采用PCR方法对F0代和F1代小鼠进行基因鉴定。将Ddx3x-flox F1代小鼠与特异性表达Alb-Cre的工具鼠交配,获得肝脏条件性敲除Ddx3x基因小鼠(Ddx3x^(Δhep))。采用PCR方法和Western blotting方法分别检测Ddx3x^(Δhep)基因小鼠目的基因与蛋白的表达。选取8周龄雄性野生型C57/6J小鼠、Ddx3x^(Δhep)小鼠、Ddx3x^(fl/fl)小鼠,测定血清ALT、AST水平评价肝脏肝损伤情况。结果对F1代小鼠基因PCR鉴定的结果表明,基因型符合Ddx3x^(fl/fl);F1代小鼠与Alb-Cre小鼠杂交,子代与Ddx3x^(fl/fl)小鼠杂交,即获得Ddx3x^(Δhep)小鼠;PCR与Western blotting结果显示,目的小鼠肝组织中Ddx3x基因和蛋白表达显著降低。此外,Ddx3x^(Δhep)小鼠无胚胎致死现象,出生后生理状况良好。正常饲养条件下,Ddx3x^(Δhep)小鼠与Ddx3x^(fl/fl)小鼠及野生型小鼠相比,血清ALT、AST指标及体质量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论基于CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法成功构建了Ddx3x^(Δhep)小鼠动物模型,为后续研究Ddx3x在肝脏中的生物学功能及作用机制奠定了良好的基础。

条件性溢出:数字时代公共参与形式转换及其异质性效应——基于“2018年中国城市治理调查”的实证分析

互联网缩短了民众与政府的距离,为公共参与带来了新渠道。那么,数字时代的公共参与如何实现形式转换?日益增长的线上参与如何形塑线下参与?如果说传统线下参与难以激发参与意愿,那么线上参与何以唤醒人们的参与热情,进而重塑线下参与?基于对“2018年中国城市治理调查”的实证分析发现,中国城市居民的线上参与在向线下“转化”时存在“条件性溢出效应”。溢出效应的异质性分析表明,社会经济地位和政治信任影响着条件性溢出效应。高学历群体存在常规和非常规渠道的溢出效应,而富裕群体则仅存在常规渠道的溢出效应。信任中央政府的群体通常偏好线上常规渠道的溢出效应,但其正向效应也会外溢至线下非常规渠道。信任地方政府的群体偏好线上常规渠道参与,且排斥线上非常规渠道参与。因此,各级政府在网络空间治理实践中,应重视网络问政的民意吸纳作用,让网络空间成为民意的“活水池”,而非制度外行为的“蓄水池”。

条件性敲除动物模型在神经发育障碍疾病中应用的研究进展

神经发育障碍疾病(NDDs)是指一组在发育时期出现行为和认知障碍,表现为学习和执行某些智力、运动或社交技能时出现明显困难的疾病。随着科学技术的发展,条件性基因敲除技术在NDDs的研究方面应用广泛。本文基于Cre-Loxp系统NDDs条件性基因敲除动物模型的构建方法及其在NDDs相关疾病中的应用进展进行阐述。

Cre/loxP条件性基因敲除小鼠在椎间盘退变研究中的应用

椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是一个在生命早期就开始的过程,其与遗传、机械负荷、创伤和营养因素以及衰老密切相关,已证是腰痛的主要原因之一[1]。然而,IDD的分子生物学机制仍然不清楚。椎间盘的不同细胞类型表达不同的基因,以调控椎间盘的发育和稳态。

条件性恐惧消退记忆的编码、巩固、提取及其干预

促进和保持条件性恐惧消退是改善暴露疗法的关键。恐惧消退并没有消除原来的恐惧记忆,而是形成新的消退记忆与其竞争。良好的消退记忆需要成功的编码、巩固与提取,杏仁核、前额叶、海马以及中脑多巴胺系统在其不同阶段具有不同作用。增大预期错误、口服认知增强剂、神经调控、口服左旋多巴胺等方法能够有效干预消退记忆编码和巩固。未来研究还需扩充各阶段神经机制,探讨如何增强消退记忆稳定性以及干预消退记忆提取。

条件性与激励性促销语言在诱发前瞻性情绪上的分工机制

语言是消费者开展促销活动认知的关键线索。现有研究尚未明晰具有不同内涵的条件性和激励性促销语言在影响消费者情绪上的分工机制。为此,本研究借助三组共六个心理学实验,对该分工机制进行了探讨并得出以下结论:(1)预期情绪的发生与激励性促销语言高度相关。第一,激励性促销语言诱发的预期欣喜和预期后悔强度显著强于希望和焦虑。第二,与未展示相比,展示激励性促销语言诱发的预期欣喜和预期后悔更强烈。第三,与低激励程度相比,激励程度高的促销语言诱发的预期欣喜和预期后悔更强烈。(2)消费者对未来事件的结果模拟是激励性促销语言影响预期情绪的中介变量。(3)预支情绪的发生与条件性促销语言高度相关。第一,条件性促销语言诱发的希望和焦虑强度显著强于预期欣喜和预期后悔。第二,与未展示相比,展示条件性促销语言诱发的希望和焦虑情绪更强烈。第三,与条件限制程度弱相比,条件限制程度强的促销语言诱发的希望和焦虑更强烈。(4)消费者对实现未来目标的过程模拟是条件性促销语言影响预支情绪的中介变量。

T细胞条件性敲除Spi1基因小鼠的繁育及鉴定

目的繁育T细胞条件性敲除Spi1基因的小鼠并对其进行鉴定,为进一步探索Spi1编码蛋白PU.1的作用提供研究基础。方法将Lck-Cre小鼠与Spi1^(flox/flox)小鼠进行杂交繁育,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出基因型为Lck-Cre×Spi1^(flox/flox)的小鼠即为T细胞条件性敲除Spi1基因的纯合子小鼠。使用磁珠分选脾脏T淋巴细胞,并应用Western blot、实时荧光定量PCR(qPCR)及流式细胞术检测PU.1在T细胞中的敲除效率。结果Lck-Cre×Spi1^(flox/flox)小鼠基因稳定遗传。与Spi1^(flox/flox)小鼠相比,Lck-Cre×Spi1^(flox/flox)小鼠脾脏T细胞中的PU.1表达水平显著降低。结论该研究应用Cre/LoxP系统和CRISPR/Cas9技术成功构建了T细胞条件性敲除Spi1基因小鼠,为后续研究PU.1在T细胞相关疾病中的具体作用提供了可靠的动物模型。

条件性基因敲除诱导剂他莫昔芬对小鼠肠道微生物群组成的影响

他莫昔芬(Tamoxifen)作为一种选择性雌激素受体调节剂,在临床上应用于治疗乳腺癌,在生物遗传学领域研究中充当诱导型Cre-loxP条件性基因敲除系统的时空开关。肠道微生物与宿主基因紧密相连,与宿主肠道吸收、代谢、发育性疾病、肿瘤密切相关,利用他莫昔芬诱导特定基因敲除已成为探究微生物与宿主基因互作的主要研究方式。已有研究表明他莫昔芬引发雌激素受体介导的毒性,干扰宿主生物学功能,少有研究报道他莫昔芬本身是否对小鼠肠道微生物群的稳定性造成影响,本研究通过给野生型C57BL/6J小鼠注射他莫昔芬模拟条件性基因敲除以研究其影响及机制。研究结果发现,注射他莫昔芬组与对照组相比,小鼠体重、肠道组织结构与形态及肠道屏障功能无明显差异,但他莫昔芬对小鼠粪便和盲肠内容物中的微生物丰度产生影响。这些结果提示使用他莫昔芬诱导小鼠条件性基因敲除时需要注意肠道菌群改变带来的生理和病理表型,从而减少他莫昔芬带来的干扰。

蛋白激酶D3血管内皮细胞条件性敲除小鼠的构建及表型分析

目的构建Prkd3血管内皮细胞条件性敲除小鼠并分析其表型,探讨血管内皮细胞上Prkd3条件性敲除小鼠的敲除效率及可能的表型。方法利用Cre/LoxP系统构建血管内皮细胞条件性基因敲除小鼠模型,即分别构建Prkd3flox/flox小鼠和Cdh5-Cre工具小鼠,再将两者进行交配,筛选得到Prkd3血管内皮条件性敲除小鼠(Cdh5-Cre;Prkd3flox/flox,简称Prkd3ΔEC)。在血管内皮细胞内特异性敲除Prkd3,通过鼠尾PCR法进行基因型鉴定;分离肝血窦内皮细胞并用Western blot检测敲除效率,通过功能学及组织病理学方法评估内皮细胞中Prkd3缺失对肝脏的影响。结果成功构建Prkd3ΔEC,敲除效率大于90%。表型分析发现,Prkd3ΔEC小鼠表现出自发性肝纤维化,随年龄增长逐渐加重(P<0.05);通过HE染色和天狼星红染色发现肝脏中胶原纤维增多,血管周围的纤维成分明显增多(P<0.05)。表明血管内皮细胞中Prkd3缺失能够诱发自发性肝纤维化。结论成功构建了Prkd3ΔEC,该条件性敲除小鼠的肝脏存在自发性肝纤维化情况。

骨形成蛋白4条件性RNA干扰小鼠的建立

为研究骨形成蛋白4(Bone morphogenetic protein 4,BMP4)在骨骼发育中的作用,我们以含有LoxPneo的pBSK/U6载体为骨架,构建小鼠BMP4条件性RNAi(conditional RNA interference),CRNA;载体(BMP4CRNAi),经KpnⅠ和AflⅢ双酶切获取针对bmp4并含neo基因的目的干扰片段,纯化后的目的片段显微注射入0.5d的FVB/NJ小鼠受精卵,并植入同期发情的假孕母鼠中,获取G0代转基因小鼠;利用PCR对G0代转基因小鼠基因型进行鉴定,PCR阳性的小鼠与FVB/NJ小鼠交配,最终获取稳定传代的BMP4CRNAi小鼠。稳定传代的BMP4CRNAi小鼠与成骨和软骨前体细胞表达Cre的转基因小鼠(Col2a1-Cre)交配,获取BMP4Col2a1-CRNAi小鼠。分离BMP4Col2a1-CRNAi小鼠原代软骨细胞,提取总RNA,利用半定量RT-PCR检测RNA干扰效率。小鼠基因型鉴定结果表明:成功获得条件性RNAi转基因小鼠;BMP4干扰效率检测结果表明:在软骨细胞中BMP4的干扰效率为81%。以上结果表明,我们成功制备了BMP4CRNAi小鼠和BMP4Col2a1-CRNAi小鼠,BMP4CRNAi小鼠与不同Cre转基因小鼠交配,可以研究BMP4在不同细胞、组织和器官的功能,BMP4Col2a1-CRNAi小鼠的获得为研究BMP4在软骨发育中的作用提供了合适的动物模型。

条件性的关联学习和消退过程的性别差异

采用事件相关电位技术和条件性关联学习模型相结合的方法,考察在负性背景下男女性对一般事件的关联学习和消退是否存在差异。结果表明:在关联学习阶段,男性较女性表现出P2潜伏期缩短和N2波幅增大,而女性比男性表现出更大的P3波幅。在消退阶段,女性较男性出现更小的P2波幅和更大的P3/LPP波幅。这说明女性可能慢于男性探索到条件刺激和非条件刺激之间的关联,并且保持时间更久;男性在相对早期对消退产生更大的反应,女性则在相对晚期对消退投入更多的资源及努力。

皮质酮对吗啡条件性位置偏爱及条件性精神运动获得的影响

目的 :研究皮质酮作用下吗啡条件性位置偏爱 (CPP)及条件性精神运动的变化趋势及其可能机制 ,为探讨应激、环境线索诱发复吸的机制提供基础。方法 :32只♂SD大鼠分成 4组。训练 2d ,1次药物匹配训练 (吗啡 2mg·kg- 1 ,皮质酮 5mg·kg- 1 ,ip ,提前 2 0min注射 ) ,1次生理盐水训练。观察训练前后大鼠在伴药侧停留的时间 ,急性给药后的运动及条件性精神运动的变化。结果 :(1)吗啡组训练后在伴药侧停留的时间显著长于对照组 (P <0 0 1) ,皮质酮吗啡组、皮质酮组与对照组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;(2 )在 5 0、6 0min时皮质酮吗啡组的急性精神运动显著大于吗啡组和对照组 (P <0 0 1) ;(3)皮质酮吗啡组大鼠的条件性精神运动显著大于对照组、吗啡组 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论 :5mg·kg- 1 的皮质酮显著抑制吗啡CPP的获得 ,但促进吗啡条件性精神运动的获得以及急性精神运动。

大鼠的条件性味觉厌恶对其他个体食物选择的影响

目的:为了探讨中毒大鼠对其他个体食物选择的影响,本实验用成年雄性SD大鼠25只,分为对照组、条件性味觉厌恶(CTA)组和3个观察组,其中观察1组观察CTA建立和测试全过程,观察2组仅观察CTA建立过程,观察3组仅观察CTA测试过程。以摄取糖精溶液为条件刺激,腹腔注射LiCl为无条件刺激,让CTA组大鼠获得对糖精的CTA,然后观察其他组的糖精嗜好性变化。结果:CTA组、观察1组和观察3组的糖精嗜好比均显著小于对照组;观察2组与对照组之间无显著差异。提示大鼠中毒后的味觉嗜好行为是影响其他个体的食物选择的重要因素。

论世界银行政策贷款条件性的概念及其发展

世界银行,是当今世界最大的国际金融开发组织和首要的国际发展组织。作为世界银行的两大信贷工具之一,政策贷款是用于帮助借款国恢复国际收支平衡、填补政策改革和制度建设方面的资金缺口,旨在实现借款国宏观发展目标的非项目贷款。发展中成员国取得政策贷款往往以满足特定条件,例如经济改革、行政改革、司法改革等为前提,习惯上我们把这些条件合称为"条件性"。条件性可谓世界银行在经济全球化的大时代背景下,向国际社会提供的一项公共产品,它以减少贫困、实现全球普遍发展为终极目标。

电针抑制大鼠吗啡条件性位置偏爱

目的 :观察不同频率电针刺激能否抑制大鼠吗啡条件性位置偏爱 (conditionedplacepreference ,CPP)的表达。方法 :采用计算机自动控制的三室迷宫CPP系统 ,第 1天测试天然偏爱 ;第 2至 5天进行条件训练 (吗啡 4mg·kg-1,i.p ,对照组给予等量的生理盐水 ) ;第 6天在无药状态下观察大鼠在伴药盒的停留时间。于CPP检测后2 4h ,分别给予大鼠 2Hz或 10 0Hz的电针刺激 ,每天 1次 ,连续 3天 ,最后一次电针结束后 2 4h测定大鼠在伴药盒停留时间。结果 :实验组大鼠在伴药盒的偏爱分数明显高于对照组。 2Hz及 10 0Hz电针均能明显降低CPP大鼠在原伴药盒的偏爱分数。结论 :多次 2Hz及 10 0Hz电针均能抑制大鼠吗啡CPP表达 ,两种频率的抑制效应差异无显著性。

左旋四氢巴马汀对吗啡条件性位置偏爱的影响

目的探讨不同剂量的左旋四氢巴马汀(lTetrahydropalmatine,lTHP)对吗啡诱导的条件性位置偏爱(CPP)的影响以及自身能否产生CPP效应。方法本实验采用倾向性实验程序,①对♂SD大鼠sc吗啡(5.00mg·kg-1)或生理盐水(NS)训练8d,d9测定大鼠对伴药侧的偏爱效应或测试前40minipNS或不同剂量的lTHP(1.25～5.00mg·kg-1),观察这些预处理对该效应的影响;②测量不同剂量的lTHP(1.25～5.00mg·kg-1)慢性用药(每天1次,ip)对CPP效应消退的影响;③测试ipNS或lTHP(1.25～5.00mg·kg-1)能否诱导大鼠对伴药侧产生偏爱(方法同吗啡)。结果5.00mg·kg-1吗啡诱导大鼠对伴药盒产生明显的CPP;测试前ip2.50mg·kg-1或5.00mg·kg-1的lTHP明显降低吗啡诱导的CPP效应的表达(P<0.05),其慢性给药明显加速吗啡CPP效应的消退;3个剂量的lTHP均不能诱导大鼠形成CPP。结论lTHP能抑制吗啡的奖赏效应,可在吗啡成瘾的治疗中发挥一定的作用。

氯胺酮诱导的大鼠条件性位置偏爱

目的:探讨氯胺酮在大鼠模型上形成条件性位置偏爱(CPP)的特点,分析氯胺酮精神依赖性潜力。方法:(1)60只SD♂大鼠随机分为对照组、氯胺酮及吗啡阳性对照组。(2)氯胺酮组每隔24h腹腔注射氯胺酮10m·lkg-1一次,连续6d,建立大鼠氯胺酮精神依赖性模型,吗啡组给予等剂量的吗啡,对照组则给予等剂量的生理盐水;(3)氯胺酮组及吗啡组于CPP形成后给予生理盐水进行消退实验。结果:(1)氯胺酮组及吗啡组大鼠出现了明显的CPP;(2)与吗啡组相比,氯胺酮组的CPP效应更显著,但消退较快。结论:氯胺酮可诱导大鼠产生CPP,但随着时间的推移CPP消退速度较吗啡快。