心肌纤维化特殊染色方法比较与优化

目的 对目前已有心肌纤维化染色方法进行优化,弥补目前心肌纤维常用染色方法在定量分析中存在的胶原纤维漏读及误读等问题,为心肌纤维化半定量及诊断提供参考。方法 利用实验室前期构建的心肌组织特异性cTnT~(R141W)基因突变致扩张型心肌病转基因小鼠模型,制备心脏组织石蜡切片,分别进行马松三色(Masson’s trichrome, Masson)染色法、天狼星红(picric sirius red, PSR)染色法、天狼星红-品红(van Gieson, VG)染色法、天狼星红-固绿(sirius red/fast green staining, SR/FG)染色法染色,利用Image J 2.1.0软件对胶原纤维面积进行定量比较,并从染液浓度、染色时间、酸性溶液预染3个方面对SR/FG染色法进行优化,对后续的胶原纤维定量分析进行应用验证。结果 4种特染方法均可实现胶原纤维的分布观察,其中,优化后的SR/FG染色法,即0.1%天狼星红-苦味酸酸性溶液预染5 min,随后于0.1%天狼星红-苦味酸与0.04%固绿的混合液中染色1 h,在软件识别中具有更低的漏读率和遗失率。结论 本文优化后的SR/FG染色法较其他传统胶原纤维特染方法,胶原纤维与心肌组织着色鲜亮、颜色对比明显、稳定性佳、方便快捷,更适用于后续胶原纤维占比定量分析应用。

精子形态学分析中染色方法的比较

目的:评价改良巴氏染色法、瑞-吉染色法和考马斯亮蓝染色法对形态正常精子率和顶体完整率检测结果影响。方法:分别采用改良巴氏染色法、瑞-吉染色法和考马斯亮蓝染色法对55例男性不育症患者精液涂片染色,计算形态正常精子率和顶体完整率。结果:①3种染色方法检测的形态正常精子率两两比较,差异均无显著性(P>0.05),瑞-吉染色法评价颈部和中段缺陷精子率及尾部缺陷精子率显著低于改良巴氏染色法和考马斯亮蓝染色法(P<0.05)。②3种染色方法检测的Ⅰ型、Ⅳ型顶体完整率两两比较,差异均无显著性(P>0.05),改良巴氏染色法检测的Ⅱ型和Ⅲ型顶体完整率明显高于考马斯亮蓝染色法和瑞-吉染色法(P<0.05)。③3种染色方法检测的形态正常精子率间均呈显著正相关关系(r=0.535、P<0.01,r=0.601、P<0.01,r=0.329、P<0.05)。3种染色方法检测的顶体完整率间均呈显著正相关关系(r=0.604,P<0.01,r=0.682、P<0.01,r=0.446、P<0.01)。结论:3种染色方法均可作为检测人精子形态和顶体完整率实用方法,其中改良巴氏染色法更适于精子形态学分析,瑞-吉染色法更适于顶体完整率判读。

黄瓜现采花粉生活力最佳染色方法的筛选

采用3种不同染色方法及离体培养法对黄瓜花粉生活力进行测定,结果显示,I-KI染色法的测定值偏低,不适用于黄瓜花粉生活力的测定;醋酸洋红染色法的测定值则明显偏高,也不适宜采用;而TTC染色法的测定值与离体培养法的测定结果相近且差异不显著,故认为是一种测定黄瓜花粉生活力较快捷、方便、精确的方法。同时还讨论了3种染色方法的应用原理及优缺点。

神经组织染色方法的研究概况

神经组织染色是研究神经退行性疾病所必需的一项关键的实验技术。但是,由于染色步骤的复杂和外界因素的干扰,时常导致染色结果的不稳定。该文就目前国内外建立的神经组织染色方法,包括尼氏染色、神经元染色、神经胶质细胞染色、髓鞘染色、突触染色和神经纤维染色的原理、优缺点及其应用作一概述,以便指导研究者选用合适的染色方法。

一种简便的考马斯亮蓝G250蛋白质染色方法

介绍一种快速、简便、几乎无背景的考马斯亮蓝G2 5 0 (CBBG2 5 0 )染色方法 .该方法所用试剂仅为稀盐酸和CBBG2 5 0 ,CBBG2 5 0的工作浓度为 0 0 0 15 % ,灵敏度达 0 0 2 μg/带 ,染色 2h达 70 % ,4h以上或染色过夜即可充分染色 .与以往的考马斯亮蓝染色方法相比 ,该方法有经济方便、灵敏度高、几乎无背景等优点 。

蛋白质双向电泳双胺染色方法的改进

讨论了蛋白质双向电泳检测的各种方法。并对本实验室使用过的两种银染方法 (非双胺银染及双胺银染 )进行对比研究。发现本实验室改进的双胺银染色方法具有以下特点 :( 1 )背景异常清晰 ,蛋白质与底色反差大 ;( 2 )敏感度大大提高 ,检测最低蛋白质量可达fg级 ,对微量表达的蛋白质具有极好分离效果 ,能清晰地检测出低丰度表达的蛋白质。

兔豆状囊尾蚴的压片技术及染色方法研究

为了详细观察豆状囊尾蚴头节的形态结构,通过屠宰检验或病兔剖检采集的豆状囊尾蚴的囊泡,制作压片后用不同的染色方法进行了比较。结果表明,制作豆状囊尾蚴头节压片的关键是载玻片要洁净、干燥,从囊泡中取出的头节应完整无损,并尽量除去黏附在头节上的囊液。将带有头节的结节放在载玻片的中部,再在其上放一载玻片,两手在载玻片的两端均匀用力挤压,待结节全部展开即可。为了观察头节的正面结构,在压制玻片前,应用手术刀片除去原始颈节与体节部分。通过常用的几种单染色和复染色法对压片进行染色,证明单染色更有利于详细的观察头节的结构,而且几种单染色之间有互补染色效果。

大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异

背景:国内外学者对关节软骨对软骨进行了大量研究,需要用不同的染色方法对研究结果进行分析,但将多种染色方法同时应用于软骨研究及探讨染色机制的较少。目的:探讨不同染色方法对大鼠膝关节软骨染色的优缺点。方法:取正常大鼠膝关节软骨,行苏木精-伊红、番红O、阿尔辛蓝、甲苯胺蓝、番红-阿尔辛蓝、番红-固绿染色,观察软骨结构。结果与结论:苏木精-伊红、番红O、甲苯胺蓝染色均可观察到潮线,分别为蓝色、红色和蓝色,番红O和甲苯胺蓝染色强度朝潮线方向增强,番红O染色对潮线的观察优于其他染色方法。苏木精-伊红染色关节软骨4层结构清晰,软骨细胞呈柱状排列,基质呈均匀呈嗜碱性染色。番红O染色显示4层结构层次清楚,基质深层染色最红。阿尔辛蓝染色显示,pH1.0时软骨细胞周边部分被阿尔辛蓝强烈染色,pH2.5时阿尔辛蓝染色较深。甲苯胺蓝染色显示组织结构层欠清,胞核染色清晰,胞浆几乎不着色,基质呈淡蓝紫色。番红-阿尔辛蓝染色显示软骨表面及基质呈不均一的红色,深层颜色较深,软骨细胞周围蓝染;番红-固绿染色显示软骨基质呈均匀的红色,软骨下骨呈绿色,软骨组织与骨组织分对比鲜明。提示上述各种方法均可观察到软骨的四层结构,但以番红O染色显示软骨各层和潮线结构最佳;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态变化较其他方法清楚。

大鼠心、脑、骨骼肌毛细血管染色方法比较

目的 对大鼠心、脑、骨骼肌毛细血管染色方法进行比较。方法 采用Mg2 + ATPase、碱性磷酸酶、肌球蛋白 ATPase等酶组化法及墨汁灌注法和Ⅷ 因子相关抗原免疫组化法对毛细血管进行染色。结果 心脏和脑组织毛细血管用碱性磷酸酶染色 ,而骨骼肌组织毛细血管用肌球蛋白 ATPase染色效果最好 ;Ⅷ 因子相关抗原免疫组化法用于脑组织毛细血管显示次之 ;Mg2 + ATPase法在心脏、脑、骨骼肌定位效果较差 ;墨汁灌注法只要方法掌握得当 ,各部位毛细血管显示均较好。结论 对毛细血管染色 ,不同器官和组织应采用不同的方法。在心脏和脑用碱性磷酸酶组化法显示较好 ,而在骨骼肌用肌球蛋白 ATPase酶组化法较好。

尿沉渣6种染色方法的应用比较

目的 选择针对AMP2 0 0 0 -U尿沉渣自动扫描系统的最佳染色液 ;探讨评价染色质量优劣的新方法。方法 对 110例尿沉渣分别采用核红与美蓝 ,考马斯亮蓝与中性红 ,甲苯胺蓝与中性红 ,S染液 ,S -M染液 ,EmerK染液染色 ,用AMP2 0 0 0 -U进行观察。结果 S染液、S -M染液背景清晰 ,尿沉渣有形成分与背景色彩对比鲜明 ,结构清楚 ;其他的 4种染液或背景模糊或有形成分结构不清楚。结论 S染液、S -M染液染色效果佳。

胶质芽孢杆菌荚膜染色方法的比较与改进

荚膜是细菌的重要附属物,细菌有无荚膜以及荚膜物质厚度和化学组成是其重要特征之一.染色和观察荚膜形态是微生物研究中的基本技能,但荚膜的低折光性与亲和染料能力差等特性,使其不易着色,制作一张好的荚膜染色玻片需要正确的染色方法和一定的熟练程度.胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)以其肥厚荚膜为显著特征,该菌的许多有益特性都与其产生肥厚荚膜有密切关系.本文以该菌为试验对象,尝试采用7种负染方法对荚膜进行染色.结果表明:7种染色方法中,墨汁染色法和刚果红盐酸染色法简便快速且效果较好;对刚果红盐酸染色法进行了改进,使染色效果更为理想,该方法值得推广.

真菌性鼻窦炎5种真菌染色方法的比较

目的对比分析不同的真菌染色方法在真菌性鼻窦炎真菌染色中的特点及其应用。方法91例真菌性鼻窦炎的石蜡包埋组织标本,真菌类型包括曲霉菌属真菌52例、链格孢菌2例、白色念珠菌12例和毛霉目真菌25例。连续切片,进行HE、PAS、AB-PAS、GMS和MUC5B免疫组化染色。结果曲霉菌属真菌和白色念珠菌PAS、AB-PAS、GMS和MUC5B免疫组化染色效果很好;链格孢菌GMS染色效果最佳,呈明显的棕黑色,其他染色方法真菌均呈现自身的棕色;毛霉目真菌除MUC5B外,其余染色方法均着色;当背景组织为丰富的黏液时,AB-PAS法的染色效果优于单纯的PAS染色,真菌和背景反差较大,真菌轮廓明显;所有类型真菌HE染色的效果均欠佳,真菌轮廓不够明显。结论真菌染色可联合应用PAS、AB-PAS、GMS和MUC5B免疫组化染色方法,其各有优势。其中GMS染色显示真菌效果最佳,所有真菌均着色;组织背景为丰富的黏液时,AB-PAS的染色效果优于单纯的PAS染色;MUC5B染色方法具有一定的特异性,能鉴别出形态接近的曲霉菌和毛霉菌。

肾组织肥大细胞的形态学特点及染色方法

目的 探索检测肾组织肥大细胞的理想方法 ,研究肾组织中肥大细胞的分布和形态特点。方法 用免疫组织化学方法和 4种不同pH值的甲苯胺蓝染液对 4 6例肾小球肾炎患者肾活检标本进行染色 ,观察肥大细胞在不同时间点的染出数及分布、形态特点 ,比较几种方法肥大细胞的显示数 ,并与免疫组织化学结果对照 ,计算每种染液的染出率。同时用透射电镜进一步观察肥大细胞的形态及超微结构。结果 肥大细胞数量比较 :pH 0 5与 1 0组无差别 ,其余的两两比较差异都有显著性 ,几种染液显示的肥大细胞相对于免疫组化结果的染出率分别是 78 8% (pH 0 5 ) ,79 4 % (pH 1 0 ) ,5 6 9% (pH 3 0 ) ,10 2 % (pH 5 0 )。电镜观察到幼稚、成熟和脱颗粒的形态不一的肥大细胞。 结论 ①免疫组织化学染色效果最好 ,其次是 pH值 0 5和 1 0的甲苯胺蓝染液 ,pH 5 0染液的效果最差。②肾组织肥大细胞形态多样 。

一种快速检测蛋白酶抑制剂电泳活性的染色方法

根据特异蛋白酶抑制剂抑制靶蛋白酶的作用而阻止水解的原理 ,借助明胶 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品 ,胶板经蛋白酶水解后 ,以考马斯亮蓝染色 ,建立了一种简便、直观、灵敏的检测蛋白酶 (胰蛋白酶 )抑制剂活性的染色方法 。

固定和染色方法对小麦胚乳细胞结构显示的影响

以扬麦16小麦颖果为材料,采用戊二醛-四氧化锇(GA-OsO4)或高锰酸钾固定,并分别用5种染色方法[甲苯胺蓝-O(TBO)、多色性染液、高碘酸-希夫试剂(PAS)、考马斯亮蓝和PAS-TBO]进行半薄切片染色,对超薄切片进行醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色,在光学显微镜和透射电镜下观察比较了小麦胚乳细胞结构显示的差异。结果表明,GA-OsO4固定的半薄切片染色效果整体上优于高锰酸钾固定,但是在PAS-TBO复染中,高锰酸钾固定制样效果最好。在超薄切片观察中,GA-OsO4固定制样能较好地保存胚乳细胞超微结构,但对膜性结构显示不够清晰,而高锰酸钾固定制样则能较好地固定细胞的膜性结构,并且能够增强膜结构反差,只是对多糖和蛋白质的固定和显色较差。因此,应根据观察对象来选择适当的固定及染色方法。

猪附红细胞体几种染色方法的比较

为了筛选出比较理想的染色方法,使猪附红细胞体病的诊断和研究得到可靠的技术保证,本试验对附红细胞体病猪的同一份血液样本,分别采用了12种染色方法进行染色,并比较其染色效果。结果显示,丫啶橙染色和姬-瑞氏混合液染色效果最好,其次为亚伯特氏、瑞氏和姬姆萨氏等染色方法。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法

目的建立一种操作简便、快速、灵敏度高、无毒的蛋白质电泳染色方法。方法利用考马斯亮蓝G-250(CBB G-250)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后对蛋白质条带进行染色,对不同染色条件进行探讨,并与考马斯亮蓝R-250(CBB R-250)染色法进行比较。结果 CBB G-250染色法试剂无毒,背景浅,经改良其灵敏度与CBB R-250染色法相当,达到0.1～0.5μg。结论 CBB G-250染色方法简单经济,灵敏度能够满足一般要求,适用于蛋白质电泳结果的快速分析。