脑缺血大鼠水通道蛋白-9 mRNA表达与钙离子浓度的改变及其关系

目的研究脑缺血后脑组织水通道蛋白-9(AQP9)mRNA表达和Ca2+浓度的改变及其关系。方法制作脑缺血大鼠模型,在脑缺血6h、1d、2d、3d、5d,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测缺血脑组织AQP9mRNA的表达水平;用Fura-2/AM荧光法测定水肿区脑细胞内Ca2+浓度;并与对照组比较。结果与对照组相比,脑缺血后6h,水肿区脑组织AQP9mRNA表达水平和Ca2+浓度均开始增高,在脑缺血后第2d、3d表达最强(P<0.05～0.01);AQP9mRNA表达水平与Ca2+浓度呈正相关(r=0.7654,P<0.05)。结论脑缺血后AQP9表达增强,Ca2+浓度增高;提示AQP9和Ca2+可能共同参与缺血性脑水肿的形成。

水通道蛋白-9在早期缺血性脑水肿中的表达变化

目的探讨水通道蛋白-9(AQP9)在早期缺血性脑水肿过程中的表达变化。方法制作脑缺血大鼠模型,在脑缺血30min、1h、3h、6h及24h,通过光镜进行对应部位的病理观察,同时采用免疫组化、原位杂交和图像分析方法测定梗死区AQP9的表达水平,并与正常对照组进行比较。结果脑缺血后30min,AQP9表达开始增加,与对照组相比差异有显著意义;在1h内增加较快,1h后呈缓慢增加趋势,1h与6h之间无显著性差异;6h后又开始出现明显增加。缺血组与对照组比有显著性差异。脑缺血后AQP9及其mRNA的表达变化呈显著正相关。早期缺血性脑组织经历了从细胞内水肿,发展到血管源性水肿,最终出现组织坏死的病理过程。结论脑缺血后AQP9表达变化与早期脑水肿的形成密切相关,可能是形成细胞内水肿的关键因素。

低渗液对星形胶质细胞水通道蛋白-9表达的影响

目的探讨体外培养星形胶质细胞在低渗状态下水通道蛋白-9(aquaporin-9,AQP9)表达的变化特点及其所起的作用。方法取生后2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,随机分为对照组和低渗组(又分268、254、240mmol/L三个组),每组分为3、6、12、24h共4个时间点,每个时间点细胞孔数为6。对照组予正常培养液常规培养,低渗组分别予不同渗透压的低渗液作用于细胞,建立星形胶质细胞对低渗液反应的实验模型。通过采用原位杂交检测AQP9mRNA的表达,乳酸脱氢酶活性的测定及图像分析等方法研究星形胶质细胞对低渗液的反应及AQP9的表达变化。结果对照组在正常渗透压培养液中培养3、6、12、24h后,AQP9表达差异无统计学意义(P>0.05)。在相同的作用时间条件下,各低渗组细胞AQP9mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。尤以作用12h后明显,而且与作用时间和低渗液的程度密切相关;同时细胞存活能力明显下降,其严重程度与低渗液的作用时间和渗透压有关。结论低渗液可导致细胞的生存能力下降、AQP9mRNA表达增强,提示星形胶质细胞AQP9的表达与渗透压可能直接相关,AQP9可能参与脑水肿的形成。

脑外伤小鼠海马水通道蛋白-9表达的变化

目的探讨脑外伤小鼠海马水通道蛋白-9(aquaporin 9,AQP9)表达的变化。方法40只Balb/c小鼠随机分为假手术组(10只)和脑外伤组(30只)。脑外伤组依据脑外伤的不同时间点再分6 h、1 d、3 d三个小组,每组10只。免疫组化和Western blot检测各组小鼠海马AQP9蛋白的表达。RT-PCR方法检测各组小鼠海马AQP9 mRNA的表达变化。结果免疫组化和Western blot结果发现,脑外伤组小鼠海马AQP9蛋白表达量明显高于假手术组(P<0.05);RT-PCR结果也发现,脑外伤组小鼠海马AQP9 mRNA表达量明显高于假手术组(P<0.05)。结论脑外伤小鼠海马AQP9表达明显升高。

水通道蛋白-9表达载体的构建及视神经脊髓炎患者血清中抗体的检测

目的构建一种能稳定表达人水通道蛋白-9(AQP9)的真核细胞载体,并检测视神经脊髓炎(NMO)患者血清中的AQP9抗体。方法将人AQP9基因克隆入pc DNA3.1+质粒中构建AQP9-pc DNA3.1+载体,并转染HEK-293T细胞中。AQP9蛋白的表达通过RT-PCR和Western blot法验证。通过间接免疫荧光法检测NMO患者血清中的AQP9抗体。结果 AQP9的mRNA相对表达量明显高于空载体,且蛋白表达量在32 k D条带附近明显高于空载和293T细胞。在4例NMO患者血清中均检测到AQP9抗体,1例脑梗死和1例健康人中抗体均为阴性。结论这种转染表达AQP9的细胞模式相对简捷,可用来检测NMO患者中的AQP9抗体,对NMO研究有一定意义。

缺氧与复氧对星形胶质细胞水通道蛋白-9表达的影响

目的探讨体外培养星形胶质细胞缺氧及复氧后水通道蛋白-9(AQP9)表达的变化特点及其所起的作用。方法取生后2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,缺氧时间分别为:12、24、48h,并取缺氧24h后复氧12、24、48h的细胞进行存活率、乳酸脱氢酶活性的测定,采用免疫细胞化学方法检测细胞AQP9的表达。结果缺氧组及复氧组的星形胶质细胞死亡数与对照组相比无明显变化,缺氧和复氧后乳酸脱氢酶活性亦无明显改变(P(0.05),缺氧组细胞AQP9表达较对照组增高,并随缺氧时间延长而明显增高(P<0.05),复氧后24h内AQP9表达逐渐下降,24h后AQP9表达仍未恢复正常水平。结论星形胶质细胞对缺氧较为耐受,缺氧对星形胶质细胞存活能力无明显影响,缺氧引起AQP9的表达上调,而复氧使其表达明显下降。

水通道蛋白-9与脑部疾病

水通道蛋白-9(AQP9)是水通道蛋白家族中特殊的一员,对水和多种中性溶质均具有转运活性。AQP9在脑内主要分布于神经胶质细胞、内皮细胞和儿茶酚胺能神经元。目前AQP9在脑内的功能还不完全清楚,初步认为除维持脑内水代谢平衡外,还可能在能量代谢方面发挥重要作用。AQP9与脑部涉及水或能量代谢的疾病如脑血管病、帕金森病和脑肿瘤等密切相关。

水通道蛋白-9在肝脏的表达及其意义

水通道蛋白-9(aquaporin-9,AQP9)是一种在肝组织中表达的跨膜转运蛋白。肝组织细胞内AQP9定位于细胞质膜。AQP9除可通透水,还可以通透甘油、尿素等其他多种小分子。大量研究证明AQP9参与肝组织多种生理和病理过程。AQP9在肝脏上的表达对肝脏生理和病理过程有多种影响,肝脏AQP9的研究可为肝脏疾病的诊断和治疗提供新的靶点。

水通道蛋白-9在缺氧缺血性脑病新生小鼠认知功能障碍中的作用

目的探讨水通道蛋白-9(AQP-9)在缺氧缺血性脑病(HIE)新生小鼠认知功能障碍中的作用及其机制。方法将90只昆明新生小鼠随机分为对照组、模型组和AQP-9组,每组30只。对照组小鼠正常喂养,不建立HIE模型,模型组和AQP-9组小鼠采用电凝法闭合颈总动脉建立HIE模型;建模成功后30 min,AQP-9组小鼠给予单次腹腔注射20μg AQP-9,对照组和模型组小鼠腹腔注射等量的生理盐水。分别于干预后第1、3、7天,每组选取10只小鼠颈椎脱臼处死,取海马组织。采用反转录聚合酶链反应法检测对照组和模型组小鼠海马组织中AQP-9 mRNA表达,免疫荧光法检测小鼠海马组织中AQP-9蛋白(对照组和模型组)和Ki-67蛋白(对照组、模型组和AQP-9组)表达,干预后第3~7天处死小鼠前进行Morris水迷宫实验检测3组小鼠空间学习记忆能力。结果干预后第1、3、7天对照组小鼠海马组织中AQP-9 mRNA和蛋白的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组小鼠干预后第3天时海马组织中AQP-9 mRNA和蛋白的相对表达量显著高于干预后第1、7天(P<0.05),模型组小鼠干预后第1天与第7天时海马组织中AQP-9 mRNA和蛋白的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);干预后第1、3、7天,模型组小鼠海马组织中AQP-9 mRNA和蛋白的相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。对照组小鼠干预后第1、3、7天海马组织中Ki-67蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组和AQP-9组小鼠干预后第7天时海马组织中Ki-67蛋白相对表达量显著高于干预后第1、3天(P<0.05),模型组和AQP-9组小鼠干预后第1、3天时海马组织中Ki-67蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);干预后第1、3、7天,模型组小鼠海马组织中Ki-67蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05),AQP-9组小鼠海马组织中Ki-67蛋白相对表达量显著高于对照组和模型组(P<0.05)。干预后第3~7天,对照组和AQP-9组小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期均逐渐缩短(P<0.05),而模型组小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期无显著变化(P>0.05);干预后第3、4、5天,3组小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期比较差异无统计学意义(P>0.05);干预后第6、7天时,模型组小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著长于对照组(P<0.05);干预后第6天,AQP-9组与对照组小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期比较差异无统计学意义(P>0.05);干预后第7天,AQP-9组小鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著短于模型组(P<0.05)。结论HIE小鼠海马组织中AQP-9表达上调,外源性AQP-9蛋白可以改善HIE小鼠的空间学习记忆能力,其机制可能与外源性AQP-9蛋白促进Ki-67表达有关。

水通道蛋白-9在小鼠脑缺氧缺血性脑病脑组织中的表达及意义

目的 探讨小鼠脑缺氧缺血性脑病（HIE）脑组织中水通道蛋白-9（AQP-9）的表达及意义.方法 低氧浓度环境下制作小鼠HIE模型,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测AQP-9mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测AQP-9蛋白的表达量.结果 模型组各时间点AQP-9mRNA（灰度值最高值1.8223±0.1468）及AQP-9蛋白表达水平[最高值（26.745±2.875）％]均高于对照组,同时AQP-9蛋白与AQP-9 mRNA表达量呈正相关（r=0.811,P ＜0.01）.结论 AQP-9可能参与了小鼠HIE的发生和发展,并起关键作用.

依达拉奉对局灶性脑缺血大鼠脑组织水通道蛋白-9 mRNA表达的影响

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后脑内水通道蛋白-9(AQP-9mR-NA)表达与脑水肿动态变化的关系,评价依达拉奉的干预作用。方法216只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为3组:假手术组(A组,6只),生理盐水组(B组,大脑中动脉阻断后6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d7个时点,各6只),依达拉奉处理组(C组,同B组),术后即刻予以依达拉奉干预。分别测定脑组织含水量;实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测mRNA表达;用HE染色方法观察病理形态学改变。结果B组大鼠MCAO后脑组织含水量呈上升趋势,48h达高峰,各时点均高于与A组(P<0.05)。同时,AQP-9 mRNA表达量与脑含水量呈相同趋势改变,相关性分析表明AQP-9 mRNA表达量(r=0.788,P<0.05)与脑组织含水量呈正相关。B组与C组相比,各时点脑组织含水量明显下降(P<0.05);AQP-9 mRNA表达显著下调(P<0.05);组织病理提示脑水肿及神经元损伤程度减轻。结论大鼠脑缺血后脑内AQP-9 mRNA表达与脑水肿变化呈正相关,提示AQP-9可能参与大脑中动脉阻断后的脑水肿形成。依达拉奉干预可减少AQP-9 mRNA的表达,从而减轻大鼠大脑中动脉阻断后脑水肿,减少神经元坏死,改善神经功能预后。

水通道蛋白-9在能量代谢中的作用

近来研究发现水通道家族成员之一AQP9在甘油、乳酸盐、丙酮酸等能量物质跨膜转运中发挥着重要作用。机体内环境稳态的维持需要多个生化过程协调有序参与,而水分子及能量物质几乎伴随着细胞生化代谢的所有过程。本文结合近几年国内外研究进展,对AQP9在哺乳动物多个系统及器官组织的能量物质代谢中所发挥的作用作一综述。

尼卡地平联合拉贝洛尔对妊娠高血压患者血压及血清基质金属蛋白酶-9、水通道蛋白-9水平的影响

目的探讨尼卡地平联合拉贝洛尔对妊娠高血压患者血压及血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、水通道蛋白-9(AQP-9)水平的影响。方法选取2018年3月至2020年3月营口市妇产儿童医院收治的88例妊娠高血压患者作为研究对象,按随机数字表法分为试验组与对照组,各44例。对照组使用拉贝洛尔治疗,在此基础上,试验组加用尼卡地平片治疗。比较两组血压、血清MMP-9、AQP-9水平和不良反应发生情况。结果治疗后,试验组舒张压(DBP)、收缩压(SBP)及血清MMP-9、AQP-9水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论尼卡地平联合拉贝洛尔治疗妊娠高血压能有效降低血压和血清MMP-9、AQP-9水平,不会增加不良反应发生。

渗透压改变与星形胶质细胞水通道蛋白9表达的关系

目的:探讨渗透压对星形胶质细胞水通道蛋白9(AQP9)表达的影响。方法:通过H-E显色观察渗透压改变(对照组、低渗组和高渗组)对细胞形态的影响,台盼蓝染色评价细胞活力的变化,免疫细胞化学、原位杂交研究星形胶质细胞AQP9及其mRNA的表达变化。结果:对照组细胞形态、活力、AQP9及其mRNA的表达在各时间点均无明显变化。低渗培养导致细胞水肿,细胞活性下降,AQP9及其mRNA的表达水平明显高于对照组,并随低渗作用的增强和时间的延长而上调。高渗作用可导致细胞皱缩,细胞活性下降,AQP9及其mRNA表达在12h内持续增加后下降,至24h后仍高于对照组。结论:低渗液作用下AQP9及其mRNA的表达上调,作为一种病理性适应反应参与了胶质细胞水肿的形成。高渗作用早期(约12h内),AQP9的表达上调对高渗型细胞脱水起到重要的代偿作用。

胎盘组织中AQP-9、HIF-1α表达水平与子痫前期患者病情程度的关联性分析

目的研究胎盘组织中水通道蛋白-9 (AQP-9)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平与子痫前期病情程度的关联性。方法回顾性采集2019年12月至2020年12月汝州市人民医院112例子痫前期患者及90例同期健康妊娠产妇的临床资料,均检测胎盘组织中AQP-9、HIF-1α表达水平。比较子痫前期患者与健康妊娠产妇、不同临床特征子痫前期患者胎盘组织中AQP-9信使核糖核酸(mRNA)、HIF-1αmRNA表达水平,并采用Spearman相关系数模型分析胎盘组织中AQP-9mRNA、HIF-1αmRNA表达水平与病情程度关联性。结果子痫前期患者胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1αmRNA表达水平高于健康妊娠产妇(P<0.05);不同年龄、体质量指数(BMI)、生产经历、孕周、子痫前期家族史患者胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1αm RNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);重度子痫前期患者胎盘组织中AQP-9mRNA、HIF-1αmRNA表达水平高于轻度子痫前期患者(P<0.05);经Spearman相关性分析,子痫前期患者胎盘组织中AQP-9 mRNA、HIF-1αmRNA表达水平与病情程度呈正相关(P<0.05)。结论子痫前期患者胎盘组织中AQP-9、HIF-1α表达水平会明显异常升高,且与病情程度密切相关,为子痫前期的临床病理研究提供理论依据。

Roux-en-Y胃转流术对2型糖尿病大鼠肝脏AQP9的影响

目的研究Roux-en-Y胃转流术(Roux-en-Y gastric bypass,RYGB)对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2MD)大鼠肝脏水通道蛋白-9(aquaporin-9,AQP9)表达的影响,初步探讨RYGB改善T2MD的机制。方法 SD大鼠50只,按随机数字表法选取40只建立T2MD模型,按干预方式分为糖尿病组(B组,n=10)、糖尿病假手术组(C组,n=10)、糖尿病手术组(D组,n=10),另10只大鼠作为正常对照组(A组)。检测各组大鼠术前和术后5、10、15、20 d的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清胰岛素及胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)水平。于术后20 d处死各组大鼠,分别用免疫荧光染色和Western blot检测肝脏组织AQP9的表达情况。结果 D组大鼠术后5 d空腹血糖由术前(23.4±1.6)mmol/L降至(8.7±0.8)mmol/L,术后20 d空腹血糖为(7.8±0.8)mmol/L;术后空腹胰岛素较术前无显著变化(P>0.05);术后5 d空腹血清GLP-1由术前(7.7±0.3)pmol/L升至(16.8±0.9)pmol/L,术后20 d为(20.3±0.7)pmol/L;术后20 d,D组大鼠肝脏组织中AQP9的相对表达量(0.21±0.02)明显低于B、C组[分别为(0.54±0.11)、(0.58±0.09),P<0.05]。结论 RYGB可显著降低T2MD大鼠肝脏中AQP9的表达,降低空腹血糖。

法舒地尔对大鼠缺血性脑水肿脑组织内AQP9表达的影响

目的探讨法舒地尔对大鼠缺血性脑水肿脑组织中AQP9基因表达和蛋白合成的影响。方法健康SD大鼠144只,随机分为:对照组、手术组、法舒地尔组,建立大脑中动脉闭塞(MCAQ)模型,分别在6 h、24 h、72 h和5 d 4个时间点将大鼠麻醉后断头取脑,采用干湿比重法测脑组织含水量,行HE染色,并用R T-PCR、Western Blot检测脑组织中AQP4基因表达和蛋白合成的变化。结果与对照组相比,手术组、法舒地尔组均从6 h开始出现脑水肿,72 h时达到高峰,且法舒地尔组脑水肿低于手术组;同样AQP9及其mRNA的表达在手术后6 h后开始升高,72 h后达到高峰,且手术组较对照组相和法舒地尔组明显增高(P<0.05)。结论 AQP9与脑水肿形成有关,法舒地尔可以降低脑组织内AQP9的基因表达和蛋白合成从而减轻脑水肿。

脑缺血后AQP9表达与血脑屏障通透性的关系

目的研究脑缺血后水通道蛋白-9(AQP9)的表达变化与血脑屏障通透性之间的关系。方法采用阻断大鼠大脑中动脉制作脑缺血的动物模型,通过免疫组化方法检测AQP9的表达,并通过检测缺血脑组织中伊文思蓝(EvansBlue,EB)外渗的量,以反应血脑屏障通透性的变化。结果对照组AQP9表达和EB含量无明显改变。与对照组相比,缺血组AQP9的表达随缺血时间的延长而表达增加;且AQP9的表达在脑缺血后2d^3d表达最强;EB含量与AQP9的表达变化相似,EB含量分别在缺血后2d和3d增加更明显。AQP9的表达与EB含量的变化呈正相关(r>0.672,P<0.05)。结论脑缺血后AQP9表达增强,血脑屏障通透性增加,提示AQP9表达上调与血脑屏障通透性的改变有关,两者可能共同参与缺血性脑水肿的形成。

脑缺血后尼膜同对AQP9 mRNA表达和血脑屏障通透性的影响

目的研究脑缺血后尼膜同对AQP9 mRNA表达和血脑屏障通透性的影响以及脑缺血后尼膜同对脑的保护作用。方法采用阻断大鼠大脑中动脉制作脑缺血大鼠模型,通过原位杂交和图像分析方法测定梗死区AQP9mRNA的表达水平,同时电镜进行对应部位的病理观察,并检测缺血脑组织中伊文思蓝外渗的量。结果脑缺血后,在尼膜同组和对照组缺血组织均出现缺血性病理变化、AQP9 mRNA表达上调、血脑屏障通透性增加,其变化趋势一致,随着脑缺血时间延长其改变加重。尼膜同组AQP9 mRNA的表达变化与生理盐水对照组,虽有差别,但差异无显著性意义(P>0.05);尼膜同组血脑屏障通透性及病理变化明显低于生理盐水对照组,其差异有显著性意义(P<0.05)。结论脑缺血后,尼膜同可能阻滞血脑屏障通透性的增加,起到脑保护作用,但不影响AQP9mR-NA的表达。

吡拉西坦氯化钠对大鼠创伤脑组织内AQP9表达的影响

目的探讨吡拉西坦氯化钠注射液对大鼠外伤性脑水肿脑组织中AQP9基因表达和蛋白合成的影响。方法健康SD大鼠144只,随机分为:对照组、手术组、吡拉西坦氯化钠注射液组,采用液压颅脑损伤仪,给予2.5～3.0atm液压冲击力,制成重型液压颅脑损伤模型,分别在6h、1d、3d和5d4个时间点将大鼠麻醉后断头取脑,采用干湿比重法测脑组织含水量,行HE染色,并用RT-PCR、WesternBlot检测脑组织中AQP9基因表达和蛋白合成的变化。结果与对照组相比,手术组、吡拉西坦氯化钠注射液组均从6h开始出现脑水肿,3d时达到高峰,且吡拉西坦氯化钠注射液组脑水肿低于手术组;同样AQP9及其mRNA的表达在手术后6h后开始升高,3d后达到高峰,且手术组较对照组相和吡拉西坦氯化钠注射液组明显增高(P<0.05)。结论 AQP9与脑水肿形成有关,吡拉西坦氯化钠注射液可以降低脑组织内AQP9的基因表达和蛋白合成从而减轻脑水肿。