猪流行性乙型脑炎的诊断与防治

我国猪养殖业规模越来越大,在养殖过程中难免会发生猪流行性乙型脑炎疾病,该疾病具有极高的致死率,一旦发生感染将影响猪的正常生长,降低了养猪户的经济利益。因此,对该病及早诊断并采取科学的防治措施尤为重要,本文主要对猪流行性乙型脑炎进行研究,阐述了该病的诊断方法以及具体的防治措施,以此减少猪流行性乙型脑炎的发生几率。

猪流行性乙型脑炎的诊断与预防

【目的】探讨猪流行性乙脑(又名“日本乙型脑炎”)的防治策略,为猪场疫病防控提供借鉴和参考,以保障猪场稳定生产。【方法】基于对猪流行性乙型脑炎的全面分析,总结其流行病学特征:妊娠母猪感染乙脑会表现流产或早产,新生仔猪可能表现出全身性痉挛,公猪在高热后会出现睾丸肿胀。提出其主要的诊断方法是通过细菌学和病毒学检测进行确定。【结果】猪流行性乙脑的治疗措施主要为康复猪血清或抗血清的应用、加强饲养管理、降低颅内压、利尿解毒和使用免疫增强剂等。【结论】作为一种严重的人畜共患传染病,猪流行性乙脑在亚洲各国包括中国的部分地区广泛存在。为有效控制猪流行性乙脑的传播,猪场需加强对其病原学特点和传播方式的认识,采取免疫接种、灭蚊和做好人员防护等措施进行综合防控。

猪流行性乙型脑炎流行特点趋势以及防控要点概述

我国目前猪养殖业发展迅速,由于养殖量扩大和饲养密度增加,随之而来的就是猪传染病发生率逐年提高,而猪流行性乙型脑炎是人畜共患病,该病引起母猪繁殖障碍和生产性能下降,对我国猪养殖业造成的危害极大。通过对猪流行性乙型脑炎流行特点、流行趋势、临床症状、剖检变化、实验室诊断、治疗与预防措施等方面进行综合概述,为今后在临床上有效预防该病的发生提供基础依据。

中国流行性乙型脑炎病毒分子生物学特性研究

为了从分子水平了解中国流行性乙型脑炎(乙脑)病毒与国外分离株的差异,对1949年以来在中国乙脑主要流行地区分离的19株乙脑病毒的PrM C区及E蛋白基因区的核苷酸序列进行了对比研究,以期了解不同时间不同地区在中国流行的乙脑病毒的分子差异。结果显示:病毒生物学初步鉴定显示,病毒感染BHK细胞后56h所有细胞均发生病变,约50%以上细胞脱落(CPE );3日龄乳鼠接种病毒72h之内死亡;所有病毒均与乙脑病毒(A2株)抗血清发生阳性反应,但反应强度不同,提示所有病毒均为乙脑病毒。病毒PrM C(456～695)区核苷酸序列与各个国家及地区、各个基因型以及各个年代的73株乙脑病毒相应序列,用Woan RuChen建立的方法进行基因分型分析,结果显示,所有19株中国分离的病毒均属于基因型Ⅲ型,与国外相关文献所报道的乙型脑炎病毒中国分离株的基因型相符。以乙型脑炎病毒疫苗株P3株为标准,对各病毒E蛋白500个氨基酸序列进行分析。各毒株核苷酸差异在0和4 2%之间,氨基酸差异在0和4 0%之间。所有核苷酸差异均为碱基的替换,无论核苷酸或氨基酸均无插入或丢失。大多数核苷酸变异在氨基酸编码的第三位,属于沉默突变,不引起氨基酸变化。18株病毒E蛋白活性结构域与疫苗株P3株相比共有247个氨基酸的差异,平均每株病毒有12 35个氨基酸的差异,?

流行性乙型脑炎病毒(JEV)全长感染性克隆的制备及恢复病毒的获得

根据JEV病毒减毒株SA14-14-2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT-PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR-kpn中,构建我国流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因组全长cDNA克隆。经过体外转录后得到的转录子转染BHK-21细胞,重新获得JEV的恢复病毒,通过生物学特性、分子生物学水平、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定。结果获得了稳定的全长cDNA克隆,转录子转染BHK-21细胞后,第4天开始出现细胞病变(CPE),第6～7天时CPE为 ,经过Vero细胞进一步放大培养后,间接免疫荧光实验和RT-PCR实验均为阳性。证实了构建的JEV的全长cDNA克隆有感染性,为进一步的研究奠定了基础。

上海市流行性乙型脑炎发病率长期变异的生态因素研究

目的 探讨上海市乙脑发病率下降的主要影响因素。方法 分析上海市历年来的生态因素 ,如气象条件、水田种植面积、猪饲养数、蚊虫密度、猪群和人群的抗体水平等与近 5 0年来乙脑发病率长期变异关系。结果 水田种植面积和猪饲养数的增多可能是 196 5～ 196 7年乙脑流行的原因 ,但对 196 8年以后乙脑发病率下降影响不大。 196 8年以后乙脑发病率的大幅度下降可能与乙脑疫苗接种率的提高有关。结论 乙脑疫苗的免疫接种对预防和控制乙脑起重要作用 ,乙脑疫苗接种仍需持续。

猪伪狂犬病、猪细小病毒病和猪流行性乙型脑炎检测基因芯片的制备及检测方法研究

对猪伪狂犬病(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒病(Porcine parvovirus,PPV)和猪流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)检测基因芯片的制备及该芯片的检测方法进行了研究。试验克隆和鉴定了16个芯片靶基因,经筛选,取其中13个靶基因PRV gB、gG、TK和gE;PPV NS2、NS3、VP1和VP2以及JEV C、PrM/M、E、NS1和NS5制备PRV、PPV和JEV检测基因芯片,基因芯片点样系统SpotArrayTM 24将靶基因点样于氨基化玻片表面,靶基因最佳点样浓度为200 ng/μL,探针扩增标记反应体系中,Cy3-dCTP使用终浓度为2.5μmol/L,芯片杂交温度可在44℃～60℃之间任意选择。以PRRSV、CSFV、PCV1、PCV2、TGEV、HPS、PAP、E.coli和S.pp菌毒株DNA或CDNA为模板标记制备的探针均不与PRV、PPV、和JEV检测基因芯片杂交,芯片检测的灵敏度为3 pg/μL,芯片批间重复性好,同一张芯片可进行至少10次的重复杂交。该方法对8株PRV、5株PPV和JEV SA14-14-2单独或混合样品检测均为阳性,可区分伪狂犬病病毒野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品单独或混合感染的检出率分别为:单独感染PRV检出率15%(3/20),PPV 5%(1/20),JEV 0%(0/20);PRV和PPV混合感染检出率15%(3/20),PRV和JEV混合感染检出率5%(1/20),JEV和PPV混合感染检出率5%(1/20),三者混合感染的检出率5%(1/20)。与PRV、PPV和JEV多重PCR检测方法比较,芯片检测的灵敏度大大提高,同时可区分PRV野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品的检出率一致。

山东省东明县流行性乙型脑炎传播媒介蚊虫的监测

目的了解东明县蚊虫的种类及其生态习性,调查当地连续突发流行性乙型脑炎(乙脑)病例可能的传播媒介蚊虫种类,为进一步防制乙脑提供依据;比较4种常用的蚊虫监测方法。方法用人帐法、网捕法、灯诱法、人工小时法在城区、稻田、畜禽舍、住户4种不同生境捕获蚊虫,分类计数,放入液氮罐中带回实验室以备病毒分离。记录当地温度、湿度、风速等环境气候因素。结果用4种方法在稻田、城区、畜禽舍、住户4种生境中共捕获成蚊5属7种5116只,三带喙库蚊、淡色库蚊为优势蚊种,分别占捕获蚊虫总数的79.1%和17.8%,其他蚊种占3.1%。从不同生境捕获的蚊虫数量来看,以畜禽舍数量最多,占捕蚊总数的57.7%,稻田和城区次之,分别占18.9%和13.4%,住户最少,仅占9.9%。从蚊虫种类上看,在城区捕获的淡色库蚊居多,占捕获该蚊总数的53.3%,其他生境合计占46.7%。而农村的稻田和畜禽舍外环境以三带喙库蚊数量较多,占捕获该蚊总数的91.2%。以人工小时法捕获蚊虫数量最多,为2943只,占蚊虫总数的57.5%;人帐法次之,占29.0%,灯诱法占8.2%,网捕法捕到的蚊虫数最少,占5.3%。三带喙库蚊和淡色库蚊的叮刺高峰一般是在日落后1-1.5h,持续约30min,淡色库蚊的叮刺高峰略迟20min。结论三带喙库蚊可能是当地乙脑的主要传播媒介。在进行蚊虫种类和数量监测时,应当以人工小时法和人帐法为主要捕获方法,网捕法和灯诱法为辅助方法。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗生产毒种(SA14-14-2株)及其疫苗的表型和E基因稳定性研究

目的 对乙脑减毒活疫苗SA14 14 2株生产毒种及其疫苗病毒滴度、脑内毒力和E区核苷酸序列进行回顾性测定。方法 应用乳金黄地鼠肾传代细胞 (BHK 2 1)结晶紫蚀斑法进行病毒滴度的测定 ,小鼠脑内法检测疫苗脑内毒力。应用RT PCR方法扩增SA14 14 2生产毒种和疫苗E区的核苷酸 ,经凝胶层析纯化的PCR产物直接用于测序或克隆到pGEM T载体中 ,经酶切和PCR鉴定后进行测序。结果 疫苗在 - 2 0℃保存长达 10多年 ,疫苗病毒滴度下降不超过 0 5lg;脑内毒力未见毒力回升。病毒蚀斑形态仍保持较SA14野毒株形态小的特性 ;以不同批次疫苗和生产毒种提取的病毒RNA作为模板进行RT PCR扩增 ,扩增的基因片段与预期大小一致 ;E区基因序列与野毒株差异的 8个氨基酸没有一个发生回复突变。结论 SA14 14

抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究进展

流行性乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE)是由黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属(Flavivirus)流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的,在自然界中主要以猪为宿主,经蚊传播的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病主要流行于亚洲及西太平洋地区,严重威胁着人类健康,已成为人类脑炎疾病最主要的病因之一,并影响养猪业的发展,引起了世界性的广泛关注,因此,流行性乙型脑炎的防治研究有着重要的实际应用意义。到目前为止,尚无治疗流行性乙型脑炎特效药面市,但对抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究已有一定的进展,而我国在这方面的系统介绍较少,本文就近10年来抗流行性乙型脑炎药物及其作用机制的研究进展做一综述,旨在为流行性乙型脑炎的预防和治疗提供参考。

流行性乙型脑炎的MRI诊断及临床意义

目的探讨流行性乙型脑炎(乙脑)的MRI影像表现和临床应用价值。资料与方法经临床血清学检测确诊的14例乙脑患者。全部行MRI扫描,扫描序列包括:T1-液体衰减反转恢复序列(FLAIR)、T2WI、T2-FLAIR和扩散加权成像(DWI)。分析病灶累及部位和各序列的MRI信号特征。结果病灶单独累及丘脑者3例,累及双侧丘脑同时伴有单个或多个其他部位受累10例,其中大脑脚、基底节、大脑皮层及小脑齿状核受累分别为6、4、2、1例。1例为右侧额叶广泛受累。病灶在T1-FLAIR多数呈低信号,在T2WI呈高信号。DWI上高信号7例,等信号4例,低信号3例。14例在T2-FLAIR上全部呈高信号。2例病灶中合并有出血灶。结论乙脑可以累及多个部位,但以双侧丘脑损害为特征性表现。T2-FLAIR和DWI对乙脑诊断及治疗中随访观察有很高的诊断价值,MRI可作为乙脑的首选影像诊断手段。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗SA_(14)-14-2E基因的稳定性

分别对SA14 - 14- 2 (PHK8代 )疫苗株及其原野毒株SA14 和另 2个疫苗传代株 [SA14 - 14- 2 (PHK17代 )和SA14 - 14- 2 (鼠脑 1代 ) ]的E区基因进行了序列测定。结果表明 ,乙脑病毒减毒活疫苗SA14 - 14- 2在PHK细胞上连传至 17代时 ,发现 2个氨基酸突变 (E - 331、E - 398) ,但不是回复突变。虽然在毒力最容易返祖的乳鼠脑内传 1代后发生E - 10 7个氨基酸回复 ,但与野毒株毒力相比仍然相差很大 ,无毒力返祖现象。在疫苗的实际质控工作中 ,对上述与毒力相关的基因进行监测 ,可能有助于发现减毒活疫苗的毒力水平 ,为疫苗安全性提供更可靠的检测手段。

1997至2004年贵州省流行性乙型脑炎病例流行病学分析及控制策略

目的分析贵州省1997～2004年流行性乙型脑炎(乙脑)流行趋势,为乙脑预防控制策略提供科学依据。方法对疫情信息监测管理系统的监测资料及2004年个案调查资料进行分析。结果累计报告13664例乙脑病例,年均发病率为4.65/10万;累计死亡540例,年均死亡率为0.18/10万;年均病死率为3.95%;男女发病之比为1.48∶1,病例中以散居儿童为主(67.54%),其次为学生(23.06%)。10岁以下病例占88.00%(12024/13664);高发季节为6～10月,发病高峰在7～8月。结论贵州省乙脑发病人群主要是10岁以下儿童,高发季节为6～10月。前2位高发地区为遵义市和毕节地区。建议对高发地区和高发县开展健康教育和宣传动员,对0～10岁儿童开展乙脑疫苗预防接种,并开展防蚊灭蚊,降低乙脑发病率。

猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析

利用RT-PCR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物。在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10 d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠脑组织RT-PCR结果均为阳性。用病死鼠脑组织研磨上清接种BHK-21细胞,感染60 h后用JEV单抗进行间接免疫荧光鉴定均为阳性,这表明分离毒株均为JEV流行毒株,分别命名为BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3。对新分离毒株进行体外细胞培养,BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3连续传代3次后病毒量均获得明显增加,最高分别可达104.5±0.1TCID50/mL和104.2±0.2TCID50/mL。用生物学软件MEGA 4.0分别构建JEV基因的系统进化树,发现BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3处于同一进化分支,均属于基因Ⅲ型。

信阳市和洛阳市2004-2010年流行性乙型脑炎疫情特点及影响因素

目的分析河南省信阳市和洛阳市流行性乙型脑炎(乙脑)流行特征与影响因素。方法用SPSS 12.0、Excel2003软件分析2004-2010年信阳市、洛阳市乙脑病例资料和2010年两市监测的媒介蚊虫和健康人群抗体资料。用微量中和试验检测乙脑中和抗体。结果 2004-2010年,信阳市乙脑年均发病率为1.97/10万,年均病死率为2.92%;洛阳市年均发病率为1.01/10万,年均病死率为9.73%。信阳市发病高峰为7～8月,占91.47%;洛阳市则为8～9月,占84.29%。信阳市0～14岁发病占97.52%,洛阳市≥15岁发病明显上升,占57.08%,二者有统计学差异(χ2=557.71,P<0.05)。信阳市以散居儿童为多(68.36%),洛阳市以农民为多(46.46%)。信阳市蚊虫密度高峰为6～7月,分别为25.09只/人.h和27.31只/人.h;洛阳市为7-8月,分别为13.94只/人.h和14.12只/人.h。信阳市≥15岁乙脑抗体阳性率为97.78%,洛阳市为48.94%,二者有统计学差异(χ2=55.42,P<0.05)。结论信阳市乙脑发病高峰较洛阳市提早1个月,与信阳市蚊虫密度高峰早于洛阳市1个月相一致;信阳市发病以0～14岁为主,洛阳市≥15岁发病明显上升,与信阳市≥15岁健康人群乙脑抗体水平高于洛阳市一致。针对性防控是降低两市乙脑发病的关键。

2000-2007年北京市流行性乙型脑炎流行特征分析

目的分析北京市流行性乙型脑炎(简称乙脑)的流行特征,为制定乙脑的防控措施提供依据。方法收集北京市2000-2007年乙脑疫情资料,结合流行病学个案数据库进行描述性分析。结果北京市2000—2007年问年发病率均低于0.08/10万,疫情从6月份开始,9月份达到高峰,10月份结束,无免疫史的流动人口是乙脑发病的高危人群。结论北京市乙脑发病控制在较低水平,预防控制工作效果显著,尚应进一步提高流动儿童疫苗的接种水平。

三种ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体比较

目的比较国内常用商品化ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体的诊断效果。方法选用3种猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒(Keqian,Lvshiyuan,Tianchen),以微量中和试验为金标准,对90份猪血清进行检测分析。结果中和试验的阳性检出率为34.4%(31/90),Keqian,Lvshiyuan和Tianchen阳性检出率分别为50.0%(45/90),47.8%(43/90)和38.9%(35/90)。灵敏度最高的是Keqian,为90.32%,但其特异度只有71.19%;Tianchen的灵敏度和特异度分别为83.87%和79.66%;Lvshiyuan的灵敏度和特异度分别仅为41.94%和16.95%。与中和试验比较,Tianchen试剂盒的κ系数最高为0.63,其次是Keqian为0.57,Lvshiyuan仅为0.04。显示3种试剂盒具稳定性。结论目前国内商品化猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒诊断结果差异较大,与中和试验相比存在较高的假阴性,质量有待提高。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗免疫效果观察

目的评价流行性乙型脑炎减毒活疫苗的免疫效果。方法在北京市东城和昌平2个区随机选择满1周岁未接种过乙型脑炎疫苗的儿童99名,采集乙脑疫苗免疫前、免疫后1～2个月和2周岁加强免疫后1～2个月的外周静脉血各1份,分离血清检测血清乙型脑炎中和抗体。结果乙型脑炎减毒活疫苗的初次免疫成功率86.87%,95%CI(80.22%～93.52%),GMT 1:17.86;加强免疫成功率97.33%,95% CI(93.68%～99.98%),GMT 1:97.82。结论乙型脑炎减毒活疫苗具有较好的免疫原性,且该疫苗为单人份包装,更利于安全接种,适合基层推广。