烧骨组织形态变化及DNA技术在个体识别中的应用

烧骨在火灾、焚尸、交通、爆炸等案件和事故的检材中具有特殊的地位。通过对不同条件焚烧下烧骨组织形态及DNA变化规律的研究,可为法医实践中烧骨的种属鉴定、性别及年龄判定提供准确的依据和标准,同时可利用残存的基因位点对烧骨残块进行个体识别和同一认定。烧骨DNA的提取方法及检测技术也在不断探索和改进。本文对烧骨在形态学、组织学和分子生物学水平研究进展以及烧骨评测的方法、技术进行概述,旨在为法医实践及进一步研究提供新的方法和思路。

烧骨个体识别的研究进展

烧骨DNA检测在火灾、焚尸、爆炸等事故中的个体识别和亲权鉴定方面,发挥着越来越重要的作用。STR作为重要的遗传标记系统,已广泛应用于法医学个体识别、亲权鉴定等领域。本文从焚烧温度及时间对烧骨STR分型的影响、烧骨STR基因座的选择和烧骨DNA的提取方法三个方面结合目前的研究进展进行了概述。

柿子滩遗址第9地点出土的动物烧骨

柿子滩遗址第9地点(S9)位于山西省吉县柏山寺乡高楼河村黄河支流的清水河畔,西距黄河约7 km。从2000年发现至今,该遗址前后历经三次发掘,出土大量细石叶制品、动物化石、数件蚌制品、骨针及磨制石器等。本文重点对S9地点第4层(12,575-11,600 cal.BP)及第5层(13,000 cal.BP)出土的动物遗存,尤其是其中测量尺寸在2cm以下的大量烧骨进行了埋藏学与动物考古学方面的观察和分析。研究结果显示,S9地点的烧骨是古人类烧烤猎物、维护遗址(甚至可能还包括以骨骼作燃料)等生存行为活动的文化残留。此外,S9地点出土烧骨的空间分布分析表明,古人类在上述行为活动之后,可能又将烧灼后的残存骨骼(与灰烬等)清理出火塘并堆放在其核心生活区的周边位置。

烧骨DNA提取与检测技术的实验研究

目的探索烧骨DNA提取与检测方法。方法常压下以200℃分别对30例成人股骨焚烧1h后,生物冷冻研磨,EDTA脱钙,改良酚-氯仿提取DNA,光度计检测DNA浓度和纯度;5色荧光标记,PCR复合扩增,基因分析仪毛细管电泳,软件收集数据和分析。结果改良酚-氯仿法提取烧骨DNA浓度为(28.5±1.7)ng/μl,16个基因位点基本齐全,相对荧光单位(RFU)>500;传统酚-氯仿法提取烧骨DNA浓度为(4.7±0.8)ng/μl,基因位点检出不全,RFU<500。结论改良酚-氯仿法、PCR复合扩增、基因分析能对烧骨DNA进行有效提取和检测,但操作时要严格规程。

一种焚烧骨骼的DNA提取方法

本文介绍了一种针对烧骨的DNA有效提取方法。对烧骨进行研磨制成骨粉,对骨粉进行大体系脱钙和裂解,采用Amicon~Ultra-15离心过滤器对获得的脱钙、裂解上清液进行浓缩,提高DNA的回收率,使用硅胶膜法对浓缩后的DNA溶液进行纯化,并经复合STR扩增检验。使用上述方法成功完成两起严重焚烧骨骼案件的检验,确定了受害人身源。

个体识别中烧骨的DNA提取

目的：探讨不同温度焚烧的股骨中的DNA的提取方法。方法：常压下以100℃～500℃对30例成人股骨进行焚烧，然后分别采用有机法、Microcon100＋Qiagen试剂盒（QIAquick PCR Purification kit）纯化法、有机法＋Qiagen试剂盒纯化法。并用ND-1000光度计进行DNA浓度测定，用Sinofiler扩增试剂盒进行荧光标记和复合扩增。结果：骨骼样本在20℃～500℃各组用3种方法检测的DNA浓度均值分别为10．1～0．0、67．2～0．0、49．8～0．0ng／μl。有机法在20℃～500℃各组的位点检出率为38．3％、28．3％、16．7％、9．4％、0．0％、0．0％；纯压法为97．3％、75．7％、45．6％、33．1％、12．5％、1．2％；有机法＋Qiagen试剂盒纯化法为98．5％、81．9％、53．5％、36．3％、7．7％、0．4％。结论：有机法提取的骨骼DNA浓度及位点检出率较其他两种方法低；未烧骨骼用后两种方法提取其DNA都能获得较高的浓度和较好的分型，焚烧温度在100~C～300℃之间的骨骼用有机法＋Qiagen试剂盒纯化法提取其DNA较好；400℃-500℃焚烧的骨骼用Microeon100＋Qiagen试剂盒纯化法提取其DNA较好。

基于光学、电子显微镜图像的烧骨组织学变化特征

目的：运用光学、电子显微镜观察烧骨组织形态变化特征，探讨其法医学应用价值。方法：对常压下以200℃～1000℃焚烧1h的30例成人股骨组织学进行光学显微镜、扫描电子显微镜观察和测量。结果：光学、扫描电子显微镜图像中均可辨别出骨单位、间骨板组织。随温度升高，哈佛氏系统渐模糊，骨板渐融合，中央管、Volkmann氏管周围浓染，颗粒块状物增多，骨小梁不规则。骨细胞渐减少、消失并皱缩为圆形、卵圆形、颗粒状。骨墙厚度由70pm收缩到46／xm，中央管直径在35～20μm，哈佛氏系统周长在570～420／am，Volkmann氏管直径在22～17μm。裂纹出现于400℃，并随着温度升高；逐渐增多、增宽，以中央管为中心呈放射状排列，裂宽在10～28,am。结论：烧骨表面颜色可反映焚烧时的大致温度并可估计骨细胞存留状况。运用LM、SEM图像观察烧骨组织学变化可作为烧骨判定的基础资料。

烧骨基因位点保存状况及检测方法比较

目的：探讨不同温度焚烧的股骨中基因位点的保存状况及其检测方法。方法：常压下以100℃～500℃对30例成人股骨进行焚烧，提取其存留DNA，用Identifiler试剂盒和Minifiler试剂盒进行荧光标记和复合扩增，ABI3130xl Genetic Analyzer软件对DNA基因位点进行检测和分析。结果：提取骨密质中的DNA可以获得正确分型，未烧和5个温度焚烧后基因位点存留不同，Mifiler试剂盒比Identifiler试剂盒更能从烧骨DNA中得到STR基因座分型结果。D21S11、FGA2个位点在2个试剂盒中的检出率差异无统计学意义。2个试剂盒中的FGA位点检出率都不高。结论：温度对骨DNA的保存有很大影响，检测焚烧程度高的骨骼DNA时用Minifiler试剂盒更容易得到基因分型结果。FGA位点不适合作为miniSTR位点用于检测烧骨等降解检材。

烧骨残片种属鉴定的研究

为了找出常见动物骨骼焚烧残片的种属鉴定方法,笔者对猪、羊,股骨及肱骨的断端,猪、羊、牛颅骨的残片(额顶部),焚烧后进行了观察及测量,并与人类股骨、肱骨及焚烧的颅骨残片进行了比较.结果发现,长骨滋养孔的位置,骨干骨壁厚度,以及颅骨厚度,颅缝形态及内板表面特征等方面,是鉴定骨骼残片种属的有价值的特征.根据对常见动物长骨及颅骨残片的现察及研究,提出了骨骼残片种属鉴定的方法.

烧骨DNA检验技术的研究

目的解决陈旧性骨骼和烧骨DNA检验难题。方法研究建立了CTAB法裂解提取DNA,再用磁珠纯化得到的DNA提取液进行STR复合扩增检验。结果实验结果及实际检案显示研究所建立的骨DNA提取方法能较好地去除DNA扩增抑制物,得到高质量的DNA模板。结论本研究所建立的烧骨DNA检验方法其识别率为10×10-12,达到个人同一认定的目的,在解决实际工作中杀人焚尸案、火灾、爆炸等恶性案件和事故中有重要的作用。

X射线衍射技术在烧骨实验研究中的初步应用

烧骨作为考古遗址中较为常见的一类特征遗物,对研究古人类用火行为有着重要的意义。过往研究表明,骨骼在加热过程中,其内部晶体会根据加热程度的不同产生不同的变化。骨骼在加热前的状态,能够在一定程度上反映古人类对骨骼进行热处理的动机与目的。为了了解骨骼在焚烧前的初始状态是否会对其内部晶体产生不同的影响,本研究利用56件现生羊骨进行了烧骨实验。实验设置了带肉骨、剔肉骨和干骨三种不同初始状态的骨骼,并在前人的研究基础上进一步细化了焚烧温度和时间参数。焚烧完成后,利用X射线衍射技术对所有样品进行了分析并观察其衍射图的差异。实验结果显示,骨骼有机质含量的多少,骨骼内部元素的不同,在一定的温度和时间条件下,会对骨骼内晶体的形成产生不同的影响。文章最后探讨了这种差异在考古研究中运用的可能性。

旧石器遗址出土烧骨的技术分析及其对考古学的启示

烧骨常见于各类旧石器时代遗址中,作为用火残留物的一类,烧骨对研究人类用火行为有着极为重要的意义,而目前国内针对烧骨的研究工作开展得尚不够深入。本文通过介绍目前烧骨研究领域中若干种主流的分析手段及其在考古学上的应用,以求能进一步完善国内关于旧石器时代人工用火的研究框架,同时希望能对中国古人类用火能力的相关研究提供有益的借鉴。

烧骨的研究现状与展望

本文根据国内外相关文献,对烧骨的宏观、微观形态学特点,烧骨形态特征与各影响因素之间的关系,热致骨折与损伤骨折、条件性骨折的鉴别等方面进行了综述,并对现有研究的局限之处进行了分析,提出改进方向。

秘方烧骨丹

方药及制法：焦栀子60克赤小豆60克为末,丝瓜络炒炭存性,冰片20克加入白酒100克溶化,老姜100克打如泥,发面一块100克诸药和匀放锅内焙半熟（不可太干）柔软适度,乘热包患处6～8小时,取下后出现被吸出的紫黑色瘢痕。

不同温度焚烧对成人股骨16个基因位点的影响

目的：探讨不同温度焚烧后骨骼DNA浓度的变化以及16个基因位点的存留情况。方法：常压下以100-500℃对30例成人股骨进行焚烧，对其存留DNA进行浓度测定，用Identifiler^TMPCR试剂盒进行荧光标记和复合扩增，ABI3100xl Genetic Analyzer软件对DNA16个基因位点进行检测和分析。结果：骨骼样本提取的DNA浓度在50．6～0．0ng／μl之间。未烧和5个温度焚烧后基因位点存留不同，位点检出率分别为98．5％、82．7％、52．9％、35．0％、8．5％、0．4％。结论：温度对骨骼DNA的保存有很大影响，温度越低，保存越完整；片段越小，存留越多。

9个miniSTR基因座在烧骨中的检测与分型

目的对300℃焚烧后成人股骨样本进行9个miniSTR（D20S1082、D6S474、D12ATA63、D9S1122、D2S1776、D1S1627、D3S4529、D2S441、Amelogenin）基因座的检测与分型。方法样本为8根经300℃焚烧后的成人股骨,用改良酚-氯仿法提取烧骨DNA,在Mastercylcerpro梯度PCR仪上对9个miniSTR基因座分别进行扩增,3130基因分型仪检测并收集电泳结果,GeneMarkerV2.2.0软件计算扩增产物片段相对大小以及进行样本基因型分型。结果8根烧骨样本均能够提取到DNA,浓度平均值为25ng/μL,D260/D280值在1.7~1.9之间。9个miniSTR基因座在样本中的检出率在78%~100%之间,分型图谱较清晰,个别样本出现额外带。结论本文9个miniSTR基因座分型检测的方法,可用于对烧骨捡材的DNA分型检验。

小河沿文化火烧墓坑及烧骨葬俗初探

对小河沿文化火烧墓坑和烧骨这两种特殊葬俗进行研究,通过与南方地区发现的相类似的葬俗对比,认为火烧墓坑葬俗来源于本地区的红烧土墓,同南方地区的火烧墓坑葬俗有较大区别。烧骨葬俗一方面是火烧墓坑的延伸,另一方面亦是埋葬特殊人群的一种特殊葬俗。

烧骨炆南瓜

特色：这是一道地道的香港风味美食，汁亮味浓，吃起来让人很有满足感，这种大快朵颐的气氛也很符合家中爸爸的角色。

HACCP在无骨鲐鱼盐烧生产中的应用

应用HACCP原理,对生产无骨鲐鱼盐烧加工工艺的各个环节进行危害分析,确定了生产的关键控制点(CCP),并建立完善的HACCP体系,从而提高了无骨鲐鱼盐烧的产品质量,确保了产品的安全。

联合偶合概率与似然比率在炭化骨骼个人识别中的计算及分析

目的探讨联合偶合概率(RMP)与似然比率(LR)在炭化骨骼个人识别中的计算方法及意义。方法常压下以300℃对两例成人股骨焚烧1h后,液氮下研磨得到骨粉,乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙,改良的酚-氯仿法提取DNA并纯化,5色荧光标记,PCR复合扩增,基因分析仪进行电泳,数据收集与分析。结果累积识别力(TDP,男):0.999 999 980 3,TDP(女):>0.999 999 999 999 99;RMP(男):2.322 5×10-12,RMP(女):4.931 3×10-24;LR(男):4.305 7×1011,LR(女):2.027 9×1023。结论 300℃炭化骨骼可提取到DNA,利用存留基因图谱比对及TDP、RMP、LR的计算可进行个人识别。