车前草苷通过抑制NF-κB/IL-6信号通路减弱LPS诱导的人牙龈成纤维细胞的炎症反应

目的:探究车前草苷(PMS)通过抑制核因子-κB(NF-κB)/白细胞介素-6(IL-6)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞的炎症反应的影响。方法:将培养的人牙龈成纤维细胞(HGnF)随机分为:对照组、模型组(10mg/L LPS)、PMS低、高剂量组(50、100μg/mL PMS+10mg/L LPS)、激活剂组(10μM BAY11-7085+10mg/L LPS)、PMS高剂量+激活剂组(10μM BAY11-7085+100μg/mL+10mg/L LPS)。CCK-8法检测HGnF细胞活力,ELISA法检测HGnF细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素18(IL-18)含量,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β及NF-κB/IL-6信号通道相关蛋白表达水平。结果:低、高剂量PMS可升高LPS诱导的HGnF细胞活力,降低上清液IL-1β、IL-6、IL-18含量、细胞IL-1β、iNOS及p-NF-κB/NF-κB、IL-6表达水平(P<0.05);激活剂BAY11-7085逆转了高剂量PMS对LPS诱导的HGnF细胞的上述指标的作用(P<0.05)。结论:PMS可能通过抑制NF-κB/IL-6信号通路改善由LPS诱导HGnF细胞的炎症。

活性氧响应的纳米颗粒对炎性环境下牙龈成纤维细胞功能的影响及机制

目的 探讨在牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis-lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导的牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)炎症环境下,活性氧(reactive oxygen species,ROS)响应型纳米颗粒PssL-NAC对HGFs内ROS、炎症因子、胶原蛋白生成、细胞迁移功能以及Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路蛋白表达的影响。方法 本研究已通过单位伦理委员会审查批准。通过响应ROS的硫缩酮键(thioketal,TK)连接聚己内酯(polycaprolactone,PCL)的疏水端和聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)的亲水端,水相油相自主装的方式得到内部包裹油溶性的抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine-NAC)的PssL-NAC微球,制备NAC水溶液,并使用透射电镜观察验证纳米粒子合成成功。在提取的HGFs中分别加入P.g-LPS(0、5、10μg/mL),P.g-LPS(0、5、10μg/mL)+NAC,P.g-LPS(0、5、10μg/mL)+PssL-NAC,共聚焦显微镜观察不同组别细胞内ROS水平,确定后续实验使用的P.g-LPS浓度。将HGFs随机分为空白对照组(对照组,不做处理),P.g-LPS组(P.g-LPS处理细胞),NAC组(P.g-LPS+NAC处理细胞),PssL-NAC组(P.g-LPS+PssL-NAC处理细胞)。通过细胞增殖与毒性实验验证PssL-NAC的生物安全性。使用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐探针与细胞共孵育通过荧光实时定量检测细胞内炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen 1,COL1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen 3,COL3)的基因水平;通过划痕实验观察PssL-NAC对牙龈成纤维细胞的迁移功能的影响;通过免疫印迹法检测TLR4-NFκB信号通路相关蛋白的表达。结果 PssL-NAC具有良好生物相容性,对HGFs的细胞增殖能力无显著影响(P>0.05);在P.g-LPS浓度升高的条件下,PssL-NAC能维持细胞内大约两倍对照组的ROS水平(P<0.001);PssL-NAC能显著降低P.g-LPS诱导升高的IL-6(P<0.001)、TNF-α基因水平(P<0.001),上调COL1基因水平(P<0.001);P.g-LPS刺激后,PssL-NAC能将细胞迁移能力恢复至对照组水平(P>0.05),并降低TLR4-NF-κB通路中TLR4(P<0.001)、p65(P=0.006)、p-p65(P=0.017)蛋白的表达。结论PssL-NAC维持细胞内适宜浓度ROS,通过TLR4-NF-κB通路减轻P.g-LPS诱导的细胞炎症,并恢复炎症条件下的细胞胶原生成和细胞迁移功能。

电化学脱合金Ti6Al4V基台对人牙龈成纤维细胞的影响

目的探讨电化学脱合金Ti6Al4V基台对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)的影响,为种植基台表面改性设计提供实验依据。方法根据试样不同表面进行分组:NC组(阴性对照,光滑表面无其他处理)、NM-1组(纳米网-1,1 mol/L NaOH电化学脱合金处理1 h,电压2 V)、NM-2组(纳米网-2,5 mol/L NaOH电化学脱合金处理1 h,电压2 V)。扫描电镜(scanning electron microscopy,SEM)观察不同试样表面形貌及HGFs在其表面的黏附状态,接触角测量仪测定试样表面亲水性。CCK-8评估HGFs在不同试样表面的增殖情况;qRT-PCR检测HGFs在不同试样表面Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COL1A1)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,COL3A1)、纤连蛋白1(fibronectin 1,FN1)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、黏着斑蛋白(vinculin,VCL)、整合素α2(integrinα2,ITGA2)、整合素β1(integrinβ1,ITGB1)等黏附相关基因表达水平;免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察HGFs在不同试样表面vinculin蛋白表达情况;天狼猩红染色评价HGFs在不同试样表面胶原纤维分泌合成情况。结果SEM观察到NM-1组和NM-2组表面形成有序均一的三维网状结构,网格直径NM-1组约为30 nm,NM-2组约为150 nm;NM-1组和NM-2组对比NC组,水接触角显著下降(P<0.0001);NM-1组细胞增殖能力较NC组显著提高(P<0.01),NM-1组和NM-2组的水接触角及细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。SEM镜下可见HGFs黏附24 h后在各组试样表面均黏附良好,NM-1组和NM-2组细胞与NC组对比伸展面积更大,形态纤长,细胞伪足更发达。qRTPCR结果显示NM-1组中COL1A1、COL3A1、FN1、FAK、VCL等黏附相关基因表达水平显著高于NC组和NM-2组(P<0.01)。vinculin蛋白免疫荧光结果表明,NM-1组vinculin蛋白表达水平最高,单个细胞黏着斑数量最多(P<0.01)。天狼猩红染色结果显示NM-1组胶原纤维分泌合成量最高(P<0.0001)。结论Ti6Al4V经电化学脱合金改性后所构建的三维纳米网状结构有促进HGFs黏附增殖和胶原分泌合成的作用,其中网格直径约为30 nm的NM-1组对HGFs的促进作用明显。

TDP-43对LPS刺激下小鼠牙龈成纤维细胞影响的实验研究

目的:探究TARDNA结合蛋白-43(TARDNA binding protein-43,TDP-43)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的炎症微环境中小鼠牙龈成纤维细胞(mouse gingival fibroblasts cells,MGFs)的影响。方法:分离培养野生型C57BL/6J小鼠的牙龈成纤维细胞。设置不同浓度及处理时间的LPS刺激,通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术检测相关炎症因子的mRNA表达量,筛选出最佳处理条件。对细胞进行免疫荧光染色,观察炎症微环境下MGFs中TDP-43的变化。使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染技术敲低MGFs中的TDP-43,并测定转染效率。设置3个实验组:阴性对照组(NC组)、LPS诱导对照组(NL组)和TDP-43敲低+LPS诱导组(SL组)。利用RT-qPCR技术检测部分炎症因子、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、黏附相关因子mRNA的表达情况。应用蛋白质印迹法(western blotting)检测部分炎症因子、黏附相关因子蛋白表达情况。使用天狼星红染色法探究细胞内胶原沉积情况。结果:最佳LPS刺激的浓度为100 ng/mL,时间为6 h;在无LPS刺激的状态下,MGFs中的TDP-43基本在细胞核内,LPS刺激后,TDP-43出现在细胞核和细胞质中;成功使用siRNA转染MGFs构建敲低TDP-43的细胞模型,转染效率接近50%;在LPS刺激下,TDP-43敲低的实验组(SL组)与对照实验组(NL组)相比,炎症因子、基质金属蛋白酶、黏附相关因子mRNA的表达量出现下调(P<0.05),且部分黏附相关蛋白及炎症因子蛋白的表达量也显著下调;在胶原沉积方面,SL组和NL组相较于NC组都有减少(P<0.05),但NL组和SL组差异不大,无统计学意义(P>0.05)。结论:当LPS诱导MGFs处于炎症微环境时,TDP-43出现由核内向核外移动的趋势;且TDP-43对LPS诱导的MGFs炎症微环境下炎症因子、黏附相关因子及基质金属蛋白酶表达起正向调控作用,对胶原沉积的影响不明显。

灯盏花素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞损伤的影响

目的探讨灯盏花素(breviscapine,BVP)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(porphyromonas gingivalis,Pg-LPS,简称LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)损伤的影响。方法体外培养HGFs细胞,分为对照组、LPS组、LPS+BVP低、中、高剂量组。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、IL-6水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;蛋白质印迹法检测细胞中细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素B1(Cyclin B1)及凋亡相关B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL-2相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平;TBA比色法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;二氢荧光素二乙酸酯(dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)法测定细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果与对照组比较,LPS组HGFs细胞存活率、细胞迁移率、Cyclin B1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平及SOD活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平及MDA、ROS水平显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+BVP低、中、高剂量组细胞存活率、细胞迁移率、Cyclin B1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平及SOD活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平及MDA、ROS水平显著降低(P<0.05)。结论BVP可通过抗炎、抗氧化作用减轻LPS诱导的HGFs细胞损伤。

新型牙髓治疗材料iRoot BP Plus对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性

目的：比较新型牙髓治疗材料i Root BP Plus与矿物三氧化物凝聚体（mineral trioxide aggregate,MTA）对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性。方法：采用四甲基偶氮唑盐（methyl-thiazol-tetrazolium,MTT）法测定上述2种材料不同浸提时间（1、3、7 d）的浸提液原液及不同浓度稀（1：2、1：5）释液对体外培养的人牙龈成纤维细胞增殖的影响。细胞增殖率以x±s表示,采用SPSS20.0软件包对数据进行析因设计的方差分析。结果：i Root BP Plus和MTA的浸提液原液及不同浓度稀释液作用后的细胞增殖率界于77.31%~113.82%,细胞毒性分级为0或1级,评价结果为无细胞毒性。不同时间点、不同稀释度下,2种材料对体外培养的人牙龈成纤维细胞增殖率的影响无显著差异（F浓度＊时间＊材料=1.393,P=0.256）。结论 ：i Root BP Plus与MTA均对体外培养的人牙龈成纤维细胞无细胞毒性。

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的 :探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法 :分别采用消化培养法和组织块培养法培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察 ,以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果 :消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短 ,而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论 :组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形 。

尼古丁和烟草浸提液对人牙龈成纤维细胞生长和贴附能力的影响

目的 :体外观察尼古丁和烟草浸提液 (ST)对人牙龈成纤维细胞的生长和贴附影响。方法 :用不同浓度的尼古丁和ST作用于人牙龈成纤维细胞 ,用MTT法检测细胞的生长和贴附情况。结果 :随尼古丁和ST浓度的增加 ,细胞的生长率逐渐下降 ,尼古丁和ST对细胞生长半抑制浓度 (IC50 )分别为 0 .0 95 g/L和 11.88g/L ;与对照组相比 ,当尼古丁及ST浓度分别大于 0 .0 1g/L和 6 .2 g/L时差异有显著意义。而对细胞贴附的影响表明 ,随着尼古丁和ST浓度的增加 ,细胞的贴附率逐渐下降 ,尼古丁和ST对细胞贴附的IC50 分别是 0 .6 g/L和 10 .33g/L ;与对照组相比 ,当尼古丁及ST浓度分别大于 0 .1g/L和 12 .4 g/L时差异有显著意义。结论 :尼古丁和浸提取液均可抑制人牙龈成纤维细胞的生长和贴附 。

内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶的影响

目的观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶-1,3量的影响,探讨基质金属蛋白酶在牙周炎致病机制中的可能作用。方法通过改良酶消化组织块法进行牙龈成纤维细胞的原代培养,用内毒素对其进行刺激,运用MTT法观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性的影响,通过免疫组化法检测内毒素对牙龈成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1,3的影响。结果MTT结果显示,低浓度内毒素在短期内可以促进牙龈成纤维细胞的增殖,但随着时间的延长,也表现为对细胞的毒性作用,抑制其增殖;高浓度内毒素抑制牙龈成纤维细胞的增殖;免疫组化研究结果表明,未受LPS刺激的牙龈成纤维细胞MMP-1,3表达弱阳性,受刺激后阳性表达增强,在12h时达到顶峰,且MMP-3的整体表达较MMP-1弱。结论LPS可以影响牙龈成纤维细胞的增殖活性;LPS可以促进牙龈成纤维细胞对基质金属蛋白酶的分泌,加快牙周细胞外基质的降解,加速牙周炎的进程。

人转化生长因子β1基因转染人牙龈成纤维细胞及其稳定表达

目的 :探讨人转化生长因子 - β1(hTGF - β1)基因转染人牙龈成纤维细胞 (GF)的表达能力。 方法 :体外培养人GF ,传代培养后以阳离子脂质体 (Lipofectamine) :pcDNA3-hTGF - β1为 3μL∶1μg的比例转染。通过免疫组织化学染色的方法及图像分析检测hTGF - β1表达水平 ;利用水貂肺上皮细胞生长抑制法检测TGF - β1的生物学活性。结果 :转染后的GF呈强阳性表达 ,并持续 4周以上。图像分析显示转染细胞hTGF - β1表达显著增强 ,与对照组比较差异显著 (P <0 .0 1)。转染后细胞上清可有效的抑制水貂肺上皮细胞的生长。结论 :hTGF - β1基因转染可使牙龈成纤维细胞有效而稳定的表达活性hTGF -

蜂胶对牙龈卟啉单胞菌及牙龈成纤维细胞的影响

目的了解蜂胶对牙龈卟啉单胞菌（porphyromonas gingival，Pg）生长的抑制作用及对人牙龈成纤维细胞的毒性作用。方法采用液体稀释法测定蜂胶对Pg的最小杀菌浓度（MBC），用MTT法测定不同浓度蜂胶作用24h后牙龈成纤维细胞的细胞相对增殖率（RGR），了解蜂胶作用24h后细胞连续7d的增殖回复情况。结果蜂胶对取的MBC为1．56g／L，相当于0．125～0．25mg／L的奥硝唑。蜂胶浓度为MBC时RGR达到70％以上；4g／L蜂胶组的RGR为52．1％，作用细胞24h后，连续7d细胞数持续增加，吸光度逐渐接近阴性对照组。结论蜂胶对Pg的生长有显著抑制作用，且细胞毒性较小，毒性作用可逆。

一氧化碳对肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β共同诱导的人牙龈成纤维细胞黏附分子表达的影响

目的研究一氧化碳对炎性环境下人牙龈成纤维细胞黏附分子表达的影响。方法以50 ng.mL-1的肿瘤坏死因子(TNF)-α和10 ng.mL-1的白细胞介素(IL)-1β刺激加入或不加入500μmol.L-1一氧化碳释放分子(CORM)的人牙龈成纤维细胞,用Western blot法检测细胞间黏附分子(ICAM)-1、血管细胞黏附分子(VCAM)-1的蛋白表达,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测黏附分子的mRNA表达,用瞬时转染和报告基因测定法分析NF-κB的活性。结果TNF-α和IL-1β共同刺激后,人牙龈成纤维细胞ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达和蛋白表达均显著增强。CORM的加入可显著抑制ICAM-1和VCAM-1的表达。CORM可显著降低ICAM-1和VCAM-1诱导的NF-κB的活性。结论一氧化碳有可能成为牙周病治疗的一种极具潜力的新物质。

钙拮抗剂对牙龈成纤维细胞作用的体外实验研究

目的 :探讨钙拮抗剂硝苯地平对牙龈成纤维细胞的作用。方法 :体外培养牙龈成纤维细胞 ,细胞在不同浓度硝苯地平作用下计数观察。结果 :细胞计数在实验第 6、7天出现组间非常显著性差异。主要表现为硝苯地平 12 0 0 μg/L和 36 0 μg/L组 ,细胞计数明显高于低剂量组。 结论

人牙龈成纤维细胞原代培养及冻存和复苏

背景:牙龈成纤维细胞是牙龈固有结缔组织层中主要的细胞,在许多生理和病理过程中起着重要作用。目的:对人牙龈成纤维细胞进行原代培养、鉴定、冻存及复苏。方法:采用组织块培养法培养人牙龈成纤维细胞,并进行形态学和免疫学鉴定。对人牙龈成纤维细胞进行冻存与复苏,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果与结论:人牙龈成纤维细胞原代培养成功率为86.7%,细胞呈梭形或纺锤形。免疫组织化学鉴定抗波性蛋白抗体染色阳性,抗角蛋白抗体染色阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。牙龈成纤维细胞冻存与复苏成功,细胞经2次传代后生物学性状与原代相似。提示采用组织块培养法培养原代人牙龈成纤维细胞及冻存与复苏方法可行。

人牙龈成纤维细胞体外诱导成骨分化的实验研究

目的牙周组织工程是修复因牙周炎导致的牙周组织缺损的研究热点。牙龈成纤维细胞(gingival fibroblasts,GFs)作为一种新的牙周组织工程的种子细胞,越来越多地受到人们的关注。研究通过GFs体外培养,诱导其向成骨细胞方向分化,探究其成骨分化能力。方法提取人GFs,传代培养后进行成骨诱导培养,并检测碱性磷酸酶及钙结节。结果与对照组比较,实验组人GFs经诱导后碱性磷酸酶增强,并产生较多的钙结节。结论人GFs经过体外培养及成骨诱导后,在牙周组织再生修复中有一定的应用价值。

人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞生物学活性的研究

目的:体外原代培养人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,并对其生物学活性作初步探讨。方法:采用组织块法原代培养牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,绘制生长曲线,测定二者碱性磷酸酶活性;流式细胞术和免疫组化染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、骨形成蛋白的表达情况,观察对比两种细胞的生物学特性的异同。结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功率及细胞增殖活性明显高于牙周膜细胞。在牙周膜细胞中,Ⅰ、Ⅲ型胶原均为阳性表达,棕黄色颗粒充满整个胞浆内。在牙龈成纤维细胞中Ⅰ型胶原为弱阳性表达,Ⅲ型胶原阳性表达更弱。牙周膜细胞的ALP水平明显高于牙龈成纤维细胞。牙周膜细胞BMP2表达为强阳性,而牙龈成纤维细胞表达弱阳性。结论:牙周膜细胞具有较强的成骨能力,是理想的牙周组织工程的种子细胞。牙龈成纤维细胞易于培养成活,增殖力强,具有牙周膜细胞的一些特点,组织取材方便,也可作为牙周组织工程的种子细胞。

排龈药物对体外培养人牙龈成纤维细胞的毒性比较

目的评价6种常用的排龈药物对人牙龈成纤维细胞(HGF)毒性作用的大小,以指导临床选择最佳排龈药物。方法将6种不同体积分数的排龈药物(20%硫酸铝、5%硫酸铝、15.5%硫酸铁、13.3%硫酸铁、0.1%盐酸肾上腺素、0.01%盐酸肾上腺素)分别作用于体外培养的HGF,MTT比色法测定细胞的损伤与增殖,透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果所有实验药物均能引起细胞的直接损伤与增殖抑制,细胞毒性由小到大分别是0.01%盐酸肾上腺素、0.1%盐酸肾上腺素、5%硫酸铝、20%硫酸铝、硫酸铁,2种体积分数的硫酸铁毒性比较差异无统计学意义(P>0.01)。透射电镜显示2种体积分数的盐酸肾上腺素及5%硫酸铝可引起细胞器数量减少,线粒体及内质网肿胀;20%硫酸铝造成细胞水肿明显,细胞核和染色质分布不均匀;硫酸铁可导致细胞变性。结论0.01%盐酸肾上腺素细胞毒性作用最小,硫酸铁毒性最大。

人牙龈成纤维细胞对甲硝唑的跨膜转运

目的:研究人牙龈成纤维细胞对甲硝唑的跨膜转运,并初步探讨转运的影响因素及牙周局部给药和人工种植牙给药的可行性。方法:将人牙龈成纤维细胞与甲硝唑共同孵育1、5、10、15min后,弃去细胞外药液,收集各时间点细胞,用高效液相色谱法测定细胞内药物含量,用考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。结果:(1)人牙龈成纤维细胞内甲硝唑含量分别为0.940±0.408ng/μg(药物浓度:20ug/ml)和1.977±0.266ng/μg(药物浓度:40μg/ml)。不同加药浓度和孵育时间下,甲硝唑的转运量差异有显著性(P<0.01)。(2)高效液相色谱法可以准确测定细胞内甲硝唑的含量。结论:(1)人牙龈成纤维细胞具有转运甲硝唑的能力,药物浓度和药物孵育时间会影响转运量,这证实了牙周局部给药和人工种植牙给药的可行性。(2)高效液相色谱法可以准确,灵敏地测定细胞内药物的含量。

hBMP_2基因转染对人牙龈成纤维细胞生物学特性的影响

目的 :分析hBMP2 基因转染人牙龈成纤维细胞的生物学特性。方法 :用脂质体转染法将hBMP2 基因转入人牙龈成纤维细胞内 ,经G4 18筛选后 ,获得阳性克隆。以原位杂交和免疫组化对转染细胞进行鉴定 ;进一步观察细胞形态、生长特性、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成以及体外形成矿化结节的能力。结果 :hBMP2 基因转染后 ,人牙龈成纤维细胞有hBMP2 mRNA的转录和蛋白表达 ;部分细胞由原来的长梭形转化为多角形 ,碱性磷酸酶活性和骨钙素合成均明显高于对照组 (两组均P <0 .0 1) ;在矿化液作用下 ,能形成体外矿化结节。但细胞的增殖特性无明显变化。结论 :外源性hBMP2 基因能够在人牙龈成纤维细胞表达 ,并促进其向成骨细胞方向转化 ,而对细胞的生长特性无明显影响。

牙龈成纤维细胞-玉米醇溶蛋白-中药双黄补复合体对犬牙周组织再生的实验性研究

目的牙周炎是最常见的口腔疾病之一,可导致牙周支持组织的破坏,最终造成牙齿丧失。组织工程技术在牙周组织修复再生中的应用为牙周炎的治疗开辟了新途径。研究旨在探讨牙龈成纤维细胞(gingival fibroblast,GF)-玉米醇溶蛋白(Zein)-中药双黄补复合体促进犬牙周组织修复再生的作用。方法以2只Beagle犬双侧上颌54|45、下颌743|347共20个牙位作为实验部位,将其配对分为4组,每组5个牙位分别制备骨缺损模型。实验Ⅰ组:翻瓣术+Zein支架植入;实验Ⅱ组:翻瓣术+GF-Zein支架植入;实验Ⅲ组:翻瓣术+GF-Zein-中药双黄补复合体植入;对照组:单纯翻瓣术。于术后3个月进行组织学观察、测量及锥形束CT(cone-beam computed tomography,CBCT)检查。结果实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组术后3个月新生牙槽骨高度均高于对照组(P<0.05),其中实验Ⅲ组新骨生成效果更显著(P<0.01);实验Ⅲ组新生牙骨质的测量值比对照组相应值高(P<0.05)。实验Ⅱ组、实验Ⅲ组术区牙槽骨与正常牙槽骨的骨密度差值百分比低于对照组的相应值(P<0.05),实验Ⅰ组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论中药双黄补可促进犬牙周骨缺损的修复,有利于牙周组织的再生。