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犬流感病毒H_(3)N_(2)和H_(3)N_(8)亚型流行病学研究进展
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作者 乔培培 霍宁宁 +5 位作者 陈亚磊 吴洪超 王洁 刘玉秀 朱进华 田克恭 《现代畜牧兽医》 2024年第6期92-96,共5页
自2004年首次在美国发现犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)以来,经过不断的演变进化和跨物种的传播,CIV已在全球范围内广泛传播。由于犬对多种流感病毒易感,流感病毒对犬的影响及其产生人畜共患的大流行性流感的风险不容忽视。文... 自2004年首次在美国发现犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)以来,经过不断的演变进化和跨物种的传播,CIV已在全球范围内广泛传播。由于犬对多种流感病毒易感,流感病毒对犬的影响及其产生人畜共患的大流行性流感的风险不容忽视。文章就CIV的病原学及较稳定传播的两种亚型CIV(H_(3)N_(2)和H_(3)N_(8))的流行病学进行综述,旨在为CIV的预防、诊断以及疫苗研发等提供参考。 展开更多
关键词 犬流感病毒 流行病学 H_(3)N_(2)亚型 H_(3)N_(8)亚型
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H3N2亚型犬流感病毒的分离鉴定 被引量:8
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作者 佘利旋 熊永忠 +3 位作者 远立国 袁天梅 贾坤 李守军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期15-18,共4页
为了解广州地区犬流感的流行情况,本研究采集107份犬鼻咽拭子样品和58份血清样品,SPF鸡胚分离病毒并进行抗体检测。结果显示:分离获得3株H3N2亚型犬流感病毒。分离株的EID50为10-2.42/0.1 mL~10-3.5/0.1 mL;MDT为177.6 h~192 h;对乙... 为了解广州地区犬流感的流行情况,本研究采集107份犬鼻咽拭子样品和58份血清样品,SPF鸡胚分离病毒并进行抗体检测。结果显示:分离获得3株H3N2亚型犬流感病毒。分离株的EID50为10-2.42/0.1 mL~10-3.5/0.1 mL;MDT为177.6 h~192 h;对乙醚、氯仿、酸和温度均敏感;对血凝素为热不稳定型;能够凝集公鸡、豚鼠、猪和牛的红细胞。 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3N2亚型 分离鉴定 生物学特性
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犬流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立 被引量:7
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作者 高晓宇 曹荣峰 +1 位作者 张桂红 李守军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期36-39,共4页
为了建立一种便捷、灵敏的犬流感病毒(CIV)检测技术,本研究根据CIV相对保守的M片段设计3对特异性引物,建立CIV的RT-LAMP检测方法,对反应体系中的MgSO4、Betaine、Bst DNA PoLymerase、dNTP、引物浓度等分别进行了优化,并进行敏感性和特... 为了建立一种便捷、灵敏的犬流感病毒(CIV)检测技术,本研究根据CIV相对保守的M片段设计3对特异性引物,建立CIV的RT-LAMP检测方法,对反应体系中的MgSO4、Betaine、Bst DNA PoLymerase、dNTP、引物浓度等分别进行了优化,并进行敏感性和特异性试验。结果表明:所建立的反应体系在恒温水浴锅中作用45min即可得到其特有的阶梯状条带,而且对犬细小病毒、犬瘟病毒和犬副流感病毒的扩增结果均为阴性。该方法对CIV RNA的最小检测限为0.1pg,灵敏性高于一步RT-PCR方法。RT-LAMP和普通RT-PCR方法检测临床样品的符合率为93.02%。该方法为犬流感病毒的临床检测提供了一种简便、实用的方法,为基层检疫提供了方便。 展开更多
关键词 犬流感病毒(CIV) 逆转录环介导等温扩增 快速检测
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一株H3N2亚型犬流感病毒的分离与进化分析 被引量:4
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作者 王晓丽 毕振威 +5 位作者 王永山 潘群兴 欧阳伟 夏兴霞 诸玉梅 董晨红 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第2期32-40,共9页
2012年从南京市某宠物医院采集的20份犬鼻拭子中分离到1株犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV),命名为A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2).该病毒分离株的血凝素(hemagglutinin,HA)效价为28,鸡胚半数感染量(median embryoinfect... 2012年从南京市某宠物医院采集的20份犬鼻拭子中分离到1株犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV),命名为A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2).该病毒分离株的血凝素(hemagglutinin,HA)效价为28,鸡胚半数感染量(median embryoinfective dose,EID50)和最小致死量平均死亡时间(mean death time,MDT)分别为10-7.60/0.1 mL和69.6h/10-4.血凝素(HA)基因、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因和核蛋白(necleoprotein,NP)基因的系统发育进化树均显示该分离株CIV位于禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)亚群中,并与H3N2亚型CIV辽宁分离株和黑龙江分离株位于同一分支上,具有最近的亲缘关系(HA基因的同源性为99.5%~99.6%,NA基因的同源性为99.0%~99.2%,NP基因的同源性为99.1%~99.3%).氨基酸序列分析显示,该病毒分离株与其他犬流感病毒分离株的HA、NA和NP氨基酸序列存在个别位点的突变. 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3N2亚型 分离 变异 系统发育进化树
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H3N2亚型犬流感病毒HA1基因的原核表达及抗原性分析 被引量:3
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作者 张敦伟 熊永忠 +3 位作者 远立国 贾坤 张桂红 李守军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期157-159,共3页
为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱... 为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析,表达的重组蛋白约为58 ku。纯化的HA1蛋白经western blot和Dot-ELISA鉴定表明,表达的重组HA1蛋白可以与H3N2亚型CIV阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 犬流感病毒 HA1基因 原核表达 抗原性
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甲流重组犬流感病毒的小鼠致病性研究 被引量:3
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作者 赵卫锋 何平 +12 位作者 周华波 丁仰保 陈泉江 刘琳 李瑞凯 邹媛婧 廖卓韵 王凌霄 韦祖樟 欧阳康 孙文博 黄伟坚 陈樱 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第6期32-36,共5页
本研究通过建立犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)感染BALB/c小鼠模型,探索新发现的甲流重组CIVs对小鼠的致病性。我们采用9株H1N1和1株H3N2甲流重组CIVs,以106 TCID_(50)/mL的剂量滴鼻攻毒10组小鼠。结果表明:感染后4 d小鼠体重... 本研究通过建立犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)感染BALB/c小鼠模型,探索新发现的甲流重组CIVs对小鼠的致病性。我们采用9株H1N1和1株H3N2甲流重组CIVs,以106 TCID_(50)/mL的剂量滴鼻攻毒10组小鼠。结果表明:感染后4 d小鼠体重均有一定程度的下降,其中A/Canine/Guangxi/LZ56/2015(H1N1)(简称LZ56)组的小鼠体重下降最为明显(P<0.5),其存活率为77.78%;通过TCID_(50)测定发现10株甲流重组CIVs均能在小鼠的鼻窦和肺脏复制,以LZ56组的复制滴度最高,分别达到107.3 TCID_(50)/mL和10^(5.3) TCID_(50)/mL;肺脏病理切片观察发现LZ36、LZ45、LZ56和QZ5组出现不同程度病变,以支气管上皮细胞坏死脱落,肺泡壁增厚,肺泡腔以及支气管内有大量的弥漫性浸润的单核细胞为主要特征。结果表明,新型重组CIVs均能感染BALB/c小鼠,并能在小鼠体内较好复制,甚至致死,一旦这些新型CIVs以犬为中间宿主传播给人,势必对人类健康构成重大威胁。因此,加强对CIVs的监测将为防控人流感大暴发提供提前预警。 展开更多
关键词 甲型流感 重组 犬流感病毒 致病性 小白鼠
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H3N2亚型犬流感病毒NP蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备 被引量:3
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作者 王晓丽 毕振威 +4 位作者 王永山 潘群兴 欧阳伟 夏兴霞 诸玉梅 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第1期1-6,共6页
将分离的H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2)株的核蛋白(NP)基因克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,构建重组表达质粒p ET-NP,然后转化大肠杆菌E.coli Rosetta(DE)感受态细胞,经IPTG诱导后,采... 将分离的H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2)株的核蛋白(NP)基因克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,构建重组表达质粒p ET-NP,然后转化大肠杆菌E.coli Rosetta(DE)感受态细胞,经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果显示,大肠杆菌表达的重组NP蛋白的分子量约为61 k Da,与预期相符,并能与犬CIV阳性血清发生特异性反应。将表达的重组NP蛋白进行纯化后,免疫大白兔制备抗NP蛋白多克隆抗体血清,Western blot检测该血清可与CIV的NP蛋白发生特异性反应,间接ELISA检测该多克隆抗体血清的效价达1:30 000,显示了较高的抗体效价。本研究为CIV快速检测方法的建立和流行病学调查奠定了科学依据。 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3N2亚型 核蛋白 原核表达 多克隆抗体
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H3N2亚型犬流感病毒血凝及血凝抑制试验的研究 被引量:3
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作者 赵明喜 赖芳芳 +2 位作者 贾坤 李华涛 李守军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期290-293,共4页
为优化H3N2亚型犬流感病毒(CIV)的血凝抑制(HI)试验方法,本研究应用不同种类红细胞进行CIV的血凝(HA)试验,应用不同种类红细胞和不同血清处理方法进行CIV的HI试验,评价其对HA和HI试验的影响。结果表明,H3N2亚型CIV对鸡和犬红细胞的凝集... 为优化H3N2亚型犬流感病毒(CIV)的血凝抑制(HI)试验方法,本研究应用不同种类红细胞进行CIV的血凝(HA)试验,应用不同种类红细胞和不同血清处理方法进行CIV的HI试验,评价其对HA和HI试验的影响。结果表明,H3N2亚型CIV对鸡和犬红细胞的凝集性最好,对小鼠、猪和牛红细胞的凝集性较差。HI试验应用鸡红细胞悬液效果最好,受体破坏酶(RDE)和高碘酸钾处理可以有效去除犬血清中非特异血凝抑制素,但高碘酸钾对血清特异性抗体有损耗。本研究筛选出H3N2亚型CIV HI试验的最佳方法,为犬流感的血清学诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3N2亚型 血凝试验 血凝抑制试验
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广东1株H3N2亚型犬流感病毒的分离与鉴定
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作者 赵明喜 赖芳芳 +2 位作者 贾坤 李华涛 李守军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第2期7-9,共3页
本试验采集一只具有流感临床症状的病犬鼻咽拭子经常规处理后接种SPF鸡胚,分离到一株流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性研究。结果表明,该毒株对1%鸡红细胞的血凝价为26,能被H3亚型流感病毒阳性血清中和,与H1、H5、H7、H9亚型阳性血... 本试验采集一只具有流感临床症状的病犬鼻咽拭子经常规处理后接种SPF鸡胚,分离到一株流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性研究。结果表明,该毒株对1%鸡红细胞的血凝价为26,能被H3亚型流感病毒阳性血清中和,与H1、H5、H7、H9亚型阳性血清和阴性血清无交叉反应。序列分析显示,该毒株的HA和NA基因核苷酸序列分别与犬流感病毒(CIV)H3和N2亚型的病毒株同源性最高。确定该毒株为H3N2亚型CIV,并将其命名为A/canine/Guangdong/01/2011。 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3N2亚型 序列分析
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新疆某地区犬流感病毒血清学及病原学调查
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作者 米晓云 盛肖刚 +3 位作者 吴建勇 汪萍 杨学云 魏玉荣 《塔里木大学学报》 2021年第3期10-15,共6页
为了解新疆某地区流浪犬和宠物犬群体中犬流感现状,应用ELISA方法和RT-PCR方法,分别对2019年1月至9月期间收集的流浪犬和宠物犬共计250份血清样本和179份鼻拭子样本进行血清学和病原学检测。检测结果显示:血清学检测流浪犬和宠物犬流感... 为了解新疆某地区流浪犬和宠物犬群体中犬流感现状,应用ELISA方法和RT-PCR方法,分别对2019年1月至9月期间收集的流浪犬和宠物犬共计250份血清样本和179份鼻拭子样本进行血清学和病原学检测。检测结果显示:血清学检测流浪犬和宠物犬流感抗体阳性率分别是58%(58/100)和5.33%(8/150);病原学检测流浪犬和宠物犬流感病毒抗原阳性率分别是4%(4/100)和1.27%(1/79),RT-PCR产物测序序列经BLASTn比对与犬流感H3N2亚型同源性最高。血清学结果显示调查地区一定比例的流浪犬和宠物犬曾感染犬流感;病原学结果显示调查地区流行H3N2亚型犬流感。犬流感病毒血清学及病原学调查可为公共卫生安全评估提供参考。 展开更多
关键词 犬流感病毒 血清学 病原学 ELISA RT-PCR
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犬流感病毒的分离鉴定及部分基因序列分析 被引量:1
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作者 师丽敏 夏冬华 程台格 《湖北畜牧兽医》 2019年第8期9-11,共3页
使用Vero细胞接种临床症状疑似感染犬流感病毒(CIV)的犬肺组织,盲传3代,观察其病变情况,收集72h培养液进行PCR鉴定、血凝特性及形态学观察,同时进行序列测定和分析,并制作系统进化树。结果表明,从犬肺中成功分离出一株犬流感病毒,该病... 使用Vero细胞接种临床症状疑似感染犬流感病毒(CIV)的犬肺组织,盲传3代,观察其病变情况,收集72h培养液进行PCR鉴定、血凝特性及形态学观察,同时进行序列测定和分析,并制作系统进化树。结果表明,从犬肺中成功分离出一株犬流感病毒,该病毒能够凝聚豚鼠、猪、鸡抗凝血,电镜观察病毒呈圆形、长丝状等形态多样、大小不等的颗粒状;序列分析表明,与人源、犬源等10株有代表性的流感病毒基因同源性极高,只有少数地方发生了特异变异。这些数据的分析对于犬流感的防控有一定的参考价值。 展开更多
关键词 犬流感病毒 分离鉴定 基因序列
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H3亚型犬流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 吴颖 王福军 +6 位作者 王秀荣 施建忠 杨焕良 邓国华 陈艳 陈化兰 刘丽玲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期722-726,共5页
为建立H3亚型犬流感病毒(CIV)荧光定量PCR检测方法,本研究根据H3亚型CIV HA基因的保守区序列,设计合成一对特异性引物和Taq Man MGB探针,经条件优化后初步建立了H3亚型CIV荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,构建的重组质粒标准品在109拷... 为建立H3亚型犬流感病毒(CIV)荧光定量PCR检测方法,本研究根据H3亚型CIV HA基因的保守区序列,设计合成一对特异性引物和Taq Man MGB探针,经条件优化后初步建立了H3亚型CIV荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,构建的重组质粒标准品在109拷贝/μL~10^(2)拷贝/μL浓度范围内有良好的线性关系,标准曲线的相关系数为0.999。该方法仅能特异性扩增H3N2亚型CIV核酸,与H3N2亚型禽流感病毒、人流感病毒和猪流感病毒及H9N2亚型CIV、H1N1亚型猪流感病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬冠状病毒等病毒核酸均无交叉反应。该方法最低可检测到的质粒标准品浓度为19拷贝/μL,敏感性高于普通PCR方法。组内与组间重复性试验的变异系数均小于1%。利用该方法对83份临床样品的核酸进行检测,检测结果与病毒分离结果总符合率为97.59%。本研究建立的荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,为临床H3亚型CIV的快速检测提供可靠方法。 展开更多
关键词 H3亚型犬流感病毒 TaqMan MGB探针 荧光定量RT-PCR
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一株H3N2亚型犬流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析 被引量:3
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作者 闫中山 洪马林 +6 位作者 付橙 黄三 郑运 王丽芳 周沛 粟硕 李守军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期407-409,共3页
为了解犬流感病毒(CIV)在广州地区的流行和进化情况,本研究从广州市宠物医院采集了230份犬鼻咽拭子样品,接种10日龄SPF鸡胚,进行CIV的分离和鉴定,并对其全基因组序列进行分析。结果表明,从这些样品中仅分离鉴定出一株H3N2亚型CIV A/cani... 为了解犬流感病毒(CIV)在广州地区的流行和进化情况,本研究从广州市宠物医院采集了230份犬鼻咽拭子样品,接种10日龄SPF鸡胚,进行CIV的分离和鉴定,并对其全基因组序列进行分析。结果表明,从这些样品中仅分离鉴定出一株H3N2亚型CIV A/canine/Guangdong/01/2014(H3N2)。对该病毒株全基因组的遗传进化分析表明,分离株的PB2、PB1、PA、NP、HA、NA、M、NS 8个基因均为CIV,未发生重组;HA和NA基因与我国广东地区分离的H3N2亚型CIV属于同一个分支,氨基酸同源性分别达98.2%和97.0%。本研究结果为明确华南地区CIV的流行进化情况提供了基础数据。 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3N2亚型 分离鉴定 遗传进化分析
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H3N2亚型犬流感病毒反向遗传操作系统的建立 被引量:4
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作者 段旭彤 荣广玉 +8 位作者 田巧珍 申伟霞 李雪松 陈鸿军 刘芹防 杨健美 滕巧泱 赵凯 李泽君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第3期7-11,共5页
H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)可以在犬中迅速的传播,甚至引起犬的死亡,也可感染其他哺乳动物。目前该病毒致病的分子机制尚不清楚。为此,本研究采用RT-PCR技术扩增犬流感病毒A/Canine/Zhejiang/01/2010(H3N2)(简称ZJ... H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)可以在犬中迅速的传播,甚至引起犬的死亡,也可感染其他哺乳动物。目前该病毒致病的分子机制尚不清楚。为此,本研究采用RT-PCR技术扩增犬流感病毒A/Canine/Zhejiang/01/2010(H3N2)(简称ZJ2010)的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS 8个基因片段,并分别克隆至双向表达载体p BD上。采用8质粒系统共转染293T细胞,转染48 h后加入TPCK胰酶作用2 h,将上清和细胞一同接种9~11日龄SPF鸡胚,并检测血凝效价。结果显示,本研究成功拯救获得了病毒株r ZJ2010。r ZJ2010株的8个基因片段的序列均与亲本ZJ2010株的序列相同。r ZJ2010株与ZJ2010株在鼠的肺和鼻中复制水平接近。这些结果证实,本研究已成功建立H3N2亚型犬流感病毒反向株遗传操作系统,为该病毒的致病机理、传播机制以及跨宿主传播机制研究等奠定了技术平台。 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3N2亚型 反向遗传操作系统
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H3N2亚型犬流感病毒重组HA1蛋白间接ELISA检测方法的建立 被引量:3
15
作者 黄柏槐 张敦伟 +2 位作者 远立国 张桂红 李守军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期711-714,共4页
为建立一种H3N2亚型犬流感病毒(CIV)血清学检测方法,本研究利用CIV重组HA1蛋白作为检测抗原,建立H3N2亚型CIV抗体的间接ELISA检测方法,并优化反应条件。通过检测阴性血清样本30份确定其临界值为0.228。该方法与抗猪流感病毒H1N1、H1N2、... 为建立一种H3N2亚型犬流感病毒(CIV)血清学检测方法,本研究利用CIV重组HA1蛋白作为检测抗原,建立H3N2亚型CIV抗体的间接ELISA检测方法,并优化反应条件。通过检测阴性血清样本30份确定其临界值为0.228。该方法与抗猪流感病毒H1N1、H1N2、H6N6、H9N2的阳性血清和犬瘟热病、犬细小病、犬副流感的阳性血清均无交叉反应。变异系数在1.01%~7.52%之间,具有较好的重复性。通过对150份临床样品进行检测并与血凝抑制试验检测结果比较,总符合率为98.6%。本研究为CIV流行病学调查提供了一种快速、方便、敏感的抗体检测方法。 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3N2亚型 HA1蛋白 间接ELISA
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北美H3N8亚型犬流感病毒双重RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
16
作者 宋晶伟 王晨曦 +3 位作者 张谞霄 孙洪磊 彭金山 蒲娟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第8期26-28,31,共4页
H3N8亚型犬流感病毒在北美地区广泛流行,并引发犬的呼吸道疾病,但目前中国尚未有犬感染H3N8亚型犬流感病毒的报道。随着近几年宠物贸易的繁盛,犬流感流行区域可能逐渐扩大,增加北美H3N8亚型犬流感病毒传入中国的可能。因此,需要建立一... H3N8亚型犬流感病毒在北美地区广泛流行,并引发犬的呼吸道疾病,但目前中国尚未有犬感染H3N8亚型犬流感病毒的报道。随着近几年宠物贸易的繁盛,犬流感流行区域可能逐渐扩大,增加北美H3N8亚型犬流感病毒传入中国的可能。因此,需要建立一种针对北美H3N8亚型犬流感病毒的快速检测方法。本研究中,我们建立了针对北美H3N8亚型犬流感病毒的HA和NA基因片段的双重RT-PCR检测方法。该方法可特异性地检出北美H3N8亚型犬流感病毒HA和NA基因,而未检出H3N2亚型犬流感病毒及其他亚型流感病毒、犬瘟热病毒、传染性肝炎病毒、犬细小病病毒、副流感病毒;检测方法灵敏度可达0.1 pg/μL。利用该方法对临床样本进行了检测,证实该检测方法可靠。该检测方法的建立为监测北美H3N8亚型犬流感病毒提供了良好的技术支撑,可用于外来犬流感病毒的检测。 展开更多
关键词 H3N8 犬流感病毒 双重RT-PCR
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从噬菌体随机七肽库中筛选抗H3N2亚型犬流感病毒多肽的研究 被引量:1
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作者 叶存栋 胡静思 +5 位作者 贾坤 李陆涛 刘荣昌 涂黎晴 孙凌霜 李守军 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期12-17,共6页
【目的】以纯化的H3N2亚型犬流感病毒HA1蛋白为作用靶点,从噬菌体随机七肽库中筛选出具有抗流感病毒活性的亲和多肽.【方法】运用噬菌体展示技术,以纯化的H3N2亚型犬流感病毒HA1蛋白为作用靶点,从噬菌体随机七肽库中筛选HA1蛋白亲和多肽... 【目的】以纯化的H3N2亚型犬流感病毒HA1蛋白为作用靶点,从噬菌体随机七肽库中筛选出具有抗流感病毒活性的亲和多肽.【方法】运用噬菌体展示技术,以纯化的H3N2亚型犬流感病毒HA1蛋白为作用靶点,从噬菌体随机七肽库中筛选HA1蛋白亲和多肽,并对获得的多肽进行鸡胚水平和细胞水平抗H3N2亚型流感病毒活性验证.【结果和结论】经过4轮体外亲和筛选获得了6条HA1蛋白亲和多肽,6条多肽对H3N2亚型流感病毒有不同程度的抗病毒活性,其中以HA-4的抗病毒活性最强.试验结果表明噬菌体随机肽库技术能够应用于抗病毒研究. 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3N2亚型 血凝素HA1亲和肽 噬菌体随机肽库 病毒多肽
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犬流感病毒重组核蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 李陆涛 袁子国 +4 位作者 孙凌霜 涂黎晴 闫中山 李秀珍 李守军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期611-614,共4页
为建立H3N2亚型犬流感病毒(cIv)血清学检测方法,本研究利用H3N2亚型CIV重组核蛋白(rNP)作为检测抗原,通过优化反应条件,建立了检测CIV核蛋白血清抗体的间接ELISA方法。通过检测10份SPF犬血清样品确定阴阳性临界值为0.288。该方... 为建立H3N2亚型犬流感病毒(cIv)血清学检测方法,本研究利用H3N2亚型CIV重组核蛋白(rNP)作为检测抗原,通过优化反应条件,建立了检测CIV核蛋白血清抗体的间接ELISA方法。通过检测10份SPF犬血清样品确定阴阳性临界值为0.288。该方法检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感毒、犬腺病毒II型、狂犬病病毒、犬弓形虫、犬弓首蛔虫、犬复孔绦虫的阳性血清均为阴性,具有良好的特异性,但与H1N1、H3N8和H9N2亚型CIV有交叉反应。该方法检测H3N2CIV血清抗体的灵敏度为血凝抑制试验(HI)的3~12.5倍;而且其批内批间变异系数为1.85%~6.57%,重复性良好。通过对H3N2CIV攻毒犬血清进行分析,表明该检测方法具有滞后性,检测到CIV抗体的时间晚于HI试验。利用本研究建立的方法和以H3N2CIV为诊断抗原的HI检测方法对450份血清样品进行检测,结果显示该方法对血清样品具有初筛作用,两者阳性符合率为58-3%,阴性符合率为100%。本研究可以结合其它血清学方法为CIV流行病学调查进行快速、高效的检测。 展开更多
关键词 犬流感病毒 重组核蛋白 间接ELISA
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H3亚型犬流感病毒的荧光定量PCR方法建立及其增殖特性研究 被引量:1
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作者 程慧敏 黄程 +7 位作者 林健 王小蕾 杨志远 段会娟 赵际成 潘洁 刘月焕 刘立新 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第2期112-118,共7页
旨在建立H3亚型犬流感病毒(canine influenza virus, CIV)荧光定量PCR方法,利用该方法对病毒在犬肾细胞(MDCK细胞)上增殖特性进行研究。根据CIV的血凝素(HA)片段上的HA2基因保守区设计并合成特异性引物,构建CIV-HA重组质粒作为标准品,... 旨在建立H3亚型犬流感病毒(canine influenza virus, CIV)荧光定量PCR方法,利用该方法对病毒在犬肾细胞(MDCK细胞)上增殖特性进行研究。根据CIV的血凝素(HA)片段上的HA2基因保守区设计并合成特异性引物,构建CIV-HA重组质粒作为标准品,经过条件优化,建立H3亚型CIV荧光定量检测方法,对其敏感性、特异性和重复性进行评价,并将该方法应用于CIV在MDCK细胞上增殖特性的研究,与病毒滴度(TCID;)进行相关性分析。结果显示:该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,最低检测线可以达到20.8 copies/μL,与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、H1亚型流感病毒不发生交叉反应,批间、批内重复性良好(变异系数<1.1%)。将该方法应用于检测CIV在MDCK细胞上的增殖特性,与细胞培养法测定病毒滴度相比,二者具有较好的相关性。本研究初步建立了H3亚型CIV荧光定量检测方法,该方法可为CIV的增殖特性研究提供工具。 展开更多
关键词 犬流感病毒 H3亚型 荧光定量PCR 染料法 增殖特性
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PB1-F2长度改变对H3N2犬流感病毒影响的研究 被引量:3
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作者 原耀贤 李舜 +4 位作者 何威 李康健 马春全 李守军 马骏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期243-249,共7页
H3N2犬流感病毒(H3N2 CIV)是流感病毒在进化过程中新形成的一个分支,在我国多地的犬中广泛流行。PB1-F2蛋白是甲型流感病毒的毒力因子,并可能与流感病毒的跨宿主传播相关。为探究PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,本研究分别构建了包含... H3N2犬流感病毒(H3N2 CIV)是流感病毒在进化过程中新形成的一个分支,在我国多地的犬中广泛流行。PB1-F2蛋白是甲型流感病毒的毒力因子,并可能与流感病毒的跨宿主传播相关。为探究PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,本研究分别构建了包含H3N2 CIV各基因节段的重组质粒及携带M1R(PB1-F2的aa1由M突变为R)及S^(11)Stop(PB1-F2 aa11由S突变为终止氨基酸序列)突变的重组质粒pHW-PB1-F2-M1R和pHW-PB1-F2-S^(11)Stop,并均经测序鉴定。通过反向遗传操作技术,分别拯救了如下3株重组病毒:表达90个氨基酸PB1-F2的重组亲本病毒rH3N2;不表达PB1-F2的重组病毒rH3N2-M1R;仅表达11个氨基酸PB1-F2的重组病毒rH3N2-S^(11)Stop。将这3株重组病毒利用MDCK细胞传代后分别对其8个基因节段经PCR扩增及测序以鉴定其遗传稳定性。测序鉴定结果显示,3株重组病毒均正确构建,且不同代次之间各重组病毒的基因序列及各突变位点均相同,表明本研究构建的重组病毒具有较好的遗传稳定性。将表达PB1、PB1-F2-M1R及PB1-F2-S^(11)Stop的重组质粒分别与重组质粒PB2、PA和荧光素酶报告质粒pPolI-Luci-NP及海肾荧光素酶表达质粒共转染293T细胞,48 h后利用双荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性并比较3株重组病毒的聚合酶活性;测定3株重组病毒感染MDCK细胞后不同时间的TCID50以绘制病毒的生长曲线;将3株重组病毒均以106TCID50/50μL经鼻腔感染小鼠,分析各重组病毒对小鼠的致病性。用以评价PB1-F2长度改变对H3N2 CIV的影响。结果显示,rH3N2-S^(11)Stop的聚合酶活性与rH3N2相比无明显变化,而rH3N2-M1R的聚合酶活性则显著高于rH3N2(P<0.05);rH3N2-M1R和rH3N2-S^(11)Stop在MDCK细胞中的复制效率显著高于rH3N2(P<0.05),且rH3N2-M1R的复制效率要高于rH3N2-S^(11)Stop。小鼠的致病性试验结果显示,感染重组病毒后的小鼠表现被毛粗乱、精神不振、食欲减退等症状;3株重组病毒均对小鼠体质量有轻微影响,并对小鼠肺脏均造成了轻微病理损伤,但三者对小鼠体质量及肺脏的影响差别不明显。本实验结果首次证实,PB1-F2的不表达能够提高H3N2 CIV的转录效果,且PB1-F2长度的改变能够提高H3N2 CIV在细胞中的复制效率,但对病毒在小鼠中致病性的影响较小。本研究初步探究了PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,为该病毒致病机制及其感染防控技术的研究与制定提供了参考依据。 展开更多
关键词 犬流感病毒 反向遗传 定点突变 PB1-F2
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