犬瘟热病毒和犬腺病毒2型双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

旨在建立犬瘟热病毒(CDV)和犬腺病毒2型(CAdV-2)双重TaqMan荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法。本试验针对CDV的N基因和CAdV-2的E3基因设计两对特异性引物与两条标记不同荧光基团的TaqMan-MGB探针,对引物、探针的浓度、反应体系和反应条件进行优化后检测该方法的灵敏度,特异性及重复性。结果:该方法在CDV和CAdV-2阳性参考质粒浓度1×10^(1)~1×10^(7) copies/μL的范围中,R2值为0.997和0.993,表明所建的标准曲线具有良好线性关系,能检测到最低浓度为5 copies/μL,并对其他病原无扩增现象,特异性良好;重复性试验中组内和组间变异系数小于1.54%。综上,建立的双重TaqMan RT-qPCR检测方法具有灵敏度高且特异性好等优点,可用于CDV和CAdV-2临床快速检测和鉴别诊断及流行病学调查等领域。

犬瘟热病毒感染的诊断与防治

犬瘟热(Canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)感染引起的一种高度接触性传染病,传染性强,感染率高,死亡率高。患犬初期表现为高体温、食欲不振、眼鼻流出水样分泌物、并有腹泻等症状,后期症状逐渐加重。本文从犬瘟热病毒感染的检测工具及其检测措施出发,探究有效的诊断方法;并从中医和西医角度分析对治疗犬瘟热病毒有效的治疗方法。由于犬瘟热病毒传染性极强,就需要做好预防工作,如注意犬舍卫生,做好日常消杀工作,定期体检,及时接种疫苗等,通过综合手段降低犬瘟热的病发率。

南充城区家养犬犬瘟热流行病学调查与分析

为了解南充城区犬瘟热(CD)的发病特点和流行规律,给该病的精准防控提供数据支持。该研究通过对川北动物医院和名宠动物医院近4年(42个月)的4 425只就诊犬病历数据进行统计分析。结果发现,就诊犬CD发病率为1.94%;CD发病率极显著受到年龄影响(P <0.01),其中以幼犬发病率最高(3.17%);性别对犬CD发病率有影响,但差异不显著(P=0.235);品种和体型对CD发病率影响差异极显著,混血犬(3.61%)极显著高于纯种犬(1.65%)(P=0.001),大型犬显著高于小型犬(P<0.01);CD发病呈现季节性差异,以春季显著高于夏秋冬三季(P=0.016);免疫犬CD发病率(0.96%)极显著低于未免疫犬(2.81%)(P<0.01);未发现绝育犬感染CD病例,驱虫对CD发病率影响不显著(P=0.155);CD病犬接受住院治疗后治愈率达81.25%,康复期约为1周。

水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗与水貂犬瘟热活疫苗混合免疫效果评价

为评价水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗(简称MEV亚单位疫苗)与水貂犬瘟热活疫苗(简称CDV活疫苗)混合免疫的效果,本研究将两种疫苗混合后在室温静置不同时间测定犬瘟热病毒(CDV)含量,并选用30只健康水貂随机分为6组进行比对试验,其中G1和G2组免疫MEV亚单位疫苗稀释CDV活疫苗的混合疫苗,G3组为CDV活疫苗单独免疫组,G4组为MEV亚单位疫苗单独免疫组,G5和G6组分别为CDV攻毒组和MEV攻毒组。免疫后21 d采血检测CDV中和抗体,同时对G1、G3、G5组进行CDV攻毒;免疫后14 d采血检测MEV血凝抑制(HI)抗体,同时对G2、G4、G6组进行MEV攻毒。结果:两种疫苗混合后在室温静置2 h, CDV含量无明显下降。免疫后21 d, G1和G3组CDV中和抗体效价达到1∶64.6~1∶128.8,CDV攻毒后混合疫苗和CDV活疫苗免疫组的保护率均为100%。免疫后14 d, G2和G4组的MEV HI抗体效价达到1∶128~1∶1 024,MEV攻毒后混合疫苗和MEV亚单位疫苗免疫组的保护率均为100%。研究表明,MEV亚单位疫苗稀释CDV活疫苗,混合免疫后各疫苗的免疫效力均不受影响。

犬瘟热病毒截短融合蛋白原核表达及其单克隆抗体制备

为制备犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)融合蛋白(F)单克隆抗体,研究通过PCR扩增CDV F蛋白胞外区基因,将其克隆至pET-28a原核表达载体,并构建pET-28a-CDV-F重组质粒;将其转化到BL21(DE3)感受态细胞,经终浓度为0.2 mmol·L^(-1)的IPTG在37℃诱导6 h后,SDS-PAGE检测表达产物,结果显示在约33 kDa处出现目的条带,且该蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot结果表明,重组F蛋白可特异性识别抗His标签单克隆抗体和CDV阳性血清。将重组F蛋白采用切胶纯化法纯化后,以此为免疫原免疫BALB/c小鼠4次,取脾细胞与SP2/0细胞融合,以重组F蛋白为包被抗原,应用间接ELISA检测方法与有限稀释法筛选阳性杂交瘤细胞,最终筛选得到2株单克隆抗体(命名为1B6、1G8);经抗体亚类试剂盒鉴定,2株单抗均属于IgM/κ型;Western blot结果表明2株单克隆抗体均能与重组F蛋白特异性结合。在CDV感染的细胞上进行间接免疫荧光试验,2株单克隆抗体均能识别CDV3疫苗株和LN(10)1野毒株。综上,CDV F蛋白单克隆抗体的制备为CDV的检测奠定基础。

犬细小病毒病和犬瘟热二联组织灭活苗的免疫研究

本文综述了犬细小病毒病和防控策略,介绍了犬细小病毒病和犬瘟热二联组织灭活苗的制备及应用等方面的研究进展。对疫苗的安全性、有效性评价、疫苗接种后免疫应答的监测以及疫苗接种策略的制定等方面的研究也被详细阐述。本文总结了犬细小病毒病和犬瘟热二联组织灭活苗是防治这些疾病的有效手段之一,这可帮助人们更好地了解犬细小病毒病和犬瘟热的防控策略,从而为犬只的健康管理提供更多支持。

犬瘟热病毒血凝素蛋白功能研究进展

犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染动物导致发病的一种烈性传染病,宿主范围广泛,感染发病的动物出现复杂的临床症状,死亡率高。血凝素(H)蛋白是CDV结构蛋白之一,具有主要的特异性抗原位点,可与信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)或上皮细胞黏附蛋白Nectin-4发生相互作用,介导病毒的吸附、出芽等,还与CDV跨动物种属传播具有密切联系。文章对CDV H蛋白功能及特点进行概述,围绕H蛋白对CDV的致病性及疫苗研究进展进行了讨论,以期为H蛋白研究及CD防控提供参考。

犬瘟热疾病的诊断与治疗案例分析

犬瘟热属急性、接触性传染病,在宠物犬饲养时较为常见。临床上,患犬瘟热的宠物犬主要表现为咳嗽、倦怠、厌食、发热、眼鼻流分泌物等症状,对宠物犬的健康生长影响甚大,严重的甚至会死亡,进而造成巨大经济损失,如何有效防治犬瘟热成为行业工作者思考的关键问题。鉴于此,本文以实例探讨了犬瘟热的诊断要点、治疗方法和预防对策,希望能够起到一定的借鉴作用。

犬瘟热疾病的预防与治疗

近年来,犬瘟热病毒在中国迅速蔓延,给家畜和野生动物带来了巨大威胁。该病毒具有极高的危害性,不仅影响动物的健康,还可能导致严重的生态问题。为了有效控制病毒的传播,必须加强相关研究工作,深入了解犬瘟热病毒的病原特性、传播途径、病理变化以及临床表现等方面。同时,还需要不断探索有效的诊断方法和免疫预后措施,为动物健康提供有力保障。只有科学、全面地应对犬瘟热病毒,才能切实保护动物的生命安全和生态平衡。

犬瘟热流行病学及临床血相变化研究

犬瘟热发病后期,鼻液、泪液、唾液、尿液和粪便中病毒含量较少,此时使用胶体金检验法进行检验很难检测出犬瘟热病毒。针对以上问题,本试验对患有犬瘟热的病犬进行了血常规的检测,并对所获得的血常规数据进行方差分析,进一步判断犬瘟热的发生是否会造成血相的显著变化以及是否能够根据血相的改变对这种高发传染病进行临床的诊断。本研究通过对犬瘟热病犬的血相变化、流行病学进行研究,以期为犬瘟热的诊断提供理论依据,同时给疾病后期诊断提供方法支持。

中兽医治疗犬瘟热相关文献统计分析

通过搜集、整理、归纳、分析现代文献,了解中兽医治疗犬瘟热的现状,总结中兽医治疗犬瘟热时选用中药、药物归经、药物四气、药物五味、药物功效及毒性的选择规律,为以后中兽医治疗犬瘟热提供文献与理论依据。采用计算机在中国知网数据库和万方数据知识服务平台,检索1983—2023年以“中药犬瘟”“中医药犬瘟”“中医药治疗犬瘟”“中药治疗犬瘟”“中兽药治疗犬瘟”为关键词的文献。经初步的综合筛选,选出所需文献114篇。除去不符要求的文献,共检出相关文献75篇,处方250个。综上所述,通过文献分析,筛选出常用药方、中药出现频次,并对药物的归经、四气、五味、功效及毒性进行分析,为今后中兽医治疗犬瘟热提供参考与借鉴。

犬瘟热的中医治疗

犬瘟热是由病毒引起的以发热、败血症和神经症状为主的犬传染性疾病,发病急、发展快、季节性明显。病犬一般以急性鼻卡他以及支气管炎、卡他性肺炎、严重的胃肠炎和神经症状为主要特征,主要发生于12月龄以下的幼犬。发病初期西医治疗效果尚可,但易迁延反复。利用中医温病学理论,以卫气营血和三焦辩证方法,结合脉证舌色确定病机、病位和病势发展程度,使用与症状特征相符的方剂来指导临床实践更有针对性。

犬瘟热的综合防治

犬瘟热是一种严重威胁犬类健康的传染病,致死率高达80%以上,对养犬业发展造成了严重危害。同时犬瘟热传染性极强,虽然非人畜共患病,但该病可传播给多种陆生和水生食肉动物,主要宿主为犬科和鼬科动物。因此本文通过预防、诊断、病例监测与隔离以及治疗几个方面对犬瘟热的防控进行了阐述。

犬瘟热病毒检测的方法

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的传染性疾病,发病后犬可能会出现一系列临床症状,表现为免疫抑制、胃肠炎、白细胞减少以及眼结膜炎等。现代医学研究发现,病犬在感染犬瘟热病毒后可能出现一系列病毒感染或者细菌感染症状,增加早期诊断难度,因此感染犬瘟热病毒后的死亡率较高。一、犬瘟热病毒的血清学诊断方法(一)犬瘟热病毒的特异性抗原检测该方法主要利用SPA协同凝集试验以及琼脂扩散试验等方法检测病犬血清中的犬瘟热病毒,其最终SPA协同凝集试验方法因为具有敏感性与特异性高等优点成为临床诊断的首选方法,并且与其他检测手段相比,该检测方法的操作便捷,整个检测过程不需要使用昂贵的机械设备,为犬瘟热病毒快速检测推广奠定良好基础。

犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究

以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗，分组进行了免疫小鼠试验，对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示：所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应，pVAXLPH＋pVAXLPF＋pVAXLPN3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答，免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0．332，而免疫前为0．158；抗CDV中和抗体效价为1：（4～16）；CD4^＋T／CD8^＋T比值为2．05±0．38，而对照组为1．99±0．56；免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0．384和0．356。基因疫苗免疫犬试验中，进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示，基因疫苗免疫3次后，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．296，抗CDV中和抗体效价为1：（8～32）。基因疫苗免疫2次，再使用弱毒疫苗加强免疫1次，血清中抗CDVELISA抗体效价为0．433，抗CDV中和抗体效价为1：（16～64）。

2019—2020年河南与河北部分地区犬瘟热流行病学调查及病毒分离鉴定

【目的】了解近年来犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus,CDV)在我国中部地区的流行及遗传变异情况。【方法】于2019—2020年期间从河南和河北两省部分地区随机采集犬、水貂、貉和狐狸样品459份,进行RT-PCR检测、毒株分离鉴定、病毒血凝素(Hemagglutinin,H)基因测序和遗传进化分析。【结果】检出CDV阳性样品87份,阳性率为18.96%。犬在秋季的CDV阳性率较高,为37.77%;水貂、貉和狐狸则多于夏季7月患病;不同年龄的动物均可发病,幼龄动物更为易感。从病犬样本中成功分离到1株CDV,经鉴定后命名为HB19-1株。基于H基因序列的遗传进化分析表明,HB19-1株属于亚洲1型毒株,与GenBank中的KJ994343毒株同源性最高,与疫苗株Onderstepoort(GenBank登录号:AF378705)的核苷酸和氨基酸同源性分别为91.3%和90.2%。【结论】在河南和河北部分地区犬及毛皮动物的CDV流行病学调查过程中成功分离到1株犬源毒株HB19-1,遗传进化分析显示该毒株为亚洲1型,且与疫苗株同源性较低。研究结果可为流调所涉地区的CDV预防、疫苗选择与使用提供依据。

应用Cephodex 微载体培养DF-1细胞增殖水貂源犬瘟热病毒的技术研究

为了建立水貂源犬瘟热病毒(CDV)的大规模悬浮培养技术,实现细胞高密度生长和病毒高效增殖,本研究应用Cephodex微载体悬浮培养鸡胚成纤维细胞系DF-1细胞,增殖弱毒株CDV3。整个过程采用摇瓶培养法,通过对病毒培养温度、病毒收获时间等关键技术条件进行优化,确立最佳培养条件。结果表明,DF-1细胞37℃培养至72 h,接种CDV3,35℃继续培养72 h收获病毒,病毒滴度每0.1 mL可达10^(5.0) TCID_(50)。CDV微载体悬浮培养技术的初步建立,为高效水貂犬瘟热疫苗的研发生产奠定了重要的基础。

犬瘟热的诊治与体会

2023年9月初以来,河北省昌黎县某犬舍发生以高热、咳嗽、流脓鼻、气喘、呼吸困难等呼吸道症状为主的传染性疾病。这次犬病中,共有6只犬发病,严重影响了犬舍正常的管理和繁育工作。疾病发生后,笔者通过临床诊断和病原学诊断,及时提出并采取有效措施,在兽医和饲养员的奋力工作下,目前犬病得到了有效控制,治愈5只,预后良好,死亡1只。

怀化地区犬瘟热病毒H、F基因遗传多样性及其遗传进化分析

【目的】探究怀化地区犬瘟热病毒的基因变异与遗传多样性情况,阐明其遗传进化关系。【方法】从怀化地区收集30株犬源犬瘟热病毒样本,用PCR法扩增其H、F基因序列。利用DNAStar软件分析H、F基因序列碱基组成;利用Clustal X、MegAlign软件进行变异位点和遗传多样性分析;运用Clustal X、PhyML 3.0软件,采用最大似然法(ML)对怀化地区犬瘟热病毒进行遗传进化分析,并用FigTree v 1.3.1软件构建遗传进化树。【结果】30株怀化地区犬瘟热病毒均为Asia-Ⅰ型,其H、F基因序列长度分别为1778和1850 bp,其AT含量分别为56.8%~57.9%和54.9%~56.1%,GC含量分别为42.2%~43.0%和44.1%~44.9%。H基因的种内差异为0~3.1%,种间差异为51.36%~60.15%;F基因的种内差异为0~2.4%,种间差异为39.60%~53.09%。基于H、F基因序列所构建的遗传进化树发现,来源于怀化地区的30株犬源犬瘟热病毒全部位于遗传进化树的同一分支上。【结论】来源于怀化地区犬瘟热病毒之间虽存在一定程度的基因变异和遗传多样性,但它们之间的亲缘关系较近。且其H、F基因序列的种内差异小、种间差异大,是研究犬瘟热病毒基因变异、遗传多样性和遗传进化的重要遗传标记。

犬瘟热病毒F蛋白融合信号肽单克隆抗体的制备及其表位的鉴定

为制备犬瘟热病毒(CDV)F蛋白融合信号肽(FSP)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达CDV HLJ1-13株重组FSP蛋白(rFSP)。将其免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌抗FSP蛋白MAb的杂交瘤细胞株G8D6E3E5,亚类鉴定结果显示该株MAb重链为Ig G2a型,轻链为κ型。构建一系列表达部分重叠的重组FSP片段,经western blot鉴定该株MAb识别的抗原区域为aa1~aa55,通过合成一系列重叠多肽,经ELISA进一步鉴定该株MAb识别的抗原表位为^(21)QQHSTRSTET^(30)。采用western blot检测该株MAb与r FSP的反应原性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测该株MAb与天然FSP的反应原性。Western blot结果显示,CDV Snyder Hill和HLJ1-13株r FSP蛋白样品在34 ku左右均出现特异性条带;IFA结果显示,感染CDV Snyder Hill株48 h后的vero细胞出现红色荧光。以上结果表明,该株MAb既能够与原核表达的CDV Snyder Hill和HLJ1-13株的r FSP蛋白反应,也能够与天然表达的CDV Snyder Hill株FSP蛋白反应。上述研究结果为CDV的检测以及FSP生物学功能的研究奠定了坚实基础。