超高效液相色谱-串联质谱法测定猪尿中12种禁用兽药残留

研究建立了超高效液相色谱-串联质谱测定猪尿中β_2-受体激动剂类、硝基呋喃代谢物类、硝基咪唑类、氯丙嗪、氯霉素等5类12种禁用兽药残留量同时检测的方法。试样中加入4.5 mL 0.2 mol/L乙酸铵溶液和40μL β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶,37℃酶解2 h后,再加入1.5 mL 1.0 mol/L盐酸溶液和100μL 0.1 mol/L邻硝基苯甲醛溶液,经37℃衍生16 h,用8 mL乙酸乙酯萃取,下层水相用混合型阳离子交换固相萃取柱萃取,合并2次萃取液,氮气吹干复溶,正负离子多反应监测模式下检测,同位素内标法定量。12种化合物在各自范围内线性关系良好,相关系数(r)>0.99;氯霉素的检出限为0.05μg/L,定量限为0.1μg/L,其他化合物的检出限为0.25μg/L,定量限为0.5μg/L;在定量限1倍、2倍、10倍添加水平下的平均回收率为83.6%~115.3%, RSD为2.20%~12.34%。方法灵敏度高,稳定性好,定量准确,适用于猪尿中12种禁用兽药残留量的同时测定。

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定猪尿液中30种不同种类“瘦肉精”药物残留

建立了超高效液相色谱-串联质谱快速简单地同时测定猪尿液中30种不同种类"瘦肉精"药物(赛庚啶、可乐定及28种β-受体激动剂类)残留的方法。对液相色谱分离条件、MS/MS检测参数及样品前处理方式进行了优化。试样经5000 r/min离心5 min后直接经MCX柱净化,分别用3 m L水和3 m L甲醇淋洗,5%氨化甲醇进行洗脱,N2吹干后以流动相进行复溶,UPLC-MS/MS进行测定。结果表明,30种药物可在5.0 min内有效分离;各药物在0.1~10μg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数均大于0.992;方法的检出限为0.1μg/L,定量限为0.3μg/L。在3个浓度水平下的平均回收率为67.6%~103.2%,日内、日间相对标准偏差分别为2.8%~16.8%和2.6%~15.8%。

液相色谱串联质谱法快速测定猪尿中10种镇静剂类药物残留量

建立了快速测定猪尿中10种镇静剂类药物(噻拉嗪、阿扎哌隆、氟哌啶、氟哌啶醇、艾司唑仑、硝西泮、地西泮、奥沙西泮、氯丙嗪和奋乃静)残留量的液相色谱串联质谱方法。猪尿样品离心后过C18固相萃取小柱,用甲醇-乙酸乙酯(1:4,V/V)混合溶剂洗脱,氮气吹干后用0.1%甲酸溶液溶解进行仪器分析。采用EclipseXDB-C18色谱柱分离,以乙腈和0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正电子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式检测,基质校准进行定量分析。10种镇静剂类药物在5～200μg/L范围内呈良好的线性,线性相关系数均大于0.99。方法检出限为0.11～0.52μg/L;定量限为0.20～0.91μg/L。添加浓度为1.0,2.0和10.0μg/L时,平均回收率在74.6%～115%之间,批内和批间相对标准偏差均小于15%。

液相色谱-串联质谱法同时测定猪尿中23种违禁药物

建立了液相色谱-电喷雾串联质谱同时测定猪尿液中β-受体激动剂类、激素类、硝基咪唑类和镇静剂类等23种违禁药物多残留分析方法。猪尿试样真空冷冻干燥后,采用Anpel MCX固相萃取小柱净化,经CNW Athena C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,5μm)分离,多反应监测模式下进行定性与定量分析。采用基质匹配标准溶液校正,23个药物响应值与其相应质量浓度在0.5～100μg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)大于0.99;以3倍和10倍信噪比计算得到的方法检出限和定量限分别为0.5～4.0μg/L和1.0～10μg/L;在4个添加水平定量限、10、20及50μg/L,猪尿中23种药物的平均回收率为50.2%～97.7%;日内相对标准偏差(RSD)小于10%,日间RSD小于18%。应用此方法检测200批次不同来源猪尿,其中2批次检测出克伦特罗,浓度为4.45和2.16μg/L。

小型化毛细管电泳-电化学检测法测定猪尿和猪饲料中的β-兴奋剂

采用小型化毛细管电泳-电化学检测技术测定了猪尿和猪饲料中的克伦特罗（clenbuterol,俗称瘦肉精）及其替代品莱克多巴胺（ractopamine）和沙丁胺醇（salbutamol）。考察了工作电极的氧化电位、运行缓冲液的酸度和浓度、分离电压和进样时间等因素对分离和检测的影响。以直径300μm的碳圆盘电极为工作电极,检测电极电位为＋0.95V（vsSCE）,在100mmol/L的硼酸盐（pH9.15）运行缓冲液中,上述3种组分在7min内实现了较好的分离。被测物浓度与峰电流在3个数量级范围内呈良好的线性关系,检测限为1.20×10^-7-2.06×10^-7g/mL。该方法简单可靠,已成功应用于猪尿和猪饲料样品中3种β-兴奋剂的测定,是一种有效的食品安全分析检测方法。

猪尿中26种性激素与13种β_2-激动剂的同时测定

采用GC-MS对猪尿中26种性激素和13种β2-激动剂进行检测。尿样经β-葡糖苷酸酶水解后,用正己烷、MCX小柱和NH2小柱提取和净化性激素,并由七氟丁酸酐进行衍生,β2-激动剂由同支MCX小柱提取和净化,并用BSTFA衍生。性激素和激动剂的检出限均为0.25-1.0μg/kg。性激素的3个添加水平的平均回收率为86%-108%,相对标准偏差为8.8%-20.6%;β2-激动剂的3个添加水平的平均回收率为86%-108%,相对标准偏差为9.6%-16.1%。方法实现了对极性差异大和酸碱性相反的两类禁用化合物的同时测定,且前处理简便高效。

放射免疫法快速检测猪尿样中的磺胺类药物残留

主要探讨应用CharmII放射免疫分析方法检测猪尿中磺胺类药物残留。确定控制点设定的方法,评价了免疫反应体系的灵敏度和特异性,验证了磺胺类最大残留限量1250μg/kg的检测稳定性,30min可出检测结果。

分散液相微萃取/液相色谱串联质谱法快速测定猪尿中的盐酸克伦特罗与氯霉素

采用分散液相微萃取净化技术,建立了快速测定猪尿中盐酸克伦特罗和氯霉素残留的高效液相色谱-串联质谱分析方法。取5 mL猪尿样品,分别加入5 ng D9-盐酸克伦特罗和D5-氯霉素内标,调节pH至10.0,加入10%NaCl,经250μL三氯甲烷和750μL异丙醇分散萃取后离心,转移下层沉淀,氮吹后以甲醇水溶液定容,采用电喷雾正负离子切换扫描模式同时分析盐酸克伦特罗和氯霉素,内标法定量。结果表明,盐酸克伦特罗的加标质量浓度为0.05～2μg/L,氯霉素的加标质量浓度为0.1～2μg/L时,两者的回收率为82%～97%,相对标准偏差(RSD)为6.8%～9.6%,盐酸克伦特罗和氯霉素的定量下限(S/N=10)分别为0.05、0.1μg/L。方法简单、灵敏,回收率和重复性良好,可用于猪尿中盐酸克伦特罗和氯霉素的测定。

乳胶免疫层析法定量检测猪尿液中的盐酸克伦特罗

目的:建立以彩色乳胶微球为标记物的免疫层析技术检测猪尿液中的盐酸克伦特罗(clenbuterol,CLB)。方法:彩色乳胶微球标记CLB抗体并真空冷冻干燥,盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白(CLB-bovine serum albumin,CLB-BSA)人工抗原与羊抗鼠抗体分别喷到硝酸纤维素膜上作检测线和质控线,猪尿液样本与冻干微球混匀后,插入试纸条,通过读条仪进行测定。结果:通过理化参数的优化,吐温-20为最优表面活性剂,选用300 nm乳胶微球,层析时间为9 min。方法的检出限为0.013 ng/m L,回收率范围在97.8%~106.0%之间,相对标准偏差不高于9.6%。结论:本研究成功建立了一种灵敏、准确的检测猪尿液中CLB的彩色乳胶免疫层析方法。

化学发光免疫分析法检测猪尿中莱克多巴胺残留

本试验运用化学发光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay,CLIA）检测猪尿中莱克多巴胺（Ractopamine,RAC）的残留。检测限为0.01 ng/mL,检测范围为0.036~32.2 ng/mL。添加浓度分别为0.1、1、10 ng/mL,平均回收率为73.2%,批内平均变异系数为9.7%,批间平均变异系数为11.3%。而本研究所建立的化学发光免疫检测方法（CLISA）可以达到检测RAC残留的要求。

高效液相色谱-质谱法同时测定猪尿中克伦特罗和莱克多巴胺

克伦特罗和莱克多巴胺同属于β_2-肾上腺素受体激动剂（简称β_2-兴奋剂）,能够改善动物养分的代谢途径,促进动物肌肉的合成,抑制脂肪合成的积累,因此常被不法分子添加于动物饲料或饮用水中,以提高胴体瘦肉率。由于其易在动物肝脏中积聚残留,并通过食物链进入人体。

分子印迹固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定猪尿中15种β_2-受体激动剂残留

建立了分子印迹固相萃取(MISPE)-超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)快速测定猪尿中15种β_2-受体激动剂的分析方法。分别优化了上样溶液的pH值、淋洗和洗脱溶液等MISPE净化条件及质谱条件。将猪尿样品离心,经MISPE柱上样,依次用水、乙腈、0.5%(v/v)乙酸乙腈溶液淋洗,10%(v/v)乙酸甲醇溶液洗脱,氮气吹干,0.1%(v/v)甲酸水-乙腈(9∶1,v/v)复溶;采用BEH C_(18)色谱柱分离,以乙腈-0.1%(v/v)甲酸水溶液为流动相,采用梯度洗脱,在电喷雾正离子多反应监测模式下外标法定量。考察了MISPE对15种β_2-受体激动剂的吸附特异性;猪尿中15种β_2-受体激动剂在0.1~20μg/L范围内线性关系良好(r^2≥0.992);检出限和定量限分别为0.03和0.1μg/L;15种β_2-受体激动剂的加标回收率为65.6%~115.0%,批内、批间相对标准偏差分别为0.57%~16.1%和1.11%~16.8%。该方法操作简单、快速、灵敏度高、特异性好。

猪尿冻干粉中盐酸克伦特罗标准物质的研制

研制一套4种浓度水平的猪尿冻干粉中盐酸克伦特罗标准物质,以健康安全的猪尿作为空白基体,利用添加的方法,经过均匀性和稳定性检验,由8家实验室采用液相色谱-串联质谱法对该套标准物质进行协同定值,并进行不确定度评估。结果表明该套标准物质均匀性良好,在4℃条件下保存稳定性在1年以上,标准物质中CLB的含量及不确定度分别为:0.65±0.15,1.28±0.44,3.78±0.46,11.5±1.8ng/mL(k=2)。该标准物质可应用于猪尿中盐酸克伦特罗检测过程的方法验证和检测结果质量控制等。

超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱检测和鉴定猪尿中氯丙那林的主要代谢产物

采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)检测和鉴定了猪尿中氯丙那林的主要代谢产物,并讨论了氯丙那林在猪体内的主要代谢途径。按10 mg/kg(b.w.)的剂量口服灌食氯丙那林,分别采集给药前及给药后的猪尿液样品。采用UPLC/Q-TOF MS对样品进行分析,并应用质量亏损过滤和离子色谱峰提取等数据处理技术,在给药后24 h内的猪尿中检测和鉴定了9种氯丙那林的代谢产物,其中,Ⅰ相代谢产物2种,Ⅱ相代谢产物7种。然后,根据氯丙那林原形和代谢产物的碎片离子特征,对代谢产物的结构进行鉴定。最后,根据所鉴定的代谢产物,推测氯丙那林在猪体内的代谢途径包括苯环羟基化、β-羟基和仲氨基的葡萄糖醛酸轭合、羟基化后的葡萄糖醛酸和硫酸轭合等。研究结果表明,羟基化氯丙那林及其轭合产物的相对含量大于60%,明显高于氯丙那林原形及其轭合产物,是尿液中的主要代谢产物。本研究将为确定氯丙那林在动物体内的残留标示物及加强对氯丙那林非法使用的监控提供科学依据。

LC-MS/MS测定猪尿中盐酸克伦特罗不确定度的评定

建立了液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定猪尿中盐酸克伦特罗残留量的不确定度评定数学模型,分析了影响样品测定结果的不确定度的主要来源,并计算出了各影响因素的不确定度分量.当猪尿中盐酸克伦特罗残留量的测定结果为3.6ng/mL时,其扩展不确定度为0.4ng/mL.

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定猪尿中金刚烷胺与金刚乙胺的残留量

采用超高效液相色谱-电喷雾串联质谱（UPLC-ESI-MS/MS）在多反应监测（MRM）模式下建立了猪尿中金刚烷胺和金刚乙胺残留量的检测方法。尿样经乙腈超声提取,Oasis MCX固相萃取柱净化后,使用Eclipse Plus C18柱（RRHD 1.8μm,2.1 mm×100 mm）进行分离,以甲醇-0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子（ESI＋）模式电离,多反应监测（MRM）模式进行定性定量测定。色谱保留时间和质谱碎片的离子丰度比定性,内标法定量。结果表明,2种待测物在0.2～20.0μg/L范围内线性关系良好,相关系数（r2）均大于0.999,该方法测得在猪尿样液中,金刚烷胺和金刚乙胺的检出限（LOD）均为0.05μg/L,定量下限（LOQ）均为0.2μg/L;平均加标回收率为89.7%～102.8%,日内相对标准偏差为2.8%～4.2%。

LC-MS/MS测定猪尿中的黄曲霉毒素M_1

建立LC-MS/MS检测猪尿中黄曲霉毒素M1的含量。猪尿样用超纯水稀释定容,充分漩涡振荡后经免疫亲和层析柱净化,甲醇洗脱,微孔滤膜过滤,经液相色谱分离,电喷雾离子源离子化,多反应离子监测(MRM)方式检测。外标法定量。采用0.1%甲酸:乙腈+甲醇溶液(1+1)为流动相,梯度洗脱。0.3mL/min的流速。在0.01μg/kg～0.50μg/kg范围内具有良好的线性关系,最低检测限为0.01μg/kg,回收率在70%～95%之间。此法操作简便、快速、灵敏、准确、样品处理简便易行,适用于测定猪尿中的黄曲霉毒素M1。

放射免疫法快速检测猪尿样中的四环素类药物残留

实验主要探讨应用Charm Ⅱ放射免疫分析方法检测猪尿中四环素类药物残留。确定控制点设定的方法,评价了免疫反应体系的灵敏度和特异性,验证了四环素类最大残留限量3000μg/kg的检测稳定性,30min可出检测结果。

液相色谱-串联质谱法测定猪尿液中地西泮及其7种代谢物残留

为建立快速测定猪尿中地西泮及其7种代谢物残留的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)确证方法,本研究优化了样品净化的阳离子交换固相萃取柱(PCX柱)及其淋洗洗脱条件。猪尿液酸化后直接经PCX柱净化,依次用水、60%甲醇水溶液淋洗,最后用5%氨化甲醇洗脱;选用BEH C18色谱柱分离,UPLCMS/MS进行检测,以基质匹配标准曲线定量。结果显示:8种药物在0.3~20.0μg/L范围内具有良好的线性关系(R^(2)≥0.995),检出限和定量限分别为0.1μg/L和0.3μg/L;各药物在3个添加浓度下回收率为73.6%~95.3%,日内、日间相对标准偏差分别为2.9%~18.6%(n=6)和2.2%~12.6%(n=3)。结果表明,本方法操作简单、快速,灵敏度高、特异性好。

用酶联免疫吸附试验筛检出口猪尿样中β促效剂

采用英国进口的 β促效剂 ELISA试剂盒对 42 4个 (次 )出口猪场进行猪尿样 β促效剂检查 ,结果查出阳性场 1 7个 (次 ) ,检测尿样 1 30 4份 ,其中含量在 5ng/ml以上的阳性尿样 2 9份 ,阳性率为 2 .2 %。在对阳性场采取停止出口和经常性监测等综合措施后 ,有效地遏制了出口猪场中非法使用β促效剂类药物的现象。该试剂盒使用方便 ,出结果快 ,重复性好 ,检测谱广。调查和检测发现 ,凡尿中含量高于 5ng/ml的都与曾服用β促效剂有关。