食源性甲型肝炎病毒快速检测技术研究进展

病毒在食源性疾病的爆发中起着至关重要的作用,其中,甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)感染后能够致人衰弱,并引发急性肝衰竭。由于其传染迅速,影响范围广,HAV污染已经给消费者带来了严重的健康风险,且在全球范围内造成了大规模的食源性疫情和经济损失。因此,早期快速准确的检测HAV对于食品安全和疫情暴发的溯源至关重要,以便及时确定并召回受污染的食品,防止感染的进一步发生。传统的HAV检测方法由于检出率不高以及病毒在细胞内的培养周期长等问题,往往耗时费力,无法快速有效地对其进行检测。本文对目前报道较多的HAV快速检测技术进行了阐述和梳理,对各项技术的检出限、检测时间以及优缺点进行了比较,并对HAV快速检测技术研究进行了展望,为后续HAV的快速检测研究提供依据,也有助于进一步探讨与开发HAV快速检测的新技术,以有效防止HAV的传播与危害。

2020—2023年山东地区13株3型鸭甲型肝炎病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析

为研究2020—2023年山东地区3型鸭甲型肝炎病毒的流行变异情况,试验采集了山东地区13份疑似鸭肝炎病毒感染的病料,通过病毒分离、RT-PCR扩增鉴定,并进行VP1基因测序及遗传变异分析。结果显示:共分离到13株3型鸭甲型肝炎病毒,均属于GⅠa分支,且分属于GⅠa分支不同小分支,其中2020年分离株(20148、20149)与2021年商品肉鸭分离株(SP21042)核苷酸相似性在98.8%~100%;2023年商品鸭分离株(SP23012、SP23014、SP-2、SP-3、SP23009)核苷酸相似性在99.7%~100%;2021年种鸭分离株(21083)与2022年、2023年种鸭分离株(22443、22468、BL23028)、2023年商品鸭分离株(SP23010)核苷酸相似性在98.8%~99.4%,小分支内相似性均高于98.8%,不同小分支间相似性在96.9%~98.2%;2023年部分3型DHAV分离株VP1基因出现了个别氨基酸位点的突变。研究表明,山东地区分离的13株GⅠa分支鸭甲型肝炎病毒VP1基因出现了变异,需要加以关注。

甲型肝炎并发自发性腹膜炎的病原菌及耐药性特征分析

目的分析甲型肝炎并发自发性腹膜炎的病原菌及耐药性特征。方法回顾性分析2022年2月至2024年2月于医院就诊的80例甲型肝炎并发自发性腹膜炎患者,采集10 ml腹水作为送检标本,进行细菌培养以及药敏试验,分析病原菌特征及耐药性。结果80例患者共计培养病原菌92株,其中革兰阳性菌39株(42.39%),其中占比最多的是溶血葡萄球菌14株(15.22%),其次为表皮葡萄球菌11株(11.96%);革兰阴性菌50株(54.35%),其中占比最多的是肺炎克雷伯菌17株(18.48%),大肠埃希菌13株(14.13%);真菌3株(3.26%)。溶血葡萄球菌对青霉素、克林霉素的耐药性较强,对万古霉素、替考拉宁、呋喃妥因的耐药性低;表皮葡萄球菌对青霉素的耐药性较强,对万古霉素、莫西沙星、替考拉宁、呋喃妥因的耐药性低。肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药性较强,对克林霉素、亚胺培南、美罗培南的耐药性低;大肠埃希菌对氨苄西林的耐药性较强,对苯唑西林、亚胺培南、美罗培南的耐药性低。结论甲型肝炎并发自发性腹膜炎患者病原菌以革兰阴性菌为主,对氨苄西林的耐药性较强。临床应根据药敏试验合理选用抗生素,提高抗菌治疗效率。

甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法的研究及应用

目的建立甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法。方法用双抗体夹心ELISA法检测试剂对甲型肝炎灭活疫苗及效力试验参比进行检测,以检测OD值为反应指标,用生物检定双平行线法的基本原理进行统计分析,计算待检疫苗对应于效力参比品的相对效力(R值)。结果样品HAAg含量与检测OD值之间具有高度的相关性,R2≥0.97,适用于建立双平行线检定方法;通过对3批样品3人次检测结果分析,验证了所建立方法的可靠性,回归、偏离平行、二次曲线、反二次曲线4个指标全部通过了验证;用所建立的体外相对效力试验检测法对32批次甲肝灭活疫苗进行检测,结果与小鼠体内效力检测结果具有良好一致性,均能反映疫苗相对效力,两种方法检测相对效力(R值)之间无明显差别(t=1.0354,P=0.3045)。结论所建立的甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力试验是一种灵敏、特异、方便、快捷的效力测定方法,可应用于甲型肝炎灭活疫苗效力检测。

甲型肝炎减毒活疫苗(LA-1株)大规模免疫长期效果观察

目的:观察甲型肝炎减毒活疫苗(LA-1株)大规模接种的长期保护效果和不同免疫程序的免疫持久性。方法:212985例1.5-10岁儿童随机分成疫苗组和对照组。疫苗组每人接种1针甲肝疫苗,接种1mo后观察两组甲肝发病隋况。6-9岁的甲肝抗体(抗HAV)阴性儿童156例按年龄和性别均衡分为A、B、C组,A组接种1剂疫苗,B组按0、6 mo、C组按0、12 mo程序分别接种2剂疫苗,然后随访各组抗HAV变化。结果:甲型肝炎3a累积发病率在对照组为63.25/10万(71/112250),疫苗组为1.99/10万(2/100735),保护率96.85％(95％CI下限为92.44％)。A组免疫后6、12、24、36 mo抗HAV阳性率分别为91％、89％、89％、80％,抗体几何平均滴度(GMT)分别为106、105、106、99 mIU/ml;B组7、12、24、36 mo的阳性率分别为100％、98％、95％、98％,GMT分别为1204、773、489、459 mIU/ml,C组12、13、24、36 mo的阳性率分别为82％、100％、100％、97％,GMT分别为92、3463、596、506 mIU/ml。B、C组在第36个月的GMT分别是A组的4.6倍和5.1倍,阳性率高于同期A组(P=0.008)。结论:甲肝减毒活疫苗(LA-1株)1针免疫有高而持久的保护效果和免疫原性;2针免疫可显著提高其免疫持久性;0、6程序与0、12程序的长期免疫效果相同。

2种口服甲型肝炎疫苗免疫应答效果评价

目的研究甲型肝炎减毒活疫苗和灭活疫苗口服免疫效果。方法将甲型肝炎减毒活疫苗和灭活疫苗口服免疫Balb/c小鼠,并检测免疫后抗甲型肝炎总抗体I、gA和sIgA,外周血淋巴细胞亚群,脾淋巴细胞增殖反应和细胞因子干扰素-γ(IFN-γ),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)水平。结果2种疫苗口服免疫后均能诱导体液、细胞和局部免疫应答;但含铝佐剂的甲型肝炎灭活疫苗口服免疫,诱导抗体水平较低,但可诱导较好的细胞免疫应答。结论口服免疫可以作为甲型肝炎疫苗有效的免疫途径之一。

甲型肝炎灭活疫苗的研究

目的研制甲肝灭活疫苗。方法甲型肝炎病毒TZ84株、吕8株接种人胚肺二倍体细胞2BS、KMB17株,经培养繁殖、收获、提纯、甲醛溶液灭活和氢氧化铝吸附制成灭活疫苗。结果纯化的甲肝病毒经HPLC、SDS-PAGE等方法检测表明具有良好的纯度。灭活工艺经验证盲传三代证明灭活可靠。甲肝灭活疫苗在豚鼠、小白鼠、ICR小鼠、恒河猴和普通狨猴上具有良好的安全性和免疫原性;经539例临床研究表明,该疫苗儿童组和成人组副反应均轻微,全程免疫后接种者100％抗体阳转,儿童组0,6月注射500u全程免疫后抗体水平达4535mIU/ml,成人组注射500u 0,6月全程免疫后抗体水平为1657mIU/ml,均可获得较长期的保护效果;该疫苗2～8℃保存21个月、37℃保存32天,质量稳定。结论甲肝灭活疫苗安全、有效、稳定。

类风湿因子与甲型肝炎病毒抗体IgM假阳性关系的实验研究

目的 探讨类风湿因子 (RF)浓度与甲型肝炎病毒抗体 (抗HAV -IgM)假阳性之间的关系 ,为排除该抗体的假阳性提供客观依据。方法 RF采用透射比浊法测定 ,抗HAV -IgM采用酶联免疫法检测。结果 实验组RF明显增高 ,且与抗HAV -IgM检测的光密度OD值之间存在直线回归关系。 结论 抗HAV -IgM阳性的确定应依据临床症状、病史、年龄及RF水平来综合判定以降低假阳性。

甲型肝炎灭活疫苗与减毒活疫苗的免疫效果分析

目的观察甲型肝炎灭活疫苗(灭活疫苗)和甲型肝炎减毒活疫苗(减毒活疫苗)基础免疫、加强免疫的效果。方法2004年对湛江市赤坎区寸金管区156名2～10岁儿童进行调查,检测抗一HAV水平。结果减毒活疫苗基础免疫后1个月抗一HAV阳性率为76.47%,灭活疫苗基础免疫后1个月抗-HAV阴性的儿童,加强接种减毒活疫苗1个月后抗-HAV全部阳性,几何平均浓度为508mlu/ml;加强接种灭活疫苗1个月后抗-HAV全部阳性,抗体几何平均浓度为3013mlu/ml。结论用减毒活疫苗进行基础免疫者需要加强接种,用灭活疫苗加强接种比用减毒活疫苗产生的甲肝抗体更高。

灭活甲型肝炎疫苗的进展

直至９０年代被批准在人群中使用的甲肝灭活疫苗是提供预防甲肝的新制品，通过人群使用证明其免疫原性高，身体反应性低，人群保护效力明显；顷已批量生产，批准使用的国家日益增多；可用以代替使用免疫球蛋白所提供的被动预防甲肝的免疫效果，但此种疫苗生产工艺操作复杂，价格昂贵，当前多用至由甲肝非流行区要到流行区的易感旅行者，当然亦可用于流行区的易感儿童。

甲型肝炎灭活疫苗与减毒活疫苗的免疫效果观察

[目的]观察甲型肝炎灭活疫苗(灭活疫苗)和甲型肝炎减毒活疫苗(减毒活疫苗)基础免疫、加强免疫的效果.[方法]2004年对湛江市赤坎区寸金管区156名2～10岁儿童进行调查,检测抗-HAV水平.[结果]减毒活疫苗基础免疫后1个月抗-HAV阳性率为76.47%,灭活疫苗基础免疫后1个月抗-HAV阳性率为100%.减毒活疫苗基础免疫后抗-HAV阴性的儿童,加强接种减毒活疫苗1月后抗-HAV全部阳性,几何平均浓度为508 mIU/ml;加强接种灭活疫苗1月后抗-HAV全部阳性,抗体几何平均浓度为3 013 mIU/ml.[结论]用减毒活疫苗进行基础免疫者需要加强接种,用灭活疫苗加强接种比用减毒活疫苗产生的甲肝抗体更高.

春节:警惕甲型肝炎传播

甲型肝炎在我国流行非常广泛,平均每100人就有70多人感染过甲型肝炎,一些大城市,如北京、上海、天津、杭州由于经济生活相对比较发达,相对中小城市的感染率稍低,但每百人也有大约40～60人感染过甲型肝炎,因此,了解、预防防甲型肝炎、普及甲型肝炎知识十分必要。

甲型肝炎：甲型肝炎灭活疫苗与减毒活疫苗的免疫效果观察

目的：观察甲型肝炎灭活疫苗（灭活疫苗）和甲型肝炎减毒活疫苗（减毒活疫苗）基础免疫、加强免疫的效果。方法：2004年对湛江市赤坎区寸金管区156名2．10岁儿童进行调查．检测抗-HAV水平。结果：减毒活疫苗基础免疫后1个月抗-HAV阳性率为76．47％，灭活疫苗基础免疫后1个月抗-HAV阳性率为100％。

人胚肺细胞制备甲型肝炎抗原的研究

为生产甲型肝炎抗原,作者提出了一种新方法。采用人胚肺细胞代替2BS,接种HAV后进行离心培养和旋转培养。结果表明本法生产HAAg优于常规法:1.此种细胞价廉易得,对HAV敏感;2.HAV的增殖周期由2～3周缩短至7～10d;3.HAAg的产量增加近1倍。

中国五省市甲型肝炎病毒基因分型的研究

为了解甲型肝炎 (甲肝 )病毒 (HAV)在中国几个城市的基因型分布 ,选择浙江杭州、江苏启东、安徽铜陵、云南昆明和上海市等的甲肝病人粪便标本或血清标本 ,以逆转录 -套式聚合酶链反应 (RT nPCR)扩增合成HAVVP1/2A交接区基因区 ,并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果表明 ,从这些城市甲肝病人分离到的 17株HAV株均属基因Ⅰ型 ,为IA和IB亚型 ;所有HAV株间核苷酸差异均小于 15 % ,但约 5 0 %HAV株株间核苷酸差异大于 7 5 % ,说明中国流行或散发的HAV株可能有基因IA、IB亚型同时存在。该项研究结果将为HAV的分子流行病学追踪调查提供方法和依据。

甲型肝炎灭活疫苗的研制

甲型肝炎病毒8347毒株在人二倍体细胞（2BS株）中增殖4周，收获的病毒液经冻融、超声、过滤．德液用1：4000福尔马林、37℃灭活6天以上制成灭活疫苗，病毒灭括前的滴度（TCID50／ml）至少可达6．5左右．疫苗免疫豚鼠和小鼠三针后，75％～100％的动物甲肝抗体阳转。经超声处理后疫苗免疫原住可大幅度提高，三针后动物血清中的中和抗体效价可达1：20以上．

新疆伊犁2005年甲型肝炎病毒流行株基因分型研究

为了解2005年新疆伊犁甲型肝炎病毒（甲肝病毒）流行株分子流行病学特征，收集了部分甲肝病人血清标本，用国际上通用的甲肝病毒结构区基因VP1—2A分型引物，经核酸提取，做RT-PCR，序列测定，对甲肝病毒基因进行分型研究，并对甲肝病毒在甲型肝炎（甲肝）病人血清中存在的时间进行了探讨。结果显示，甲肝病毒核苷酸序列变异在0～3．2％之间，分为不同的基因簇，但都属于1A亚型（同一基因亚型间核苷酸序列变异小于7．5％）;氨基酸序列几乎相同。甲肝发病8周后的病人血清中仍能检测到甲肝病毒。结果说明该流行区有多株甲肝病毒存在，其传染源可能有多个传播途径，当人群免疫水平较低时，可引起甲肝流行。甲肝病毒在病人血液中可存在较长时间。这些工作为今后进一步开展甲肝病毒溯源研究及有效控制甲肝病毒流行提供了理论和技术支撑。

甲型肝炎灭活疫苗免疫原性的猴体实验

甲型肝炎病毒TZ84毒株经 2BS二倍体细胞培养制备成甲型肝炎灭活疫苗。采用普通狨猴和恒河猴进行疫苗的保护性研究。结果均有较好的抗体反应 ,而且对甲型肝炎病毒鲁兴株 (强毒株 )的攻击亦均有保护作用。表明该疫苗有较好的免疫效果。