SPE-GC-FPD法测定三七中甲基对硫磷残留量

目的:为更好地控制三七质量,拟建立三七中甲基对硫磷的GC-FPD检测方法。方法:采用超声提取固相萃取法、GC-FPD检测。结果:方法回收率在62.52%~118.49%,精密度RSD为3.597%,标准偏差符合检测要求,满足农药残留检测的要求。

基于rGO-AuNPS修饰丝网印刷电极的电化学生物传感器快速检测甲基对硫磷

目的:实现对甲基对硫磷的快速检测。方法:基于金纳米颗粒和还原氧化石墨烯制备了用于对甲基对硫磷进行定量检测的乙酰胆碱酯酶传感器。采用层层组装方法,将还原氧化石墨烯、金纳米颗粒、乙酰胆碱酯酶依次修饰在丝网印刷电极表面。对传感器的催化活性、阻抗特性、传感器的抑制率与甲基对硫磷浓度的关系、实际样品检测进行了评估。结果:制备的乙酰胆碱酯酶生物传感器对乙酰硫代胆碱氯化物表现出优异的亲和力,米氏常数为2.76 mmol/L。在最佳条件下,可以有效检测甲基对硫磷,线性范围为5~500 ng/mL,检出限为0.692 ng/mL。结论:该方法操作简单、成本低、稳定性好,适用于有机磷类农药的快速检测。

相对湿度条件下二氧化锰对甲基对硫磷的转化行为

以不同晶型的二氧化锰(MnO_(2))为试验材料,探讨了相对湿度(relativehumidity,RH<5%~100%)条件下MnO_(2)对典型有机磷农药甲基对硫磷的转化行为。结果显示:甲基对硫磷的一级降解速率与RH呈明显负相关性,与MnO_(2)含量呈明显正相关性;不同晶型MnO_(2)对反应体系中甲基对硫磷的降解行为差异较大,其一级动力学降解反应速率常数(kobs)顺序为α-MnO_(2)>γ-Mn O_(2)>β-Mn O_(2);负载离子(PO_(4)^(3-)、Ca^(2+)和Mn^(2+))都能明显抑制甲基对硫磷的降解反应速率,其中Mn^(2+)的抑制效果最为显著;RH条件下Mn O_(2)对甲基对硫磷的转化路径主要包括水解和氧化,水解产物为对硝基苯酚,氧化产物为甲基对氧磷。本研究结果证实了实际土壤层RH显著影响锰氧化物对有机磷农药的转化行为,对理解天然环境中该类污染物的归趋行为具有参考价值。

气相色谱法测定蔬菜中甲基对硫磷残留量的不确定度评定

依据《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012)和《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》(NY/T 761—2008),建立评定蔬菜中甲基对硫磷残留量测定不确定度的数学模型,分析其测定不确定度的主要来源有样品质量称量、体积、工作液配制、添加回收、精密度,计算其合成标准不确定度与扩展不确定度。结果表明,标准储备液及标准工作液配制引入的不确定度是不确定度的关键来源,甲基对硫磷合成标准不确定度Uc(W)为0.00182 mg/kg,取置信水平为95%,甲基对硫磷扩展不确定度U(W)为0.00364 mg/kg,蔬菜中甲基对硫磷残留量测定的不确定度可表示为(X±U)=(0.10±0.00364)mg/kg。

全自动在线固相萃取-液相色谱串联质谱法快速测定地表水中痕量甲基对硫磷

建立了全自动化在线固相萃取-液相色谱串联质谱法快速、准确测定地表水中痕量甲基对硫磷的方法.水样经在线富集、色谱柱分离后,梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子多反应监测模式,内标法定量.通过对离子源参数、水相洗脱溶剂、有机相洗脱溶剂、洗脱溶剂初始比例进行优化试验,甲基对硫磷的灵敏度显著提升,峰型更好.该方法在质量浓度5—1000 ng·L^(-1)范围内线性关系良好(相关系数R^(2)≥0.998).添加回收试验结果表明,方法检出限为4 ng·L^(-1),方法定量限为16 ng·L^(-1),在40、100、500 ng·L^(-1)的3个添加水平下,平均回收率为90.1%—97.8%,相对标准偏差为1.7%—3.5%。应用于实际地表水样品测定,结果均未检出.该方法便捷、高效,可实现高通量测定地表水中痕量甲基对硫磷.

杀螟硫磷、对硫磷和甲基对硫磷三合一单克隆抗体的制备

为保障农产品安全,建立杀螟硫磷、对硫磷和甲基对硫磷的快速、简单、准确的免疫学检测方法,制备出能够特异性识别杀螟硫磷、对硫磷和甲基对硫磷的三合一单克隆抗体。本实验在保留杀螟硫磷化学结构的基础上,将其一个甲基改造成羧基,制备得到半抗原。将半抗原分别与载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联获得完全抗原,然后进行动物免疫,经细胞融合,制备得到特异性好、灵敏度高的三合一单克隆抗体,利用间接竞争酶联免疫吸附法对抗体效价以及特异性进行测定。结果表明成功合成了免疫原和包被原,抗原包被浓度为0.5μg/mL,血清稀释倍数为1:2000。该抗体对杀螟硫磷的半数抑制(IC50)值为3.1 ng/mL,对对硫磷的IC50为4.5 ng/mL,对甲基对硫磷的IC50为3.4 ng/mL。交叉反应结果显示抗体与水胺硫磷、氧乐果、毒死蜱、马拉硫磷、苯硫磷、辛硫磷的交叉反应率均<1%。表明成功制备了特异性强、灵敏度高的单克隆抗体。本研究制备的单克隆抗体为农产品中杀螟硫磷、对硫磷和甲基对硫磷快速检测试剂盒的开发奠定了基础。

甲基对硫磷降解菌L1的分离、鉴定及降解酶基因的克隆

从农药厂的污水处理池中分离到一株能高效降解甲基对硫磷的菌株L1,L1能以甲基对硫磷为惟一碳源、氮源和能源生长;经生理生化实验和16s rRNA同源性分析,初步将L1归为节杆菌属(Arthrobacter sp.)。紫外分光光度法对L1的降解性能研究表明,L1能在12h内将50mg/L的甲基对硫磷完全降解;用PCR方法克隆其甲基对硫磷降解酶基因mpd,这是迄今首次从革兰氏阳性菌中克隆到的mpd基因。

甲基对硫磷降解菌假单胞菌WBC-3的筛选及其降解性能的研究

从农药污染土样中分离出的一株细菌具有彻底降解甲基对硫磷的能力。该菌经生理生化特性分析和 1 6SrDNA序列同源性分析 ,鉴定为假单胞菌属 ,命名为Pseudomonassp .WBC 3。该菌在pH7～ 8、温度 2 3℃～ 3 0℃范围内均生长良好 ,对甲基对硫磷的耐受浓度在单纯无机盐培养基中可达到 80 0mg L ,在含有 0 1 %葡萄糖的培养基中可达到 2 0 0 0mg L。该菌能够以甲基对硫磷作为唯一碳源、氮源 ,将其彻底降解作为生长基质 ,对于 3 0 0mg L甲基对硫磷的降解速度达 1 5mg L·h ,于 2 2h后达到其稳定生长期。该菌对于多种有机磷农药及部分芳烃类化合物具有生化代谢能力。从该菌的细胞周质组分中纯化出的有机磷水解酶在SDS PAGE胶上显示为分子量约为 3 3 5× 1 0 3 的条带。

茶叶中水胺硫磷、亚胺硫磷、甲基对硫磷和伏杀硫磷农药残留的高效液相色谱法测定

建立了茶叶中4种有机磷农药——水胺硫磷、亚胺硫磷、甲基对硫磷和伏杀硫磷残留的高效液相色谱测定方法．在45℃加温条件下用乙酸乙酯-正己烷（1：1，by vol．）混合溶剂提取待测目标物、活性炭层析柱净化，用10．0mL乙酸乙酯-正己烷（6：1，by vol．）淋洗待测组分，以Eclipse XDB-Cs色谱柱、乙腈-水混合液梯度洗脱分离、二极管阵列检测器测定．结果表明，上述4种农药在6．5min内能很好地分离；样品中添加的待测组分能定量回收，回收率89．0％～108．0％，相对标准偏差为1．89％～5．96％（1．0μg／mL，n=5），检出限分别为：水胺硫磷9．82μg／kg、亚胺硫磷7．88pg／kg、甲基对硫磷2．19pg／kg、伏杀硫磷0．72pg／kg（dm）．

邻单胞菌DLL-1对土壤中甲基对硫磷的降解

应用甲基对硫磷降解菌DLL-1对土壤环境中甲基对硫磷农药的降解进行了实验室研究和小区试验.结果表明,DLL-1对甲基对硫磷具有高效降解作用,不论是菌原液、菌体细胞还是离心去菌体的培养液都表现出很好的降解作用.DLL-1在土壤中有一定的移动性.当从土壤表面施加菌剂时,对0~6cm深的土层中的甲基对硫磷都有很好的降解效果.对土壤中一定含量的农药来说,降解菌的用量并非越多越好,存在一个最适菌量.

流动注射化学发光测定甲基对硫磷

首次研究了农药甲基对硫磷在碱性介质中（ｐＨ：１１．５～１２．０）与鲁米诺和过氧化氢产生化学发光的行为及反应机理，并发现水溶性高分子聚乙二醇对该反应具有显著的增效作用，据此建立了流动注射化学发光测定甲基对硫磷的新方法。甲基对硫磷的浓度在 ５×１０－８～１．０ ×１０－５ｇ／ｍＬ范围内与化学发光强度呈良好的线性关系；检出限为 ２×１０－８ｇ／ｍＬ；对 １．０×１０－６ｇ／ｍＬ甲基对硫磷进行了１１次平行测定，相对标准偏差小于４％；标准加入回收率为８３％～９４％。该法应用于谷物中农药残余量的测定，结果满意。

甲基对硫磷人工抗原的合成与鉴定

根据甲基对硫磷的结构特征 ,分别从甲基对硫磷的硝基一端或磷酸酯基甲氧基一端引入一定长度的间隔臂和活性基团 ,设计并合成了 4种结构的半抗原 ;针对各种半抗原所带活性基团的性质 ,通过多种方法制备了与不同的载体蛋白偶联的人工抗原。进行动物免疫后 。

凤眼莲植物修复水溶液中甲基对硫磷的效果与机理研究

报道了凤眼莲 (EichhorniacrassipesSolms)净化水溶液中甲基对硫磷的作用及修复甲基对硫磷污染水体的主要机理。研究结果表明 ,与空白抑菌水溶液相比 ,10— 11g凤眼莲抑菌可将 2 5 0mL的 10mg L的甲基对硫磷降解速度提高 76 3 5 2 %。处理 10d后甲基对硫磷的消除率 ,凤眼莲培养液为 99 9% ,对照水溶液为 4 0 1%。其修复机理主要是凤眼莲的直接吸收和微生物降解。在不抑菌条件下 ,凤眼莲对水溶液中甲基对硫磷净化的贡献率达 6 7 2 8% ,微生物降解约占 2 3 97%

苍白杆菌B2对甲基对硫磷降解途径研究

采用薄层层析、紫外吸收光谱以及气谱-质谱联用的方法分析了苍白杆菌Ochrobacterumsp.B2降解甲基对硫磷的中间产物。结果表明,B2水解甲基对硫磷产生对硝基苯酚(PNP),PNP通过产生4-硝基邻苯二酚(4-nitrocatechol,4-NC)和1,2,4-苯三酚(1,2,4-benzenetriol)的途径进一步代谢。苍白杆菌B2可以以PNP和4-NC为碳源生长,在菌的初始OD600值为0.02时,B2可在48h内将50mg/L的PNP完全降解,在60h内,将30mg/L的4-NC完全降解。

甲基对硫磷降解菌PF32的分离鉴定及其降解特性研究

从某农药厂采集污泥,采用驯化富集的方式分离得到1株能以甲基对硫磷为唯一碳源生长的菌株,命名为PF32。根据表型特征、生理生化特性和16SrRNA基因序列相似性分析,鉴定该菌株为寡养单胞菌Stenotrophomonas sp.。PF32能在24h内降解浓度为100mg/L的甲基对硫磷,降解率99%以上。PF32降解甲基对硫磷的最适pH值为7.0,最适温度为30℃,该菌降解甲基对硫磷的速率和起始接种量呈正相关。降解谱试验结果表明,PF32对辛硫磷、倍硫磷、杀螟硫磷、三唑磷、毒死蜱也有较好的降解效果。

甲基对硫磷水解酶基因的克隆与融合表达

利用鸟枪法从甲基对硫磷降解菌DLL 1Peudomonasputida)中克隆了甲基对硫磷水解酶基因 (mpd)片段2 5kb ,并进行了测序。通过软件分析开放阅读框和启动子序列 ,表明该序列中最可能为甲基对硫磷水解酶结构基因的阅读框为 76 9～ 1 794区域。软件分析还表明该水解酶前端 4 5个氨基酸为典型的信号肽结构。通过PCR扩增了mpd结构基因 ,亚克隆到表达载体pET 32a中 ,构建了完整的融合表达载体pET MP。转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,在IPTG的诱导下 2～ 4h甲基对硫磷水解酶表达可以达到最高水平 ;同时还研究了乳糖的诱导效果 ,2 %乳糖诱导 2h就可以起到很好的效果。通过PCR反应验证了mpd基因定位于DLL

耐盐及苯乙酸、甲基对硫磷降解基因工程菌的构建

H1 (Halomonassp.)是一株耐高盐浓度 (1 8%NaCl,W V)和降解苯乙酸的菌株 ,pDT3质粒为pUC1 9插入甲基对硫磷水解酶基因 (mpd基因 )构建而成。采用HindⅢ酶切 ,获得含有完整mpd基因片段 ,克隆到广宿主质粒pKT2 3 0和pBBR1 MCS2上 ,构建成质粒pKT MP和pBBR MP。通过三亲杂交 ,在辅助质粒pRK2 0 1 3的帮助下 ,将质粒pKT MP和pBBR MP转移到H1中 ,得到的工程菌H pKT MP和H pBBR MP具有耐盐、降解苯乙酸和水解甲基对硫磷的功能 ,其中H pBBR MP水解酶活性与亲本菌株甲基对硫磷降解菌 (Pseudomonasputida)DLL E4相当 ,而H pKT MP水解酶活性要提高 1倍左右。经过传代试验 。

DLL-1菌对甲基对硫磷农药的降解作用及其降解机理

研究了假单胞菌 (DLL - 1)在水溶液介质中降解甲基对硫磷的性能与影响因素及其降解机理。结果表明 ,当菌体浓度为 10 5个·ml-1时 ,即发生快速的降解作用 ,3h时 ,降解率达 88.5 %。在pH为 5 .0、7.0和 9.0条件下 ,DLL - 1菌均产生对甲基对硫磷农药的高效降解作用。采用气相色谱 -质谱联用技术与离子色谱法 ,测定了DLL - 1菌 -甲基对硫磷作用过程产生的中间产物和最终产物 ,表明对硝基苯酚为主要中间产物 ,且DLL - 1菌能将其进一步降解为NO2 -和NO3 -。

水胺硫磷与甲基对硫磷在苹果中的残留动态研究

采用田间喷施试验方法,研究了水胺硫磷与甲基对硫磷在苹果中的残留动态。结果表明,水胺硫磷与甲基对硫磷相比具有高残留、消解慢的特点。在中熟品种上,喷药后的第29d,甲基对硫磷在果皮、果肉中的残留浓度分别为0.027、0.0023mg·kg-1,水胺硫磷分别为0.956、0.112mg·kg-1,分别为甲基对硫磷的35.41倍和48.7倍。果皮中的残留浓度降至1.412mg·kg-1,甲基对硫磷仅需7d,而水胺硫磷则需23d。早熟品种上也有相同的特点。从果实不同部位的残留情况来看,水胺硫磷在果实中的残留时间长,残留浓度大,说明水胺硫磷与甲基对硫磷相比应属高残留、消解慢的农药品种。从果实各部位残留量之比可以看出,水胺硫磷喷易于由果皮渗入果肉,其果皮/果肉含量之比平均低于甲基对硫磷的2倍,而果肉与果心之比高出甲基对硫磷1￣2倍。

甲基对硫磷人工抗原的合成及鉴定

为了合成甲基对硫磷(M1605)人工抗原,用醋酸-锌粉-盐酸还原甲基对硫磷,制备氨基甲基对硫磷,重氮化法使氨基甲基对硫磷与牛血清白蛋白(BSA)及中国鲎血蓝蛋白(TTH)偶合,合成人工抗原M1605-BSA、M1605-TTH。M1605-BSA免疫新西兰兔10周后,双向琼脂扩散试验和间接ELISA检测,证明得到了高价且具有较好特异性的多抗血清,成功地合成了甲基对硫磷人工抗原,为其免疫分析方法的建立提供了条件。