疫苗口服接种及其微粒传输系统

为说明疫苗口服接种产生黏膜免疫的生理学基础,突出微粒作为口服疫苗载体的研究意义,本文分析了肠系淋巴组织的抗原呈递及黏膜免疫反应特点,并结合肠道吸收屏障,进一步讨论微粒载体经肠道的摄取和转运,阐述疫苗微粒口服接种的研究概况。参与免疫调节的M-细胞和派伊尔集合淋巴结是口服疫苗产生免疫应答的重要部位,采用微粒作为疫苗转运载体,可克服肠道屏障的影响,赋予了口服疫苗以新的内涵,特别是凝集素化微粒在提高疫苗转运及免疫接种效率方面的作用。可见经肠黏膜免疫系统进行的疫苗口服接种,通过微粒载体介导,将实现定位触发和效应放大,具有潜在的研究和应用价值。

大剂量新城疫V4弱毒疫苗口服紧急预防非典型鸡新城疫的观察

大剂量新城疫Ｖ４弱毒疫苗口服紧急预防非典型鸡新城疫的观察王庆普王殿礼（辽宁省普兰店市兽医卫生站，１１６２００）崔杰（瓦房店市兽医站）目前鸡新城疫特别是非典型鸡新城疫仍然是威胁养鸡业的主要传染病之一。为此，笔者选用鸡新城疫Ｖ４弱毒疫苗大剂量口服，紧急预...

基于酵母β-葡聚糖载体的口服OVA疫苗(WGP-OVA疫苗)诱导体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应

目的:探讨口服WGP-OVA疫苗对C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫的诱导作用。方法:分别连续给予C57BL/6小鼠口服PBS、WGP及WGP-OVA 17 d后,使用LEGENDplexTM多因子流式检测试剂盒检测给药后小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的含量;HE染色比较各组小鼠脾脏淋巴小结的大小。取小鼠腹股沟淋巴结(ILNs)制备单细胞悬液,流式细胞仪(FACS)检测淋巴结内F4/80+巨噬细胞及F4/80+SIINFEKL+巨噬细胞比例,分析WGP-OVA对巨噬细胞在ILNs内的浸润及抗原提呈情况;同时通过MHC Tetramer染色检测抗原特异性CD8+T细胞比例,明确WGP-OVA疫苗对T细胞免疫的诱导作用。结果:与PBS组相比,WGP-OVA能显著诱导IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的分泌,增大脾脏内淋巴小结。此外,口服WGPOVA疫苗能促进F4/80+巨噬细胞向淋巴结浸润,诱导巨噬细胞对OVA的抗原提呈,同时增加淋巴结内OVA特异性CD8+CTLs的数量。结论:口服WGP-OVA疫苗能诱导C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应。

鱼类迟缓爱德华氏菌肠溶口服疫苗的制备及免疫保护效应研究

本文采用海藻酸钠作为载体,采用乳化复沉淀方法包裹迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)全菌制备疫苗微球。制备工艺研究结果表明:3%(m/v)海藻酸钠溶液,4%(m/v)CaCl_(2)溶液,水油相比1∶2,乳化剂Span801%,搅拌速度1200 r/min为最佳制备工艺,微球包埋率达91.04%,微球平均粒径(16.51±11.87)μm。通过人工胃肠液对疫苗微球的耐受性进行分析,微球在体外人工模拟胃液和肠液中16h释放率分别为0.8%和98.1%。用表达有绿色荧光蛋白的大肠杆菌做示踪标记,口灌免疫半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gunther),疫苗能耐受胃的酸性环境影响,通过前消化道到达后肠。免疫保护效应研究表明,口腔灌注疫苗后,出现特异性和非特异性免疫应答,疫苗组在初免后第14天血清效价达到峰值1∶322;外周血白细胞吞噬率在初免后第14天达到峰值27.06%,吞噬指数在初免后第14天达到峰值1.65。初免后第28天用迟缓爱德华氏菌活菌攻毒,对照组死亡率58.82%,疫苗组死亡率13.33%,免疫保护率为77.33%。本研究优化了鱼类肠溶口服疫苗的制备工艺,疫苗免疫评价结果表明,该口服疫苗可以有效激活鱼体免疫反应,预防鱼类疾病发生。

[鱼師]诺卡氏菌口服疫苗的制备与免疫效果研究

以海藻酸钠为包被体,[鱼師]诺卡氏菌(Nocardia seriolae)全菌灭活疫苗为内芯,制备[鱼師]诺卡氏菌口服微球疫苗,口灌体质量(45±5)g的珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂)。一周灌3 d停4 d,4周后每尾腹腔注射100μL[鱼師]诺卡氏菌液,攻毒浓度为1×10~8CFU/mL,对照组口服生理盐水微球,然后测定保护率及肝中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LSZ)以及过氧化氢酶(CAT)活性,用RT-PCR研究相关免疫基因的表达。结果显示,口服疫苗免疫保护率(RPS)为67%,疫苗组ACP活力在免疫1周时达到峰值;CAT活力在免疫后先升高再降低,在免疫1周时达峰值,第3周时仍与对照组差异显著;LSZ活力第2 d、21 d、28 d显著低于对照组;SOD活力整体显著低于对照组;免疫组与对照组相比,口服疫苗免疫后的珍珠龙胆石斑鱼激发TLR信号通路,促进TLR2、TLR3、MyD88基因表达量上调。细胞因子类相关基因IL-12p40、TNF-α转化生长因子TGF-β、免疫球蛋白IgM,及适应性免疫相关基因MHC表达量均有上调,但不同组织上调程度不同。

斜带石斑鱼口服PELA-OmpK微球疫苗的示踪及免疫效果

采用可生物降解的合成高分子聚DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(DL-polylactide–co–polyethylene glycol,PELA),包裹哈维氏弧菌(Vibrio harveyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK后,制备成PELA-OmpK微球。微球粒径小于10μm,且94%粒径小于5μm,平均粒径为2.8μm。蛋白包裹率达79.4%。斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)口灌四甲基异硫氰酸罗达明(TRITC)荧光素标记的OmpK-PELA微球后,第1天在其后肠观察到大量红色荧光微球,第3天荧光微球数量明显减少,第7天荧光微球基本消失。免疫组化研究结果表明,口服PELA-OmpK组在斜带石斑鱼后肠组织黏膜层可见较强的棕黄色阳性着色。口服PELA-OmpK组血清抗体效价(峰值210)显著高于口服OmpK蛋白溶液组(峰值24)与对照组(P<0.05),低于注射组(峰值212)(P<0.05);口服PELA-OmpK组的黏液抗体效价显著高于口服OmpK蛋白组(P<0.05)。初次免疫30d后用活菌攻击,口服PELA-OmpK组的相对保护率(62.5%)显著高于口服OmpK蛋白组(12.5%)(P<0.05);低于注射组(87.5%)(P<0.05)。结论为采用可生物降解材料PELA作为鱼类口服疫苗的投递载体是可行的。

转基因番茄表达口服乙肝疫苗

将构建好的植物表达载体pCAMBIA1301/HB转化到根癌农杆菌LBA4404中,并通过农杆菌介导转化番茄。所得再生植株经PCR和Southern杂交鉴定确认成功整合了HBsAg(hepatitis B surface antigen)基因,SDS-PAGE显示蛋白表达与非转化植株相比有明显差异,ELISA检测和Western blotting证实HBsAg已在转化植株中表达,分子量约为24kD。

鱼用嗜水气单胞菌口服疫苗的免疫保护效应

目的:制备含嗜水气单胞菌被膜或全菌的PLG疫苗微粒,以草鱼为实验动物,研究疫苗微粒的免疫保护效应。方法:采用复乳挥发法制备PLG疫苗微粒,草鱼口服免疫在4周内进行3次(每次10 mg微粒),用ELISA法测定血清和肠粘液的抗体变化,保护效应用细菌攻击实验检测。结果:获得被膜和全菌的PLG疫苗微粒,蛋白含量分别为2.31%,6.12%,2种疫苗微粒均可诱导血清及肠粘液抗体应答。腹腔接种20 LD50嗜水气单胞菌后,被膜、全菌疫苗微粒组的存活率分别为46.7%和36.7%,相对存活率分别为42.9%和32.1%,接受空微粒的草鱼仅有6.7%的存活率。结论:被膜、全菌疫苗微粒对草鱼均有显著免疫保护效应,可作为预防嗜水气单胞菌感染的疫苗。

犬用口服狂犬病疫苗的研究

用我国分离并传代适应的狂犬病病毒固定毒22号毒株作为家犬口服疫苗毒株。22号毒株活毒疫苗用于家犬一次口服(拌入煮熟待凉的粥内,在口腔停留约30秒至2分钟服完)即可获得免疫。免疫力可持续15个月,至少与国外Flury LEP疫苗相同。流行病学观察19,425只家犬证明疫苗安全、有效。犬用口服疫苗在我国属首创,国外仅有用于狐狸的口服疫苗,用于家犬的同类制品未见报道。

一种新型鱼病口服疫苗的研制和示踪研究

目的研制一种新型的鱼病口服疫苗,并进行鱼体内的示踪研究。方法通过物理方法(油/水/油)制备包裹模式蛋白的PLGA微粒;将FITC标记蛋白与PLGA结合,观察该新型疫苗在鱼体内的消化过程;将特异性尘螨Derf1蛋白结合PLGA口服给予鱼,不包裹PLGA的Derf1蛋白作为对照,运用ELISA方法测定该疫苗给予后不同时间在血液中的含量。结果PLGA包裹的荧光标记蛋白在消化道1h内即可被鱼小肠上皮细胞吸收,24h小肠消化道内残余很少。包裹特异性尘螨Derf1蛋白的PLGA微粒给予鱼1h后血液中特异性蛋白浓度最高,2、4和24h后仍在血液中保持一定浓度。而不给药对照或Derf1直接给予则在鱼血液中不能测到该特异性蛋白。结论以PLGA为佐剂的蛋白鱼病疫苗可通过消化道吸收入血,是一种新型的鱼病口服疫苗给药系统。

鲈鱼口服生物胶囊疫苗的研究

以暴发弧菌病的鲈鱼 (Lateolabraxjaponicus)鱼苗体内分离的 1株病原菌W 1(Vibrioanguillarum)为材料 ,分别以直接浸浴法、创伤后浸浴法和肌肉注射法人工感染鲈鱼鱼苗。结果表明 ,这三种感染方式均能使鲈鱼发病 ,其半致死浓度 (LD50 )分别为2 75× 10 7cfu/ml ,4 .68× 10 6cfu/ml和 3.72× 10 5cfu/尾。在此基础上 ,分别以福尔马林灭活法和喷雾干燥法制备了全细胞疫苗和微胶囊疫苗。将全细胞疫苗及微胶囊疫苗以直接拌入饵料法和卤虫携带法等两种方法口服免疫接种鲈鱼鱼苗 ,一周后以W 1活菌攻毒( 2 50× 10 6cfu/尾 )。结果表明 ,各免疫组一周的累积死亡率远低于两组对照组 ( 95% )。其中 ,以卤虫携带的生物微胶囊疫苗组的一周累积死亡率最低 ,为 2 5.0 % ;以卤虫携带的生物全细胞疫苗组的一周累积死亡率较高 ,为 60 .0 %。因而 ,以卤虫携带的生物胶囊疫苗组的免疫保护力最高 ,为 73.7% ,其次为微胶囊疫苗直接投喂组 ,保护力为 56.8%。直接投喂和卤虫携带法的全细胞疫苗也显示了一定的免疫效果 ,其免疫保护力分别为 52 .6%和 36.8%。

鳗弧菌油乳化二价口服疫苗免疫养殖大菱鲆的免疫应答及免疫效果的研究

以鳗弧菌M3和SMP1为细菌抗原制备了油乳化二价疫苗,用饵料包埋后连续7天口服免疫大菱鲆鱼,评价鱼的免疫应答和疫苗的保护效果.结果显示,乳化疫苗在鱼后肠刺激产生的溶菌酶和抗蛋白酶活性以及抗体水平均高于未乳化疫苗（P＜0.05）;并且在乳化疫苗免疫的鱼血清检测到明显升高的M3抗体效价（P＜0.05）.原位杂交结果显示,乳化疫苗免疫鱼的后肠IgM的产生水平高于未乳化疫苗免疫鱼.攻毒实验显示,乳化疫苗免疫的鱼对M3和SMP1的感染分别获得100%和50%的免疫保护率,而未乳化疫苗获得的免疫保护率分别为57.9%和0%.结果表明,鳗弧菌油乳化二价口服疫苗能引起大菱鲆后肠的非特异性和特异性免疫应答并有效地抵抗鳗弧菌的感染,适合用作水产口服鱼用疫苗.

罗非鱼无乳链球菌PLGA微球口服疫苗免疫效果的研究

目的探讨用聚乳酸-羟基乙酸[poly(D,L-lactic-co-glycolic)acid,PLGA]包裹无乳链球菌制备的口服疫苗对罗非鱼的免疫保护效果。方法复乳溶剂挥发法制备包裹无乳链球菌全菌和破碎后上清的PLGA微球,通过口服给予方式免疫尼罗罗非鱼,以注射灭活全菌疫苗为阳性对照,免疫后第7、14、21、28天测定受免鱼血清的白细胞吞噬百分比与吞噬指数、血清中的溶菌酶与超氧化物歧化酶活性以及抗体水平。人工攻毒实验比较罗非鱼无乳链球菌PLGA微球的免疫保护作用。结果实验组鱼的白细胞吞噬百分比、吞噬指数、溶菌酶和超氧化物歧化酶均显著高于阴性对照组,低于阳性对照组;抗体水平也有类似结果,但第14天后阳性对照组鱼的抗体水平开始下降,而实验组鱼则仍维持在较高水平。攻毒实验显示全菌和破碎后的上清微球疫苗相对免疫保护率(RPS)分别为57.63%和34.40%,阳性对照组为94.53%。结论本研究制备的罗非鱼无乳链球菌PLGA微球口服疫苗能够增强罗非鱼对无乳链球菌的免疫反应,并可通过缓释作用使机体维持较高的抗体水平,可为罗非鱼提供一定的免疫保护,但其RPS低于全菌灭活注射疫苗。

鱼用三联口服疫苗的制备方法及其对大菱鲆的免疫效果

为探究海水养殖中安全可靠、经济适用的疫苗接种方法,以药用淀粉、麦芽糊精,以及经0.5%甲醛灭活的溶藻弧菌Vibrio alginolyticus、副溶血弧菌V.parahemolyticus和迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda为主要原料,采用挤出-滚圆法制备鱼用三联口服疫苗,并用其对大菱鲆Scophthalmus maximus免疫,分别在免疫0、7、14、21、28 d时测定溶藻弧菌、副溶血性弧菌和迟缓爱德华氏菌特异性抗体,以1×109cfu/m L活菌(3种菌液比例为1∶1∶1)进行攻毒试验并计算免疫保护率。结果表明,药用淀粉150 g、麦芽糊精50g、菌液60 m L、挤出速度200 r/min、滚圆时间60 s时,为比较成熟的三联口服疫苗制备工艺,用该疫苗免疫大菱鲆后,3种细菌的大菱鲆血清和后肠黏膜抗体效价均显著高于对照组,且免疫保护率达50%以上。

乳酸菌作为口服疫苗载体的研究进展

乳酸菌是一类重要的工业菌株,是食品级安全菌。利用乳酸菌作为表达载体制成的口服疫苗安全无毒,乳酸菌口服疫苗通过胃肠粘膜进行抗原呈递,能诱导机体产生有效的免疫应答和免疫耐受。近年来对于乳酸菌口服疫苗的研究成为热点,并在此方面取得了突破性成果。

中华鳖对温和气单胞菌口服微球缓释疫苗的免疫应答

以中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As) Z- 1株灭活全菌液 ,采用生物降解性高分子材料制成缓释微球疫苗 ,口服免疫中华鳖 ,测定血清中凝集抗体、血液中白细胞杀菌率以及对活菌攻击的免疫保护率。结果表明 ,中华鳖口服微球疫苗 ,其血清中凝集抗体效价和血液中白细胞杀菌百分率均可达到灭活菌液注射组相当的水平 (P>0 .0 5 ) ,显著高于对照组 (P<0 .0 1) ;微球疫苗口服组和灭活菌液注射组的免疫保护率分别为 94 .7%和 89.5 % ,两者差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,而对照组小鼠 95 %死亡。采用可生物降解微球作为中华鳖气单胞菌口服疫苗的载体系统是可行的。

利用转基因植物生产乙肝口服疫苗

乙型肝炎危害全球大部分地区,由于没有切实可行的治疗方法,因此,控制和预防乙型肝炎便极其重要。转基因植物可表达外源乙肝表面抗原蛋白(HB_sAg)并保持自然状态的免疫原性,产生的疫苗不需纯化就可供口服使用,所以,本文提出,利用转基因植物生产廉价疫苗系统有巨大的前景,可代替微生物疫苗生产系统。

乳酸菌用作口服疫苗传递载体的研究

乳酸菌是食品级安全菌,利用乳酸菌为表达载体制成的口服疫苗安全无毒,能诱导机体产生有效的免疫应答和免疫耐受。乳酸菌口服疫苗通过胃肠粘膜进行抗原呈递,使用方便,而且较传统注射途径的免疫效果和依从性好,是理想的疫苗,有广阔的发展前景。

BALB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌热休克蛋白A疫苗的免疫应答

目的 评价重组热休克蛋白A (rHspA)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成分的效果。方法 采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂 (霍乱毒素 ,CT ;大肠不耐热肠毒素B亚单位 ,LTB)共口服免疫BALB c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgG、IgA抗体水平 ,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况以及IL4、IFN γ的变化。结果 单纯口服rHspA组产生的抗体水平与对照组 (PBS)相差不显著 ,而rHspA +佐剂组与对照组相差非常显著。rHspA +佐剂组小鼠脾淋巴细胞体外培养 ,在Hp抗原刺激作用下出现明显的增殖反应 ;不加佐剂免疫组分泌IFN γ水平增加 ,IL 4水平未发现增加 ;而加佐剂免疫组除IFN γ水平增加外 ,IL 4水平也发现显著增加。结论 BALB

鲁氏耶尔森氏菌口服微球疫苗特性分析及免疫效果研究

为制备并评价鲁氏耶尔森氏菌口服微球疫苗的免疫效果,实验采用天然高分子聚合物海藻酸钠为疫苗载体,鲁氏耶尔森氏菌灭活疫苗为抗原,制备鲁氏耶尔森氏菌口服疫苗。以拌料口服方式进行免疫,通过血清非特异免疫指标、抗体效价、免疫保护率等综合评价疫苗的免疫效果。结果表明,鲁氏耶尔森氏菌口服微球疫苗成球性好,粒径均匀,粒径(8.76±1.73)μm,跨距0.47,包封效率94.51%,具备良好的抗酸性、肠溶性及高安全性的特点。将疫苗免疫斑点叉尾,能显著提高斑点叉尾血清中溶菌酶活力、总超氧化物歧化酶活力(T-SOD)以及补体替代途径活性(ACH_(50));血清凝集效价于第5周达到峰值为1︰8,至免疫后第8周仍能检测到特异性抗体;口服鲁氏耶尔森氏菌微球疫苗的斑点叉尾获得的抗鲁氏耶尔森氏菌相对免疫保护率为65.52%。综上所述,实验制备的鲁氏耶尔森氏菌口服微球疫苗能够对鲁氏耶尔森氏菌病起到较好的预防作用。