周期性张应变调控组蛋白H3乙酰化在移植静脉内膜增生中的作用

目的自体大隐静脉是临床冠状动脉旁路移植术的常用血管供体,术后动脉水平张应变诱导静脉血管平滑肌细胞(VSMCs)功能异常,引起血管内膜增生,其力学生物学机制仍有待阐明。方法与结果“套管法”构建SD大鼠静脉移植模型,HE、EVG染色显示术后7天新生内膜增生显著;熔融纺丝构建1.5 mm和2.0 mm两种内径血管外支架限制张应变,超声结果显示无支架组移植静脉张应变为15.51±1.25%,2.0 mm支架组为9.18±0.88%,1.5 mm支架组为7.01±1.13%,相比于2.0 mm支架组,1.5 mm支架组内膜厚度显著减少。免疫荧光结果显示,1.5 mm组移植静脉组蛋白H3K9乙酰化水平显著降低。FLEXCELL系统对体外培养的VSMCs施加15%、1.25 Hz及7%、1.25 Hz周期性张应变,western blot结果显示15%周期性张应变诱导VSMCs收缩表型标志物SM22α及Calponin显著下降,组蛋白H3K9乙酰化水平显著升高。为了确定组蛋白H3K9乙酰化在内膜增生中的作用,持续对模型鼠注射组蛋白乙酰转移酶抑制剂姜黄素,1周后免疫荧光显示姜黄素可以抑制组蛋白H3K9乙酰化水平,缓解移植血管内膜增生。结论动脉水平的周期性张应变上调组蛋白H3K9乙酰化,促进静脉VSMCs向合成表型转换,引起移植静脉内膜增生。适当的张应变束缚可能通过抑制组蛋白H3K9乙酰化而缓解移植静脉内膜增生。

局部应用没食子儿茶素-3-没食子酸抑制移植静脉内膜增生

目的探讨局部应用没食子儿茶素-3-没食子酸对移植静脉内膜增生的抑制作用及其发生机制。方法应用异硫氰酸荧光素荧光标记技术和高效液相色谱法体外定性和定量测定血管对没食子儿茶素-3-没食子酸的吸收情况。日本大耳白兔20只,随机分为没食子儿茶素-3-没食子酸处理组和对照组(n=10)。建立兔颈外静脉与颈内动脉间置移植模型,移植前没食子儿茶素-3-没食子酸处理组血管在0.1 g/L没食子儿茶素-3-没食子酸中常温保存1 h,而对照组血管保存在生理盐水中。组织学方法测定移植三周后移植静脉血管新生内膜厚度、内膜中膜厚度比,原位DNA断裂位点的3′-羟基末端标记、Ki67免疫组织化学染色测定新生内膜阳性细胞百分比。结果0.1g/L没食子儿茶素-3-没食子酸中保存1 h2、h4、h,静脉血管的吸收量分别为2.9±0.9 mg/g、5.8±2.1 mg/g和8.0±2.3 mg/g,分布在血管壁全层。两组移植血管术后3周的通畅率均为90%(9/10)。移植术后3周没食子儿茶素-3-没食子酸处理组较对照组内膜厚度(41.1±13.6μm比89.9±48.3μm,P<0.01)及内膜/中膜厚度比(0.40±0.18比0.77±0.31,P<0.05)均显著降低,新生内膜Ki67阳性染色平滑肌细胞百分比也显著下降(22.4%±8.6%比8.8%±2.4%,P<0.05),而凋亡细胞百分比(0.40%±0.55%比0.60%±0.89%,P>0.05)无明显变化。结论局部应用没食子儿茶素-3-没食子酸能够抑制移植静脉内膜增生,可能与其抑制内膜平滑肌细胞增殖有关。

自体移植静脉病变机制的研究进展

血管旁路移植手术是临床上常用的治疗缺血性心肌病和缺血性周围血管疾病的方法。大隐静脉具有容易获取、来源丰富、长度足够和操作简便的优点。常用作重要的移植材料。但研究显示，冠状动脉旁路移植术后。大约10％的静脉桥在1月内闭塞，约20％在1年内闭塞。术后10年的病人大约只有50％的静脉桥仍保持通畅，移植静脉病变的高发生率严重影响了手术的远期疗效。移植静脉病变由血栓形成期、内膜增生期、粥样硬化期三个相对独立而又相互关联的病理过程构成，现就自体移植静脉再狭窄病变的机理研究现状作一综述。

转录组测序鉴定兔移植静脉桥血管再狭窄相关基因

目的使用转录组测序技术鉴定兔移植静脉桥血管再狭窄相关的基因。方法选取40只实验用新西兰兔,分为实验组、对照组,上述两组再分为2周组和4周组,10只/组。实验组将兔左侧颈外静脉移植至左颈总动脉上,分别于2周、4周时取下桥血管标本,对不同组别标本进行病理学检查,观察血管内膜、中膜厚度,血管平滑肌细胞的增殖情况;对照组不做手术处理,2周或4周后取出左侧颈外静脉。之后使用转录组测序技术对术后4周的移植血管进行检测,与对照组对比,寻找差异表达的基因,并利用GO数据库及KEGG数据库对表达差异的基因进行筛选分析。结果术后2周桥血管病理提示:内膜及中膜增厚,血管平滑肌细胞增殖,术后4周时,上述改变进一步加重。与对照组静脉相比,术后4周的移植静脉标本明显上调基因1583个,下调608个。用GO以及KEGG数据库分析筛选出前10个处于中心位置基因分别为CD4、ZAP70、SYK、CD28、PIK3CD、CXCR4、CCR5、ITK、CCL5、BTK。结论CD4、ZAP70、SYK、CD28、PIK3CD、CXCR4、CCR5、ITK、CCL5和BTK可能是引起兔静脉桥血管再狭窄的基因。

PLGA/CS-tPAcDNA静电纺丝血管外支架预防移植静脉再狭窄

目的通过PLGA/CS-tPAcDNA静电纺丝血管外支架进行t-PA基因局部定位转移,探讨其对移植静脉血栓形成和内膜增生的影响。方法60只兔构建颈外静脉-颈总动脉移植模型,制备PLGA/CS-tPAcDNA纳米粒超细纤维复合膜支架,并随机分为基因治疗组(含t-PA基因PLGA/CS静电纺丝血管外支架,n=30)、对照组(PLGA/CS静电纺丝血管外支架,n=30),分别在术后不同的时间点取样,通过免疫印迹、逆转录聚合酶链反应和底物发色法分别检测移植静脉t-PA活性和基因表达,病理形态学观察移植血管新生内膜增生情况。结果在术后2、5、14、28、60 d,基因治疗组移植静脉可检测到外源性t-PA mRNA的表达,其活性变化分别为(390.42±63.71)、(368.47±54.21)、(275.23±58.32)、(170.75±60.52)和(63.52±23.21)U/g。对照组中对应时间点则t-PA无活性。术后5、14、28、60 d,基因治疗组移植静脉镜下显示新生内膜面积、内膜中膜面积比均明显小于对照组。结论PLGA/CS-tPAcDNA静电纺丝血管外支架可介导t-PA基因局部治疗,可影响移植静脉管腔内血栓形成,抑制移植静脉内膜增殖,继而有效降低移植静脉再狭窄的发生。

大孔隙非限制性血管外支架抑制移植静脉内膜增生的实验研究

目的探讨大孔隙非限制性聚对二氧环己酮血管外支架抑制移植静脉内膜增生的实验效果及其作用机制。方法建立兔自体颈外静脉移植至颈总动脉动物模型,48只新西兰大白兔随机分为对照组(单纯静脉移植,n=24)和实验组(静脉移植+血管外支架,n=24)。于术后4周、12周分别取出移植静脉,行病理学检查测量内膜、中膜的厚度和面积,对增殖细胞核抗原行免疫组织化学检查计算细胞增殖率。结果48只兔无手术和术后死亡,移植血管全部通畅。实验组血管外支架与移植静脉壁之间形成富含毛细血管的"新生外膜"。术后4周和12周实验组管腔面积大于对照组,而中膜面积、内膜面积、中膜厚度和内膜厚度均小于对照组(P<0.05)。术后4周实验组细胞增殖率(22%±11%)低于对照组(37%±15%,P<0.05);术后12周实验组和对照组细胞增殖率均较术后4周降低,而实验组细胞增殖率(8%±5%)低于对照组(16%±9%,P<0.05)。结论大孔隙非限制性聚对二氧环己酮血管外支架通过刺激外膜滋养血管生成、改善静脉壁缺血和缺氧、减小移植静脉壁的轴向应力,而达到减轻内膜和中膜增生的作用。

大鼠自体移植静脉内膜增生模型的改进

目的改进大鼠自体移植静脉内膜增生模型。方法将36只SD大鼠随机分成实验组和对照组。实验组采用套管法将大鼠自体颈外静脉移植入同侧颈动脉系统。对照组采用吻合法行自体颈外静脉移植,术后均皮下注射肝素800 U/kg,2次/d,共5 d。观察术后不同时间点两组大鼠移植静脉通畅性、吻合口狭窄及内膜增生情况。结果实验组移植静脉自体移植静通畅性优于对照组,吻合口狭窄程度轻于对照组。结论实验组模型设计科学,操作简便,成功率高。

实验性自体移植静脉内膜增生模型的建立

目的 建立自体静脉移植模型 ,并观察其平滑肌细胞 ( SMC)增殖和内膜增厚的时空变化 .方法 用“Cuff”技术将兔自体颈外静脉移植入同侧颈动脉系统 ,观察 PCNA和 α-actin表达 ,并对自体移植静脉管腔、内膜、中膜面积定量分析 .结果 自体静脉移植后扩张 ,2 wk内最明显 ,同时 SMC增殖和迁移 ,1～ 2 wk达高峰 ,PCNA和 α- actin表达也明显增高 .结论 该模型设计科学 ,成功率高 .SMC增殖从术后 3 d即已开始 ,1～ 2 wk达高峰 ,是抑制细胞增殖的最佳时期 ,增生内膜主要是由中膜

人组织因子途径抑制因子基因转染对移植静脉新生内膜的影响

目的为减少冠状动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄,探讨人组织因子途径抑制因子(tissuefactorpathwayinhibitor,TFPI)基因转染对移植静脉内膜增生的影响。方法构建真核表达质粒pCMV-(Kozak)TFPI。将48只日本大耳白兔随机分为3组,每组16只,即TFPI转染组、空载体对照组和空白对照组。建立颈总动脉旁路移植模型。吻合前,TFPI转染组移植静脉内采用阳离子脂质体pCMV-(Kozak)TFPI(400μg)和腔内加压灌注法(30min)转染,空载体对照组以空质粒pCMV(400μg)代替pCMV-(Kozak)TFPI,空白对照组不予干预。术后3d,用RT-PCR、Western-blot和免疫组织化学法检测外源基因在移植静脉中的表达。术后30d,血管多普勒测量移植静脉管腔内径和管壁厚度;组织病理标本测量内膜面积和中膜面积,并计算其比值;透射电镜观察移植静脉新生内膜的细胞构成。结果TFPI转染组移植静脉中有人TFPI基因mRNA和蛋白表达,两对照组未见表达。TFPI转染组移植静脉管腔内径为(2.68±0.32) mm,大于空载体对照组(2.41±0.23)mm和空白对照组(2.38±0.21)mm,差异均有统计学意义(P<0.05)。TFPI转染组管壁厚度为(1.09±0.11) mm,小于空载体对照组(1.28±0.16)mm和空白对照组(1.34±0.14)mm,差异均有统计学意义(P<0.01)。TFPI转染组移植静脉内膜面积和内膜、中膜面积比值分别为(0.62±0.05)mm2及0.51±0.08,均小于两对照组的(0.70±0.05) mm2、0.58±0.06及(0.72±0.04) mm2、0.59±0.08(P<0.05);中膜面积各组差异无统计学意义(P>0.05)。透射电镜观察,TFPI转染组移植静脉内膜未见平滑肌细胞,两对照组均见平滑肌细胞。结论人TFPI基因转染减少移植静脉内膜增生。

血卟啉单甲醚-光动力学疗法对兔移植静脉再狭窄的抑制作用

目的探讨局部灌注血卟啉单甲醚(HMME)结合血管外激光照射的方法对移植静脉吻合口处内膜增生的抑制作用。方法采用兔颈外静脉颈总动脉移植模型,将实验动物随机分为光动力学治疗组、单纯激光照射组、单纯光敏剂灌注组、空白对照组,每组4只兔。光动力学治疗组局部应用血卟啉单甲醚HMME(15μg/ml)溶液充盈在移植静脉段,再以532nm波长半导体激光器在吻合口(每只兔2处吻合口)附近进行血管外照射5min,功率密度100mW/cm2,能量密度30J/cm2;单纯激光照射组以生理盐水充盈移植静脉段,再用激光照射;单纯光敏剂灌注组仅用HMME(15μg/ml)溶液充盈移植静脉段5min;空白对照组应用生理盐水充盈移植静脉段5min。术后第4周于各实验组移植静脉的动静脉连接部及其两侧0.5cm处的动脉端、静脉端取材,常规石蜡包埋切片HE染色,组织病理观察,采用IMAGE-ProPlus生物医学图像分析系统,观察不同处理组内膜增生程度的差异。结果在移植静脉吻合口的动静脉连接部、动脉端及静脉端,光动力学治疗组与其他各组相比内膜增生程度明显减低。结论光动力学疗法对移植静脉早期阶段的再狭窄有明显的抑制效应。

真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI在搭桥模型移植静脉中的表达

目的构建真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI并检测其在移植静脉中的表达,为冠状动脉旁路移植术中转染大隐静脉内皮细胞抗凝治疗的临床试验奠定理论应用基础。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法提取人组织因子途径抑制因子(TFPI)基因,并引入Kozak序列,将(Kozak)TFPI亚克隆入pCMV质粒中。在阳离子脂质体介导下,转染颈总动脉搭桥模型移植静脉内皮细胞。RT-PCR、蛋白印迹法(Western印迹)和免疫组化法检测移植静脉中外源TFPI基因mRNA和蛋白的表达。结果(Kozak)TFPI成功克隆入pCMV中。RT-PCR、Western印迹和免疫组化检测到移植静脉中外源TFPI基因mRNA和蛋白的表达。结论pCMV-(Kozak)TFPI真核表达载体构建成功,移植静脉中检测到其蛋白的表达。

血管内皮生长因子在血管外支架预防移植静脉再狭窄中的作用

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)在血管外支架预防移植静脉再狭窄中的作用及不同管径材料外支架的作用效果。方法:通过动物实验获得外支架干预下的移植静脉及其对照标本,用免疫组化及形态学方法对标本中的VEGF、增殖细胞核抗原(PCNA)及滋养血管的表达进行检测、分析。结果:与对照组相比,外支架干预的移植静脉组中膜VEGF含量显著降低(P<0.05),而外膜VEGF含量显著增高(P<0.05),中膜PCNA含量显著降低(P<0.05),外膜滋养血管密度显著增高(P<0.05)。结论:血管外支架可有效促进VEGF向外膜聚集,减少其在中膜、内膜聚集,进而促进滋养血管的生长,减少中膜增生,减轻再狭窄。

维拉帕米对移植静脉平滑肌细胞增生的影响

目的 观察钙离子通道阻滞剂维拉帕米对移植静脉段内膜平滑肌细胞增生的影响。方法 选取成年长耳大白兔 2 4只 ,分为两组 ,每组 12只。分离并切取 1～ 2cm长颈外静脉 ,插入替代同侧同等长度的颈总动脉。术后两组动物均常规饲养。实验组每天沿耳缘静脉注入维拉帕米 0 5mg/kg ,每日 2次 ,而观察组无须特殊处理。分别于术后 7天、14天和 2 1天两组动物各取 4只 ,完整取下移植静脉段 ,常规HE染色 ,计算内膜增生的厚度和平滑肌细胞增生的程度。结果 实验组内膜增生厚度及细胞增生阳性指数均小于对照组。结论 维拉帕米对移植静脉内细胞增生有抑制作用。

大鼠自体移植静脉内膜增生模型的改进

目的改进大鼠自体移植静脉内膜增生模型,比较采用不同方法建立模型的效果。方法将36只SD大鼠随机分成2组:实验组和对照组。实验组采用“套管法”将大鼠自体颈外静脉移植入同侧颈动脉系统。对照组采用“吻合法”行自体颈外静脉移植,术后均给予肝素皮下注射5天。观察术后不同时间点两组大鼠移植静脉通畅性、吻合口狭窄及内膜增生情况。结果实验组移limit自体移植静脉通畅性优于对照组,吻合口狭窄程度轻于对照组。结论实验组模型设计科学,手术操作简便,成功率高。

移植损伤对移植静脉影响的实验研究

目的探讨移植静脉再狭窄的机制,明确移植损伤对移植静脉的影响。方法健康新西兰大白兔36只,随机选取一侧将股静脉翻转后移植于同侧股动脉缺损(静-动组),另一侧将同等长度股静脉截取后行原位缝合(静-静组),另取正常股静脉作为对照组(取自静-动组移植前静脉的一部分)。均于术后4周取移植静脉段,行HE染色、弹力纤维的维多利亚蓝染色观察移植静脉管壁组织学变化;增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)免疫组织化学染色观察管壁细胞增殖情况;电镜观察管壁细胞超微结构改变。结果静-静组血管壁中膜平滑肌细胞增殖,但内膜(3.50±0.41μm)、中膜(12.23±1.59μm)厚度无明显变化;静-动组内膜、中膜细胞均增殖,内膜(25.60±3.21μm)、中膜(21.30±2.47μm)厚度较对照组、静-静组均增加,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组未见PCNA阳性细胞,静-静组内膜(5.9%±1.3%)、中膜(23.4%±3.4%)PCNA阳性细胞百分比均小于静-动组内膜(16.4%±1.9%)、中膜(36.5%±3.7%),差异有统计学意义(P<0.01)。静-静组透射电镜下可见内皮细胞扁平,游离端有绒毛样突起,细胞排列紧密,中膜平滑肌细胞增殖;静-动组透射电镜下可见内皮细胞增殖明显,增殖的内皮细胞形态不规则,细胞间隙增宽,内膜中可见大量平滑肌细胞,基底膜不完整,中膜平滑肌细胞明显增殖;对照组内皮细胞形态及排列与静-静组相似,只是中膜平滑肌细胞未见增殖。结论静脉移植后可导致血管管壁细胞增殖,如合并血流动力学变化则会发生更严重的细胞增殖和迁移,导致管腔狭窄;减少移植损伤,改善移植静脉的微循环,成为预防移植静脉再狭窄的理论基础之一;静-静移植的动物模型,有助于探寻静脉移植后再狭窄的机制。

局部应用紫杉醇预防兔移植静脉再狭窄

目的探讨局部应用紫杉醇对移植静脉再狭窄的预防作用。方法将96只兔随机分为3组,对照组,组,组,每组32只。3组兔均行颈外静脉与颈总动脉旁路移植术,紫杉醇与生物蛋白胶混合物局部喷涂于组(紫杉醇1μg)和组(紫杉醇8μg)移植血管表面,对照组单纯喷涂生物蛋白胶。分别于术后1,2,4和6周采集颈静脉标本,进行形态学和免疫组织化学分析。结果术后1,2,4和6周组移植血管内膜厚度均较对照组减少(30.10±4.50μmvs.48.20±9.16μm,40.70±6.91μmvs.54.20±8.67μm,54.70±7.11μmvs.68.60±13.72μm,68.70±8.24μmvs.76.40±12.98μm,P<0.05);组和组CD8和金属硫蛋白阳性细胞表达在各时间段均较对照组显著减少(P<0.05)。结论在兔颈动脉旁路移植模型中,静脉移植血管周围应用紫杉醇可以抑制移植血管新生内膜的增生。

移植静脉外膜增生与兔血管再狭窄的相关性

目的探讨冠状动脉旁路移植术后移植静脉外膜增生与血管再狭窄的相关性。方法构建20例兔颈动脉旁路移植模型,术后当日行血管彩色多普勒检查,检测移植静脉的通畅性。术后30 d,取出移植静脉,组织病理标本切片、HE染色,测量外膜面积和管腔面积。用统计软件分析外膜面积与管腔面积的相关性。结果术后当日,血管多普勒证明,所有20例模型移植静脉全部通畅。统计软件分析结果显示,移植静脉外膜面积与管腔面积成直线关系。结论移植静脉外膜增生与血管管腔再狭窄有相关性。移植静脉外膜增生越重,管腔越狭窄。

纳米粒子介导Egr-1 DNA酶转染抑制移植静脉内膜增生

背景:应用基因防治移植血管狭窄、闭塞现已被普遍公认,但如何增加其转染效率现已成为焦点及热点问题。目的:观察以纳米粒子为载体的外源性Egr-1 DNA酶局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:构建Egr-1DNA酶,应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载Egr-1 DNA酶,制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型210只,随机分成3组,转基因组转染以纳米粒子为载体的Egr-1 DNA酶,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。结果与结论:转基因组内膜中Egr-1基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05);在术后7,14,28d,转基因组内膜增生厚度较其他两组明显减少(P<0.01);转基因组血管平滑肌细胞凋亡百分比较其他两组明显增高(P<0.05)。结果表明Egr-1DNA酶的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进血管平滑肌细胞凋亡。

雷帕霉素抑制兔自体移植静脉内膜过度增殖

目的观察血管周围局部应用雷帕霉素对兔自体移植静脉段内膜过度增殖的抑制作用。方法大耳白兔15只,采用自身对照设计建模。任取一侧静脉桥为干预组,外涂含0·3mg雷帕霉素的Pluronic凝胶;另一侧为对照组,外涂空凝胶。4周后测桥静脉内膜厚度、细胞的增殖指数及p27kip1免疫组化阳性细胞数。结果干预组桥静脉内膜厚度为(63·7±14·0)μm,明显少于对照组的(77·8±14·9)μm(P<0·05)。增殖指数,干预组为29·3±7·2,明显高于对照组的20·1±9·5(P<0·05)。p27kip1免疫组化染色在干预组见有阳性表达细胞,而对照组表达呈阴性。结论血管周围局部应用雷帕霉素具有抑制兔移植静脉内膜过度增殖的作用;这种作用与p27kip1的上调表达有关。

可降解性PDS血管外支架抑制移植静脉内膜增生的动物实验观察

24只新西兰大白兔随机分为对照组和实验组,各12只。对照组单纯行颈外静脉移植,实验组同时移植可降解性聚对二氧环己酮(PDS)血管外支架。术后4周取出移植静脉,测量其内膜、中膜的厚度和面积,检测增殖细胞核抗原(PCNA),计算细胞增殖率。结果显示,实验组PDS血管外支架与移植静脉壁之间形成了富含毛细血管的新生外膜,移植静脉中膜及内膜厚度、面积皆小于对照组(P均<0.05);其细胞增殖率为22%±11%,低于对照组的37%±15%(P<0.05)。认为可降解性PDS血管外支架具有良好的组织相容性,早期可以明显抑制移植静脉内膜和中膜增生。