猪瘟病毒中和抗体竞争抑制ELISA检测方法的建立

利用杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经筛选确定,CI-ELISA的抗原最佳包被浓度为3μg/mL,酶标竞争抗体的最佳稀释度为1∶4 000,阴性血清临界值为33%,阳性血清临界值为40%。CI-ELISA的检出下限为1∶44(中和抗体效价),与进口阻断ELISA试剂盒的符合率为85.00%,高于间接ELISA与进口阻断ELISA试剂盒的符合率(81.25%),CI-ELISA与其他主要病毒的阳性血清均无交叉反应。对采自我国4个省份的290份现地血清进行CI-ELISA检测,结果273份(94.1%)为CSFV抗体阳性。

竞争抑制ELISA法检测植物中豌豆胰岛素PA1b

为研究豌豆胰岛素PA1b在植物生长发育中的作用,利用竞争抑制ELISA法,检测PA1b在豌豆、芋头、姜、西红柿、苦瓜、蒜头、洋葱、丝瓜、黄瓜等植物中的分布,以及PA1b在豌豆种子发芽过程中的含量变化。结果显示PA1b在豌豆中含量最高,且随着豌豆种子发芽时间的增加含量逐渐减少,PA1b可能对植物生长发育起调控作用。

葡聚糖多克隆抗体竞争抑制ELISA检测方法的建立

采用广州甘蔗糖业研究所和厦门大学共同研制的抗葡聚糖多克隆抗体和DEX-OVA交联的免疫原,确定了最佳的抗原包被浓度为5ug/ml,最佳的多抗工作浓度为1:8000。建立了竞争抑制ELISA定量检测葡聚糖的方法,并尝试了对原糖样本的检测。

检测牛边缘无浆体抗体的竞争抑制ELISA方法的建立

为建立检测牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)抗体的方法,本研究以牛A.marginale膜表面重组MSP5蛋白作为包被抗原,抗MSP5单克隆抗体(MAb)作为竞争抗体,建立一种用于检测牛A.marginale抗体的重组MSP5蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经优化确定CI-ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为2μg/孔,封闭液为2%脱脂乳,MAb的稀释度为1∶400,酶标二抗的稀释度为1∶1000,阴性和阳性血清临界值分别为33%和40%;该方法具有良好的特异性和重复性;2348份临床血清样品的检测结果表明,217份为阳性,阳性率为9.2%,与IDEXX A.marginale抗体检测试剂盒的阳性符合率为95.3%,阴性符合率为100%。本实验建立的ELISA方法具有较高的特异性和重复性,可用于流行病学调查研究。

竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖的含量

目的采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的含量,以替代小鼠免疫力试验方法。方法用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,并分析与小鼠免疫力试验检测结果的一致性。结果霍乱灭活疫苗中LPS的含量与疫苗保护力呈正相关。结论采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,能够反映疫苗的保护力,为进一步替代小鼠免疫力试验方法奠定了基础。

加样间隔时间对ELISA竞争抑制法检测结果的影响

目的:探讨“加样间隔时间”对酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争抑制法检测人血清HBeAb、HBcAb结果的影响。方法:随机检测91份HBeAb、HBcAb阴性的血清样本,加样后室温25℃分别放置0min、5min、10min、15min、20min、30min[1]再加入酶标抗体(HBeAb组先加中和试剂),其后严格按试剂盒说明操作。结果:0min、5min、10min、15min、20min、30min时,HBeAb组阳性率为0、3.3%、10.9%、16.5%、24.2%、37.3%;HBcAb组阳性率分别为0、4.3%、12%、18.6%、26.3%、40.6%;与加入酶结合物0min组标本A值比较,HBeAb、HBcAb均5min、10min组P>0.05,其余各组P<0.01。结论:随着加入样本与酶标抗体间隔时间的延长,HBeAb、HBcAb测定的假阳性率逐渐增加,应在加样后10min内加入酶标抗体,避免标本先与固相抗原结合引起的假阳性。

柯萨奇病毒A组16型疫苗免疫后中和抗体检测方法的比较

目的采用3种方法检测灭活的柯萨奇病毒A组16型(CA16)疫苗的免疫保护性抗体水平,旨在构建评价疫苗免疫保护的检测平台。方法 CA16候选株疫苗(3726,4430和4432)按0、4、6、8周,经腹腔接种小鼠、大鼠和豚鼠,采集0、4、6、8周和10周血样。通过竞争抑制ELISA、细胞微孔病变实验和乳鼠攻毒保护实验评估免疫血清中和抗体水平,利用SPSS16.0软件分析3种检测方法相关性。结果血清中和抗体在首次加强免疫2周后达到峰值;竞争抑制ELISA和细胞微孔病变实验测得中和效价的相关系数为0.861;竞争抑制ELISA和乳鼠攻毒保护的相关系数为0.8;细胞微孔病变实验和乳鼠攻毒保护的相关系数为0.89。结论竞争抑制ELISA检测中和抗体与"金标准"相比具有灵敏、快速、大量、低廉等特点,具有广阔的应用前景。

醋酸甲孕酮单克隆抗体的制备与鉴定

用人工合成的醋酸甲孕酮-牛血清白蛋白(MPA-BSA)作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选得到1株稳定分泌醋酸甲孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C11A3B6,该细胞株经体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。间接ELISA测定培养上清效价为1∶640,诱生腹水效价为1∶2.56×106。经鉴定:杂交瘤细胞分泌的抗体亚型为IgG2а。竞争抑制ELISA(ciELISA)检测显示其IC50为22 ng/mL,与常见抗生素及结构类似物的交叉反应小,表明该单抗具有较好的敏感性和特异性。

抗人硫氧还蛋白-1单克隆抗体的制备与鉴定及初步应用

目的:制备抗硫氧还蛋白-1(TRX-1)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:以原核表达的TRX-1为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲和力和进行表位分析,用Westernblot法对mAb的特异性进行鉴定。结果:得到筛选出3株能稳定分泌抗TRX-1的杂交瘤细胞株B6、D5和E3,免疫球蛋白亚类均为IgG1(κ),腹水mAb效价均在106以上,3株抗体分别针对不同抗原表位。用mAb建立的竞争抑制ELISA灵敏度达1.22μg/L。结论:获得3株特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗TRX-1的杂交瘤细胞株,为研究TRX-1在人类细胞、血液、组织中的表达及定位提供了可能,并为探索相关炎症、癌症发病机制及新治疗方法提供了强有力的工具。

用于变应原疫苗分析和质控的实验技术

建立和应用一种可靠的质量分析方法是所有生物制品质量和工艺一致性的保障。一种准确反应药物中特异组成成分的活性和结构,并且优化和验证了的方法,是所有生物医药领域研发和新药上市的一个核心目标。变应原疫苗是天然物质的混合物,每一种变应原疫苗含有多种活性成分和与变应原无关未知的非活性成分,其中,具有变应原活性的物质只占一小部分,而且主要变应原成分作用在患者与患者之间差异性很大。本文介绍了一种变应原疫苗分析和质控的方法,包括变应原疫苗总蛋白含量、总蛋白组分、主要致敏蛋白组成、主要致敏蛋白含量、总生物活性几方面。