小鼠红白血病细胞在半相合型小鼠体内的生物特性

把可移植性EL96 11H 2d小鼠红白血病细胞 ,接种给 (BALB/c×C5 7BL/ 6 )F1H 2d/b代 (CB6F1)小鼠并连续在CB6F1传代 ,观察红白血病细胞在半相合型小鼠体内的生物特性 ,为骨髓或造血干细胞移植中研究和观察移植物抗白血病 (GVL)作用提供实验对象。把EL96 11H 2d小鼠脾细胞经尾静脉接种给CB6F1H 2d/b小鼠 ,再把红白血病细胞在CB6F1传代接种 ,建立F1代红白血病模型。结果表明 :每只鼠在静脉接种 10 3 - 10 8个白血病细胞的情况下 ,发病率 10 0 % ;所接种的白血病细胞数量与存活时间呈线性关系 ;接种 10 6细胞的小鼠平均生存时间为 ( 9.6± 0 .8)天。在CB6F1体内连续传 4代 ,发病率 10 0 %。白血病细胞主要侵及肝、脾和骨髓组织 ,血红蛋白染色呈阳性 ,过氧化物酶反应阴性 ,对阿糖胞苷和环磷酰胺等化疗药物敏感。结论 :利用实验室常用的C5 7BL/ 6×BALB/c小鼠建立F1代小鼠红白血病模型 。

芦可替尼对人红白血病细胞免疫检查点分子表达的影响

目的:芦可替尼通过抑制酪氨酸蛋白激酶2(tyrosine protein kinase 2,JAK2)通路来抑制人红白血病(human erythroleukemia,HEL)细胞的血管新生及迁移能力,而HEL细胞中程序性死亡受体1(programmed death-1,PD-1)、程序性死亡受体配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)的表达及芦可替尼对其表达的影响尚无相关报道。本研究探讨芦可替尼对JAK2 V617F突变阳性HEL细胞增殖、凋亡以及免疫检查点分子PD-1、PD-L1表达的影响。方法:用不同浓度的芦可替尼处理HEL细胞,细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术检测HEL细胞凋亡率,荧光定量PCR检测JAK2、PD-1及PD-L1 mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测p-JAK2、PD-1、PD-L1蛋白质表达水平。流式细胞术分析淋巴细胞与HEL细胞共培养48 h后HEL细胞PD-1、PD-L1的表达和淋巴细胞PD-1的表达及调节性T细胞比例。结果:不同浓度芦可替尼能够抑制HEL细胞增殖,并与时间和剂量呈正相关。芦可替尼能够降低JAK2、PD-1、PD-L1 mRNA及蛋白质表达水平,并与时间和剂量呈正相关。结论:芦可替尼可能通过特异性抑制JAK2信号通路降低HEL细胞PD-1、PD-L1的表达。

用单倍体相合小鼠FBL-3红白血病细胞株移植建立CB6F1小鼠红白血病模型

本研究探讨建立F1代单倍体相合小鼠FBL-3红白血病模型的可行性,并观察FBL-3细胞在小鼠体内的生物学特性。将FBL-3H2-d小鼠红白血病细胞经尾静脉分别接种给小鼠C57BL/6和CB6F1H-2b/d(C57BL/6×BALB/c),观察两种小鼠的生存时间和染色体变化,并对濒死小鼠的肝、脾、肺和肾进行病理检查,部分进行电子显微镜检查。分析骨髓和脾脏细胞染色体核型及MHC分子表达情况。结果表明:静脉接种103-107个白血病细胞的情况下,C57BL/6小鼠和CB6F1小鼠发病率分别为100%和92.5%;接种的细胞数量与存活时间呈线性关系;接种相同数量FBL-3细胞的CB6F1小鼠平均生存时间较C57BL/6小鼠延长。白血病细胞主要侵及肝、脾、骨髓、肺和肾组织,糖原染色阳性、氯醋酸染色部分阳性,过氧化物酶、碱性磷酸酶、丁酸染色均为阴性。电子显微镜观察到细胞内病毒样颗粒。脾脏和骨髓细胞染色体多数为非二倍体,且H-2b表达率升高,H-2d表达率降低。结论:经尾静脉接种FBL-3细胞可以建立CB6F1小鼠红白血病模型。

移植性C57BL/6小鼠FBL-3红白血病模型的建立及其生物学特性

目的探讨利用国内传代培养的FBL-3细胞建立H-2相合C57BL/6小鼠FBL-3红白血病模型的可行性,并观察模型的生物学特性。方法把FBL-3小鼠红白血病细胞经尾静脉接种C57BL/6小鼠,观察小鼠的生存时间和染色体变化,并对濒死小鼠的肝、脾、肺和肾进行病理检查,部分进行电镜检查。结果静脉接种1×10^3-1×10^7个白血病细胞,C57BL/6小鼠发病率分别为100%;接种细胞的数量与存活时间呈线性关系;白血病细胞主要侵及肝、脾、骨髓、肺和肾组织,糖原染色阳性、氯醋酸染色部分阳性,过氧化物酶、碱性磷酸酶、丁酸染色均阴性。电镜下观察到细胞内病毒样颗粒。脾脏和骨髓细胞染色体多数为非二倍体,只表达H-2b。结论经尾静脉接种FBL-3细胞可建立C57BL/6小鼠红白血病模型。

土槿甲酸诱导人红白血病细胞凋亡的研究

目的 :探讨土槿甲酸的抗肿瘤作用机制。方法 :应用MTT法测定土槿甲酸对K5 62细胞生长抑制作用 ;荧光染色法观察细胞形态学变化 ;琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA裂解。结果 :K5 62细胞经土槿甲酸处理后MTT法检测其IC50 值为 5× 1 0 - 5M ;荧光显微镜下可见染色质凝集、碎裂、凋亡小体形成。琼脂糖凝胶电泳呈典型的“DNALadder”。结论 :土槿甲酸可诱导K5

人红白血病斑马鱼异种模型的建立

目的利用斑马鱼胚胎建立人红白血病(HEL)细胞异种移植瘤模型,提供研究血液肿瘤的体内行为和实用药物测试的模型。方法将HEL细胞分为空白组和CM-DiI组,CM-DiI组用活细胞示踪剂进行标记;取野生型斑马鱼培育繁殖,产胚后将胚胎置于28℃孵育48 h至破膜,将破膜后斑马鱼分为空白对照组、PBS实验组、HEL实验组,将CM-DiI组细胞,通过显微注射方式移植到HEL实验组斑马鱼卵黄囊中,PBS实验组注射PBS,再将三组斑马鱼置于34℃温箱培养,通过体内外增殖实验及体内荧光观察等鉴定模型是否建立成功;将鉴定成功的斑马鱼进行阿糖胞苷药物暴露,分为50、100、200 nmol/L组及模型对照组,观察各组浓度药物暴露后异种移植瘤模型中白血病细胞的增殖及迁移情况。结果 CM-Dil组与空白组HEL细胞增殖状态相近,差异无统计学意义(P>0.05);通过体内外增殖实验证实了HEL细胞在斑马鱼体内出现了增殖,而HEL实验组斑马鱼存活量相对于空白对照组和PBS实验组降低(P<0.05);三个浓度的阿糖胞苷药物暴露组相对于模型对照组细胞增殖降低(P<0.05)。结论人急性红白血病HEL细胞移植入斑马鱼胚胎后可进行增殖,且增殖活动可被阿糖胞苷干预,证实异种移植瘤模型建立成功。

雷公藤内酯醇对红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对人类红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响。方法运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果雷公藤内酯醇能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用24h时其半数抑制浓度IC50为25nmol/L。且经雷公藤内酯醇处理后K562细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用48h,其浓度的变化与K562细胞凋亡率具有相关性(r=0.97,P<0.05),而作用24h时,则无明显诱导凋亡的作用。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰K562细胞周期,上调细胞G/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。

斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的细胞学研究

目的 研究抗癌药物斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人红白血病 K5 6 2细胞凋亡的细胞学变化特点。 方法 观察药物作用后 K5 6 2细胞形态的动态变化、一般及超微结构特征 ,并用流式细胞术分析斑蝥素及去甲斑蝥素诱导 K5 6 2细胞凋亡与细胞周期的关系。 结果 2 mg/ L斑蝥素及 10 mg/ L去甲斑蝥素作用 2 4h,部分 K5 6 2细胞质膜突起 ,染色质异常凝集 ,原位复染显示这些细胞质膜的通透性没有增强 ,DNA琼脂糖凝胶电泳呈现细胞凋亡特有的“梯子”状带纹。电镜下 ,加药处理组中部分细胞染色质凝集成块 ,没有核膜包被 ,部分细胞染色质靠核膜边集呈新月形 ,胞浆浓缩 ,内质网结构正常或有扩张 ,呈现典型的凋亡细胞形态。流式细胞术分析结合细胞形态学研究表明 ,斑蝥素及去甲斑蝥素诱导 K5 6 2细胞凋亡与细胞 G2 / M期阻滞相关。 结论 斑蝥素及去甲斑蝥素能够诱导 K5 6 2细胞凋亡 ,凋亡大部分发生在细胞周期的 M期 ,也有少量发生在间期 ,是多点启动的。

103例急性红白血病患者生物学特征与疗效观察

目的:本研究总结分析急性红白血病(AEL)的生物学特征与疗效。方法:回顾性分析2009年6月至2016年5月收治的103例急性红白血病患者肝功能、乳酸脱氢酶、凝血、形态学、免疫学、细胞遗传学及分子生物学特征,通过缓解率、复发率、无复发生存及总生存等指标观察疗效。结果:白细胞、粒细胞、血红蛋白及血小板中位数分别为3.04×10~9/L、0.67×10~9/L、66 g/L及45.0×10~9/L,71.1%的患者外周血涂片可以发现有核红细胞,无1例患者出现凝血功能异常,患者主要表达:CD13(93.5%)、CD117(89.1%)、HLA-DR(87.0%)、CD34(80.0%),部分患者表达淋系抗原CD4(42.9%)及CD7(28.9%)。82例患者核型分析显示,正常核型52.4%(43/82),异常核型41.5%(34/82),检查失败6.1%(5/82)。34例异常核型中,简单异常41.2%(14/34),复杂核型58.8%(20/34)。对60例患者检测融合基因显示,阳性率为16.7%(10/60)。27例患者检测预后基因突变显示,阳性率为77.8%(21/27)。初诊急性红白血病103例中接受化疗81例,可进行疗效分析66例。2个疗程累积缓解率45.5%(30/66),复发率36.7%(11/30),中位复发时间15.5(6.2-50)个月。可进行疗效分析66例患者中位生存时间为29个月。CR(30例)患者截至随访结束未达中位生存时间,明显优于未获CR(36例)患者12个月(P=0.001)。CR患者5年生存率65%,无复发生存(RFS)中位时间46.2个月,3年RFS为58%。结论:AEL患者具有高表达CD34抗原、多为复杂核型等生物学特点。虽然AEL患者缓解率低,生存期短,但缓解患者人群具有较好的长生存及良好的生存质量。

蝌蚪提取液对小鼠红白血病细胞分化的诱导作用

蝌蚪提取液（Ｔ－８７１）与ＤＭＥＭ培养基按１：５０（ｖ／ｖ）混合制成Ｔ－８７１培养基。作为研究分化模型的小鼠红白血病细胞（ＭＥＬ）培养于Ｔ－８７１培养基中。结果发现Ｔ－８７１诱导ＭＥＬ发生终末分化，即在其胞质中有血红蛋白合成。用流式细胞仪（ＦＡＣＳ－４２０）分析经Ｔ－８７１培养的ＭＥＬ，证明其Ｐ（５３）蛋白含量降低。由于Ｐ（５３）蛋白是细胞由Ｇ１期转变为Ｓ期所必需的，所以本研究认为ＭＥＬ中Ｐ（５３）蛋白含量降低可能导致细胞周期中Ｇ０＋Ｇ１期细胞的积累和Ｇ２＋Ｍ期细胞的减少。

Fr. MuLV小鼠红白血病模型的建立及叠氮胸苷抗病毒作用的研究

目的应用Friend鼠白血病病毒(Friend murine leuke-mia virus,Fr. MuLV)建立小鼠红白血病模型,并在此模型上观察抗逆转录病毒药物叠氮胸苷(Zidovudine,AZT)的治疗作用。方法用Fr.MuLV感染BALB/c小鼠。以RT-PCR法测定脾脏病毒载量;血常规分析白细胞(WBC)、血红蛋白(Hbg)及血小板(PLT)变化;镜检计数外周血及骨髓有核细胞。结果与正常对照组相比,模型组小鼠脾脏病毒载量、WBC和Hbg明显升高;外周血及骨髓中红系和非红系均出现大量原始和幼稚细胞,骨髓中非红系原始细胞(NEC)计数≥0.30,有核红细胞≥0.50;AZT治疗组上述指标明显改善。结论用Fr.MuLV感染BALB/c小鼠成功建立小鼠红白血病模型,AZT在此模型上显示出良好的抗病毒作用。

粉防己碱诱导人红白血病细胞凋亡的研究

目的 探讨粉防己碱诱导人红白血病细胞 (K56 2 )凋亡的作用。 方法 采用光镜、电镜、免疫荧光观察K56 2 细胞形态的改变 ,以流式细胞仪分析细胞周期 ,以ABC法检测细胞中Bcl 2和p5 3蛋白的改变 ,以TUNEL法检测细胞凋亡。 结果 K56 2 细胞经粉防己碱诱导 4 8h后 ,出现细胞凋亡早期形态学改变 ;流式细胞仪显示细胞DNA合成受到抑制 ;ABC法检测出细胞中Bcl 2水平降低和p5 3水平升高 ;TUNEL法原位检测揭示有DNA断裂。结论 粉防己碱可抑制K56 2 细胞的生长 ,其作用与浓度相关 。

FTIR对TFAR19基因促红白血病MEL细胞凋亡作用的研究

采用 FTIR方法 ,研究了 TFAR19基因转染前后 ,小鼠红白血病 MEL 细胞内重要组分的变化。经脂质体介导基因转染 ,获得了稳定携带 TFAR19基因的 MEL- TF19细胞 ,RT- PCR检测表明 ,该基因在 m RNA水平有表达 ;撤除血清诱导凋亡 ,在此过程中进行了 FTIR检测 ,结果显示 :转染 TFAR19基因后 ,细胞内蛋白质相对核酸的含量增高 ,细胞转录活性增强 ,细胞内磷脂的相对含量降低。所有这些变化都反映了 TFAR19基因的促凋亡作用 。

红白血病——骨髓增生异常综合征的一种亚型?

为了研究红白血病是否为急性髓细胞白血病一个独立亚型,从临床实验及病程进展方面对21例红白血病患者进行了分析。结果显示,诊断时患者合并白细胞减少、贫血和血小板减少者分别为42.9%、81%、81%。外周血分类显示85.7%患者有幼稚粒细胞和幼稚单核细胞,52.4%患者有幼稚红细胞和有核红细胞;骨髓涂片显示骨髓增生活跃或明显活跃;红系细胞占58.3±8.0%,原始粒细胞占NEC58.0±18.4%;66.7%患者有病态造血,与典型AML不同。在病程中52.4%患者发生疾病转型,转为RAEB/RAEB-T和AML-M2,19例在确诊M6后接受化疗,11例有效(57.9%),其中CR10例、PR1例,CR中位维持6个月、PR2个月,但CR患者绝大多数伴有骨髓病态造血,外周血细胞减少。中数生存期在初诊M6和MDS转化为M6组分别为13.0±13.3和2.3±1.3月。结论:临床诊断急性红白血病与典型AML有许多差异,可能大部分是以红系过度增生为表现的MDSRAEB和RAEB-T型。

不同时期应用细胞瘤苗对红白血病荷瘤小鼠抗瘤作用的研究

目的:探讨不同时间应用细胞瘤苗对红白血病荷瘤小鼠的抗瘤作用。方法:在不同时间内应用瘤苗免疫治疗红白血病荷瘤小鼠,观察小鼠生存期,皮下肿瘤大小及肿瘤、注射部位病理变化。结果:3天、7天瘤苗治疗的小鼠生存期延长,皮下肿瘤生长缓慢,病理可见瘤组织坏死及大量以单个核细胞为主的炎细胞浸润,与PBS组及10天瘤苗组相比,有显著性差异。结论:3天、7天瘤苗比10天瘤苗组抗肿瘤作用强。

EL9611红白血病小鼠急性GVHD动物模型的建立

目的:建立EL9611红白血病小鼠急性移植物抗宿主病(GVHD)的动物模型。方法:同种异基因骨髓移植(allo-BMT)以C57BL/6(H-2b)鼠为供鼠,BALB/c(H-2d)为受鼠。设白血病组(n=10)、照射对照组(白血病鼠照射后不进行allo-BMT,n=4)、GVHD组(白血病鼠照射+allo-BMT,n=10)及正常对照组(n=4)。白血病组采用每只BALB/c鼠尾静脉输注2×106个EL9611红白血病细胞建立红白血病动物模型;GVHD组于接种白血病细胞7 d后行总剂量为8.0 Gy的1次性[60Co]γ射线全身照射(TBI),照射后5 h内每只小鼠尾静脉输注C57BL/6鼠骨髓细胞2×106个+脾细胞1×107个,建立EL9611红白血病小鼠的急性GVHD动物模型。观察小鼠体位、皮毛、大便等临床表现,病理检查肝脾、皮肤、小肠、外周血和骨髓,计算生存率。结果:白血病组生存时间(14.5±2.1)d[从照射当天(第0 d)算起为(7.5±0.7)d],生存时间与GVHD组相比P<0.01,死亡率100%,无自发缓解,死亡时肝脾肿大(肝重2.40 g±0.48 g,脾重0.84 g±0.20 g,与正常对照组比P<0.01),外周血WBC升高[死亡前(3.33±0.27)×1010/L,与正常对照组比P<0.05],病理检查示组织正常结构破坏,白血病细胞浸润。照射对照组生存时间为(9.0±0.7)d,生存时间与GVHD组和正常对照组相比差异显著(P<0.01),死亡率100%,病理检查显示造血衰竭。GVHD组生存时间为(32.0±3.2)d,生存时间与其它各组相比P<0.01,死亡率100%,allo-BMT后第10-13 d出现症状,临床表现和病理检查符合Ⅰ到Ⅱ度GVHD的改变。结论:采用EL9611红白血病细胞(2×106/鼠)静脉输注的方式可成功建立EL9611红白血病动物模型;接种EL9611红白血病细胞第7d行TBI+allo-BMT可成功建立EL9611红白血病小鼠的急性GVHD动物模型。

黑木耳多糖对人红白血病K562细胞周期和凋亡的影响

目的:观察黑木耳多糖(Auricularia auricula polysaccharide,AAP)体外对人红白血病K562细胞的抗肿瘤作用及其机制。方法:将K562细胞与AAP以及AAP作用于体外培养人外周血单个核细胞(PBMCs)的上清液培养,用MTT法检测K562细胞增殖和流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。结果:AAP对K562细胞没有显示直接的细胞毒作用,但AAP作用的PBMC上清液能显著抑制K562细胞的增殖,抑制率最大可达49.68%;AAP作用的PBMCs上清液能使G0/G1期细胞显著增加(P<0.05,P<0.01);200μg/mL到800μg/mL浓度AAP刺激的PBMCs上清液能显著诱导K562细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),其凋亡率可达24.70%。结论:AAP通过激活免疫细胞抑制肿瘤细胞生长,诱导其凋亡并使细胞阻滞于G0/G1期。

急性红白血病的生物学特征与临床疗效研究

本研究探讨急性红白血病(AML-M6)的生物学特征与临床疗效的关系。对29例M6初治患者细胞形态学、免疫表型和染色体核型进行回顾性分析并观察临床化疗效果,同时随机抽取30例AML-M2(急性粒细胞白血病部分分化型)作为对照。结果表明:M6患者的外周血中均可见幼稚细胞(2%-10%)及有核红细胞,骨髓穿刺细胞学检查显示19例伴有多系细胞发育异常,累及二系细胞或三系细胞。流式细胞术检测表明,M6Gly-A(血型糖蛋白A)的表达率高达(66.67±23.86)%,明显高于其在M1,M2,M3,M4和M5中的阳性表达率(P<0.01)。M6高表达HLA-DR[(60.00±24.79)%],CD34[(40.00±24.79)%],CD38[(33.33±23.86)%],髓系抗原主要表达CD13[(66.67±23.86)%],MPO[(33.33±23.86)%],CD33[(46.67±25.25)%],CD15[(33.33±23.86)%],CD117[(46.67±25.25)%]。部分病例伴有淋系抗原的表达,如CD3、CD4、CD19,其中CD4的表达高达26.67%。M6中CD38、CD33、CD15、MPO的阳性表达率低于M2患者。9例M6患者染色体的检查显示,4例存在核型异常,异常率达44.44%,其中复杂核型异常1例。M6患者化疗完全缓解率为29.41%,低于M2患者化疗完全缓解率(68.18%,P<0.01)。结论:Gly-A是鉴别M6与其他亚型急性髓性白血病的一个重要标志,M6有自己独特的生物学表型,其化疗效果不佳可能与其生物学特征有关。

胡椒碱诱导人红白血病细胞株K562的分化

背景与目的:白血病是一种血液系统的恶性肿瘤,诱导分化是治疗白血病非常有效的方法之一。胡椒碱(piperine)是一种从胡椒属植物中提取的生物碱,具有镇静、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。本研究旨在探讨胡椒碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法:采用台盼蓝染色计数法绘制生长曲线和流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,观察胡椒碱对K562细胞增殖的影响;通过观察细胞形态学变化、检测硝基蓝四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力、流式细胞术检测细胞表面标志CD33和CD14的变化,探讨胡椒碱对K562细胞的诱导分化作用。结果:20μmol/L和40μmol/L胡椒碱可诱导K562细胞向巨噬细胞和单核系细胞分化。40μmol/L胡椒碱作用3d,K562细胞的NBT还原阳性率由(8.5±1.9)%上升到(76.7±5.3)%;20μmol/L胡椒碱作用3d,流式细胞术结果显示细胞表面分化抗原CD33的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)下降42.05%(P<0.01),而CD14的MFI则升高了1倍(P<0.01);20μmol/L以上浓度的胡椒碱对K562细胞的增殖具有抑制作用,其抑制作用随时间的延长或剂量的增加有增强的趋势。结论:胡椒碱可诱导K562细胞向巨噬和单核系细胞分化。

地西他滨联合改良CAG方案治疗急性红白血病4例

目的了解地西他滨联合阿柔比星(Acla)+阿糖胞苷(Ara-C)+重组人粒细胞刺激因子(G-CSF)的方案(DCAG)治疗急性红白血病(AML-M6)的疗效及不良反应。方法应用地西他滨联合CAG方案化疗,治疗4例急性红白血病患者:地西他滨20 mg/m2,1次/d,5 d;重组人粒细胞刺激因子300μg,1次/d,使用时间为化疗前1 d至中性粒细胞恢复;阿糖胞苷10 mg/m2,1次/12小时,5 d;阿柔比星20 mg,第1、3、5天使用。观察疗效及不良反应。结果 4例急性红白血病患者中,2例完全缓解(CR),2例部分缓解(PR),治疗过程中不良反应轻微,病人可耐受。结论 DCAG方案治疗急性红白血病缓解率好,不良反应轻,可以作为急性红白血病诱导化疗的备选方案。