三频谱点的人体细胞内外液研究方法

通过对人体细胞内液和细胞外液这两个参数的特征分析可以预测或诊断人体的某些疾病。应用传统的生物电阻抗谱分析法计算这两个值时,需要用到几百甚至几千个频率点的人体生物电阻抗数据,数据的采集和处理都极为复杂。基于Cole-Cole理论提出了三频谱点法与Moissl方程相结合的人体细胞内、外液研究方法。该方法只需要采集和应用3个频率点的生物电阻抗值,就可以提取出生物电阻抗参数,进一步计算出细胞内液和细胞外液。实验结果表明,方法与常用的生物电阻抗谱分析法得到的结果相吻合,且采集数据和处理数据耗时仅为传统方法的12.73%。

共聚焦显微技术分析卡维地洛对人心房肌细胞内钙离子的影响

目的:研究卡维地洛对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人心房肌细胞内钙超载的拮抗作用。方法:急性分离单个人心房肌细胞。实验分4组:正常对照组; AngⅡ组:加入终浓度为0.1μmol/L的AngⅡ;卡维地洛组:加入终浓度为1μmol/L的卡维地洛; AngⅡ+卡维地洛组:卡维地洛1μmol/L与AngⅡ0.1μmol/L同时加入。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入干预药物后即刻与15 min检测[Ca2+]i变化。结果:对照组和卡维地洛组人心房肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低。AngⅡ加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15 min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著增高(P<0.05)。而AngⅡ+卡维地洛组细胞内荧光光密度值显著低于AngⅡ组(P<0.05)。结论:AngⅡ可引起人心房肌细胞内Ca2+超载,卡维地洛能显著减轻AngⅡ诱导的人心房肌细胞内Ca2+超载。

大鼠增龄过程中下丘脑-垂体-性腺轴细胞内游离钙改变

目的:探讨下丘脑-垂体-性腺轴细胞内游离钙随年龄增长的变化规律。方法:实验于2001-07/12在解放军第三军医大学药理教研室完成。检测3,6,12,18,21月龄Wistar大鼠90只分成了3(青年),6(成年),12(中年),18(老年前期),21(老年)月龄组,每组16只。下丘脑、垂体、卵巢(雌性)、睾丸(雄性)细胞内游离钙水平,与上一月龄组指标作比较。结果:90只大鼠均进入结果分析。①随月龄增加,下丘脑和垂体细胞内游离钙逐渐增加。3月龄、6月龄、12月龄、18月龄和21月龄下丘脑细胞内游离钙水平分别为(137±13),(140±21),(197±18),(240±28)和(243±21)nmol/L;垂体细胞内游离钙水平分别为(110±19),(117±18),(159±21),(199±22)和(203±14)nmol/L;其中12月龄组与6月龄组、18月龄组与12月龄组差异有显著性(t=5.096～8.291,P<0.05～0.01)。②随月龄增加,卵巢和睾丸细胞内游离钙逐渐增加。3月龄、6月龄、12月龄、18月龄和21月龄卵巢细胞内游离钙水平分别为(101±17),(108±23),(145±19),(188±29)和(221±28)nmol/L;睾丸细胞内游离钙水平分别为(190±21),(192±22),(238±17),(289±26)和(311±20)nmol/L;其中12月龄组、18月龄组和21月龄组与上一月龄组比较,差异均有显著性(t=2.276～5.973,P<0.05～0.01)。结论:随月龄的增长。

狼疮性肾炎合并足细胞内陷性肾小球病1例并文献复习

足细胞内陷性肾小球病(podocytic infolding glomerulopathy,PIG)是一种罕见的肾脏病变,其特征是足细胞内折叠进入肾小球基底膜,导致在增厚的肾小球基底膜内形成微球和(或)微管。目前已知的病例绝大多数来自于亚洲,且常与系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病相关。本文报道1例Ⅱ型狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)重复活检后诊断为膜性伴增生性LN合并PIG的中年女性患者,并进行文献复习。

基于光照模型的细胞内镜图像不均匀光照校正算法

细胞内镜需实现最大倍率约500倍的连续放大成像,受光纤照明及杂散光的影响,其图像存在不均匀光照,且光照分布会随放大倍率的变化而变化。这会影响医生对病灶的观察及判断。为此,本文提出一种基于细胞内镜光照模型的图像不均匀光照校正算法。根据图像信息由光照分量和反射分量组成这一基础,该算法通过卷积神经网络学习图像的光照分量,并基于二维Gamma函数实现不均匀光照校正。实验表明,经本文方法进行不均匀光照校正后,图像的光照分量平均梯度和离散熵分别为0.22和7.89,优于自适应直方图均衡化、同态滤波和单尺度Retinex等传统方法以及基于深度学习的WSI-FCN算法。

脑热清对小鼠的腹腔巨噬细胞内游离钙及活性氧的作用

目的:实时监测脑热清口服液(NRQ)对小鼠腹腔巨噬细胞内活性氧(ROS)及游离钙([Ca2+]i)的作用. 方法:取小鼠腹腔巨噬细胞,原代培养24小时,分别以荧光探针二氯荧光素二酯(H2 DCFDA)和Fluo-3-AM标记细胞内ROS及[Ca2+]i,并用EDTA和维拉帕米螯合细胞外钙,阻断细胞膜钙离子通道,通过激光共聚焦显微系统动态观察NRQ的作用.

剪切力作用下巨噬细胞和间充质干细胞内皮向分化的相互作用

目的损伤血管会发生局部力学环境变化,巨噬细胞会大量浸润,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可归巢至局部参与早期再内皮化修复,本文主要研究剪切力作用下巨噬细胞和间充质干细胞内皮向分化的相互作用。方法采用transwell直接共培养巨噬细胞和MSCs,通过RT-PCR和免疫组化技术检测细胞表达内皮细胞相关因子基因和蛋白的情况,利用流式细胞术检测巨噬细胞的表型。使用脂多糖、干扰素-γ和白细胞介素4分别诱导获得高纯度M1、M2型巨噬细胞,提取其培养上清制备条件培养基,探究间接共培养下巨噬细胞对MSCs向内皮细胞方向分化的影响。利用实验室自制的细胞力学生物学实验系统加载剪切力,研究剪切力作用下巨噬细胞和间充质干细胞内皮向分化的相互作用。结果直接共培养下,巨噬细胞可以促进MSCs表达内皮细胞相关的基因和蛋白,同时,巨噬细胞自身向M2表型极化。间接共培养下,M1型和M2型巨噬细胞均可以促进MSCs内皮向分化,其中M2型巨噬细胞的促进效果更显著,与间接共培养作用的促进效果无显著差异。剪切力条件下,M2型巨噬细胞可以更好地促进MSCs向内皮细胞方向分化,尤其是较高剪切力组。结论剪切力可以影响巨噬细胞和间充质干细胞内皮向的相互作用,但其规律和机制有待进一步深入研究。

4-苯基丁酸通过核转录因子-κB通路减轻滋养细胞内质网应激

目的探讨4-苯基丁酸(4-PBA)减轻内质网应激的信号通路。方法采用永生化的滋养细胞株HTR-8/Svneo为研究对象,建立内质网应激模型,加入4-苯基丁酸进行培养后,采用蛋白免疫印迹法比较质网应激特异性分子GRP78、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达。同样的方法检测核转录因子(NF)-κB,caspase-3,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达。结果随着4-PBA浓度增加,内质网应激特征蛋白的表达量下降,各不同浓度之间表达量相比较,差异具有统计学意义。培养基中加入不同浓度的4-PBA进行培养后检测NF-κB的表达量随着4-PBA浓度的增加,NF-κB的表达量下降,差异具有统计学意义。结论4-苯基丁酸通过NF-κB通路减轻滋养细胞内质网应激。

黄芪甲苷对人外周血单个核细胞内HBV表达的影响

目的:探索黄芪甲苷对乙肝后肝硬化患者外周血单个核细胞(PBMC)内HBV表达的影响。方法:选取2019年2月—2022年2月于江西省人民医院就诊的20例乙肝后肝硬化患者,分离并培养外周血单个核细胞,依据培养液所含药物类型分为对照组、拉米夫定组、黄芪甲苷组。拉米夫定组和黄芪甲苷组又根据药物终浓度各分为低、中、高浓度3个亚组。培养1周后,分别检测各组HBsAg、HBeAg、HBV-DNA、HBV-cccDNA表达。结果:与对照组相比,黄芪甲苷各浓度组HBsAg表达量均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);黄芪甲苷各浓度组HBeAg表达量无统计学差异(P>0.05),黄芪甲苷低浓度组HBV-DNA表达量无统计学差异(P>0.05),黄芪甲苷中、高浓度组HBV-DNA表达量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),黄芪甲苷各浓度组HBV-cccDNA表达量无统计学差异(P>0.05)。与对照组相比,拉米夫定各浓度组HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达量均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);拉米夫定低浓度组HBV-cccDNA表达量无统计学差异(P>0.05),拉米夫定中、高浓度组HBV-cccDNA表达量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。Spearman检验分析提示黄芪甲苷浓度与HBsAg、HBeAg、HBV-DNA、HBV-cccDNA表达量呈线性负相关,其中与HBsAg、HBV-DNA的负相关性有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪甲苷能够在一定程度上抑制乙肝后肝硬化患者PBMC中HBV的复制,能为解决肝移植术后HBV复发提供新的治疗思路。

ALL患儿大剂量甲氨蝶呤化疗和亚叶酸解救治疗期间红细胞内叶酸和甲氨蝶呤代谢的变化

目的 探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)儿童在给予大剂量甲氨蝶呤(HDMTX)化疗和亚叶酸(LV)解救后红细胞(REC)内叶酸(FA)和甲氨蝶呤(MTX)代谢产物的变化。方法 2021年5月至2022年12月,前瞻性测定72例ALL儿童在HDMTX开始前(T0)和LV解救停止后(T1)红细胞内叶酸(REC-FA)和REC内MTX聚谷氨酸盐(REC MTX-PG_(2-5))的水平。结果 在T0和T1之间,REC MTC-PG_(2-5)和REC-FA水平显著增加(P<0.001),ΔT1-T0值分别为180.50(79.50,362.00)nmol/L和92.52(60.96,117.01)nmol/L;这是由于5-甲基四氢叶酸(THF)水平增加(P<0.001),其ΔT1-T0值为172.50(76.50,361.00)nmol/L,而非甲基THF水平没有变化(P>0.05)。REC-FA在T0和T1之间增加(P<0.001),结果不受年龄、性别、MTHFR677C>T基因型、ALL表型和T0血浆FA水平的显著影响。MTX诱导的≥3级口腔粘膜炎与REC MTX-PG_(2-5)ΔT1-T0更高以及REC 5-甲基THF、REC-FA水平和REC-FA/REC MTX-PG_(2-5)ΔT1-T0更低有关(P<0.05)。结论 ALL儿童经HDMTX化疗和LV解救治疗后,REC-FA水平积累,表明LV可恢复细胞内叶酸库;另一方面REC-FA水平的增加似乎对REC内MTX水平没有太大影响。

电针预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤细胞内Ca^(2+)变化的影响

目的 :探讨重复电针预处理诱导缺血耐受对脊髓缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法 :76只雄性新西兰大白兔随机分成 4组 :对照组 (C组 ) ,戊巴比妥钠组 (SP组 ) ,假手术组 (S组 ) ,电针预处理组 (EA组 )。最后一次预处理后 2 4h ,阻闭肾下腹主动脉 ,制作兔脊髓缺血模型 ;S组动物手术操作同C组 ,但不阻闭腹主动脉。分别于阻闭后不同时相点测定细胞内Ca2 + 含量 ,并分别对动物后肢运动功能评分。结果 :EA组脊髓组织细胞内Ca2 + 含量显著低于C组和SP组各时相值 (P <0 0 1) ,神经功能评分EA组明显高于C组 (P <0 0 1) ,C组和SP组细胞内Ca2 + 和神经功能评分无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :电针预处理具有降低脊髓组织细胞内Ca2 + 含量 ,防止Ca2 + 超载 ,稳定细胞内环境的能力 ,对腹主动脉阻断所致的脊髓缺血再灌注损伤具有良好的保护作用。

RNA测序观察低氧培养环境下卵巢癌细胞内管家基因表达的变化

卵巢癌是危害女性健康的主要恶性肿瘤之一。阐明卵巢癌发生和进展的分子机制有助于提升卵巢癌诊断与治疗水平。明确卵巢癌细胞在不同病理与生理条件下差异基因表达模式是研究其分子机制重要途径。实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)是一种快速有效的检测细胞内基因表达水平的技术^([1])。在基因表达分析中,需要控制不同样本之间总体转录活性差异的变量,使用内部控制(参考)基因是最常用的方法。

血清铁调素结合红细胞内游离原卟啉水平对缺铁性贫血的诊断效能

目的 探讨血清铁调素结合红细胞内游离原卟啉(FEP)水平对缺铁性贫血的诊断效能。方法 选择2022年3月-2023年4月昆山市第一人民医院收治的85例缺铁性贫血患者为研究组,另选择医院同时间段体检健康人群53例为对照组。对比研究组与对照组血清铁调素、FEP水平,对比不同程度缺铁性贫血患者血清铁调素、FEP水平,分析血清铁调素、FEP水平及二者联合对缺铁性贫血的诊断效能。结果 研究组平均红细胞体积(MCV)、红细胞计数(RBC)、平均血红蛋白量(MCH)水平比对照组低(P<0.05),而研究组红细胞分布宽度(RDW)水平比对照组高(P<0.05);重度贫血组血清铁调素水平低于轻度贫血组、中度贫血组(P<0.05),中度贫血组血清铁调素水平低于轻度贫血组(P<0.05);重度贫血组血清FEP水平高于轻度贫血组、中度贫血组(P<0.05),中度贫血组血清FEP水平高于轻度贫血组(P<0.05);血清铁调素、FEP水平及二者联合诊断缺铁性贫血的曲线下面积(AUC)值分别为0.778、0.774、0.906(P<0.05),且二者联合诊断的AUC值更高(P<0.05)。结论 血清铁调素、FEP水平可用于诊断缺铁性贫血,且二者联合具有更高的诊断效能。

尼克酰胺转甲基酶通过介导细胞内活性氧影响肝癌细胞铁死亡的作用研究

目的探究尼克酰胺转甲基酶介导细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)在肝癌细胞铁死亡中的影响及其机制。方法选取2019年3月至2020年2月于笔者医院接受治疗的40例原发性肝细胞癌患者作研究对象,分别取患者的癌旁组织标本及肝癌组织标本。使用串联液相质谱仪检测细胞中甲基尼克酰胺(methyl nicotinamid,MNA)表达,使用流式细胞仪检测ROS及过氧化脂质的平均荧光强度,采用蛋白质印迹法(Western blot)法检测人肝癌细胞(SK-Hep-1、Hep3B)细胞表达的情况变化。采用免疫组化法检测癌旁组织、肝癌组织中尼克酰胺转甲基酶(nicotinamide N-methyltransferase,NNMT)及ROS水平,采用CCK-8法检测不同铁浓度细胞的生存活性。结果肝癌组织组中的MNA水平较癌旁组织组有所提升差异有统计学意义(P<0.05)。与癌旁组织组比较,肝癌组织组的ROS平均荧光强度表达升高,过氧化脂质平均的荧光强度表达降低,SK-Hep-1、Hep3B细胞表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,NNMT组2、10、20及25μmol/L的细胞生存活性水平升高(P<0.05)。与NNMT组比较,铁抑制组不同铁浓度(2μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、25μmol/L)的细胞生存活性表达下降差异有统计学意义(P<0.05)。结论经尼克酰胺转甲基酶介导可引导产生ROS及能量紊乱,提高了肿瘤细胞的死亡率。

齐墩果酸诱导Jurkat细胞凋亡及对ROS和细胞内Ca^(2+)含量的影响

目的探讨齐墩果酸对白血病Jurkat细胞株增殖抑制和诱导凋亡作用,分析凋亡发生与细胞内活性氧(ROS)及钙离子浓度([Ca2+]i)变化的关系。方法应用MTT法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期;DCFH-DA荧光定量法检测ROS含量;Fluo-3AM荧光负载方法测定[Ca2+]i的变化。结果齐墩果酸对Jurkat细胞的增殖具有浓度依赖性和时间依赖性抑制作用,0,40,80,160μmol/L齐墩果酸作用24 h细胞凋亡率分别为(7.36±0.40)%、(19.80±1.59)%、(29.39±0.64)%、(34.72±0.94)%,G0/G1期细胞比例分别为(54.26±1.43)%、(85.83±0.91)%、(91.18±1.32)%、(92.90±1.19)%。80μmol/L和160μmol/L齐墩果酸处理24 h,细胞中ROS和[Ca2+]i水平均明显高于对照组(P<0.05),ROS和[Ca2+]i水平均与细胞凋亡率呈正相关(r分别为0.95、0.97)。结论细胞中ROS和Ca2+可能参与了齐墩果酸对Jurkat细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用。

细胞内活性氧在甲基乙二醛促人腹膜间皮细胞分泌血管内皮生长因子中的作用

目的:观察葡萄糖降解产物甲基乙二醛(MGO)对人腹膜间皮细胞(HPMC)分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响及细胞内活性氧(ROS)在其中的作用。方法:分别用不同浓度的MGO及抗氧化剂N-酰-L-半胱氨酸(NAC)作用于细胞,用RT-PCR和ELISA方法测定HPMC中VEGF的表达;再以氧化敏感的荧光染料2、7-二氢二氯荧光素(DCFH)染色,流式细胞仪测定细胞内ROS强度。结果:MGO能使细胞内ROS水平明显升高,呈浓度依赖效应;MGO同时以时效和量效方式促进HPMC中VEGF的表达;而NAC能够明显抑制MGO导致的细胞内ROS升高,同时抑制HPMC中VEGF的分泌。结论:MGO可能部分通过诱导细胞内ROS,促进HPMC表达VEGF,从而引起腹膜新生血管的增加,最终导致腹膜失超滤现象。

全麻机制研究——细胞内钙离子信号通路研究进展

全身麻醉药物的分子作用机制及细胞作用机制虽不明确,但是其对神经递质释放的影响已经达到共识:一方面全身麻醉药物分子与离子通道蛋白或突触蛋白直接作用可以改变神经递质的释放,另一方面也可能通过改变细胞内信号通路而影响神经递质的释放。作为细胞内的重要信使,钙离子浓度([Ca2+]i)受到钙内流系统、钙外流系统及内质网等多方面调节,而存在于这些调节通路的蛋白受体大多数被证明是全身麻醉药物的潜在作用位点。细胞内钙离子最终影响细胞兴奋性和神经递质的释放的重要作用,使得全身麻醉药物调节[Ca2+]i成为研究全麻机制的重要方面。

脂质纳米粒递送DNA细胞内转运过程

通过PCR和免疫荧光技术实现生物素-链霉亲和素-异硫氰酸荧光素标记核酸,同时用0.1%(摩尔百分比)ATTO 647 DOPE标记LNP(SM-102∶DSPC∶Cholesterol∶PEG2000-DMG=50∶10∶38.5∶1.5,摩尔百分比),对制成的LNP-DNA制剂的理化性质及包封进行考察,并进行了体外细胞(Hela)实验,使用特异性抗体标记内涵体/溶酶体等内吞途径中相关囊泡,在倒置荧光显微镜或高内涵显微镜下考察LNP内吞过程及其在细胞内的转运情况。以GFP表达质粒作为递送货物,考察转染后绿色荧光蛋白表达效率。结果表明,祼DNA在被细胞内吞后,在细胞外周和表面形成内涵体颗粒且不会被进一步转运到细胞内。转染时间是影响LNP-DNA转染效率的主要因素之一,LNP-DNA通过内吞途径进入细胞,大部分被早期内涵体摄取形成LNP-DNA内涵体,随后转运至细胞核周围,部分转运至溶酶体,转运过程实现DNA的逃逸。

大鼠下丘脑薄片视上核神经元的细胞内生物电记录

从成年Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠用振动切片机制备含有视上核的下丘脑冠状薄片（５００μｍ厚），并对视上核神经元（ｎ＝１７）进行常规细胞内生物电记录。测得静息电位－６０±８ｍＶ，膜输入电阻１７３±５８ＭΩ，时间常数１０．２±３．９ｍｓ，动作电位幅度６５±１２ｍＶ，阈电位－４４±７ｍＶ，由Ｉ─Ｖ曲线测得斜率电阻１５８±６２ＭΩ，大部分细胞还显示内向整流特性。在静息电位状态下，５７％细胞保持静息，４３％有自发锋电位发放。细胞的锋电位发放模式７８％为时相型，２２％为持续型。外源性去甲肾上腺素（ｎ＝７）或谷氨酸钠（ｎ＝５）可引起伴有膜电阻减小的去极化反应，并可导致锋电位的串发放。

铁离子对Caco-2细胞内钙离子转运的影响及钙离子浓度变化与细胞凋亡关系的研究

目的 研究细胞外铁离子(Fe3+)浓度变化对钙离子(Caco 2)细胞内Ca2+转运的影响及细胞内钙离子 浓度升高与Caco 2细胞凋亡的关系。 方法 采用激光共聚焦扫描显微镜和流式细胞技术进行观察与检测。 结果 (1)利用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察发现,随着Caco 2细胞外Fe3+浓度的减少(DFO终浓度为100～ 300μmol L),Ca2+向细胞内的转运量增加;而随着细胞外Fe3+浓度的增加(FAC终浓度为10～100μmol L),Ca2+向细 胞内的转运呈降低趋势;(2)经A23187和Fluo 3 AM处理后Caco 2细胞的存活率较高,达90%以上(用荧光素二醋酸 酯检测);(3)A23187升高Caco 2细胞的胞内Ca2+浓度,呈剂量依赖性;经流式细胞技术(FCM)检测发现胞内Ca2+浓度 增加具有诱导Caco 2细胞凋亡的作用。 结论 Caco 2细胞外Fe3+浓度的减少有促进Ca2+向细胞内转运的作用, 但胞外Fe3+浓度增加时有抑制Ca2+向胞内转运的作用;胞内Ca2+浓度增加对Caco 2细胞凋亡具有诱导作用。