尿路感染细胞实验中庆大霉素对尿路致病大肠杆菌的杀伤作用及细胞毒性研究

目的在尿路感染体外细胞实验中,比较不同浓度庆大霉素(0、10、20、50、100、200μg/mL)对尿路致病大肠杆菌(UPEC)的杀伤作用,对尿路上皮细胞及炎性细胞如巨噬细胞的毒性作用。方法比较不同浓度庆大霉素对不同量UPEC J96菌株(10^(8)、10^(7)、10^(6))的杀伤情况;CCK-8实验检测不同浓度庆大霉素在不同时间内(2 h或24 h)对原代培养的C57BL/6雄鼠肾小管上皮细胞、腹腔巨噬细胞、人膀胱上皮细胞系J82的毒性作用;根据实验选择合适的庆大霉素浓度和作用时间,检测J96对小鼠肾小管上皮细胞的黏附、入侵以及小鼠巨噬细胞对J96的吞噬、清除作用。结果庆大霉素(≥10μg/mL)对J96的杀伤作用均强于1%的青霉素/链霉素双抗(P<0.0001),高浓度庆大霉素(≥100μg/mL)可在30 min内完全杀伤高达10^(8)的J96。50μg/mL庆大霉素作用2 h可对人膀胱上皮细胞系J82产生毒性作用(P<0.05)。结论本文明确了不同细胞体外实验时适宜的庆大霉素处理浓度及时间,人膀胱上皮细胞系J82对庆大霉素更为敏感。

基于京尼平结构的衍生物设计与合成及其对HepG2细胞毒性的研究

目的:设计并合成一系列基于京尼平结构的环烯醚萜类衍生物,并探讨其对HepG2细胞的毒性作用,为寻找具有肝保护作用的药物提供一定的理论指导。方法:以京尼平为起始物,以三氟化硼乙醚为催化剂,在低温无水无氧体系下与低碳醇(甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇)进行S_(N)1取代反应,获得的产物经^(1)H-NMR进行结构表征;采用CCK-8法评价化合物对HepG2细胞的细胞毒性,并以谷胱甘肽为阳性对照,以IC_(50)值表示其毒性强弱。结果:设计并合成了6个京尼平衍生物,分别是1-O-甲基京尼平、1-O-乙基京尼平、1-O-正丙基京尼平、1-O-异丙基京尼平、1-O-正丁基京尼平、1-O-叔丁基京尼平,经^(1)H-NMR表征其结构正确。细胞实验显示,谷胱甘肽的IC_(50)值>1 000μmol/L,京尼平的IC_(50)值为(558.70±22.81)μmol/L,1-O-正丙基京尼平、1-O-正丁基京尼平的IC_(50)值分别为(537.40±188.10)μmol/L、(586.10±42.41)μmol/L,细胞毒性均低于谷胱甘肽,但与京尼平相近;1-O-异丙基京尼平的IC_(50)值为(628.30±38.72)μmol/L,低于谷胱甘肽,但高于京尼平;1-O-甲基京尼平、1-O-乙基京尼平、1-O-叔丁基京尼平的IC_(50)值分别为(324.30±55.67)μmol/L、(111.95±18.06)μmol/L、(91.10±15.20)μmol/L,均低于谷胱甘肽和京尼平。结论:合成了6个京尼平衍生物,获得了一条简单的、可控的京尼平衍生物的合成方法;其中京尼平衍生物1-O-正丙基京尼平、1-O-异丙基京尼平、1-O-正丁基京尼平对HepG2细胞毒性较小。

新型碳纤维增强复合材料的细胞毒性评价

目的体外评价新型碳纤维增强复合材料的细胞毒性。方法选用建系的 L929成纤维细胞进行体外细胞毒性实验,评价新型碳纤维增强复合材料对细胞增殖的影响。结果材料浸提液与 L929成纤维细胞作用后的细胞增殖度为第2d 104%,第4d 104%,第7d 77%,毒性判定为1级,有良好的细胞相容性。结论新型碳纤维增强复合材料未见明显的细胞毒性作用。

Mg含量对可降解Zn-Ag-Mg合金的微观组织、力学性能、耐蚀性及细胞毒性的影响

制备了不同Mg含量的铸态Zn-5Ag-x Mg(x=0,0.5,1,1.5,质量分数/%)合金。采用X射线衍射仪、光学显微镜、扫描电子显微镜、万能试验机、维氏硬度计、电化学工作站和CCK-8(Cell Counting Kit-8试剂)等,研究了Mg含量对合金的显微组织、力学性能、耐蚀性能和细胞毒性的影响。结果表明,Zn-5Ag合金的第二相为ε-AgZn3,而Mg的加入细化了合金的晶粒并新生成了Mg2Zn11相。随着Mg含量的增加,合金的抗压屈服强度从218 MPa提高到309 MPa,维氏硬度从71.4提高到131.9。电化学测试和体外浸泡实验表明,由于Mg含量的增加导致合金的耐蚀性能下降,体外降解速率由0.08 mm/a提高到0.16 mm/a。细胞毒性结果表明,Mg的添加可以提高小鼠胚胎成骨细胞(mouse embryonic osteoblasts cells,MC3T3-E1)的活力,所有合金表现出良好的生物相容性。

米糠纳米纤维素的制备表征及其细胞毒性

以提取的米糠纤维素(纤维素质量分数90.22%)为原料,采用不同体积分数硫酸水解(60%、64%和68%)制备获得米糠纳米纤维素(Rice bran nanocellulose,RBNC),对其表面形貌、尺寸、电位、化学结构、热稳定性及晶体结构进行了表征,并进一步评价了其细胞毒性。透射电镜和原子力显微镜结果显示,制备得到的RBNC是长度在196.45~257.26 nm、直径为8.46~16.34 nm、长径比为17.06~24.34范围内的针状粒子;Zeta电位值在-32.9~-35.2 mV范围内;红外光谱和X-射线衍射分析表明得到的RBNC化学结构未发生变化,仍保留纤维素Ⅰ型晶体结构。体积分数为64%的硫酸水解得到的RBNC长径比最优(24.34±3.63)、结晶度最高(81.32%)、Zeta电位绝对值最大(-35.20±0.85)mV。进一步的细胞毒性评价表明,RBNC分别在≤2000μg/mL和≤500μg/mL质量浓度范围内,对Caco-2和HepG-2细胞无显著毒性,表现出良好的生物相容性。

细胞毒性T淋巴细胞和T白血病细胞利用柔软性逃避穿孔素介导的杀伤

目的细胞毒性淋巴细胞(CTL)释放的穿孔素仅在肿瘤细胞膜表面打孔,而不在CTL表面形成孔洞,这种单向杀伤机制在免疫学角度尚未被阐明。穿孔素打孔既是一个化学过程,也是一个生物力学过程,细胞可利用其柔软性妨碍穿孔素打孔。方法实验室前期研究发现活化的CTL下调FLNA表达,通过柔软性逃避穿孔素介导的杀伤,这种柔软性同样被T白血病细胞用于免疫逃逸。结果和结论本研究在细胞、动物及病人3个水平结合多组学、原子力显微镜等手段,发现ZAP70介导的YAP Y357磷酸化和活化使filamin A下调来诱导柔软性的形成。并且在CTL中,耐药转运蛋白MDR1表达更高,因此CTL比恶性T细胞对YAP抑制剂更具耐药性。YAP的适度抑制使恶性T细胞变硬,但CTL仍然保持一定的柔软性,从而使CTL在杀伤恶性肿瘤细胞时避免自溶。因此,本发现揭示了一种基于机械力的针对T细胞白血病的免疫治疗策略。本研究基于生物机械力学和肿瘤免疫核心问题进行探究,揭示了T白血病细胞免疫逃逸背后的生物力学机制,为开发基于生物机械力学的新型免疫治疗奠定了理论基础。

绿原酸碳基材料的荧光性质及细胞毒性

以绿原酸(CA)为碳源,通过溶剂热法一步合成绿原酸衍生的碳基发光材料CA-71。借助荧光光谱、细胞共聚焦成像及细胞活力实验,进行CA-71荧光性质及细胞毒性研究。结果表明,绿原酸碳基材料CA-71荧光发射光谱具有激发依赖特性,最大激发波长为400 nm,对应的发射波长为492 nm。共聚焦成像实验进一步显示,CA-71能够通透细胞膜,定位人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内线粒体,与线粒体绿色定位染料高度定位重合,皮尔森系数为0.98。此外,25.00 mg/L的CA-71对体外HUVEC细胞24 h抑制率为(7.70±0.93)%,与等质量浓度绿原酸对HUVEC细胞的抑制率(8.24±1.18)%接近,总体呈现低毒性,但无显著性差异。

猪源病毒细胞毒性T淋巴细胞表位研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子,也称为猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)Ⅰ类分子,在机体抗原递呈、器官移植、细胞免疫应答和调控等方面起重要作用。细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位是抗原经抗原递呈细胞加工后,与SLA-Ⅰ类分子结合并递呈的线性肽段,具有高度特异性,在机体抗原识别递呈和细胞免疫抵抗病毒感染方面发挥着关键作用。CTL表位能够刺激CTLs发挥细胞杀伤作用,主要表现为杀伤病毒。作者将对口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒等几种重要的猪源病毒的CTL表位研究现状进行综述,并利用生物信息学手段分析SLA-Ⅰ与CTL表位结合基序特征,以期为今后相关猪源病毒CTL表位的研究和多表位疫苗的设计提供参考。

菊科橐吾属植物中艾里莫芬烷型倍半萜化合物细胞毒性研究进展

艾里莫芬烷型倍半萜是由15个碳原子组成的双环倍半萜,主要从菊科植物橐吾属植物中提取,具有抗肿瘤、抗菌、抗炎等生物活性。艾里莫芬烷型倍半萜的基本结构类型主要包括内酯环、二聚体、呋喃环、降碳型和C19等。本文综述了艾里莫芬烷型倍半萜的相关结构及其潜在的细胞毒性,阐述其特定化学结构特点对抗肿瘤活性的影响,以期为研究其抗肿瘤的临床治疗效果提供参考。

桑树类黄酮对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB231的细胞毒性作用初探

桑树中富含的类黄酮具有多种药理活性。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑试剂(MTS)染色和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)等方法,就桑树中类黄酮对乳腺癌细胞MDA-MB231的细胞毒性作用进行初步探索。实验结果显示,供试的4种桑树类黄酮中,戊烯基化类黄酮亚类对乳腺癌细胞的毒性作用强于非戊烯基化类黄酮。其中,戊烯基化类黄酮——桑根酮C整体呈现出更强的细胞毒性作用,当桑根酮C的浓度达到20μmol/L时能显著抑制MDA-MB231增殖。胸腺嘧啶脱氧核苷类似物(EDU)检测细胞增殖等实验结果显示,20μmol/L桑根酮C处理MDA-MB231后,细胞中DNA的复制明显减少,体外克隆能力显著减弱;RT-qPCR检测细胞周期阻滞和DNA损伤相关的周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A基因(CDKN 1A)和生长阻滞与DNA损伤基因(GADD 45A)的转录水平显著上升,而DNA复制相关S期激酶相关蛋白2基因(SKP 2)和增殖细胞核抗原基因(PCNA)的转录水平则显著降低。此外,用桑根酮C处理MDA-MB231后,出现细胞形态变圆变亮和变小、细胞中线粒体膜电位丢失和ROS积累等现象,以及促凋亡基因phorbol-12-myristate-13-acetate诱导蛋白1基因(PMAIP 1)的转录水平显著上升,抑制凋亡基因Bcl 2的转录水平显著下降,提示桑根酮C可能诱导细胞发生凋亡。

基于德尔菲法构建口服细胞毒性药物给药指引

目的:构建口服细胞毒性药物给药指引,规范临床口服细胞毒性药物给药全流程,减少给药错误发生,保障用药安全。方法:由深圳市某三级甲等肿瘤专科医院多学科团队撰写口服细胞毒性药物给药指引初稿,形成专家咨询问卷,对全国临床、护理、药学领域15名专家进行2轮专家咨询,运用德尔菲法对其进行论证。结果:构建包括医嘱开具、医嘱审核、药品储存、药物调剂、药房发药与病区接收、病区药品发放、门诊药品发放、用药后观察、药物回收与病人教育10个环节,共31个条目的给药全流程。2轮专家咨询积极系数均为100%,权威系数分别为0.917和0.934。结论:基于德尔菲法构建口服细胞毒性药物给药指引,符合科学性与可操作性原则,对规范口服用药安全具有积极意义。

慢性阻塞性肺病稳定期患者外周血Treg细胞与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4的表达及意义

目的检测吸烟者及慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA4)/B7及Treg细胞的表达,观察免疫指标在COPD外周血中的变化及临床意义。方法选择8名健康志愿者为A组(正常对照组)、8名吸烟但肺功能正常者为B组、8名轻中度慢性阻塞性肺疾病患者为C组,收集3组研究对象的外周血标本,采用流式细胞术分析方法检测各组外周血单个核细胞CD11c^(+)树突状细胞(DCs)的比例、CD11c^(+)DCs表面CD80及CD86的表达,Treg细胞(CD4^(+)CD25^(+)FOXP3^(+))及CD4^(+)CD25^(+)CTLA4^(+)的表达。结果与A组比较,B组及C组的CD11^(+)DCs、CD80(B7-1)和CD86(B7-2)表达均显著增多,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在Treg细胞表达上,与A组相比,B组及C组的Treg细胞减少(均P<0.05),而B组与C组间比较无统计学意义(P>0.05)。与A组相比,B组及C组的CTLA4^(+)细胞表达增多,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论吸烟者及COPD患者外周血中CTLA4/B7呈高表达,Treg细胞比例减少,提示吸烟所致免疫细胞异常可能参与COPD全身炎症进展过程。

基因递送中阳离子脂质体结构对转染效率及细胞毒性的影响研究进展

阳离子脂质体在基因治疗和基因沉默领域被广泛应用,其数量繁多,结构多样,有优化和改善基因递送行为的功能,随着基因治疗研究的逐渐深入,新型阳离子脂质体也被不断开发。阳离子脂质体主要有4个组成部分,即亲水的阳离子头部、疏水的脂质尾部、连接键以及辅助脂质,每个部分的结构对基因递送中阳离子脂质的转染效率和细胞毒性具有重要影响。可电离阳离子脂质细胞毒性较低,已有产品上市。本综述可为阳离子脂质体的设计提供一个概念框架,为阳离子脂质体的选择提供一定理论支持。

川芎挥发油对雷公藤甲素体外透皮性能及细胞毒性的影响

目的探究川芎挥发油对雷公藤甲素体外透皮性能和细胞毒性的影响。方法采用气相色谱-质谱联用法对川芎挥发油的化学成分进行分析。分离KM小鼠下腹皮肤,分为雷公藤甲素、雷公藤甲素配伍川芎挥发油1∶10、1∶50、1∶100组(以下简称“配伍1∶10“”配伍1∶50”“配伍1∶100”组),将各组小鼠皮肤与相应乳膏各0.2 g充分接触24 h后,采用高效液相色谱法测定各组接收液中雷公藤甲素的累计透皮量(Q_(n)),并计算透皮吸收速率(J_(ss));再以人永生化角质形成细胞(HaCat)为模型,采用CCK-8法检测不同浓度川芎挥发油和雷公藤甲素配伍前后的细胞存活率。结果共鉴定出62个川芎挥发油化学成分,包括Z-藁本内酯、洋川芎内酯、β-瑟林烯等。与雷公藤甲素组比较,配伍1∶10组和配伍1∶50组24 h内雷公藤甲素的Q_(n)(P<0.01)和J_(ss)有所升高,而配伍1∶100组的Q_(n)(P<0.05)和J_(ss)有所下降。与雷公藤甲素组比较,雷公藤甲素浓度在36、72、144 ng/mL时,配伍1∶10组和配伍1∶50组可以显著提高HaCat细胞的存活率(P<0.05或P<0.01),而配伍1∶100组细胞的存活率反而降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论雷公藤甲素与川芎挥发油在配伍比例为1∶10和1∶50时可以促进雷公藤甲素的透皮吸收,且可降低雷公藤甲素对HaCat细胞的毒性。

艾灸干预免疫抑制兔细胞毒性T淋巴细胞抗原-4的作用效应分析

目的:比较不同艾灸干预下免疫抑制兔细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)及程序性死亡受体1(PD-1)表达变化的异同。方法:20只大耳白兔随机分为空白组、模型组、艾条灸(MSM)组与隔药饼灸(HPM)组,每组5只,连续7 d腹腔注射环磷酰胺(CTX)诱导免疫抑制模型。造模成功后分别进行MSM与HPM干预,均为隔日灸,共治疗10次。治疗结束后麻醉白兔,取血清、肝脏与脾脏,ELISA检测血清中PD-1、PD-L1含量,免疫组化法检测肝组织PD-1含量,RT-qPCR检测肝、脾组织CTLA-4 mRNA含量。结果:HPM和MSM均可降低免疫抑制下PD-1及PD-L1水平,并可有效抑制脾脏CTLA-4和肝脏PD-1、CTLA-4水平升高,与免疫抑制模型组相比差异均存在统计学意义(P<0.05),且Pearson相关性检验表明肝组织中CTLA-4与PD-1呈显著正相关(r=0.7807,P<0.001)。结论:HPM可通过调控多个免疫抑制位点改善机体免疫功能。

Na^(+)通道在锰神经细胞毒性中的作用

目的初步探讨Na^(+)通道在锰神经细胞毒性中对γ-氨基丁酸(GABA)的作用。方法SH-SY5Y细胞建立锰暴露模型,并分为空白对照组、0.25 mmol/L MnCl_(2)、0.50 mmol/L MnCl_(2)、1.00 mmol/L MnCl_(2)。河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)0.10μmol/L、0.20μmol/L进行干预,MTT法测其细胞存活率、光学显微镜进行形态学观察、蛋白质印迹法检测Na^(+)通道中Nav1.1通道蛋白和GABA的标记酶谷氨酸脱羧酶65(GAD65)蛋白的表达水平。结果MnCl_(2)可抑制细胞增殖,0.25 mmol/L MnCl_(2)、0.50 mmol/L MnCl_(2)、1.00 mmol/L MnCl_(2)均可显著降低细胞存活率,差异均具有统计学意义(P<0.05);TTX可改善锰暴露所致的神经元损伤,提高细胞存活率,差异具有统计学意义(P<0.05);锰暴露可上调神经元GAD65蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05),但锰暴露未改变神经元细胞Nav1.1蛋白的表达水平,差异无统计学意义(P>0.05)。结论锰暴露所致神经元损伤及GABA能损伤可能与其Nav1.1蛋白表达无关。

不同浸提条件对医疗器械体外细胞毒性试验结果的影响

目的探讨不同浸提条件(浸提24、72 h)对医疗器械体外细胞毒性试验中细胞生长与细胞毒性结果的影响。方法采用含血清MEM细胞培养液作为浸提介质,按照GB/T 16886.12-2017推荐的浸提比例,将空白对照品、阴性对照品及5种不同医疗器械常用材料样品在(37±1)℃条件下分别浸提24、72 h,依据GB/T 16886.5-2017中的MTT法进行试验。比较浸提24、72 h对细胞生长与细胞毒性结果的影响。结果与浸提24 h比较,浸提72 h后空白对照组吸光度偏低,相对偏差为-3.0%,差异无统计学意义(P>0.05);被检样品试验结果显示,样品1、样品2有细胞毒性,样品3和样品5无细胞毒性,浸提24、72 h结果一致,相对增殖率(RGR)变化小;样品4有细胞毒性,但浸提72 h后RGR明显降低,降低幅度为93.7%,提示有毒物质溶出量增多。结论结合显微镜观察细胞形态,确认延长浸提时间至72 h对细胞生长的影响可以忽略。对于被检样品组,延长浸提时间至72 h各样品RGR呈降低趋势。对于RGR>80%、<60%的医疗器械样品,浸提24、72 h的评价结果一致,评价风险较小。而对于RGR处于临界值(60%~80%)的医疗器械样品,浸提24、72 h的结果可能不一致,评价风险较大,尤其是长期接触人体的医疗器械,建议采取浸提72 h的条件进行体外细胞毒性试验,以降低评价风险。

肝素涂层医用聚氯乙烯的细胞毒性研究

本研究通过肝素—氯烃基二甲基代苯甲胺复合物(A组)、肝素—苯扎溴胺复合物(B组)和肝素—聚乙烯亚胺复合物对医用聚氯乙烯体外循环管道进行了肝素涂层,同时采用材料直接接触细胞培养法和四唑盐(MTT)比色试验评价各种涂层材料的细胞毒性。结果显示A、B组材料直接接触L-929细胞后24h即引起细胞大量死亡,而C组材料直接接触后具有良好的细胞相容性。MTT比色试验也表明A、B两种涂层材料具有较低的OD值。A、B两种涂层材料具有较强的细胞毒性,而C方法处理的聚氯乙烯材料不引起细胞死亡,具有进一步临床应用前景。

质量控制在静脉药物调配中心细胞毒性药物管理中的应用研究

目的分析质量控制在静脉药物调配中心(Pharmacy Intravenous Admixture Services,PIVAS)细胞毒性药物管理中的应用效果。方法选取2020年1月—2023年12月泰州市中医院PIVAS在职的20名工作人员为研究对象,2020年1月—2021年12月实施传统PIVAS管理,2022年1月—2023年12月实施质量控制。比较质量控制实施前后的评判性思维能力评分(寻找真相、开放思想、分析能力、系统化能力、自信心、求知欲、成熟度)、细胞毒性药物管理知信行评分(知识、态度、行为)、细胞毒性药物配制差错发生率、细胞毒性药物溢出发生率、管理总满意率。结果质量控制实施后的评判性思维能力评分、细胞毒性药物管理知信行评分和管理总满意率均高于实施前,差异有统计学意义(P均<0.05)。质量控制实施后,细胞毒性药物配制差错发生率、细胞毒性药物溢出发生率均低于实施前,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论在PIVAS细胞毒性药物管理中应用质量控制能够进一步提升工作人员的评判性思维能力与细胞毒性药物管理知信行水平,避免细胞毒性药物配制差错与细胞毒性药物溢出的发生,提高管理总满意率。

中性粒细胞毒性指数联合碱性磷酸酶染色积分在慢性肾衰竭合并细菌感染患者中的早期诊断价值

目的分析中性粒细胞毒性指数(TG%)联合中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色积分在慢性肾衰竭合并细菌感染患者中的早期诊断价值。方法采取随机抽样方式,选取2022年1月至2023年9月我院肾内科住院的慢性肾衰竭患者(100例,疾病组)及同期的健康体检者(100名,健康组)。慢性肾衰竭患者分为合并细菌感染组(13例)、无细菌感染组(87例)。分析比较3组TG、NAP染色积分的差异;分析比较诊断的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值;分析比较肾衰合并感染组抗生素使用前后两项指标下降幅度。结果合并细菌感染组肾衰竭患者降钙素原、C反应蛋白、TG%、NAP染色积分水平均高于无细菌感染组与健康组;联合检测方式灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于单一检测,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论TG与NAP染色积分可对慢性肾衰竭患者是否合并细菌感染进行评估,具有较高的诊断价值,还能分析患者受感染的严重程度,为临床治疗提供依据。