哺乳动物卵母细胞老化的相关机制研究进展

哺乳动物卵母细胞老化是一个复杂且不可逆的生物学过程,主要表现为孤雌激活和细胞凋亡。老化会引起卵母细胞发生形态结构改变和细胞器功能下降,导致卵母细胞质量下降,直接影响受精和胚胎发育的结果。目前对体外培养卵母细胞过程中老化特征、老化影响因素以及如何延缓老化等研究越来越广泛,本文将近些年卵母细胞老化特征、影响老化因素和延缓卵母细胞老化的相关研究进行综述,以期对改善卵母细胞老化及优化辅助生殖技术提供一定参考。

凝血酶对实验性神经细胞老化过程中脂褐质含量的影响

目的：凝血酶对实验性神经细胞老化过程中脂褐质含量的影响。方法：采用无血清培养神经母细胞老化模型，显微分光光度计测定细胞内脂褐质含量。结果：随着无血清培养时间的延长，细胞内脂褐质含量增加，时间越长越显著。低浓度凝血酶能延缓脂褐质的聚焦。结论：凝血酶具有潜在抗老化作用。值得进一步研究。

硫辛酸在神经细胞老化过程中的细胞保护作用研究

目的探讨硫辛酸在神经细胞老化过程中抗氧化损伤和对细胞的保护作用。方法应用实验性神经细胞老化模型,设立不同浓度的硫辛酸作用组和不含硫辛酸的对照组,分别在培养至5、10、15d用MTT法分析神经细胞的存活率,并检测细胞内脂质过氧化反应物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果硫辛酸浓度自25～300μmol/L内能显著提高老化各阶段的细胞生存率,与对照组比较,差异显著;其中以100μmol/L的效果最大。与对照组相比,100μmol/L硫辛酸作用组能显著降低细胞内MDA含量(P<0.05);提高SOD活力,但差异不显著。结论在体外培养的神经细胞老化模型中,硫辛酸能显著降低细胞内脂质过氧化反应,提高细胞抗氧化能力,提高细胞的生存率,延缓老化的进程。

神经细胞老化与细胞内Ca^(2+)相关性的实验研究

应用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化模型,运用Fura2/AM染色结合计算机图像处理的方法观察神经细胞老化过程中不同时间细胞内Ca^(2+)动态变化过程。实验结果表明:随着培养时间增长,细胞内Ca^(2+)浓度增加,培养一天时细胞内Ca^(2+)浓度为104.8±21.9(±s),培养至21天时细胞内Ca^(2+)浓度变为130.8±29.6(P<0.01)。

自由基损伤与D-半乳糖所致细胞老化关系

实验观察了Ｄ－半乳糖（Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓｅ），超氧阴离了自由基Ｏ和Ｈ２Ｏ２对培养人胚肺二倍体成纤维细胞（Ｈｕｍａｎｆｅｔａｌ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＢＳ）的促老化作用。结果表明，Ｄ－十乳糖和Ｏ２均使细胞增殖速度减慢，分裂周期中Ｇ２－Ｍ期细胞比例减少、Ｇ－Ｇ１期细胞比例增加、ＤＮＡ含量下降，此外，细胞中ＳＯＤ含量降低，丙二醛（Ｍａｌｏｎｄｉｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）水平升高。Ｈ２Ｏ２上述作用不明显。提示，在Ｄ－半乳糖的代谢过程中可能产生了Ｏ２等活性氧自由基，Ｏ２本身和／或其与Ｈ２Ｏ２进一步反应生成的羟自由基（·ＯＨ）过量引起的组织细胞损伤及抗氧化酶活力下降、过氧化产物增多可能是Ｄ－半乳糖诱发细胞老化的主要原因。

胆囊收缩素对实验性神经细胞老化过程中微突起影响的超微结构研究

目的 探讨胆囊收缩素 (CCK8)对实验性神经细胞老化过程中细胞微突起超微结构的影响。方法 采用 NBA2 细胞无血清培养建立神经细胞老化实验模型。以扫描电子显微镜观察的细胞表面结节状物的大小以及微突起数目作为细胞老化指标 ,观察 CCK8对细胞老化过程的影响。结果 1使细胞表面结节状物变小。 2增加细胞突起终末的微突起数量。结论 CCK8可以延缓实验性神经细胞的老化进程值得进一步研究。

软骨细胞老化特征及机制的研究进展

软骨细胞的老化是一个极其复杂的过程,其特征包括:细胞不可逆的生长停滞于G1期;老化相关β-半乳糖苷酶的表达;端粒长度缩短;软骨细胞分化特征的改变。目前认为其机制为基因表达的程序性或减进性改变,包括肿瘤抑制基因p53和pRb等在细胞生长停滞中的作用;端粒结合蛋白和端粒酶对端粒长度的调节;细胞骨架蛋白的重组使软骨细胞形态的变化;基质降解酶类表达增加以及各种细胞因子的变化对软骨细胞代谢的影响。

红细胞老化及其机制的研究进展

红细胞（RBC）在人体内的生命周期大概是（120±4）d，该过程中RBC经历着各种生理及生化的改变，这些变化被认为是一种非线性、非渐进性的细胞老化过程，RBC老化机制的研究一直是一项具有重大临床和科研价值的课题。在体外保存条件（保养液4℃）下的RBC，其使用有效期降到35—42d，更重要的是RBC在保存期间所经历的变化（即RBC保存损伤）对于安全和有效输血造成了隐患。因此阐明体外条件下的RBC老化途径以提高RBC的保存质量是很重要的。

胆囊收缩素对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响

目的 观察 CCK8对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响。方法 采用 NBA2 细胞无血清培养建立神经细胞老化实验模型 ,以显微荧光分光光度仪测定单个细胞内脂褐素自发荧光值作为细胞老化指标 ,观察 CCK8对细胞老化过程的影响。结果 在无血清培养条件下 ,细胞内脂褐素荧光值随培养时间的延长而累积性增加 (P<0 .0 1 )。将 CCK8加入无血清培养液 ,CCK8作用 1 0 d和 1 5 d都可显著降低细胞内脂褐素荧光值 (P<0 .0 1 )。结论 在无血清培养条件下 ,NBA2 细胞由分裂增殖变为分化成熟老化 ,反映了神经细胞的老化过程。而 CCK8可以延缓细胞的老化进程。

强啡肽［DynA（1－8）］对体外神经细胞老化过程中细胞周期和总蛋白的影响

用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化实验模型。以流式细胞光度术观察ＤｙｎＡ（１－８）对老化过程中神经细胞的细胞周期和细胞总蛋白的影响。结果发现ＤｙｎＡ（１－８）可延缓细胞老化的细胞周期和细胞总蛋白的变化。提示ＤｙｎＡ（１－８）是通过使细胞周期和细胞总蛋白发生变化以发挥其延缓神经细胞老化的作用。

细胞老化与椎间盘退变关系的研究进展

椎间盘细胞老化可导致其细胞功能减退和细胞活性下降,进而引起椎间盘退变。细胞老化可分为复制老化和应激诱导早衰两类。复制老化为细胞老化的固有机制,而应激诱导早衰则加速了老化进程。细胞老化相关信号途径主要有p53-p21-pRb途径和p16-pRb途径两条。此外,最新研究还发现椎间盘细胞老化可能被WNT信号通路调节。因此,通过干预椎间盘细胞老化途径中关键因子的表达来延缓或逆转椎间盘细胞老化,可能成为治疗椎间盘退变的新思路。

神经细胞老化过程中细胞内脂质过氧化反应程度和超氧化歧化酶活性的动态变化

目的:观察体外培养的小鼠神经母细胞瘤细胞A2无血清培养条件下分化成神经细胞过程中,细胞内脂质过氧化的主要产物-丙二醛和自由基清除剂超氧化物歧化酶的变化,探讨脂质过氧化反应程度和抗氧化能力与细胞老化的相关性。方法:实验于2004-04/2005-02在上海第二医科大学附属仁济医院神经内科神经生物学实验室进行。①建立神经细胞老化实验模型:传代培养的小鼠神经母细胞瘤细胞A2中加入无血清培养液后,在37℃、含体积分数为0.05的CO2的空气中培养,24h后换培养液,以后每隔3d更换培养液;按不同的培养天数分为培养1,7和14d组,各组在培养至相应的天数后终止培养。②评估神经细胞变化的指标检测:采用显微荧光分光光度计测定细胞老化指标脂褐素水平(相对荧光值)反映细胞老化程度;以比色法测定细胞内丙二醛浓度评估细胞脂质过氧化程度,亚硝酸盐比色法得出超氧化物歧化酶活性反映细胞的抗氧化能力。结果:①细胞内脂褐素相对荧光值:培养1,7和14d组分别是(11.55±0.9)%,(22.41±1.99)%和(29.51±4.57)%,组间比较差异显著(F=478.04,P<0.01)。②丙二醛浓度:培养1,7和14d组分别是(0.90±0.20),(1.91±0.19)和(2.98±0.20)μmol/L;组间比较差异显著(F=148.31,P<0.01)。③超氧化物歧化酶活性:培养1,7和14d组分别是(685.30±107.85),(372.07±74.35)和(175.04±29.67)μkat/L:组间比较差异显著(F=66.10,P<0.01)。结论:①随着无血清培养天数的增加,小鼠神经母细胞瘤细胞A2细胞内脂褐素逐渐增多,细胞在不断衰老。②细胞内丙二醛浓度随细胞老化而不断增加,而超氧化物歧化酶活性却随着细胞老化而下降。说明神经细胞的老化与细胞内脂质过氧化反应呈正相关,与细胞的抗氧化能力呈负相关。③体外神经细胞老化实验研究模型是科学和客观的,具有很强的应用价值。

细胞老化与椎间盘退变

近期研究发现椎间盘细胞老化与椎间盘退变的特征性改变,如细胞数量减少,基质降解,炎性因子、基质金属蛋白酶等合成和分泌增加相关,在椎间盘退变发生发展过程中起着重要作用。椎间盘退变过程中细胞老化发生机制不同,复制老化为细胞老化的固有机制,而应激诱导早衰则加速了细胞老化,在两种机制的共同作用下最终导致椎间盘细胞染色体和基因表达变化、细胞功能障碍、增殖能力丧失及基质合成改变,椎间盘发生不可逆性变化。因此,干预椎间盘细胞老化途径,延缓椎间盘细胞老化就有可能成为椎间盘治疗的新思路。该文就椎间盘退变过程中细胞老化研究进展及潜在的治疗策略作一综述。

神经细胞老化中脂褐素和Ca^(2+)浓度的变化

目的研究神经细胞内钙离子浓度等因子与细胞治化的相关性。方法运用神经细胞老化实验模型─—无血清条件下培养小鼠神经母细胞瘤细胞，显微荧光光度术测定细胞内脂褐素的自发荧光值，反映脂褐素的累积量；Fluo3／AM标记钙离子的激发荧光值，反映钙离子浓度。结果1．随着细胞老化，神经细胞内脂褐素的积累也逐渐增加入细胞内钙离子浓度随神经细胞治化而增高。结论钙离子浓度的增加与神经细胞的老化呈正相关。

精氨酸加压素对实验性神经细胞老化过程中细胞周期和细胞总蛋白的影响

采用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养，建立神经细胞老化实验研究模型。以流式细胞光度术观察精氨酸加压素（ＡＶＰ）对老化过程中实验性神经细胞的细胞周期和细胞总蛋白的影响。结果发现ＡＶＰ可产生延缓细胞老化的细胞周期和细胞总蛋白的变化。提示ＡＶＰ通过使细胞周期、ＤＮＡ和细胞总蛋白等发生变化来发挥其延缓实验性神经细胞老化的作用。

人红细胞老化过程中花生凝集素和ConA受体电镜细胞化学研究

目的 观察人血液中 ,老化红细胞膜上花生凝集素 (PNA)和刀豆凝集素 (Con A)受体细胞化学反应的变化。 方法 应用金标花生凝集素 (PNAg)和刀豆凝集素 (Con Ag) ,对早期和老化红细胞膜上 PNA和 Con A受体进行电镜细胞化学显示 ,并用计算机图像分析系统对电镜照片进行定量处理。 结果 与早期红细胞相比 ,老化红细胞膜上 PNAg颗粒和 Con Ag颗粒均有明显增多。 结论 老化红细胞膜上唾液酸的丢失导致半乳糖基和甘露糖基暴露的相应增加 。

红细胞老化与补体调节蛋白数量变化

目的通过检测不同老化程度红细胞表面CD55、CD35和CD59数量,来探索老化红细胞清除机制中补体调节蛋白所发挥的作用。方法利用流式细胞术,检测30份标本其毛细管分离的年轻、年老红细胞表面CD35数量,和21份样本年轻、年老红细胞表面CD55和CD59数量。另外检测了其中随机选取的3份标本的4℃保存红细胞和37℃保存红细胞表面CD35、CD55和CD59数量。通过流式细胞术检测了15份标本自身IgG抗体的敏感性。结果与毛细管分离的年轻红细胞相比,年老红细胞CD35的平均荧光强度(MFI)下降了约35%(P<10-22)。年轻、年老红细胞表面CD55和CD59数量也呈现显著性下降(CD55:下降约44.17%;CD59:下降约36.18%,P<10-12)。体外保存的红细胞结果有所不同。对于CD35,4℃和37℃保存的红细胞表面数量变化不大无显著性统计学意义(P>0.05)。对于CD55和CD59,37℃保存的红细胞表面数量显著降低(P<0.01),而4℃保存的红细胞数量无显著性差异(P>0.05)。另外,毛细管分离得到的年老红细胞结合的自身抗体IgG显著高于年轻红细胞,荧光强度是年轻红细胞的1.8倍(P<0.01)。结论年轻、年老红细胞自身IgG抗体敏感性不同,说明毛细管离心方法可以一定程度反映人体生理条件下红细胞的老化状态。随着红细胞在血液循环中的老化,3种补体调节蛋白的显著下降,可能会使更多的C3b在红细胞表面沉积,从而中和调理、增强吞噬。此外,体外红细胞的老化与生理条件下的老化可能存在不同机制。

硫辛酸在实验性神经细胞老化过程中对内源性谷胱甘肽水平的影响

目的研究硫辛酸在神经细胞老化过程中对细胞内源性抗氧化分子谷胱甘肽(GSH)的作用。方法采用无血清培养神经母细胞瘤细胞建立实验性神经细胞老化模型。设立100μmol/L硫辛酸(LA)作用组和空白对照组,采用MTT法检测细胞存活率;比色法测定细胞内GSH含量。结果硫辛酸作用组5d、10d和15d时细胞内GSH含量分别为306.48μg/mgprot、240.72μg/mgprot、152.34μg/mgprot(同时期对照组分别为278.08μg/mgprot、181.94μg/mgprot、99.13μg/mgprot);随着细胞老化进程而下降,但LA实验组的细胞内GSH含量显著高于同时期对照组。结论硫辛酸能明显提升实验性神经细胞内GSH水平,增加细胞内源性抗氧化能力。

神经降压素对实验性神经细胞老化过程中细胞周期和细胞总蛋白的影响

目的：观察神经降压素（ＮＴ）对实验性神经细胞老化过程中细胞周期，ＤＮＡ和细胞总蛋白的影响。方法：采用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型。以流式细胞光度术测定的细胞周期，ＤＮＡ和细胞总蛋白为实验性神经细胞老化的指标，观察ＮＴ对这些指标的影响。结果：ＮＴ促使滞留于Ｇ１期的老化细胞向Ｓ期转化并降低伴随培养时间延长而增高的细胞总蛋白。结论：ＮＴ是通过使细胞周期、ＤＮＡ和细胞总蛋白发生变化来发挥其延缓实验性神经细胞老化的作用。