甘草酸、姜黄素和羟基喜树碱自组装纳米粒递药系统的工艺优化研究

目的:以两亲性药物分子甘草酸(GA)、疏水性药物姜黄素(CUR)和羟基喜树碱(HCPT)为材料,通过自组装形式构建GA、CUR和HCPT纳米粒递药系统(GA/CUR/HCPT-NPs),考察其制备工艺并进行质量评价。方法:采用反溶剂沉淀法和透析法相结合制备GA/CUR/HCPT-NPs,利用响应面Box-Behnken法对制备工艺进行优化,最终获得尺寸合适,稳定电荷,高载药量的GA/CUR/HCPT-NPs;并对优化出来的GA/CUR/HCPT-NPs进行核磁共振氢谱(1HNMR)、差示扫描量热法(DSC)、高分辨X射线衍射法(XRD)、傅里叶红外分光光度法(FTIR)、紫外分光光度法(UV)等表征和微观形态观察,并测定GA/CUR/HCPT-NPs中GA、CUR和HCPT含量大小。结果:得到的最优处方为去离子水体积30 mL,二甲基亚砜(DMSO)1 min内滴入去离子水,制备温度为40℃,确定GA、CUR、HCPT投药量分别为6.00 mg、10.03 mg、5.01 mg;测量GA/CUR/HCPT-NPs粒径为(146.37±0.15)nm,且带较高的稳定电荷-(34.43±0.77)mV,PDI为0.157±0.01,透射电子显微镜(TEM)和扫描电子显微镜(SEM)可观察到GA/CUR/HCPT-NPs是类球形或球形,并且均匀分布;1HNMR、DSC、XRD等证明了成功自组装成稳定的GA/CUR/HCPT-NPs,并且在7 d内4℃保存条件下稳定性良好;高效液相色谱(HPLC)测定GA/CUR/HCPT-NPs中GA、CUR、HCPT的载药量分别为57.19%、39.17%和3.07%。结论:本研究通过优化的反溶剂沉淀法结合透析法成功制备尺寸合适、均匀分布的GA/CUR/HCPT-NPs,为进一步实验奠定了基础。

羟基喜树碱铁蛋白包合物的制备及其抗结肠癌活性的研究

目的用铁蛋白(ferritin,Fn)包合羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)制备羟基喜树碱铁蛋白包合物(hydroxycamptothecin@ferritin,HCPT@Fn),增加HCPT的溶解性,提高治疗结肠癌的效果。方法用透析法制备HCPT@Fn;用激光粒度测定仪检测HCPT@Fn的粒径及Zeta电位;用超高效液相色谱法(ultra-high performance liquid chromatography,UPLC)检测HCPT@Fn中HCPT的载药量;用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]实验、活死细胞染色实验及克隆形成实验考察HCPT@Fn对人结肠癌细胞(human colon cancer cells,HT-29)的毒性;用荧光显微镜观察HCPT@Fn在HT-29细胞内的蓄积;用溶血实验及HE染色实验初步考察HCPT@Fn的安全性。结果用透析法制备的HCPT@Fn的粒径为148.4 nm,Zeta电位为−34.4 mV,载药量为37.46%;HCPT@Fn能大量蓄积于HT-29细胞中,可显著抑制HT-29细胞的增殖及克隆形成;在设定的质量浓度范围内,HCPT@Fn均未造成明显的溶血,HCPT@Fn对小鼠正常组织无明显破坏性。结论HCPT@Fn能够显著增加HCPT的溶解性,提高抗结肠癌活性并降低毒性和不良反应。

10-羟基喜树碱对非小细胞肺癌上皮-间质转化的影响

目的研究10-羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对人非小细胞肺癌细胞(A549)上皮-间质转化(EMT)的影响,为后续的分子水平研究奠定基础。方法实验组分为常氧组和低氧组,其中低氧组以100μmol·L^(-1) CoCl 2溶液,低氧诱导24 h,使A549细胞产生上皮-间质转化。通过MTT细胞毒性实验、划痕实验、transwell实验、形态学显微观察HCPT对A549细胞的形态、迁移能力、侵袭能力的影响。结果通过MTT实验测得HCPT作用于A549细胞24 h后的IC 50=75.284μmol·L^(-1);HCPT能够显著抑制A549细胞的迁移能力和侵袭能力,并且细胞的间质形态特征得到显著抑制甚至是逆转。结论10-羟基喜树碱对人非小细胞肺癌细胞的上皮-间质转化起抑制作用。

羟基喜树碱脂质体调节SphK1/S1P信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

【目的】探讨羟基喜树碱脂质体(LHCPT)调节鞘氨醇激酶1(SphK1)/1-磷酸鞘氨醇(S1P)信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。【方法】SD大鼠分为对照组、模型组、羟基喜树碱(HCPT)组、LHCPT组、卡托普利组、LHCPT+K6PC-5(SphK1激活剂)组,每组12只。除对照组外,其他组大鼠均需通过腹腔注射阿霉素的方法构建心力衰竭大鼠模型,建模成功后,进行给药处理,给药一天一次,持续4周。彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF);HE、Masson染色分别检测大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化;ELISA法检测大鼠心肌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;qRT-PCR检测大鼠心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、I型胶原蛋白(Collagen I)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)表达;Western blot检测大鼠心肌组织中SphK1、S1P蛋白表达。【结果】与对照组比较,模型组大鼠心肌组织病理损伤及纤维化严重,LVESD、LVEDD、TNF-α、IL-6水平、TGF-β1、Collagen I、CollagenⅢmRNA表达及SphK1、S1P蛋白表达升高,LVEF降低(P<0.05);与模型组比较,HCPT组、LHCPT组、卡托普利组大鼠心肌组织病理损伤及纤维化减轻,LVESD、LVEDD、TNF-α、IL-6水平、TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达及SphK1、S1P蛋白表达降低,LVEF升高(P<0.05);与LHCPT组比较,LHCPT+K6PC-5组大鼠心肌组织病理损伤及纤维化加剧,LVESD、LVEDD、TNF-α、IL-6水平、TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达及SphK1、S1P蛋白表达升高,LVEF降低(P<0.05)。【结论】LHCPT可能通过抑制SphK1/S1P信号通路抑制心力衰竭大鼠心肌纤维化。

10-羟基喜树碱不同载体材料纳米粒的研究进展

10-羟基喜树碱(10-hydroxycampothecin,10-HCPT)是从植物喜树中提取的一种天然生物碱,通过靶向肿瘤细胞内拓扑异构酶I而显示出较强的抗肿瘤活性,但是10-HCPT的溶解度低、稳定性差和副作用大,严重限制了药物在临床上的应用。为了提高10-HCPT的溶解度和稳定性,同时实现“减毒增效”的作用,目前已经开发了多种10-HCPT纳米递送系统。本文重点综述采用不同的有机材料和无机材料制备的10-HCPT纳米粒、无载体10-HCPT纳米制剂的研究进展,为更优良的10-HCPT制剂开发提供参考。

超声介导下羟基喜树碱纳米粒抗细胞增殖活性的研究

目的比较载羟基喜树碱纳米粒经超声刺激前后对鼠源性肝癌细胞H22、鼠源性乳腺癌细胞4T1、人正常肝细胞LO2及人源性肝癌细胞Bel-7402增殖活性的影响。方法采用MTT法、MTS法检测超声前后羟基喜树碱原药、注射液及纳米粒对H22、4T1、LO2、Bel-7402细胞增殖活性的影响。结果与羟基喜树碱注射液及原药比较,未经超声辐照,纳米粒对4种细胞的增殖抑制性较低,4T1细胞存活率>50%,H22细胞、Bel-7402细胞及LO2细胞存活率均>60%;经超声辐照48 h后,纳米粒对细胞的增殖抑制性升高(P<0.05),H22、4T1、Bel-7402、LO2细胞IC_(50)值降低至32.75、19.88、69.68、11.94μg/mL。结论未经超声辐照下羟基喜树碱纳米粒安全性较好;超声辐照后纳米粒对肿瘤细胞的抑制作用优于原药及其注射液。

羧甲基-β-环糊精共价偶联10-羟基喜树碱的合成与性能

将β-环糊精和氯乙酸在碱性条件下反应合成羧甲基-β-环糊精,通过羧基与10-羟基喜树碱发生酯化反应共价偶联生成具有良好生物相容性的HCPT/CM-β-CD,并进行表征和生物性能研究。实验结果表明,HCPT/CM-β-CD改善了药物的生物相容性,增加了药物的稳定性,并且能够在肿瘤组织中得到有效的释放。

羟基喜树碱注射液与注射用羟基喜树碱含量与有关物质的比较

目的 考查国内不同企业羟基喜树碱制剂的产品质量。方法 用高效液相色谱UV检测法和蒸发光散射检测法(ELSD)对来源于国内 5个企业 7个批次的羟基喜树碱制剂进行含量和有关物质的比较。结果 羟基喜树碱注射液B厂和C厂的产品中杂质喜树碱的含量大于 3% ,注射用羟基喜树碱中仅D厂 ,杂质喜树碱含量大于 3% ;其它各厂的产品中 ,杂质喜树碱含量均小于 1%。结论 羟基喜树碱制剂质量的好坏、稳定与否与其制剂是粉针剂还是注射液没有直接的必然的联系 ;不管是哪一种制剂 ,只要生产企业能够提高质量意识 ,严把质量关 ,都能够得到高质量的产品。

四(对-乙酰氧醚-10-羟基喜树碱)苯基卟啉的合成及结构表征

设计并合成了一种卟啉类光敏剂与抗癌药羟基喜树碱通过共价键相连的四(对-乙酰氧醚-10-羟基喜树碱)苯基卟啉化合物.通过紫外光谱、红外光谱、核磁氢谱和质谱分析等手段对其结构进行了表征.在癌症治疗过程中目标化合物中2种药物可能起到一定的协同效应.

羟基喜树碱治疗恶性胸腔积液

目的观察羟基喜树碱(HCPT)治疗恶性胸腔积液的近期疗效和毒副反应.方法 17例恶性胸腔积液患者,先给予胸腔穿刺抽尽胸水后,腔内注入HCPT20～30 mg,每周1次,连续2～3次.结果 17例恶性胸腔积液的近期疗效为58.8 %(10/17).结论胸水引流后腔内注入HCPT,治疗恶性胸腔积液,疗效肯定,是控制恶性胸腔积液的有效方法.

10-羟基喜树碱衍生物的合成及其抗肿瘤活性的初步研究

为提高10-羟基喜树碱在水中溶解性和稳定性,将其与丁二酸酐经酯化合成喜树碱衍生物—10,20(S)-O-二琥珀酰羟基喜树碱,所得衍生物经核磁共振氢谱表征,并用水浴搅拌法测定衍生物溶解度。采用MTT比色法检测衍生物对结肠癌细胞SW480的生长抑制,DNA片段化分析和Hoechst 33342染色检测其对结肠癌细胞株凋亡的影响。结果表明,衍生物在水中的溶解度(25℃)为2.3mg,比10-羟基喜树碱高21.8倍;肿瘤细胞的生长抑制作用呈剂量/时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50值)为700nM;而琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状图谱,Hoechst 33342染色表明喜树碱类衍生物可诱导细胞凋亡。

HPLC-荧光法测定人血浆中羟基喜树碱的两种构型及其相互间的转化

目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定人血浆中羟基喜树碱两种活性成分盐型羟基喜树碱(C-HCPT)和酯型羟基喜树碱(L-HCPT)含量的方法,并且对两者之间的相互转化进行了初步研究.方法采用HPLC-荧光法,Lichrospher C18色谱柱,流动相为乙腈-0.075 mol·L-1醋酸铵缓冲液(32∶68,pH 6.4),流量1.0 ml·min-1,检测器激发波长为363 nm,发射波长为530 nm,内标法计算药物浓度.结果人血浆样品中C-HCPT、L-HCPT峰分离良好,内源性杂质不干扰样品峰,最低检测浓度均为5 ng·ml-1.C-HCPT、L-HCPT浓度范围在15～2000 ng·ml-1间呈线性相关,回归方程分别为Y1=9.393×10-4X1-9.1×10-6和Y2=1.0207×10-3X2-3.4×10-6,相关系数分别为r1=0.9997和r2=0.9998,相对回收率分别为96.79%～119.64%和100.23%～112.93%,日内和日间变异均小于10%.两者之间的转化具有一定规律性;C-HCPT标准血样-20 ℃冻存20 d稳定,L-HCPT标准血样的稳定性有待进一步研究.结论本方法专属性强,灵敏、可靠,适用于HCPT类制剂给药后血药浓度的监测和体内的药代动力学特征研究;有关两者相互转化的机制及L-HCPT稳定性问题尚待进一步深入研究.

羟基喜树碱Ⅰ期药代动力学及人体耐受性临床研究

目的:研究羟基喜树碱(HCPT)在人体药代动力学,观察人体对其的耐受性。方法:分5个剂量级5.0mg/m2、7.5mg/m2、12mg/m2、16mg/m2、20mg/m2,按体表面积折算HCPT剂量并将其溶于0.9%NaCl液中,30min内恒速静脉滴入,连续用药5天,停药后观察2周。同时第一天于给药前、停药即刻、停药后15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、12h分别取2ml静脉血置肝素化试管中,用高效液相荧光法测定HCPT在人体的血药浓度,3p87计算药代动力学参数。结果:共有24例病人入选。剂量限制性毒性(DLT)为骨髓抑制和腹泻。随剂量增加,上述两种不良反应的发生率和强度呈线性增加。其它不良反应主要包括恶心、呕吐犤程度较轻(Ⅰ-Ⅱ度)、持续时间短(2-3天)犦、肝功能异常、血尿和皮疹。HCPT在体内呈二室模型,t1/2α0.0523-0.613h,t1/2β:1.03-2.42h,Vd:5.54-11.4L/m2。犤HCPT犦内酯占犤HCPT犦总的10%-20%,血浆蛋白结合率65%-99%,24h尿排泄率24%。结论:HCPT主要不良反应为骨髓抑制和消化道反应,随剂量增加,不良反应发生率、严重程度增加,停药或对症治疗能缓解。最大耐受剂量16mg·(m2·d)-1,临床推荐剂量12mg·(m2·d)-1。HCPT在体内主要以酸式结构存在,HCPT在体内呈二室模型。

羟基喜树碱冻干粉针(拓僖)单药治疗晚期恶性肿瘤临床研究的初步报告

背景和目的:羟基喜树碱(HCPT)属拓扑异构酶I(TOPOI)抑制剂,对多种实体肿瘤有一定抗瘤活性,拓僖是羟基喜树碱冻干粉针,其纯度和稳定性明显高于水针剂。本研究的目的是通过用药试验,探索该药临床应用最适剂量以及初步了解其疗效和毒副反应。方法:本多中心研究采用单药拓僖6～8mg/(m2·d),连用5～10天,共治疗各种晚期实体肿瘤60例,其中男性42例,女性18例,年龄17～73岁,中位年龄53岁。初治18例(含6例放疗后),复治42例;肺癌22例,鼻咽癌12例,原发性肝癌9例,胰腺癌2例,结直肠癌9例,其它6例。结果:可评价疗效51例,全组总的有效率为15.7%;6mg/m2组有效率为16%,8mg/m2组有效率为15.4%。按病种计算其有效率肺癌为13.7%(3/22),结直肠癌为33.3%(3/9)以及鼻咽癌为16.6%(2/12);本组60例患者中,总有效率(ITT)为13.3%(8/60),其中初治患者PR3例(16.7%),复治患者PR5例(11.9%)。拓僖的适用剂量为6～8mg/m24小时静脉滴注,连用5～10天,每3周重复;剂量限制性毒性是骨髓抑制,其次为恶性呕吐、腹泻和皮疹,其中Ⅲ+Ⅳ度发生率分别为:WBC下降32%,皮疹8%和血小板8%,恶性呕吐6%,腹泻4%;未发现心脏、肺和肾的毒性反应。结论:拓僖单药(HCPT冻干粉针剂)对复治结直肠癌、非小细胞肺癌和鼻咽癌有较好的疗效,值得在联合化疗中对多种实体肿瘤?

改变检测波长高效液相色谱法测定喜树碱和羟基喜树碱的含量

建立了改变检测波长测定喜树种子中喜树碱和 10 羟基喜树碱的高效液相色谱法。使用TechspheseODSC18(4.6mm× 2 5cm ,5 μm)色谱柱 ,以水∶乙腈 =3∶7(V/V)为流动相 ,流速为 1.0mL/min ,2 5℃下检测。检测波长 :0～ 8min时为 2 6 6nm ,8～ 2 0min时为 2 5 4nm。结果表明 :喜树碱的平均回收率为 10 0 .92 % ,RSD值 1.4 0 % ;羟基喜树碱的平均回收率为 10 0 .0 9% ,RSD值 1.34%。此方法简单、可靠。

羟基喜树碱包衣纳米脂质体的处方及制备工艺研究

目的研究羟基喜树碱包衣纳米脂质体的处方筛选及制备工艺。方法采用薄膜分散法制备羟基喜树碱脂质体;用柱色谱法分离游离药物;用紫外分光光度法测定包封率;用正交实验优选处方;用氯化壳聚糖包被脂质体,经高压乳匀得到纳米脂质体(<100nm)并测定Zeta电位、粒径大小及分布;用不同冻干保护剂进行冷冻干燥,以筛选合适的保护剂。结果最佳处方制备的药物平均包封率为(68.8±0.9)%(n=3);包衣纳米脂质体的Zeta电位为55.1mV,平均粒径为90.9nm,粒径分布为20-120nm;以15%海藻糖做冻干保护剂的脂质体冻干前后粒径变化最小。结论本试验制备的羟基喜树碱包衣纳米脂质体具有包封率高,稳定性好,表面带正电荷等特点,为其进一步研究奠定了基础。

聚乙二醇修饰的羟基喜树碱纳米脂质载体的制备及其小鼠组织分布

本研究采用熔融乳化-高压均质法制备了聚乙二醇(PEG)修饰的羟基喜树碱(HCPT)纳米脂质载体(HCPT-PEG-NLC)及非修饰的羟基喜树碱纳米脂质载体(HCPT-NLC),并考察了其形态、粒径及包封率。测定了HCPT注射液、HCPT-PEG-NLC及HCPT-NLC 3种制剂经小鼠尾静脉注射后在血浆、心、肝、脾、肺、肾及卵巢等主要组织的浓度,评价了HCPT-PEG-NLC及HCPT-NLC在各组织的靶向性效果。透射电镜下观察,HCPT-PEG-NLC及HCPT-NLC呈球形;测得平均粒径分别为(88.6±22.5)和(127.2±43.4)nm;包封率分别为(90.51±3.29)%和(84.37±2.81)%。经小鼠尾静脉注射后,HCPT-PEG-NLC及HCPT-NLC在多数取样时间点的血药浓度较HCPT注射液有所提高,HCPT在各组织中的消除半衰期明显延长。HCPT-NLC蓄集于网状内皮系统(RES),在肝、脾的相对摄取率(Re)和峰浓度比(Ce)明显高于HCPT-PEG-NLC。HCPT-PEG-NLC延长了药物在血浆中的滞留时间,提高了生物利用度,MRT及AUC0-24 h分别为注射液的19.80和17.02倍,并且与HCPT-NLC比较显著降低了RES的吞噬作用,在肺部表现出明显的靶向作用(Re及Ce分别为14.51,41.35)。综上,HCPT-PEG-NLC可延长HCPT的体内循环时间,呈现明显的肺靶向性,有望作为HCPT肺癌治疗的理想载体。

羟基喜树碱脂自制质体注射液与市售注射液家兔体内药代动力学行为的比较

目的 比较自制羟基喜树碱脂质体注射液 (hydroxycamptothecinliposomesinjection ,L HCPT)和市售羟基喜树碱注射液 (markethydroxycamptothecininjection ,M HCPT)在家兔体内的药代动力学行为。方法 分别静脉注射单剂量 ( 1mg kg)的L HCPT和M HCPT ,用HPLC法测定血浆中的药物浓度 ,用 3p87程序和SPSS软件处理和分析数据 ,计算有关药代动力学参数。结果 经 3p87程序拟合 ,家兔静脉注射单剂量L HCPT和M HCPT后 ,其血药浓度 时间数据分别符合权重为1 C C的二室模型 ;静脉注射L HCPT和M HCPT后Cmax分别为 3 1768、1 5 2 19μg ml,t1 2 β分别为 3 3 990 7、2 9 3 92 9min ,AUC分别为 2 8 85 15、11 65 5 1μg·min·ml- 1 ,CL分别为 0 .0 3 5 0、0 0 860L·min- 1 ·kg- 1 ,Vc分别为 0 2 70 0、0 64 0 0L kg ,可见L HCPT比M HCPT注射后具有更高的血药浓度水平 ,较长的消除半衰期 ,更大的血药浓度 时间曲线下面积 ,较低的总体清除率和较小的表观分布容积。结论 L HCPT和M HCPT在家兔体内的一些重要的药代动力学特性发生了明显改变 。

含羟基喜树碱联合治疗方案治疗晚期胃肠道癌临床观察

观察含羟基喜树碱（ＨＣＰＴ）联合治疗方案治疗晚期胃肠道肿瘤６９例。其中ＨＣＰＴ并用５－氟脲嘧啶（５－ＦＵ）、叶酸治疗晚期大肠癌２９例。全部肠癌病人均接受了ＨＣＰＴ（１０～１２ｍｇ／天，静滴４小时，共１０天）治疗。其中１０例同时接受了低剂量５－ＦＵ（０．３５７ｇ／天，持续深静脉输注２１天）、叶酸片（第１天给予ＣＦ３００ｍｇ静滴，第２天起给予叶酸片２０ｍｇ／次，每天３次口服至２１天）治疗；另１９例接受了５－ＦＵ（０．７５ｇ／天，每天静滴４小时共５天）、ＣＦ（３０ｍｇ／天，静滴２小时，共５天）治疗。低剂量５－ＦＵ治疗组的有效率为５０％（５／１０），５例ＰＲ，３例ＮＣ，２例ＰＤ。５－ＦＵ治疗组的有效率为３６．８％（７／１９），７例ＰＲ，９例ＮＣ，３例ＰＤ。总有效率４１．３％。前者毒副作用以腹痛、腹泻为主，其中１例出现Ⅲ度腹痛腹泻。后者以局部静脉炎为主，发生率达９０．１％，白细胞下降率（４７．４％）高于前者（２０％）。ＨＣＰＴ单药或联合阿霉素（ＡＤＭ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）治疗晚期胃癌４０例，单药治疗组５例，１例ＰＲ，有效率２０％；联合治疗组３５例，１２例ＰＲ，有效率３４．３％。毒副反应联合组高于单药组，以白细胞下降明?