羟基红花黄色素A干预脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞脂质运载蛋白2的表达

背景:缺血性脑卒中严重威胁人类健康,缺血缺氧后星形胶质细胞大量表达脂质运载蛋白2加重脑损伤,但其具体机制并不清楚。羟基红花黄色素A具有抗缺血、抗氧化、抗血栓及抗炎等作用,其是否影响脑缺血缺氧后星形胶质细胞表达脂质运载蛋白2,目前尚不清楚。目的:探究羟基红花黄色素A对脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞中脂质运载蛋白2表达的影响及机制。方法:(1)将30只成年SD大鼠随机分成3组:假手术组、大脑中动脉闭塞再灌注组、羟基红花黄色素A组,后2组建立大脑中动脉闭塞再灌注模型,羟基红花黄色素A组在再灌注后以12 mg/kg的剂量腹腔注射羟基红花黄色素A。采用Longa评分法评估神经功能缺损程度,采用TTC染色法测定脑梗死体积,Western blot和免疫荧光检测JAK2/STAT3通路及脂质运载蛋白2的表达,ELISA法检测白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平。(2)将星形胶质细胞分为4组:正常组、糖氧剥夺复糖氧组、羟基红花黄色素A组、AG490组,后3组建立糖氧剥夺复糖氧模型,在糖氧剥夺期间分别用75μmol/L羟基红花黄色素A、10μmol/L酪氨酸磷酸化抑制剂AG490处理星形胶质细胞8 h,进一步验证羟基红花黄色素A对脂质运载蛋白2的作用机制。结果与结论:(1)与假手术组相比,大脑中动脉闭塞再灌注组大鼠脑梗死体积明显增加,并伴有神经功能损伤加重(P<0.01),羟基红花黄色素A治疗可以减小脑梗死体积,改善神经功能(P<0.01);(2)大脑中动脉闭塞再灌注组p-JAK2、p-STAT3和脂质运载蛋白2的表达高于假手术组(P<0.01),羟基红花黄色素A治疗后抑制了p-JAK2、p-STAT3和脂质运载蛋白2的表达(P<0.01);(3)大脑中动脉闭塞再灌注组炎性因子白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平高于假手术组(P<0.01),羟基红花黄色素A治疗后抑制了白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α表达(P<0.01);(4)体外实验糖氧剥夺复糖氧组p-JAK2、p-STAT3、脂质运载蛋白2的表达高于正常组(P<0.01),加入AG490后JAK2、STAT3磷酸化降低,脂质运载蛋白2表达被抑制(P<0.01)。结果表明,羟基红花黄色素A可能通过调控JAK2/STAT3信号通路抑制缺血缺氧后星形胶质细胞中脂质运载蛋白2的表达,从而减轻脑损伤。

Box-Behnken响应面法优化羟基红花黄色素A纳米粒处方工艺及体外释放评价

目的优化羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)纳米粒制备工艺,并对其进行体外释放评价。方法以乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA]为载体,利用改良的复乳法制备HSYA纳米粒,通过Plackett-Burman设计实验联用Box-Behnken响应面法优选最佳制备工艺;利用粒径测定仪、TEM扫描电镜仪、傅里叶红外光谱(FT-IR)仪、X-射线粉末衍射(XRD)仪对纳米粒进行表征;并对其进行4℃储藏稳定性、生理介质中稳定性、冻干保护剂及体外释放率考察。结果优选出纳米粒最佳工艺处方为:pH为6.95,投药量为2.8 mg,载体用量为18.2 mg;在此条件下制备出的纳米粒粒径为(176.4±1.29)nm,多分散系数(Polydiseperse Index,PDI)为(0.152±0.014),Zeta电位为(-17.6±0.46)mV,包封率为(78.5±0.49)%,载药量为(7.3±0.07)%,纳米粒形态圆整,分散性好;在4℃储存环境下、不同生理介质中稳定性良好,最佳冻干保护剂为1%葡萄糖;纳米粒48 h体外释放率为85%。结论该优化方法合理可靠,所得纳米粒稳定性良好,具有一定的缓释作用,体外释放符合一级动力学模型。

基于代谢组学和网络药理学探讨羟基红花黄色素A治疗脓毒症急性肝损伤作用机制

目的采用代谢组学与网络药理学方法探讨羟基红花黄色素A(HSYA)治疗脓毒症急性肝损伤作用机制。方法将50只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(10只)、脓毒症组(20只)和HSYA组(20只),采用盲肠结扎穿刺法构建脓毒症急性肝损伤小鼠模型,HSYA组造模后2 h皮下注射HSYA(2.25 mg/kg)。检测小鼠血清炎症因子含量及肝功能,HE染色观察肝组织病理变化,超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对肝组织进行代谢组学分析,多元数据统计方法筛选差异代谢物,采用网络药理学预测HSYA治疗脓毒症急性肝损伤潜在靶点,并对潜在靶点进行GO和KEGG通路富集分析,用Metabo Analyst 5.0数据库对模型组和HSYA组差异代谢物与潜在靶点进行匹配,构建靶点-代谢物-代谢通路网络,使用AutoDock Vina软件对HSYA与核心靶点进行分子对接,最后采用RT-qPCR验证核心基因表达。结果HSYA能降低模型小鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,恢复肝功能,减轻肝组织病理损伤。代谢组学筛选出26个向假手术组回调的差异代谢物,包括氟芬那酸、白叶藤碱、邻苯二甲酸、甲氰菊酯等,主要涉及不饱和脂肪酸的生物合成、α-亚麻酸代谢等5条代谢通路。网络药理学分析得到HSYA治疗脓毒症急性肝损伤潜在靶点81个,涉及2735个GO条目、124条信号通路;联合分析共匹配到5个差异代谢物,对应IL1B、STAT3、PTGS2、TP53等14个靶点参与HSYA对脓毒症急性肝损伤代谢紊乱的调控。分子对接结果显示,HSYA与IL1B、STAT3、PTGS2、TP53有良好的结合活性。RT-qPCR结果显示,HSYA能抑制肝组织IL1B、STAT3、PTGS2基因表达。结论HSYA可能通过调节IL1B、STAT3、PTGS2基因表达抑制炎症因子释放,维持机体代谢稳态,从而减轻脓毒症急性肝损伤。

羟基红花黄色素A对自发性高血压大鼠肾损伤的保护作用

采用生化检测、HE染色和免疫组化技术,研究了羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rat,SHR)血清生化、氧化应激和肾脏病理的影响.结果表明:与SHR模型组相比,不同剂量HSYA可调节SHR的血清REN、AngⅡ、ALD、ACE、TNF-α和IL-6含量,提高肾组织中SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,上调HMGCS2蛋白表达,改善肾脏病理程度.

基于脂质代谢组学研究羟基红花黄色素A治疗高脂血症LDLR^(-/-)小鼠的作用机制

[目的]基于脂质代谢组学方法考察羟基红花黄色素A(HSYA)对高脂饲料诱导的LDLR^(-/-)小鼠高脂血症脂质代谢的影响及其机制。[方法]将28只雄性LDLR^(-/-)小鼠分为对照组与高脂组。对照组喂养普通饲料,高脂组喂养高脂饲料,6周后,高脂组按照血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量平均分为4组:模型组、辛伐他汀组、HSYA(3.8 mg/kg)低剂量组、HSYA(7.6 mg/kg)高剂量组。给药11周,给药期间同时给予高脂饲料饲养。全自动生化仪检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、LDL-C含量,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理形态,油红O染色观察小鼠肝脏组织脂肪蓄积情况,采用靶向脂质组学技术对LDLR^(-/-)小鼠血清中脂质进行测定。[结果]与对照组比较,模型组小鼠血清中LDL-C、TC、TG、AST、ALT含量升高(P<0.05),肝组织出现大小不等的脂滴浸润,肝细胞排列紊乱,大量脂质蓄积。与模型组比较,HSYA两组小鼠血清中LDL-C、TC、TG、AST、ALT含量降低(P<0.05),肝脏的脂肪变性、脂质蓄积等病理情况得到改善。脂质组学检测结果显示,模型组和对照组之间具有差异的脂质分子共有14种(VIP>1,P<0.05)。HSYA两组与模型组比较,17种脂质分子呈现相反的趋势并具有差异,分别为PE(18∶0/18∶1)、PE(18∶0/18∶2)、PE(18∶0/20∶3)、PE(18∶0/20∶4)、PE(O-18∶0/18∶1)、PE(O-18∶0/20∶4)、LPE(18∶1)、LPE(20∶4)、FFA(22∶4)、PI(18∶0/18∶2)、PI(16∶0/18∶1)、PI(18∶1/18∶1)、LPI(18∶0)、PG(18∶1/16∶1)、PG(18∶1/18∶1)、PG(18∶1/18∶2)、PA(18∶1/18∶1)(VIP>1,P<0.05)。[结论]研究利用脂质组学技术,发现HSYA可以通过调节高脂血症LDLR^(-/-)小鼠血清中脂质代谢水平,发挥治疗高脂血症的作用,为临床应用HSYA提供了新的参考依据。

羟基红花黄色素A减轻双环己酮草酰二腙小鼠髓鞘脱失的机制

背景:在中枢神经系统脱髓鞘疾病的发生发展过程中,小胶质细胞导致的神经炎症是主要病理特征,因此抑制炎症反应对缓解髓鞘脱失非常重要。羟基红花黄色素A有保护血脑屏障、抑制神经元的凋亡、改善神经功能的作用。目的:探究羟基红花黄色素A抑制双环己酮草酰二腙诱导的小鼠髓鞘脱失的作用机制。方法:①体内实验:将30只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、双环己酮草酰二腙组和羟基红花黄色素A组3组,后2组小鼠喂养含0.2%双环己酮草酰二腙的饲料6周建立脱髓鞘小鼠模型,正常组小鼠喂养正常饲料;在第4周末,给予羟基红花黄色素A组小鼠腹腔注射20 mg/(kg·d)羟基红花黄色素A,正常组和双环己酮草酰二腙组小鼠腹腔注射生理盐水,持续2周。旷场实验、高架十字迷宫实验评价小鼠的行为学变化;黑金染色和髓鞘碱性蛋白、降解髓鞘碱性蛋白免疫荧光染色检测胼胝体髓鞘脱失情况;离子钙结合接头分子1免疫荧光染色和ELISA法分别检测小胶质细胞的活化和炎症因子的表达;Western Blot法检测各组小鼠脑中Toll样受体4、髓样分化因子88、核因子κB p65蛋白的表达水平;②体外实验:采用脂多糖诱导建立BV2小胶质细胞炎症模型。将BV2细胞分为正常组、脂多糖组(1μg/mL)和脂多糖(1μg/mL)+羟基红花黄色素A(25μmol/L)组,采用ELISA法检测细胞上清中肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的表达水平。结果与结论:①对比正常组,双环己酮草酰二腙组小鼠焦虑情况严重、自主运动能力异常,胼胝体区髓鞘大量脱失,髓鞘碱性蛋白平均荧光强度显著降低,降解髓鞘碱性蛋白平均荧光强度显著升高,离子钙结合接头分子1阳性小胶质细胞数量增多,脑内白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平升高,Toll样受体4、髓样分化因子88、核因子κB p65的蛋白表达水平明显升高。羟基红花黄色素A治疗后,小鼠上述症状和各项指标均发生相反的变化。②羟基红花黄色素A显著抑制由脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的表达。③上述结果说明羟基红花黄色素A能够显著改善双环己酮草酰二腙诱导的小鼠髓鞘脱失,作用机制与Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子κB p65信号通路抑制小胶质细胞活化介导的炎症反应有关。

基于生物信息学分析探讨羟基红花黄色素A通过JAK2/STAT3信号通路抑制缺血性脑卒中后神经元凋亡的机制

目的:利用生物信息学技术筛选并鉴定缺血性脑卒中(IS)的关键基因,基于基因富集分析结合相关实验探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对脑缺血损伤后神经元凋亡的影响及机制。方法:从GEO数据库获得IS相关的样本数据,进行差异表达基因(DEGs)分析及基因富集分析,获得关键基因与关键信号通路,并通过体内外实验进行相关验证。建立Sprague-Dawley大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型(MCAO/R),采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和免疫荧光检测Janus激酶2(JAK2)/信号传导转录激活因子3(STAT3)通路的磷酸化水平及凋亡相关蛋白的表达;线粒体膜电位探针检测线粒体膜电位情况进而明确细胞凋亡水平。利用HT-22海马神经元细胞建立糖氧剥夺/复糖氧模型(OGD/R),使用JAK2/STAT3信号通路抑制剂进一步验证HSYA对神经元凋亡的作用机制。结果:通过生物信息学分析研究GSE22255数据集发现23个显著上调的DEGs和2个显著下调的DEGs。富集分析发现其与脂多糖的反应、细胞凋亡的调控、炎症反应、急性炎症反应调节、分子干预信号通路相关。生物过程方面,通过建立特征基因功能网络发现,特征基因与急性炎症反应、凋亡信号通路的调节、脂多糖介导的反应、稳态分子的反应等功能相关。基因集富集分析显示,肿瘤坏死因子α(TNF-α)介导的核因子κB(NF-κB)信号通路、血红素代谢信号通路、细胞凋亡相关信号通路、JAK/STAT3信号通路、P53信号通路发挥着关键作用。筛选出JAK2/STAT3信号通路和凋亡相关通路为研究重点。与假手术组比较,MCAO/R组大鼠磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)和促凋亡相关蛋白表达升高(P<0.001),抑凋亡相关蛋白表达降低(P<0.001)。HSYA干预后可抑制JAK2/STAT3信号通路磷酸化激活和神经元凋亡(P<0.01)。体外实验显示,OGD/R组JAK2/STAT3通路被磷酸化激活,促凋亡相关蛋白表达较Normal组升高(P<0.001),抑凋亡相关蛋白表达低于Normal组(P<0.001);加入抑制剂AG490后JAK2、STAT3磷酸化程度降低(P<0.01)。与Normal组比较,OGD/R组凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平升高(P<0.001),Bcl-2表达降低(P<0.001)。HSYA抑制了神经元的凋亡(P<0.01)。结论:JAK2/STAT3信号通路和凋亡相关信号通路在IS后发挥着关键作用,HSYA可能通过调控JAK2/STAT3信号通路,抑制缺血缺氧后神经元凋亡,从而减轻脑损伤。

羟基红花黄色素A对实验性自身免疫性肝炎小鼠的保护作用

目的 利用刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的肝损伤小鼠模型,研究羟基红花黄色素A(hydroxylsafflor yellow A,HSYA)对实验性自身免疫性肝炎小鼠的保护作用。方法 36只BALB/c小鼠随机分为6组,Sham组、Con A组、HSYA低剂量组(5 mg/kg)、HSYA中剂量组(10 mg/kg)、HSYA高剂量组(20 mg/kg)、Sham+HSYA高剂量组(20 mg/kg),每组小鼠各6只。将各组小鼠称质量并记录,通过腹腔注射给药的方式对其进行3 d HSYA预处理,处死小鼠前12 h,尾静脉注射Con A,制作实验性自身免疫性肝炎小鼠模型,最终以二氧化碳吸入法处死小鼠并取材备用。使用全自动生化分析仪检测各组小鼠血浆AST和ALT水平,并进行组间比较。肝组织进行苏木精-伊红染色,镜下观察肝脏组织学变化。应用ELISA检测血浆中TNF-α、 IL-17、IL-10水平。结果 Con A组小鼠体内TNF-α、 IL-17、IL-10水平(F=21.19、F=13.12、F=3.209,P均<0.05)及ALT、AST水平(F=274.33、F=214.91,P均<0.05)高于Shan组,并伴有肝细胞大片坏死。HSYA中剂量和HSYA高剂量组小鼠体内炎症因子水平及氨基转移酶水平低于ConA组,同时伴肝细胞坏死区域缩小。结论 Con A成功诱导小鼠肝组织损伤,HSYA对实验性自身免疫性肝炎小鼠具有保护作用。

羟基红花黄色素A抑制糖氧剥夺/复糖复氧处理后神经元焦亡的作用

背景:羟基红花黄色素A具有抗缺血、抗氧化、抗血栓及抗炎等作用,其是否影响糖氧剥夺/复糖复氧处理后神经元焦亡,目前尚不清楚。目的:探讨羟基红花黄色素A对神经元焦亡的干预作用及机制。方法:取对数生长期的HT22细胞,随机分为5组:正常组、模型组、羟基红花黄色素A组、Colivelin组、Colivelin+羟基红花黄色素A组。利用糖氧剥夺/复糖复氧处理HT22细胞建立神经元焦亡模型,然后给予STAT3激动剂Colivelin、羟基红花黄色素A干预。干预后JC-1探针检测线粒体膜电位变化,活性氧试剂盒检测细胞内活性氧含量,GSDMD/TUNEL染色观察细胞焦亡情况,免疫荧光检测STAT3、GSDMD蛋白表达,RT-PCR检测STAT3、NLRP3、Caspase-1 mRNA表达,Western blot检测p-STAT3、NLRP3、GSDMD、Cleaved-caspase-1、白细胞介素1β蛋白表达。结果与结论:①与正常组相比,模型组焦亡细胞数量增多,p-STAT3、NLRP3、Cleaved-caspase-1、GSDMD、白细胞介素1β蛋白表达显著升高;与模型组相比,羟基红花黄色素A组焦亡细胞数量减少,焦亡相关蛋白的表达显著降低;②与模型组相比,Colivelin组细胞焦亡加剧,线粒体膜电位降低,活性氧含量增加,STAT3、NLRP3、Caspase-1 mRNA表达升高,p-STAT3、NLRP3、GSDMD、Cleaved-caspase-1、白细胞介素1β蛋白表达升高;与Colivelin组相比,Colivelin+羟基红花黄色素A组上述指标均有好转。结果表明:羟基红花黄色素A通过STAT3信号通路抑制糖氧剥夺/复糖复氧后HT22细胞焦亡发挥神经保护作用。

HPLC法测定参梅养胃颗粒(无蔗糖)中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立HPLC法测定参梅养胃颗粒(无蔗糖)中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用色谱柱ODS-C_(18)(4.6 mm×250 mm, 5μm);以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相等度洗脱;检测波长403 nm;柱温25℃;进样量10μL;流速1.0 mL/min。结果:羟基红花黄色素A在0.0480~0.7196μg范围内线性关系良好,平均加样回收率(n=9)为101.74%, RSD值为1.6%。结论:该方法操作简便、准确、重复性好,测定结果稳定,可以作为参梅养胃颗粒(无蔗糖)中羟基红花黄色素A的含量测定方法。

羟基红花黄色素A抑制非小细胞肺癌增殖、迁移和体内成瘤的作用研究

观察红花花瓣提取物羟基红花黄色素A(hydroxysaffloryellowA,HSYA)对人非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299增殖、迁移及体内成瘤的影响。方法 实验分为空白对照组、HSYA10μmol/L组、HSYA100μmol/L组。选取非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299,空白组常规培养液培养,各组加入相应浓度HSYA培养,48小时后显微镜下拍照,CCK-8法检测细胞增殖能力变化,划痕愈合实验检测细胞迁移能力情况,裸鼠皮下成瘤实验检测体内成瘤能力情况变化。结果 HSYA处理48小时后,相比空白对照组,不同浓度的HSYA(10μmol/L、100μmol/L)处理均能显著抑制A549和NCI-H1299细胞生长,且呈浓度依赖性(P均<0.05);相比空白对照组,HSYA100μmol/L组处理后,A549细胞迁移速率减慢(P均<0.05);裸鼠皮下成瘤实验提示,相比对照组,HSYA(2.25mg/kg,1天2次,腹腔注射)后A549和NCI-H1299肿瘤生长减缓,肿瘤重量减少(P均<0.05)。结论 HSYA能显著抑制人非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299增殖、迁移及体内成瘤能力,在非小细胞肺癌治疗可能具有一定的应用价值。

基于网络药理学和动物实验探究羟基红花黄色素A治疗肺纤维化的作用机制

基于网络药理学及动物实验探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)治疗肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)的作用靶点及机制。利用网络药理学相关数据库SwissTargetPrediction、PharmMapper、GeneCards、OMIM、TTD筛选HSYA和PF的作用靶点,取两者交集得到共同靶点,构建蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络。借助DAVID数据库进行GO及KEGG富集分析,以探究HSYA治疗PF可能的分子机制。采用博来霉素建立肺纤维化小鼠模型,通过HE、Masson染色对肺组织进行形态学观察,并检测肺组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;运用免疫组化和Western blot对小鼠肺组织中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PI3K/AKT/mTOR)通路的相关蛋白进行检测。网络药理学方法筛选出药物疾病的共同靶点132个;GO富集分析得到719个条目,KEGG通路富集分析筛选出160条信号通路,主要涉及PI3K-AKT、Ras、MAPK等信号通路。IHC和Western blot结果显示,HSYA组肺组织中的PI3K、AKT、mTOR的蛋白表达较模型组显著减少(P<0.01)。网络药理学分析及动物实验结果提示,HSYA可能通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路来影响PF的发病进程,为HSYA的临床应用提供了科学依据。

高效液相色谱串联质谱法测定天然染料中的羟基红花黄色素A

为鉴别天然染料中羟基红花黄色素A区别于化学合成染料,采用高效液相色谱串联质谱法建立一种天然染料中羟基红花黄色素A的定量鉴别方法。采用25%甲醇水溶液提取、0.25 mL/min流动相流速、5μL进样体积、40℃柱温箱温度、以甲醇-10 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相、梯度洗脱,在多反应监测模式下使用铂金埃尔默色谱柱C18(2.7μm,2.1mm×100 mm)对样品进行分析。结果表明:该方法的质量浓度在0.02~2.00 mg/L时具有良好的线性关系,且拟合度大于0.9990;最低检出限为0.125μg/L,定量限为0.42μg/L,回收率在不同质量浓度下为80%~95%;该方法能够为羟基红花黄色素A的判定提供高效灵敏的检测方案,也为天然染料染色纺织品的产品质量判定提供参考依据。

补阳还五汤质量评价及其活性成分羟基红花黄色素A对内皮细胞损伤保护作用的研究

目的建立同时测定补阳还五汤中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、羟基红花黄色素A、芍药苷、苦杏仁苷5种成分的高效液相色谱(HPLC)分析方法,并研究羟基红花黄色素A对内皮细胞损伤的作用。方法采用HPLC法对补阳还五汤中的5种成分进行质量分数测定及方法学考察。细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK8)法检测羟基红花黄色素A不同浓度对EA.hy926细胞的细胞毒性;qRT-PCR法检测羟基红花黄色素A对TNF-a诱导的EA.hy926细胞损伤中TF、IL-6、IL-1β、MCP-1的mRNA水平。结果5种成分线性关系均良好,相关系数(R2)均在0.9950以上;平均加样回收率在93.80%~101.48%之间,RSD均小于3%,表明方法准确度良好;5种成分质量分数的RSD值在1.78%~2.59%之间。TNF-a(10 ng/mL)刺激EA.hy926细胞后,TF、IL-6、IL-1β、MCP-1的mRNA水平显著升高(P<0.05),而羟基红花黄色素A干预后呈浓度依赖性下调(P<0.05)。结论该方法专属性强、重复性好,稳定、可控,可为补阳还五汤的质量评价提供参考。其活性成分羟基红花黄色素A可改善TNF-a诱导的Ey.hA926内皮细胞损伤,为阐明补其药效物质基础提供参考。

高效液相色谱法测定史国公药酒中羟基红花黄色素A含量

目的建立测定史国公药酒中羟基红花黄色素A含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为Kromasil 100-5-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(12∶88,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为403 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果羟基红花黄色素A质量浓度在2.814~45.025μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9995,n=5);精密度、稳定性,重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均加样回收率为102.12%,RSD为2.44%(n=6)。结论所建立的方法操作简便,结果准确、稳定,且简化了流动相组成及供试品溶液的制备方法,可用于史国公药酒的质量控制。

HPLC法测定中药热敷包中羟基红花黄色素A的含量

目的建立中药热敷包中羟基红花黄色素A的含量测定方法。方法采用Agilent 1260高效液相色谱仪测定热敷包中羟基红花黄色素A的含量,样品用25%乙醇超声提取40 min。Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温:30℃;流动相为乙腈-甲醇-0.7%磷酸水溶液(2∶26∶72),流速:1.0 ml·min^(-1);检测波长:403 nm。结果羟基红花黄色素A在0.511~1.789μg范围内与其色谱峰面积有良好的线性关系(r=0.9999),该方法的平均回收率为98.65%,RSD为0.61%(n=6),3批中药热敷包中羟基红花黄色素A平均含量为0.83 mg·g^(-1)。结论本法稳定可靠,重复性好,可用于中药热敷包的质量检测。

羟基红花黄色素A抑制血管紧张素Ⅱ介导的心脏成纤维细胞肌化

目的研究羟基红花黄色素A对血管紧张素Ⅱ介导的心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响。方法实验细胞随机分为正常对照组、Ang-Ⅱ组、Ang-Ⅱ+HSYA(5μM)组、Ang-Ⅱ+HSYA(25μM)组、Ang-Ⅱ+HSYA(50μM)组和Ang-Ⅱ+HSYA(100μM)组。使用划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测细胞迁移侵袭情况,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)水平,Western blot检测α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ及转化生长因子β1(transforming growthfactor-β1,TGF-β1)的蛋白表达水平。结果Ang-Ⅱ促进心脏成纤维细胞迁移、增加ROS产生;而HSYA抑制了Ang-Ⅱ介导的心脏成纤维细胞迁移以及ROS产生;Western blot发现HSYA抑制了Ang-Ⅱ介导的心脏成纤维细胞α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ及TGF-β1的蛋白表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论HSYA通过减少ROS的产生和下调TGF-β1信号通路抑制Ang-Ⅱ诱导心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞分化。

高效液相色谱法同时测定跌打活血散中羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量

目的:建立跌打活血散中红花和当归的主要成分羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量测定方法。方法:以Agilent ZORBAXSB-C8柱(5 μm, 250 mm × 4.6 mm)为色谱柱,乙腈-0.1%磷酸-四氢呋喃(18:80:2)为流动相,检测波长为340 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃。结果:羟基红花黄色素A在40.2~201.0 μg/mL浓度范围内线形关系良好,r = 0.9995 (RSD = 1.6%, n = 5),平均回收率为96.2% (RSD = 1.3%, n = 6);阿魏酸在1.01~5.05 μg/mL浓度范围内线形关系良好,r = 0.9997 (RSD = 1.1%, n = 5),平均回收率为98.6% (RSD = 1.5%, n = 6)。结论:本方法简便、准确,结果稳定,可用于跌打活血散中红花和当归的主要成分羟基红花黄色素A和阿魏酸的测定。

羟基红花黄色素A对脑组织蛋白质硝基化及对损伤侧脑组织保护作用的研究

目的探究羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)通过细胞实验及动物实验对损伤侧脑组织的保护作用,观察ONOO-及Heme/NaNO_(2)/H_(2)O_(2)途径对脑组织蛋白硝基化以及HSYA的影响,探讨HSYA对损伤脑组织的保护作用。方法选取30只SD大鼠分为正常组(Control组)、模型组(Model组)及HSYA干预组(HSYA组)。采用Western blot检测3-NT蛋白表达水平,通过细胞实验观察HSYA对脑缺血再灌注损伤诱导的脑组织蛋白质硝基化、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达情况的影响,初步探讨HSYA对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。选取120只SD大鼠分为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(CIRI组)及HSYA治疗组(HSYA+CIRI组)。通过改良线栓法制备大鼠脑梗死模型,采用免疫组化及Western blot检测3-NT蛋白表达水平,使用ABTS法检测T-AOC,使用ELISA法检测CAT、SOD及GSH-Px。结果经细胞实验发现ONOO-及Heme/NaNO_(2)/H_(2)O_(2)途径均可增加脑组织中3-NT且经HSYA预处理后对3-NT具有明显抑制作用。HSYA组脑组织中3-NT含量明显低于Model组(P<0.05)。经动物实验发现HSYA具有改善CIRI后脑组织的损伤,降低3-NT蛋白表达,升高T-AOC、CAT、SOD及GSH-Px在脑组织内中含量,对损伤侧脑组织具有保护作用。HSYA+CIRI组损伤侧脑组织中3-NT蛋白含量明显低于CIRI组(P<0.05),损伤侧脑组织中3-NT阳性细胞数明显低于CIRI组(P<0.05),损伤侧脑组织中T-AOC、CAT、SOD及GSH-Px含量明显高于CIRI组(P<0.05)。结论HSYA可抑制ONOO-及Heme/NaNO_(2)/H_(2)O_(2)途径在体外对脑组织蛋白硝基化的修饰作用,且HSYA可抑制损伤侧脑组织中3-NT含量,提高T-AOC、CAT、SOD及GSH-Px含量,具有较强抗氧化作用。

羟基红花黄色素A对脂多糖诱导抑郁模型大鼠的影响

目的:通过脂多糖(LPS)诱导建立大鼠抑郁模型,研究羟基红花黄色素A的抗抑郁作用。方法:腹腔注射LPS建立大鼠抑郁模型,设置正常对照组、模型组、阳性对照组和羟基红花黄色素A不同剂量给药组,评价大鼠抑郁样行为,检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、BDNF和5-HT含量,观察海马组织病理学变化,检测TLR/NLR信号通路蛋白表达情况。结果:与抑郁模型组相比,羟基红花黄色素A各剂量组大鼠水平运动、垂直运动及糖水偏好率增加,悬尾和游泳不动时间减少(P<0.01);血清BDNF、5-HT水平升高,TNF-α、IL-1β及IL-6水平下降(P<0.01);海马组织TLR2、NLRP1、NLRP3、ASC、TLR4和Caspase-1蛋白表达水平均降低(P<0.01)。结论:羟基红花黄色素A可改善LPS诱导的大鼠抑郁样行为,其机制可能与抑制TLR/NLR信号通路有关。