新冠病毒肺炎后肺纤维化的研究进展

新型冠状病毒肺炎(COVID-19),简称“新冠肺炎”,是由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的传染病,具有强大的传播性和感染性。而新冠病毒肺炎后肺纤维化(PCPF)是COVID-19后严重的并发症。本文综述了PCPF的流行病学、发生发展机制、危险因素、临床表现及诊断和治疗的最新研究进展,以期为PCPF患者的治疗提供更多诊治思路。

基于自噬探究补肺活血胶囊对博来霉素诱发小鼠肺纤维化的抑制作用

目的 基于自噬与上皮间质转化(EMT)角度探究补肺活血胶囊对肺纤维化(PF)小鼠的作用。方法 105只C57BL/6J小鼠随机分为正常组,模型组,雷帕霉素组(2 mg/kg,腹腔注射),低、中、高剂量补肺活血组(0.32、0.63、1.62 g/kg补肺活血胶囊,灌胃)和补肺活血+3-MA组(1.62 g/kg补肺活血胶囊,灌胃;30 mg/kg 3-MA,腹腔注射)。通过对小鼠气管内单次注射2.5 mg/kg博来霉素(BLM)来诱导PF,造模成功后1 d开始给药,持续21 d。统计小鼠存活率与体质量,采集肺泡灌洗液(BALF)并测定总细胞与总蛋白,测定肺组织湿干重比与羟脯氨酸水平,苏木精和伊红(HE)染色和Masson三色染色观察肺组织病理学变化,RT-qPCR法检测肺组织EMT相关因子(E-cad、Vim、α-SMA、TGF-β1)mRNA表达,Western blot法检测肺组织EMT相关蛋白以及自噬相关蛋白(p-mTOR、mTOR、P62、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin1)表达。结果 与模型组比较,雷帕霉素与补肺活血胶囊干预后PF小鼠生存率提高,体质量增加,肺组织湿干重比、BALF总细胞和总蛋白、羟脯氨酸水平均降低,肺组织病理形态改善,肺组织上皮细胞标志物E-cad mRNA及蛋白表达升高,间质细胞标志物Vim、α-SMA、TGF-β1 mRNA和蛋白表达降低,p-mTOR/mTOR、P62蛋白表达降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1蛋白表达升高;3-MA干预后PF小鼠各指标与模型组无明显差异。结论 补肺活血胶囊可通过促进上皮细胞自噬并抑制EMT来缓解BLM诱导的PF小鼠肺损伤。

巨噬细胞向肌成纤维细胞转化促进LPS诱导的急性肺损伤模型小鼠肺纤维化

目的探讨巨噬细胞向肌成纤维细胞转化(MMT)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠肺纤维化过程中的作用。方法将21只小鼠分为7组:对照组、不同时间点LPS诱导小鼠早期肺纤维化(LPS-PF)模型组和不同时间点氯磷酸二钠脂质体(CL-LIP)干预组(n=3)。用HE、Masson染色评估各组肺纤维化程度;用免疫荧光检测MMT过程中CD68和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)共标记阳性细胞数量。骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)分为对照(Ctrl)组和转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(n=3);用RT-qPCR检测各组α-SMA、纤连蛋白(FN)、人I型胶原蛋白(Col1)表达水平。用Western blot检测各组间α-SMA以及Smad同源物3(Smad3)、磷酸化的Smad3(p-Smad3)蛋白表达量。结果LPS-PF模型小鼠肺组织第7天Ashcroft评分较对照(Ctrl)组显著增高(P<0.01);但在CL-LIP组中肺纤维化程度较LPS-PF组明显减轻(P<0.05)。肺组织免疫荧光染色发现,CL-LIP组CD68α-SMA共标记阳性细胞数较LPS-PF组对应时间点明显减少(P<0.01)。体外实验中,TGF-β1刺激组48 h、96 h后α-SMA、FN、Col1较对应时间点表达量明显增加(P<0.01)。检测体内、体外实验中Smad3、p-Smad3的蛋白表达量,发现LPS-PF组(第7天、第10天)和TGF-β1刺激组(48 h和96 h)均较各自对照(Ctrl)组明显增加(P<0.01)。结论MMT具有促进LPS诱导模型小鼠肺纤维化的作用,其转化过程可能经Smad3调节。

益气活血宽胸祛痰法治疗特发性肺纤维化的临床疗效观察

目的观察益气活血宽胸祛痰法对特发性肺纤维化(IPF)的临床治疗效果。方法选取2019年9月至2020年12月就诊于成都中医药大学附属医院急诊科/中医经典病房的41例IPF患者为研究对象,按照随机数字表法分为试验组21例,对照组20例。对照组给予西医常规治疗,试验组在对照组治疗基础上采用“益气活血宽胸祛痰”中药汤剂,每日3次,每次100mL,疗程3个月。比较两组治疗前后中医证候积分、血气分析和肺功能检查结果及6分钟步行试验(6MWT)距离。结果治疗后试验组总有效率和6MWT距离均高于对照组(P<0.05);中医证候主症咳痰、咳嗽、喘息症状评分及中医证候总积分均低于对照组(P<0.05);治疗后两组肺功能中肺一氧化碳弥散量(DLCO)占预计值百分比(DLCO%)水平较治疗前升高,且试验组高于对照组(P<0.05);血气分析中试验组氧分压(PO_(2))指标高于对照组(P<0.05)。结论益气活血宽胸祛痰法可改善试验组患者中医证候量化评分、血气PO_(2)水平,增强肺弥散功能,提高6MWT距离;同时可减缓肺通气功能障碍的下降进程,改善临床症状,较西医常规治疗更具有优势。

肺纤维化脂质代谢研究概况

肺纤维化是一种预后较差的弥漫性、间质性肺病,其发病机制尚未完全明确。脂质作为构成细胞结构以及参与信号转导的一类关键成分,对维持肺部功能起着重要作用。越来越多的研究表明,脂质变化与肺纤维化的进展密切相关。该文对脂质组学在肺纤维化中的研究进展,以及各类脂质在肺纤维化中的作用进行简要概述。

新型冠状病毒诱发的炎症后肺纤维化治疗新进展

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染属于全球重大突发公共卫生事件,对全球卫生系统造成重大威胁。SARS-CoV-2感染康复后部分患者长时间存在多种呼吸道症状,这被称为SARS-CoV-2感染急性期后遗症,SARSCoV-2感染后肺纤维化(PCPF)作为其中一种后遗症可不同程度影响患者的呼吸功能和生活质量。有关PCPF的治疗是目前研究的热点,本文就PCPF的治疗方法做一综述,旨在改善PCPF患者的预后。

中医药治疗特发性肺纤维化研究进展

特发性肺纤维化是原因不明的慢性进行性致纤维化间质性肺炎,主要见于中老年男性,局限于肺,临床上呈渐进性呼吸困难和肺功能恶化,组织病理学和胸部HRCT表现为特征性的寻常型间质性肺炎。特发性肺纤维化属中医学“肺痿、肺痹”范畴,中医对此病的认识历史悠久,优势明显,近年来受到越来越多的重视,通过对近5年多(2018年—至今)中医药在特发性肺纤维化的研究文献进行总结,主要从病机(“肺虚络瘀”论、“热毒滞络”论、“肺寒络凝”论、其他)、临床研究(古方、自拟方、中成药、六字诀呼吸操、热敏灸)2方面进行了综述,以期为此病的治疗提供有益的参考。

新冠康复1号方治疗小鼠肺纤维化的抗氧化保护机制

目的探讨新冠康复1号方对小鼠肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)的干预作用及其作用机制。方法72只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,随机分为6组:对照组(Con组)、博来霉素模型组(BLM组)、新冠康复1号方低剂量组(XL组)、新冠康复1号方中剂量组(XM组)、新冠康复1号方高剂量组(XH组)、醋酸泼尼松组(P组),每组12只。采用气管注射5 mg/kg博来霉素(bleomycin,BLM)诱导小鼠肺纤维化模型。收集各组小鼠血清和肺组织,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学改变;检测活性氧族(reactive oxygen species,ROS),采用试剂盒测定血清氧化应激指标[丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)];用细胞凋亡染色(Tunel染色)观察肺组织细胞凋亡情况,用免疫荧光染色(SP-C染色)染色观察氧化应激对肺泡上皮细胞损伤情况,使用电镜进一步观察小鼠肺泡上皮细胞及线粒体的变化,采用Western blotting检测B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bax基因、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白活性。结果HE染色、Masson染色结果提示BLM诱导的小鼠肺纤维化模型构建成功,给予新冠康复1号方后肺纤维化表型明显改善;氧化应激结果显示:新冠康复1号方可抑制ROS和MDA生成,增强GSH-Px、SOD的活性;Tunel染色、SP-C染色和电镜学观察显示新冠康复1号方可减轻BLM对小鼠肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells,AECs)的损伤程度,保护线粒体的结构和功能;Western blotting检测结果显示:新冠康复1号方可下调凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3的表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论新冠康复1号方可通过纠正氧化/抗氧化失衡,改善肺泡上皮细胞损伤,保护线粒体结构从而改善肺纤维化,为开发肺纤维化的治疗药物提供一定的理论基础。

Mfn2通过Ras-Raf-ERK1/2信号通路抑制ARDS肺纤维化及其机制

目的探讨线粒体融合蛋白(Mfn)2通过细胞外信号调节激酶(Ras-Raf-ERK)1/2信号通路抑制急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化及其机制。方法离体培养人胚肺成纤维细胞(HELF),给予脂多糖(LPS)刺激建立ARDS细胞模型,构建腺病毒重组体Adv-Mfn21-264-GFP、Adv-Mfn2265-757-GFP、Adv-Mfn21-757-GFP,分别转染HELF,使其分别过表达Mfn2的N端GTP酶结构域(aa1-264)、C端跨膜区(aa265-757)及Mfn2的全长氨基酸残基(aa1-757),将细胞分为:Control组、Adv-vector组、LPS组、Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组;噻唑蓝(MTT)法观察各组HELF细胞增殖情况,并检测细胞内胶原蛋白的表达情况,Western印迹及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Ras信号通路Ras、Raf-1及ERK1/2的表达。结果Control组与Adv-vector组细胞增殖水平无明显差异(P>0.05);与Control组比较,LPS组第2、3、4、5、6天细胞增殖水平均明显增加(P<0.01);转染不同Mfn2基因片段后,与LPS组比较,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组肺成纤维细胞增生受到抑制,细胞增殖水平明显下降(P<0.01);且LPS组较Control组细胞内胶原蛋白含量明显增加,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组较LPS组细胞内胶原蛋白含量明显减少(均P<0.01);Western印迹及RT-PCR检测结果显示,与Control组比较,LPS组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显增加,而转染不同Mfn2基因片段腺病毒后,与LPS组比较,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显下调(均P<0.05)。结论Mfn2可能通过N端GTP酶结构域、C端跨膜区调控Ras-Raf-ERK1/2信号通路影响成纤维细胞异常增殖抑制ARDS肺纤维化。

特发性肺纤维化肺内相关共病异病同证基因组生物信息学分析

目的通过基因组生物信息学分析探讨特发性肺纤维化(IPF)肺内相关共病(肺动脉高压、阻塞性睡眠呼吸暂停综合征、慢性阻塞性肺疾病、肺癌)异病同证生物学基础。方法下载GSE110147、GSE113439、GSE135917、GSE106986和GSE118370数据集,筛选各病例组与对照组的差异基因,运用Cytoscape3.10.0软件进行拓扑分析以筛选核心基因,运用OmicShare平台对核心基因进行GO和KEGG通路富集分析。结果共筛选出IPF肺内相关共病核心基因23个。GO富集分析显示,核心基因生物过程主要富集于细胞进程、代谢进程、生物调控/生物进程调控、发育进程、底物定位进程、刺激反应、免疫系统进程、信号转导,细胞组分主要富集于细胞解剖实体、含蛋白复合物,分子功能主要富集于结合途径、酶催化活性、结构分子活性、分子适配器活性、分子功能调节因子、转录调控因子活性;KEGG通路富集分析显示,核心基因主要富集于真核生物核糖体的生物合成、糖尿病并发症AGE-RAGE信号通路、Th17细胞分化、JAK-STAT信号通路、RNA聚合酶、中性粒细胞胞外诱捕网形成等信号通路。结论运用基因组生物信息学分析探讨IPF肺内相关共病核心基因及信号通路,可在一定程度上揭示IPF肺内相关共病异病同证作用机制。

结合网络药理学分析p53信号通路在麦门冬汤改善肺纤维化小鼠模型中的作用

目的探讨麦门冬汤对肺纤维化小鼠模型的干预作用及其药理机制。方法将C57BL/6小鼠随机分成对照组、模型组、干预组,每组6只,模型组小鼠经气管滴注博来霉素建立肺纤维化小鼠模型,干预组造模24 h后麦门冬汤灌胃给药20 d,观察小鼠一般情况,HE染色观察肺组织的病理变化,免疫组化和Western blot分析α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)和钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)的表达情况。网络药理分析麦门冬汤干预肺纤维化的潜在机制。其后通过转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3构建肺纤维化细胞模型,麦门冬汤含药血清和(或)p53抑制剂(pifithrin-α,PFT-α)干预后,荧光定量PCR和Western blot检测p53、α-SMA、E-cadherin和I型胶原蛋白(collagen type I,Collagen I)的表达情况。结果与对照组比较,肺纤维化小鼠模型肺组织均出现大面积实变区和大量炎性细胞浸润,α-SMA表达增加,E-cadherin降低(P<0.01),麦门冬汤干预后上述症状得到显著改善。网络药理学分析发现麦门冬汤的差异药靶基因主要富集在p53信号通路。细胞实验则显示麦门冬汤组含药血清干预可使肺纤维化细胞模型中α-SMA下调,E-cadherin和p53表达上调(P<0.01)。PFT-α干预实验中,PFT-α干预后对照组和麦门冬汤组中p53和E-cadherin表达降低,α-SMA和Collagen I表达升高(P<0.01)。结论麦门冬汤可通过调节p53信号通路改善肺纤维化进展。

肺痹方干预肺纤维化小鼠肺泡上皮细胞线粒体途径凋亡的机制

背景:研究表明,线粒体介导的肺泡上皮细胞凋亡在肺纤维化发病中起着重要的作用,而肺痹方可以减轻肺纤维化,抑制肺纤维化小鼠细胞外机制转化。目的:探讨肺痹方对博来霉素致肺纤维化小鼠肺泡上皮细胞线粒体途径凋亡的机制。方法:40只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组、模型组、吡非尼酮组、肺痹方组,每组10只。除空白对照组外,其他3组腹腔注射博来霉素[7.5 mg/(kg·d)]建立肺纤维化模型,连续注射10 d。造模后第1天各药物组小鼠灌胃给药[51.43/(kg·d)]吡非尼酮或[12.86 mg/(kg·d)肺痹方],连续给药28 d。用药结束后取材,采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察小鼠肺组织的形态学变化,ELISA法检测血清中白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素17、白细胞介素37水平,Western-blot法检测肺组织中Bax、Bcl-2、Beclin-1和Caspase3表达。结果与结论:①肺组织的形态学观察显示,模型组肺泡间隔及肺泡腔有大量炎症细胞浸润,出现大片融合成团的纤维灶;吡非尼酮组肺泡间隔增厚,炎症细胞少量浸润,出现肺纤维灶;肺痹方组肺泡结构增宽,少量的炎症细胞浸润,肺泡结构几乎无明显受损,少量肺纤维灶。②与空白对照组相比,模型组小鼠血清白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素17和白细胞介素37质量浓度明显升高(P<0.01),两用药组明显低于模型组(P<0.01),肺痹方组低于非尼酮组。③与空白对照组相比,模型组小鼠肺组织Bax和Caspase3蛋白表达显著升高,两用药组均低于模型组;与空白对照组相比,模型组Bcl-2和Beclin-1蛋白表达显著降低,两用药组均高于模型组。④结论:肺痹方可以减轻肺纤维化,其机制可能与下调白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素17和白细胞介素37水平,以及调节线粒体凋亡Bax、Bcl-2、Beclin-1和Caspase3相关蛋白从而减少肺泡上皮细胞凋亡有关。

吡非尼酮和尼达尼布对156例特发性肺纤维化患者的临床效果及对肺功能的影响

目的研究吡非尼酮和尼达尼布对特发性肺纤维化(IPF)患者的临床治疗效果及对肺功能相关指标的影响。方法选择2019年至2022年间,我院呼吸与危重症医学科收治的156例IPF患者,随机分成乙酰半胱氨酸对照组(n=48)、吡非尼酮观察组(n=51)和尼达尼布观察组(n=57),观察组分别给予吡非尼酮或尼达尼布进行治疗,对照组患者按照常规方法给药乙酰半胱氨酸治疗,疗程为48周。比较三组药物对IPF患者治疗前后的用力肺活量(FVC)、一秒量(FEV_(1))、一氧化碳弥散量占预计值比例(D_(L)CO%pred)指标的影响;检测血清涎液化糖链抗6(KL-6)、干扰素-γ、白介素-6(IL-6)和乳酸脱氢酶(LDH)表达;统计圣乔治呼吸问卷(St.George’s Respiratory Questionnaire,SGRQ)评分、复发率以及生存曲线。结果治疗48周后,吡非尼酮和尼达尼布观察组患者的FVC和FVC%pred指标较对照组相比均有统计学差异(P<0.05),尼达尼布观察组治疗48周后,FVC较对照组下降140 mL/年,吡非尼酮观察组较对照组下降110 mL/年,两观察组之间无统计学差异(P>0.05);对照组治疗前后患者的血清KL-6值和干扰素-γ值无统计学差异,而吡非尼酮和尼达尼布两观察组治疗前后患者血清KL-6和干扰素-γ值均显著下降(P<0.05),三组患者治疗前后的IL-6和LDH表达变化均无统计学差异(P>0.05)。治疗48周后随访,对照组患者急性发作率为45.83%,吡非尼酮观察组患者急性发作率为23.53%,尼达尼布观察组患者急性发作率为22.81%;治疗后两观察组患者的SGRQ评分显著降低,生活质量具有明显优势。结论吡非尼酮或尼达尼布均可延缓IPF患者肺功能下降,降低患者血清KL-6和干扰素-γ水平,治疗效果显著,治疗方案对临床使用具有重要的指导作用。

特发性肺纤维化合并肺动脉高压的发病机制和治疗进展

特发性肺纤维化的晚期常合并肺动脉高压,病理表现为肺血管重塑、增殖和炎症,肺动脉高压的出现加重原有肺部疾病症状,导致右心衰竭,死亡风险增加、预后差、社会及家庭负担重。特发性肺纤维化合并肺动脉高压目前病因尚不明确、治疗棘手。本文对特发性肺纤维化合并肺动脉高压的发病机制及治疗进展进行综述,以期为特发性肺纤维化合并肺动脉高压的研究和治疗方案的制定提供新的思路。

CTD-ILD合并肺部感染患者肺部微生物菌群特点及对肺纤维化的影响

目的探讨结缔组织病相关间质性肺疾病(CTD-ILD)合并肺部感染患者肺部微生物菌群特点及对肺纤维化的影响。方法选取2021年2月至2022年5月在医院治疗的45例CTD-ILD合并肺部感染患者作为观察组,同时选取45例CTD-ILD未合并肺部感染患者作为对照组,比较两组肺功能、高分辨CT(HRCT)肺纤维化评分,同时分析观察组病原菌分布情况。结果观察组用力肺活量占预计值百分比(FVC%pred)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV 1%pred)、一氧化碳弥散量占预计值百分比(DLCO%pred)、用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(MEF)和残气容积(RV)低于对照组(P<0.05);观察组HRCT影像学斑片状、支气管扩张比率高于对照组(P<0.05),CT纤维化评分高于对照组(P<0.05)。观察组病原菌分布:细菌分布中以肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌为主,分别占24.44%和15.56%,病毒检出巨细胞病毒、人类疱疹病毒,分别占11.11%和6.67%,真菌检出白念珠菌,占11.11%。观察组年龄≥60岁患者CT纤维化评分高于年龄<60岁患者(P<0.05)。结论CTD-ILD合并肺部感染患者以细菌感染为主;相比较未合并肺部感染患者,合并肺部感染患者肺纤维化较重。

豆蔻明对肺纤维化的治疗作用及机制

目的观察豆蔻明(Cardamonin,CDN)对肺纤维化小鼠的作用,并探究其对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/smad信号通路的影响。方法将小鼠随机分为生理盐水(Sham)组、博莱霉素(Bleomycin,BLM)组、豆蔻明低剂量(low dose of Cardamonin,CDN-L)组、豆蔻明中剂量(medium dose of Cardamonin,CDN-M)组、豆蔻明高剂量(high dose of Cardamonin,CDN-H)组、地塞米松(dexamethasone,DXM)组;单次气管注射BLM诱导肺纤维化,计算肺指数;酶联免疫吸附法测血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;试剂盒测肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,苏木精-伊红、马松染色观察肺炎症程度及纤维化情况,RT-PCR法检测肺组织TGF-β1/smad信号通路相关基因表达情况。结果与Sham组相比,BLM组小鼠肺指数、Szapiel评分、Ashcroft评分明显升高(P<0.05),肺部炎症程度和纤维化程度严重。血清中TNF-α含量升高(P<0.05)、肺组织HYP水平升高(P<0.05),TGF-β1[(1.02±0.21)vs.(3.25±0.14)]、smad2[(1.00±0.05)vs.(1.63±0.09)]、smad3[(1.00±0.06)vs.(1.82±0.07)]、α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)[(1.00±0.10)vs.(2.15±0.10)]mRNA表达升高(P<0.05),上皮-钙黏蛋白(E-Cadherin)[(1.01±0.16)vs.(0.57±0.09)]mRNA水平降低(P<0.05)。CDN-M、CDN-H干预可减低小鼠肺指数,减轻炎性和肺纤维化,降低TNF-α、HYP水平(P<0.05),同时下调肺纤维小鼠肺组织中TGF-β1、smad2、smad3、α-SMA表达,上调E-Cadherin表达。CDN-L无明显治疗效果,CDN-H治疗作用与DXM相似。结论CDN可能通过TGF-β1/Smad通路介导上皮-间充质转化而发挥抗纤维化作用。

Wnt/β-catenin信号通路在肺纤维化中的作用及中医药调控研究进展

肺纤维化(Pulmonary fibrosis,PF)是一种致命且不可逆的呼吸系统疾病,在间质性肺疾病终末期过度表现,以肺泡上皮细胞损伤及异常修复、成纤维细胞增殖、细胞外基质过度沉积等为病理特征,对人类健康造成严重危害,已成为威胁世界范围的公共卫生问题。Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路是PF经典通路之一,能够直接或间接参与细胞增殖、炎症细胞浸润、肺组织血管新生及上皮间质转化(EMT)等。中医药在防治PF方面已取得不错的效果,其中有不少中药复方及单体或有效成分通过靶向调节Wnt/β-catenin信号通路作用于PF,文章对近年来中医药调控Wnt/β-catenin信号通路治疗PF相关研究成果进行综述,以期为中医药临床应用提供合理选择。

黄芪甲苷靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR通路激活肺泡细胞自噬治疗肺纤维化

目的探究黄芪甲苷-IV(Astragaloside IV,AS-IV)靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活自噬,抑制特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)发展进程的作用机制。方法通过气管注射10 mg·kg^(-1)博莱霉素造模小鼠IPF,分别以10、20、40 mg·kg^(-1) AS-IV及5 mg·kg^(-1)醋酸泼尼松连续治疗28 d。对肺样本进行伊红美蓝,马松染色,及透射电镜观察。实时荧光定量法(qRT-PCR)或蛋白免疫印迹法(Western blot)检测样本中miR-21、P62、Beclin^(-1)、LC3B、PTEN、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR等的表达。结果醋酸泼尼松及40 mg·kg^(-1) AS-IV可显著减少肺纤维组织增生与炎性细胞浸润,抑制嗜锇性板层小体变性,促进肺泡上皮细胞中自噬体的形成,显著上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例与Beclin^(-1)、PTEN蛋白表达,下调P62、miR-21表达,并抑制mTOR与AKT的磷酸化。但AS-IV治疗对PI3K表达无明显影响。结论AS-IV通过靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活,从而激活肺泡细胞自噬逆转IPF。

间质性肺疾病患者肺纤维化指标的变化及与患者预后的关系

间质性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)为一组发病原因不明确的异质性肺疾病,发病隐匿,其主要病理变化为肺间质内的纤维化或炎症,造成体内气体交换障碍,临床表现为呼吸衰竭或进行性呼吸困难^([1-2])。由于ILD患者临床特征不显著,且在血管炎、结节病和感染等疾病患者中也会出现和ILD患者一样的肉芽肿病变,导致其临床诊断难度大,影响患者预后。纤维化为机体对慢性损伤所产生的免疫反应,如果持续存在损害且纤维化过量会激活固有免疫、募集、增殖及活化成纤维细胞,加速细胞外基质的形成与交联,产生大量瘢痕组织而诱发器官功能衰竭^([3])。

桔梗素D通过下调成纤维细胞TRPC6表达改善小鼠肺纤维化

目的探究桔梗素D(PD)对肺纤维化的影响及其机制。方法博来霉素(BLM)气道内滴入构建C57BL/6J小鼠肺纤维化模型,再予PD(10 mg/kg)灌胃,28 d后处死小鼠。分组如下:对照组(control)、BLM(10 mg/kg)模型组、BLM(10 mg/kg)+PD(10 mg/kg)组。肺组织石蜡切片HE染色、免疫组化和天狼星红染色评估小鼠肺组织纤维化程度和瞬时受体电位离子通道亚族C成员6(TRPC6)的表达与分布。Westernblot检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。小鼠原代肺成纤维细胞体外培养,分别用PD、TRPC6抑制剂醋酸落叶松酯(LA)预处理后加入转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激细胞,根据加入的TGF-β1和PD浓度不同分组如下:control组、TGF-β1(10 ng/mL)组、PD(2.5μmol/L)+TGF-β1组、PD(5μmol/L)+TGF-β1组和PD(10μmol/L)+TGF-β1组,LA处理分组如下:control组、TGF-β1(10 ng/mL)组和LA(10μmol/L)+TGF-β1组,测定细胞存活率、collagenⅠ、α-SMA和TRPC6的表达水平、活性氧(ROS)生成水平、线粒体膜电位、细胞增殖能力等指标。利用网络药理学方法结合文献分析PD作用于肺纤维化可能通过的机制。结果PD可明显减轻BLM诱导小鼠模型的肺部纤维化程度、减少α-SMA表达(P<0.05)。CCK-8结果显示PD、TGF-β1和LA的最适宜刺激浓度分别是10μmol/L、10 ng/mL和10μmol/L;5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色结果显示PD能够有效抑制肺成纤维细胞增殖;2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色显示PD能有效减少TGF-β1诱导的细胞ROS生成(P<0.0001);线粒体膜电位检测(Jc-1染色)结果显示PD能有效缓解TGF-β1诱导的细胞线粒体膜电位下降(P<0.001);蛋白电泳结果显示PD能显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA和collagenⅠ的表达(P<0.05)。网络药理学结合文献分析发现PD可能通过TRPC6作用于肺纤维化。免疫组织化学结果显示PD明显减轻了BLM诱导的肺组织TRPC6表达。蛋白电泳结果显示PD可明显抑制TGF-β1诱导的TRPC6表达(P<0.05);使用LA可明显抑制细胞TRPC6、α-SMA、collagenⅠ的表达(P<0.05)。结论PD可降低小鼠肺纤维化,其机制可能与下调TRPC6并减少ROS产生有关。