雷帕霉素对高糖诱导的人肾小球足细胞增殖、凋亡和IL-6表达的影响及其机制

目的观察雷帕霉素对高糖诱导的人肾小球足细胞增殖、凋亡和IL-6表达的影响,并基于磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(AKT)信号通路探讨相关机制。方法体外培养人肾小球足细胞系HGPC,分为对照组、高糖组、实验组,对照组不做干预,高糖组、实验组加入30 mmol/L D-葡萄糖,实验组在此基础上分别加入2.5、5、10μmol/L雷帕霉素,检测各组细胞活力,筛选雷帕霉素最适浓度。将HGPC细胞分为对照组、高糖组、实验组、抑制剂组、雷帕霉素+抑制剂组、雷帕霉素+激动剂组;对照组不加药物,高糖组加入30 mmol/L D-葡萄糖,抑制剂组加入30 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002,实验组、雷帕霉素+抑制剂组、雷帕霉素+激动剂组加入30 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L雷帕霉素,雷帕霉素+抑制剂组再加入10μmol/L LY294002,雷帕霉素+激动剂组再加入10μmol/L PI3K/AKT信号通路激动剂SC79;各组给药后培养24 h。采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷法检测细胞增殖能力,Hoechst 33258染色检测凋亡细胞;采用ELISA法检测细胞培养液上清中的白细胞介素6(IL-6);Western blotting法检测细胞中的细胞周期素D1(Cyclin D1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)及PI3K/AKT通路相关蛋白。结果高糖组细胞增殖率、Cyclin D1表达低于对照组,实验组和抑制剂组细胞增殖率、Cyclin D1表达高于高糖组;与实验组相比,雷帕霉素+抑制剂组细胞增殖率、Cyclin D1表达增高,雷帕霉素+激动剂组细胞增殖率、Cyclin D1表达降低(P均<0.05)。高糖组细胞凋亡率、Caspase-3表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、IL-6水平高于对照组,实验组和抑制剂组细胞凋亡率、Caspase-3表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、IL-6水平低于高糖组;与实验组相比,雷帕霉素+抑制剂组细胞凋亡率、Caspase-3表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、IL-6水平下降,雷帕霉素+激动剂组凋亡率、Caspase-3表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、IL-6水平上升(P均<0.05)。结论雷帕霉素可促进高糖诱导的人肾小球足细胞增殖,减少细胞凋亡,减轻炎症损伤,其机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。

基于JAK/STAT3信号通路探讨SLIT3对高糖诱导的人肾小球足细胞炎症反应的影响

目的探讨SLIT3能否调控JAK/STAT3信号通路调控高糖诱导的肾小区足细胞炎症反应。方法将肾小球足细胞MPC-5随机分为L-Glucose+NC siRNA组、L-Glucose+SLIT3组、L-Glucose+SLIT3 siRNA组、H-Glucose+NC siRNA组、H-Glucose+SLIT3组、H-Glucose+SLIT3 siRNA组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA检测细胞中炎症因子水平;蛋白质印迹检测细胞中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达;RT-PCR检测细胞中SLIT3、IL-1β、IL-6、TNF-α相对表达量。结果与Ctrl组相比,SLIT3-siRNA1组(0.67±0.04)、SLIT3-siRNA2组(0.26±0.03)和SLIT3-siRNA3组(0.71±0.08)MPC-5细胞中SLIT3对表达量均明显降低,且SLIT3-siRNA3组变化最显著(P<0.01);与L-Glucose+NC siRNA组相比,L-Glucose+SLIT3组和H-Glucose+NC siRNA组MPC-5细胞凋亡率(分别为11.84%±1.06%、11.88%±1.07%)、细胞中IL-1β(分别为164.69±6.92、155.31±8.62)、IL-6(分别为162.16±5.56、105.35±3.44)、TNF-α(分别为103.31±6.84、128.43±4.82)水平及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(分别为1.74±0.14、3.93±0.17)和p-STAT3/STAT3比值(分别为1.99±0.24、4.43±0.16)明显增加,L-Glucose+SLIT3siRNA组细胞凋亡率(2.73%±0.25%)、细胞中IL-1β(78.09±7.47)、IL-6(46.48±2.63)、TNF-α水平(42.61±3.10)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(0.16±0.04)和p-STAT3/STAT3(0.20±0.03)比值明显降低(P<0.01);与H-Glucose+NC siRNA组相比,H-Glucose+SLIT3组MPC-5细胞凋亡率(16.24%±1.28%)、细胞中IL-1β(214.09±9.28)、IL-6(205.44±6.80)、TNF-α水平(192.11±4.93)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(5.00±0.39)和p-STAT3/STAT3比值(5.71±0.33)明显增加,H-Glucose+SLIT3 siRNA组细胞凋亡率(6.25%±0.43%)、细胞中IL-1β(118.60±8.05)、IL-6(74.37±4.91)、TNF-α水平(98.76±4.81)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(2.99±0.13)和p-STAT3/STAT3(2.05±0.14)比值明显降低(P<0.01)。结论敲减SLIT3可抑制高糖诱导的肾小球足细胞中炎症反应和细胞凋亡,改善足细胞损伤,其作用机制可能比抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关。

肾小球足细胞损伤在脂质肾损害发病中的作用

目的 :探讨肾小球足细胞损伤在脂质肾损害发病中的可能作用。方法 :用含 4 %胆固醇和 1%胆酸钠的高脂饲料饲喂大鼠建立高脂模型 ,观察高脂组和正常组大鼠血脂、尿蛋白、肾功能及肾脏病理学改变 ,运用免疫组化技术检测肾小球足细胞损伤标志蛋白 -结蛋白表达 ,并进行相关分析。结果 :高脂组大鼠总胆固醇、低密度脂蛋白、血肌酐和尿蛋白均显著升高 (P <0 .0 1) ,肾小球系膜基质增生明显 (P <0 .0 1) ,肾小球内结蛋白表达上调 ,透射电镜下可观察到肾小球足细胞损伤表现。结蛋白表达与血脂、血肌酐、尿蛋白、肾小球系膜基质增生之间存在显著正相关性。结论

加味黄芪赤风汤对阿霉素诱导肾小球足细胞凋亡的影响

目的:探讨加味黄芪赤风汤对阿霉素诱导的肾小球足细胞凋亡的影响。方法:体外培养小鼠肾小球足细胞,以阿霉素(adriamycin,ADR)诱导制作足细胞损伤模型。按随机数字表法分为空白组、模型组、替米沙坦组及加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组(简称中药高、中、低剂量组),采用CCK-8法检测各组足细胞存活率,流式细胞仪检测各组足细胞凋亡情况,并采用EXPO32v1.2软件分析足细胞凋亡率,透射电镜下观察各组足细胞凋亡超微结构。结果:与空白组比较模型组足细胞存活率明显下降,与模型组比较中药高、中剂量组足细胞存活率均明显上升,中药低剂量组无明显升高;与空白组比较模型组早期凋亡率明显升高,与模型组比较中药各组及替米沙坦组早期凋亡率均明显下降,中药高、中剂量组与替米沙坦组比较差异无统计学意义,与低剂量组比较差异有统计学意义;模型组较空白组足细胞明显皱缩、胞浆内细胞器减少,染色质边集、凝聚成块、核碎裂,形成凋亡小体,中药各组及替米沙坦组较模型组凋亡超微结构均有不同程度改善。结论:加味黄芪赤风汤对ADR诱导的足细胞损伤具有保护作用,并呈现一定的量效关系,其保护作用可能与该方能够抑制足细胞的过度凋亡有关。

Nephrin,podocin及α-actinin在小鼠肾小球足细胞系的表达与分布

目的 :探讨nephrin ,podocin及α actinin在小鼠肾小球足细胞系 (MPC5)的表达与分布 ,为进一步研究上述分子间的相互作用建立稳定的实验平台。 方法 :培养小鼠MPC5,以γ 干扰素诱导在 33℃传代增生 ,继而在37℃培养两周使细胞分化成熟以用于实验研究。相差显微镜观察足细胞形态 ;免疫荧光染色观察nephrin ,podocin ,α actinin及WT1在足细胞的分布 ;RT PCR检测足细胞nephrin ,podocin及α actinin 4的mRNA ;免疫蛋白印迹检测nephrin ,podocin ,α actinin及WT1蛋白。 结果 :成熟足细胞呈星形且有突起形成。免疫荧光及免疫蛋白印迹显示足细胞特异性的表达WT1分子。免疫荧光染色可见nephrin和podocin在足细胞内均呈线状分布于胞膜表面 ,α actinin呈细丝状分布于胞质内及伸出的突起中。在mRNA水平及蛋白水平均检测到nephrin ,podocin和α actinin 4表达 ,其蛋白大小分别为 180KDa,4 5KDa和 10 0KDa。 结论 :首次在mRNA水平及蛋白水平证实了小鼠MPC5能够表达nephrin ,podocin及α actinin ,为进一步研究这些分子间的相互作用奠定了基础。

缬草油对高胆固醇血症大鼠肾小球足细胞损伤的影响

目的探讨缬草油对高胆固醇血症大鼠肾小球足细胞损伤的保护作用。方法大鼠32只,随机分为正常组、高脂组(用含4%胆固醇和1%胆酸钠的高脂饲料饲喂)、缬草组(缬草油25 mg.kg-1.d-1灌胃)和他汀组(辛伐他汀5 mg.kg-1.d-1灌胃),各8只。第8周和第16周时检测各组血脂、尿蛋白、肾功能,观察肾脏病理学改变,免疫组化和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾小球结蛋白(Desm in蛋白)和mRNA表达。结果缬草油和辛伐他汀均能显著降低大鼠血脂;8周时缬草组24 h尿蛋白明显降低,而他汀组16周时尿蛋白排泄有所下降。在尿蛋白下降同时,缬草油能明显改善足细胞超微结构损伤,减少损伤足细胞数量(P<0.01),下调肾小球内Desm in蛋白和mRNA表达(P<0.01),其改善作用较辛伐他汀更明显。结论缬草油可能通过降脂、减轻足细胞损伤、抑制足细胞从基底膜脱落、降低尿蛋白而发挥肾保护作用。

黄芪多糖对高糖刺激小鼠肾小球足细胞Nephrin和Desmin表达的影响

目的模拟体外高糖病理微环境,探讨黄芪多糖对实验鼠肾脏肾小球足细胞Nephrin及Desmin表达的影响.方法试验(1):将培养的实验鼠肾脏肾小球足细胞分为5个组,分别是D-葡萄糖30 mmol/L+黄芪多糖干预组(0.0 g/L,0.1 g/L,0.2 g/L,0.4 g/L及0.8 g/L);干预时间为72 h,筛选出黄芪多糖干预的最佳浓度点0.Z g/L.试验(2):将培养的实验鼠肾脏肾小球的足细胞分7个组,分别是D-葡萄糖30 mmol/L+黄芪多糖的干预(干预浓度是0.Z g/L),干预的时间分别是0 h,3 h,6 h,12 h,24 h,48 h及72 h;筛选出干预的最佳时间点Y h.试验(3):根据上述试验(1)、(2)结果,将培养的小鼠肾小球足细胞分为:正常对照组、甘露醇高渗对照组、高糖组和黄芪多糖干预组(黄芪多糖的干预浓度是0.Z g/L,干预的时间是Y h),采用流式细胞术与实时聚合酶链反应(real-Time Polymerase Chain Reaction,real-Time PCR)分别检测七组足细胞Nephrin、Desmin蛋白与m RNA的表达.结果随着黄芪多糖干预梯度浓度的递增,实验鼠肾脏肾小球的足细胞Nephrin蛋白表达逐渐上调,Desmin蛋白表达逐渐下调,呈浓度依赖性(P<0.05);随着黄芪多糖干预时间的延长,实验鼠肾脏肾小球的足细胞Nephrin的表达逐渐上调,但肾小球的足细胞Desmin的表达逐渐下调,呈时间依赖性.相比正常对照组和甘露醇高渗对照组,高糖组小鼠肾小球足细胞Nephrin蛋白和m RNA表达均下降,Desmin蛋白和m RNA表达均增加(P<<0.05);而相较高糖组,黄芪多糖干预组Nephrin蛋白和m RNA表达明显上升,Desmin蛋白和m RNA表达明显降低(P<0.05).结论在高糖刺激下,黄芪多糖干预可上调肾小球足细胞Nephrin表达,降低肾小球足细胞Desmin表达,是黄芪治疗DN蛋白尿的可能作用靶点.

人肾小球足细胞表达Nephrin的体外研究

目的:观察人足细胞在体外表达Nephrin的分子量大小、细胞内分布。方法:体外培养人肾小球足细胞,采用间接免疫荧光法、免疫蛋白印迹研究原代培养人足细胞表达Nephrin的分布、蛋白质的分子量,逆转录PCR(RT-PCR)法检测Nephrin的mRNA表达等,RT-PCR产物进行序列分析加以确定。结果:体外原代培养的人足细胞可以表达Nephrin,间接免疫荧光显示其沿足细胞的细胞膜、细胞骨架和细胞核分布,并且在细胞内有一聚集中心。免疫蛋白印迹示人足细胞表达2种分子量的Nephrin,其中135kD的分子量与预期分子量一致,180kD的分子量与肾小球蛋白提取物一致,RT-PCR从基因水平确定了该蛋白的表达。结论:人足细胞在体外培养的条件下表达不同分子量的Nephrin,并且在细胞内分布具有一定的规律,为进一步研究其在自身细胞和肾脏病中的作用提供了可靠的实验方法。

他克莫司通过稳定细胞骨架和nephrin抑制血管紧张素Ⅱ损伤肾小球足细胞

目的探讨他克莫司(Tac)在足细胞损伤中的作用机制。方法以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),或AngⅡ联合Tac干预体外培养足细胞,干预后0、12和24 h收集细胞;行荧光染色观察细胞骨架分布,以WB检测足细胞分子nephrin和podocin蛋白表达。结果对照组骨架分子F-actin呈强有力丝状排列,AngⅡ引起F-actin的断裂和不连续分布,Tac明显抑制AngⅡ对F-actin的损坏,维持细胞骨架良好的丝状结构。AngⅡ刺激后24 h,nephrin表达明显低于对照组,Tac抑制AngⅡ对nephrin的下调(1.00±0.19 vs.0.76±0.32,P<0.05),稳定nephrin正常表达;AngⅡ和Tac干预对podocin表达无明显影响。结论 Tac抑制AngⅡ损伤足细胞,稳定细胞骨架的规律排列和nephrin的正常表达。

雷公藤内酯醇对小鼠肾小球足细胞裂孔隔膜核心蛋白表达干预作用的研究

目的观察雷公藤内酯醇(TP)干预高糖环境培养的小鼠肾小球足细胞裂孔隔膜nephrin、podocin和CD2AP的表达,探讨雷公藤治疗糖尿病肾病(DN)蛋白尿的分子生物学机制。方法培养成熟的小鼠足细胞随机分为对照组1、对照组2、高糖组和TP干预组,TP干预组进一步分为低剂量、中剂量和高剂量组。用不同浓度的TP(8、16和32ng/ml)干预高糖(25mmol/L的Glu)培养24h后的小鼠足细胞,用RT-PCR法检测干预前后nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达;用间接免疫荧光法检测16ng/ml TP干预后nephrin和podocin蛋白的表达。结果(1)与对照组相比,高糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA表达均明显减弱(均P<0.01)。(2)TP显著上调高糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达(均P<0.05)。(3)16ng/ml TP能明显上调高糖对足细胞nephrin和podocin(均P<0.05)蛋白表达的抑制。结论 TP显著上调高糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP的表达,可能是其降低DN蛋白尿的机制之一。

CD2AP突变对肾小球足细胞骨架蛋白F-actin分布的影响

目的构建突变型CD2相关蛋白(CD2AP)荧光表达载体并转染肾小球足细胞,观察细胞内骨架蛋白F-actin分布的变化。方法定点诱变真核表达质粒pcDNA6-V5-CD2AP致CD2AP第2外显子160G>A杂合突变,测序鉴定。利用野生型和突变型质粒和pEGFP-C1荧光表达载体,分别构建野生型和突变型重组质粒pEGFP-C1-CD2AP荧光表达载体并转染小鼠肾小球足细胞,荧光显微镜观察处于不同细胞周期的足细胞内F-actin分布情况。结果测序结果显示,pcDNA6-V5-CD2AP真核表达载体CD2AP的2号外显子第160位碱基G诱变为A,而其他碱基未发生改变。在细胞分裂间期,未转染足细胞内F-actin平行排列成纤维束;野生型重组质粒转染足细胞内F-actin在细胞核周围呈点、块状浓聚;而突变型重组质粒转染足细胞内F-actin主要在细胞膜上勾出轮廓。在细胞分裂中期,野生型重组质粒转染足细胞内F-acin纤维丝呈粗纤维状,环细胞浓聚;突变型重组质粒转染足细胞则仅见胞质内F-acin纤维丝增多,部分区域浓聚。结论成功构建野生型和突变型重组CD2AP荧光表达载体。CD2AP基因160G>A杂合突变使肾小球足细胞分裂间期和分裂中期的F-actin纤维骨架发生改变。

加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾小球足细胞增殖影响的实验研究

目的：观察加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾足细胞增殖的影响。方法：用不同浓度低密度脂蛋白(LDL)和氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导小鼠肾足细胞增殖,再用不同浓度加减下瘀血汤及强的松龙、缬沙坦的含药血清进行刺激干预,然后用四唑盐(MIT)法检测足细胞增殖。结果：25μml浓度LDL与100μg/ml OX-LDL刺激足细胞增殖达峰值,加减下瘀血汤的高、低剂量,强的松龙的中、高剂量及缬沙坦的中、高剂量含药血清有明显抑制足细胞增殖作用。结论：①LDL和OX-LDL在一定的剂量和时间条件下可以刺激足细胞增殖。②加减下瘀血汤、可抑制脂质诱导的足细胞增殖现象。

肾小球足细胞与内皮细胞的相互作用

肾小球是维持肾脏正常结构和功能的重要部分，其损伤是许多动物实验和人类进展性肾脏疾病发展的重要机制。足细胞、内皮细胞和肾小球基底膜（GBM）共同构成肾小球的滤过屏障，他们在结构和功能上紧密相关，任何一部分的损伤都可能会引起肾小球滤过功能的改变。

线粒体功能障碍与肾小球足细胞损伤的研究进展

随着2型糖尿病在全球的蔓延，糖尿病的防治工作已成为世界公共卫生的巨大挑战。据国际糖尿病联盟预测，2030年全世界的糖尿病患病人数将达到5．52亿。随着糖尿病群体的迅猛扩增，糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）的发生率也逐年增加，业已成为导致终末期肾病最常见的原因。

肾小球足细胞损伤与糖尿病性肾病相关性研究

目的探讨糖尿病性肾病 (diabeticnephropathy ,DIA)病人肾小球足细胞形态及数量的改变与肾功能[主要以血清肌酐浓度 (serumcreatinineconcentration ,SCC)来反应 ]的关系。 方法对 2 2例DIA病人活检标本肾小球足细胞面积与数量的改变作形态定量测定 ;5例因镜下血尿而作肾活检 ,但电镜观察排除其他肾病的标本作为阴性对照(NC)。测定参数 :足细胞面积 ,足细胞面积与肾小球面积比 ,肾小球单位面积足细胞数量 ,肾小球平均面积 ,系膜面积与肾小球面积比 ,肾皮质间质面积比。 结果DIA病人肾小球足细胞面积与数量的定量改变与SCC及肾皮质间质面积比显著相关 ,而对照组无这种关系。 结论在DIA病人 ,肾小球系膜面积的增加与肾间质纤维化的严重程度成正比 ;足细胞相对面积及相对数量的减少与血清肌酐浓度的升高及肾间质纤维化的严重程度成正比。说明在DIA病人 ,不仅肾小球系膜面积的增加与病程的进展密切相关 ,而且足细胞的损伤和丢失也可能起着重要的作用。

黄芪多糖对高糖刺激小鼠肾小球足细胞Desmin表达的影响

目的:体外模拟高糖病理微环境,探讨黄芪多糖对小鼠肾小球足细胞Desmin表达的影响。方法:将培养的小鼠肾小球足细胞分为:正常对照组、甘露醇高渗对照组、高糖组和黄芪多糖干预组,采用流式细胞术和real-Time PCR检测各组足细胞Desmin蛋白和mRNA的表达。结果:流式细胞术计数结果显示:黄芪多糖干预组小鼠肾小球足细胞表面Desmin阳性细胞百分率明显低于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05);较正常对照组和甘露醇高渗对照组,高糖组Desmin mRNA表达增加(P<0.05);而相较高糖组,黄芪多糖干预组Desmin mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在高糖刺激下,黄芪多糖干预可下调肾小球足细胞Desmin表达,是黄芪治疗DN蛋白尿的可能作用靶点。

PFT-α对高糖诱导的肾小球足细胞泛素化通路和细胞凋亡的影响

目的:观察p53抑制剂(Pifithrin-alpha,PFT-α)对高糖刺激后肾小球足细胞泛素化通路和细胞凋亡的影响。方法:体外培养小鼠肾小球足细胞,分为对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(30 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、PFT-α组(30 mmol/L葡萄糖+10μmol/LPFT-α)、0.2%二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)溶剂对照组(30 mmol/L葡萄糖+0.2%DMSO)。用Western blot法检测各组足细胞p53和COP1蛋白的表达,TUNEL方法检测各组足细胞凋亡情况。结果:高糖刺激48 h后足细胞p53蛋白表达水平(1.210 8±0.035)较对照组(0.072 9±0.007 13)明显增加,COP1蛋白表达水平(0.579 6±0.041 9)则较对照组(1.067±0.053 4)下调;PFT-α在高糖刺激48 h后作用足细胞6 hp,53蛋白表达水平(0.166 4±0.038 7)较高糖组(1.210 8±0.035)下调,COP1蛋白表达水平(0.308 1±0.014 5)与高糖组(0.579 6±0.041 9)则差异无统计学意义;高糖刺激足细胞后凋亡率(35.41±3.31)%分别是对照组(2.23±0.17)%和PFT-α组(4.27±0.21)%的15.87倍和8.29倍,甘露醇组(42.44±6.11)%和0.2%DMSO组(32.80±5.02)%与高糖组差异无统计学意义。结论:高糖损伤肾小球足细胞时可能抑制小鼠肾小球足细胞泛素蛋白酶体活化,进而增加肾小球足细胞的凋亡,PFT-α可通过下调p53蛋白致小鼠肾小球足细胞凋亡减少。

他克莫司对嘌呤霉素损伤的肾小球足细胞重组人帕金森蛋白7表达的影响

目的探讨嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)对小鼠肾小球足细胞(mouse podocyte clone 5,MPC-5)凋亡及重组人帕金森蛋白7(Parkinson's disease 7,Park7)表达的影响,以及他克莫司(tacrolimus,FK506)对MPC-5损伤的保护机制。方法体外培养MPC-5,分为空白对照组(对照组)、PAN组和FK506组。PAN组滴加PAN(浓度50 mg/L)构建MPC-5损伤模型,FK506组同时滴加PAN(浓度50 mg/L)和FK506(浓度5 mg/L)。分别于12、24、48 h在倒置显微镜下观察MPC-5的形态结构;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用实时荧光定量PCR法检测Park7 mRNA的表达;采用Western blot、免疫荧光染色法检测Park7蛋白表达。结果对照组各时间点细胞体足突数量多,细胞之间连接紧密,呈正常形态;PAN组各时间点细胞体积较对照组明显缩小,细胞间连接松散,可见破碎细胞;FK506组各时间点细胞体积较PAN组增大,细胞之间的连接较紧密,形态好转。PAN组各时间点细胞凋亡率较对照组明显升高,FK506组各时间点细胞凋亡率较PAN组均下降(P<0.05)。PAN组各时间点的Park7 mRNA表达量均较对照组显著增高,FK506组各时间点Park7 mRNA表达量较PAN组均下降(P<0.05)。Western blot结果显示PAN组中各时间点Park7蛋白表达量均较对照组显著增高,FK506组各时间点Park7蛋白表达量较PAN组均下降(P<0.05)。免疫荧光染色显示PAN组Park7蛋白分布在细胞膜和细胞质中,较对照组明显增加,呈密集团状分布,荧光强度增加;FK506组Park7蛋白分布较PAN组明显降低。结论PAN作用于MPC-5可引起细胞形态结构损伤及凋亡,以及Park7 mRNA及其蛋白的表达上调;FK506可使MPC-5损伤模型的Park7 mRNA及其蛋白表达下调,维持细胞功能稳态,减轻蛋白尿,延缓肾小球硬化。