富硒黄芪多糖对STZ诱导的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:观察富硒黄芪多糖对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法:将50只STZ诱导的SPF级雄性糖尿病大鼠随机分为模型组、吡格列酮组和富硒黄芪多糖低、中、高剂量组,每组10只,正常组10只大鼠不进行造模。富硒黄芪多糖低、中、高剂量组按100、200、400 mg/kg灌胃,正常组及模型组灌胃等体积生理盐水,吡格列酮组按10 mg/kg灌胃吡格列酮。每天灌胃1次,连续干预4周。造模前及造模后第0、2、4周记录各组大鼠一般状况、检测尿微量白蛋白(urinary albumin,UAlb)和血糖。干预结束后,采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)观察各组大鼠肾脏组织形态学变化情况;测定各组大鼠血清肌酐(serum creatinine,SCr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血尿酸(uric acid,UA)表达水平;荧光定量PCR检测各组大鼠肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白(Fibronectin,FN)mRNA表达水平;免疫组化法(immunocytochemistry,IHC)检测各组大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达。结果:与模型组比较,富硒黄芪多糖中、高剂量组及吡格列酮组大鼠血糖、24 h UAlb于造模后第2周明显下降(P<0.05),血清SCr、BUN及UA表达降低(P<0.05),富硒黄芪多糖高剂量组及吡格列酮组大鼠肾组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、FN表达均降低(P<0.05),E-cadherin表达升高(P<0.05),富硒黄芪多糖低、中、高剂量组及吡格列酮组大鼠肾组织中α-SMA表达下降(P<0.01),肾小球数量增多,细胞外基质减少;与吡格列酮组比较,黄芪多糖高剂量组大鼠24 h Ualb、血清SCr、BUN、UA水平及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、FN表达水平、E-cadherin和α-SMA蛋白表达变化均不明显(P>0.05),肾小球数量减少,细胞外基质减少。结论:富硒黄芪多糖可降低STZ诱导的糖尿病大鼠血糖,具有抑制糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。

HES5对肾小管上皮细胞转分化和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨HES5(hairy and enhancer of split 5)对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡的作用及其潜在机制。方法分析和筛选GSE66494数据中的差异表达基因。建立小鼠的输尿管梗阻模型(unilateral uretera obstruction,UUO),检测肾组织中HES5的表达水平。TGF-β1(10 ng/mL)处理HK-2细胞24 h建立肾小管上皮-间质转化模型后,通过qRT-PCR和Western blot检测HES5的表达水平。用过表达HES5的质粒转染HK-2细胞,24 h后检测其纤连蛋白(Fibronectin,FN)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)及凋亡相关标志物(Bax、Bcl2)等蛋白表达;然后,将HK-2细胞分为4组:Control组、siHES5组、TGF-β1组、siHES5+TGF-β1组,检测各组的纤维化及凋亡标志物的表达情况。运用TUNEL及流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot检测各组AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K的蛋白表达。通过加入PI3K抑制剂(LY294002)处理过表达HES5的HK-2细胞后,检测Vimentin的表达。结果HES5的表达在慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)和小鼠纤维化肾组织中均显著上调;过表达HES5可以促进HK-2细胞中FN、CollagenⅠ、Vimentin、Bax的合成,抑制Bcl2的表达(P<0.05);敲低HES5不仅下调纤维化标志物的表达,还抑制了肾小管上皮细胞凋亡;此外,HES5基因敲低使TGF-β1诱导的HK-2细胞内PI3K/AKT信号通路的激活程度降低(P<0.05);PI3K/AKT信号通路抑制剂减弱了HES5对Vimentin的诱导作用。结论敲低HES5可以抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和凋亡,这可能与PI3K/AKT信号通路活性降低有关。

姜黄素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化及TGF-β/Smads信号转导途径的影响

目的观察姜黄素对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾小管上皮细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及TGF-β/Smads信号转导途径的影响。方法建立大鼠UUO模型,分为假手术组、模型组及姜黄素1、2组。姜黄素1组术后第2天开始给予姜黄素100mg/(kg·d)灌胃,姜黄素2组术后第10天开始给予姜黄素100mg/(kg·d)灌胃。假手术组和模型组给予同等剂量的生理盐水灌胃。术后28天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,免疫组化染色观察α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA),E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达分布;Western blot检测转化生长因子-β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)、P-Smad2、P-Smad3及Smad7的蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测TGF-β1、转化生长因子-β受体Ⅰ型(tansforming growth factor-βreceptorⅠ,TβRⅠ)、胶原蛋白-Ⅰ(collagen-Ⅰ,Col-Ⅰ)和胶原蛋白-Ⅲ(collagen-Ⅲ,Col-Ⅲ)mRNA水平表达。结果 UUO组大鼠肾组织中α-SMA表达明显增强(P<0·01),E-cadherin表达明显减弱(P<0·01),P-Smad2和P-Smad3蛋白,TGF-β1蛋白及mRNA,TβRⅠmRNA及Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA的表达水平均明显上调(P<0·01),Smad7蛋白表达明显减少(P<0·01)。姜黄素1、2组α-SMA蛋白,P-Smad2及P-Smad3蛋白,TGF-β1蛋白及mRNA,TβRⅠmRNA,Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA的表达水平与UUO组比较显著下降(P<0·05,P<0·01),E-cadherin和Smad7蛋白表达显著升高(P<0·05,P<0·01)。结论姜黄素可干预UUO大鼠TGF-β/Smads信号通路中多个位点,抑制肾小管上皮细胞EMT的发生,从而减轻肾小管间质纤维化。

红景天甙对低氧诱导肾小管上皮细胞转分化的作用研究

目的观察红景天甙(salidroside,Sal)对氯化钴(cobaltous chloride,CoCl2.6 H2O,Co)诱导的低氧状态下正常大鼠近端肾小管上皮细胞(normal rat kidney tubular epithelia cell,NRK52E)转分化的影响并分析其可能的机制。方法体外培养NRK52E细胞,分为正常对照组,氯化钴低氧组,10、50、100μmol/L不同浓度红景天甙组。观察低氧标志蛋白低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible foctor-1α,HIF-1α)的表达。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;荧光免疫及细胞免疫法检测NRK52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达情况;RT-PCR检测NRK52E细胞α-SMA、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA的表达;Western blot蛋白印迹检测HIF-1α和α-SMA蛋白的表达;酶联免疫吸附法检测细胞上清液胶原Ⅰ(collagenⅠ,Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的含量。结果100μmol/L Co诱导NRK52E细胞表达HIF-1α。Co组细胞明显肥大、拉长,呈肌成纤维细胞外观。不同浓度Sal组细胞形态介于正常与Co组之间。Co组α-SMA基因、蛋白和TGF-β1mRNA表达量较对照组升高(P<0.05),不同浓度Sal组α-SMA基因、蛋白和TGF-β1mRNA表达量较Co组减少(P<0.05)。Co组细胞上清液Col-Ⅰ和FN的含量较对照组增加(P<0.05),不同浓度Sal组Col-Ⅰ和FN的含量明显下降(P<0.05),以高剂量组最为明显。结论Sal可在一定程度上改善Co诱导的低氧状态和细胞转分化,减少细胞外基质的增加。其机制可能是通过抑制TGF-β1和HIF-1α的表达实现的。

Smad信号传递途径调节肾小管上皮细胞转分化实验

目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)转分化作用与其细胞内信号传递途径的关系。方法:以细胞间粘连蛋白(Ecadherin)和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)作为肾小管上皮细胞转分化的观察指标,借助细胞培养、蛋白印迹和基因转染等方法,检测TGFβ1引发的Smad信号途径的变化,和TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞转分化作用。将含有Smad7基因表达质粒转染HKC细胞,观察高表达的Smad7蛋白对TGFβ1作用的影响。结果:实验结果表明①TGFβ1作用HKC细胞10min即可磷酸化HKC细胞内Smad2/3蛋白,而且此作用可持续48h以上;②TGFβ1作用HKC细胞6h即可下调Ecadherin蛋白的表达,24h后能诱导该细胞表达αSMA,其作用呈明显的剂量依赖关系;③转染Smad7表达质粒的HKC细胞,可拮抗TGFβ1诱导HKC细胞表达αSMA以及下调Ecadherin蛋白表达的作用;④应用特异性MAP激酶抑制剂(PD98059和SC68376)和PI3激酶抑制剂(Wortmannin)均不能拮抗TGFβ1的作用。结论:TGFβ1诱导的上皮细胞转分化作用是依赖其引发的Smad信号途径,阻断该信号传递途径则能够拮抗TGFβ的作用。

川芎嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察川芎嗪对单侧输尿管梗阻大鼠(UUO)肾小管上皮细胞-间充质转分化(EMT)的影响及机制。方法 SD大鼠60只,随机分为A组(假手术)、B组(UUO)、C组[川芎嗪,40 mL/(kg·d),腹腔注射]、D组[厄贝沙坦,50 mg/(kg·d),灌胃],每组各15只。术后分别于第3、7和14天取左肾组织。荧光实时定量PCR检测分化抑制因子1(Id1)mRNA,免疫组化法测Id1、小窝蛋白1(Cav1)、转化生长因子-β1(TGFβ1)、钙粘蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原表达及相关分析。结果与A组比较,B组大鼠各时间点Id1 mRNA和蛋白、Cav1、TGFβ1、α-SMA和I型胶原表达增多,E-cad表达逐渐减少;C组大鼠各时间点均反向调节上述因子,疗效与D组相似;UUO大鼠肾组织中Id1表达与Cav1、α-SMA、TGFβ1表达正相关,与E-cad表达呈负相关。结论 Id1及Cav1表达强弱与肾间质纤维化程度相关,川芎嗪能有效减轻UUO诱导的大鼠肾间质纤维化,可能与有效抑制Id1及Cav1表达,部分逆转EMT有关。

温莪术对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨温莪术对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(epithelial-myofibroblast transdifferentiation,EMT)拮抗作用。方法将体外培养的正常肾小管上皮细胞随机分为6组:正常对照组(C组)、TGF-β1诱导模型组(T组)、温莪术低浓度组(E1组)、温莪术中浓度组(E2组)、温莪术高浓度组(E3组)、盐酸贝那普利组(Y组),除C组外,各组TGF-β1诱导24h后,温莪术各剂量组及Y组加入药物作用48h。运用倒置显微镜观察细胞形态的改变,细胞免疫荧光法、RT-PCR法及ELISA法检测各组NRK-52E细胞EMT过程中细胞骨架成分β-肌动蛋白(β-actin)的分布,α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmus-cleactin,α-SMA)mRNA、E钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)mRNA表达,纤维粘连蛋白(fibro nectin,FN)浓度。结果 TGF-β1诱导3天后,T组细胞出现肥大、拉长,呈梭形,细胞骨架结构β-actin表达增多(P<0.05),胞浆内出现束状纤维样结构,细胞内α-SMA mRNA表达显著上调(P<0.05),E-cadmRNA表达降低(P<0.05),细胞上清液中FN浓度升高(P<0.05)。与T组比较,E1-3组细胞仅见部分呈成纤维样改变,伴随胞浆内β-actin表达及FN浓度的降低(P<0.05),E2-3组细胞内α-SMA mRNA表达升高(P<0.05),E-cadmRNA表达减少(P<0.05),但E1组E-cad及α-SMA mRNA表达量与之比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与E1组比较,E2-3组胞浆内β-actin蛋白表达及FN浓度降低(P<0.05),E3组细胞内E-cadmRNA表达升高伴α-SMA mRNA表达降低(P<0.05)。与Y组比较,E1组细胞浆内β-actin mRNA及细胞上清液中FN浓度均升高(P<0.05),E3组β-actin表达升高(P<0.05),E-cad mRNA表达降低(P<0.05),E1-3α-SMA mRNA表达量则差异无统计学意义(P>0.05)。结论温莪术可抑制TGF-β1诱导的EMT发生,可作为临床治疗慢性肾功能不全的有效药物之一。

人肾小管上皮细胞转分化过程中血管内皮细胞生长因子及其受体表达的变化

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化过程中,血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的变化。方法用不同浓度的TGFβ1诱导HK-2转分化,细胞免疫化学方法检测血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和VEGFmRNA表达,酶联免疫分析(ELISA)检测上清中的VEGF,免疫印迹检测细胞裂解物中的VEGF及其受体。结果(1)HK-2细胞在TGFβ1(5、8ng/ml)刺激后,α-SMA免疫染色均为阳性,以8ng/ml时最强;TGFβ1呈剂量和时间依赖诱导α-SMAmRNA表达(P<0.001)。(2)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF从基因到蛋白水平呈双相改变:0.1和1ng/mlTGFβ1刺激后VEGFmRNA和蛋白表达强度均高于对照组(P<0.001);而3、5和8ng/mlTGFβ1刺激后表达强度则低于对照组(P<0.001)。8ng/mlTGFβ1刺激较短时间(12和24h),VEGFmRNA和蛋白表达强度高于对照组(P<0.001);而刺激较长时间(36、48和72h),mRNA和蛋白表达强度均低于对照组(P<0.001)。(3)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,以浓度和时间依赖性方式诱导VEGF受体表达增强(P<0.001)。结论TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF受体表达增强,而VEGF表达出现双相变化,高浓度的TGFβ1刺激可引起VEGF表达下调。

醛固酮及其拮抗剂安体舒通对高糖刺激下肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:通过观察高糖环境下,醛固酮(aldosterone,Aldo)及其拮抗剂安体舒通(spironolac-tone,SP)对大鼠肾小管上皮细胞(normal rat kidney epithelial cell,NRK-52E)转分化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的影响,探讨Aldo及SP在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾保护作用中的机制。方法:用无血清DMEM(Dulbecco's modification of Eagle's medium Dulbecco)同步化培养NRK-52E细胞系12h后分为6组。LG组:采用低糖(1000mg/L)DMEM;HG组:采用高糖(4500mg/L)DMEM培养;10nmol/L Aldo组、50nmol/L Aldo组、100nmol/L Aldo组:分别采用高糖DMEM加10,50,100nmol/L Al-do培养;SP组采用高糖(4500mg/L)DMEM加10-7mol/L SP培养。采用细胞免疫化学、RT-PCR和Western免疫印迹方法检测各组细胞E-cadherin和α-SMA mRNA的表达情况。结果:RT-PCR结果表明,与LG组比较,HG组E-cadherinmRNA表达明显降低(P<0.01),α-SMAmRNA表达明显升高(P<0.05);50nmol/L Aldo组、100nmol/L Aldo组E-cadherinmRNA表达明显低于高糖组,而α-SMAmRNA表达明显高于高糖组(P<0.05),两者与Aldo呈浓度依赖关系(r=-0.70,P<0.05;r=0.67,P<0.05);SP组E-cadherinmRNA明显高于HG组,而α-SMAmRNA表达低于HG组(P<0.01)。细胞免疫化学和West-ern免疫印迹检测表明,与低糖组比较,HG组E-cadherin蛋白表达明显减低,而α-SMA表达明显升高(P<0.01);10nmol/L Aldo组、50nmol/L Aldo组、100nmol/L Aldo组E-cadherin蛋白表达明显低于HG组,而α-SMA蛋白表达明显高于HG组(P<0.05),与Aldo呈浓度依赖关系(r=-0.83,P<0.05;r=0.81,P<0.05);而SP组E-cadherin蛋白表达明显高于高糖组,α-SMA蛋白则明显低于HG组(P<0.05)。结论:Aldo能促进高糖环境下肾小管上皮细胞EMT的发生,致DN肾间质纤维化,而使用SP可抑制高糖诱导肾小管上皮细胞的EMT,这可能是其阻遏肾间质纤维化的重要机制。

姜黄素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的研究

目的:探讨姜黄素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。方法:采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。将24只大鼠随机均分为假手术组、模型组和姜黄素组。从制模后2 d起,姜黄素组给予100 mg.kg-1.d-1姜黄素腹腔注射。术后4周心脏穿刺抽血,测定各组大鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)值。处死大鼠,用苏木素-伊红(HE)、Masson染色评定肾小管间质纤维化程度;用免疫组化方法检测肾组织内转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达部位及表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠BUN水平显著增加(P<0.01),肾间质纤维组织相对面积显著扩大(P<0.01),肾组织内TGF-β1、α-SMA和Vimentin的蛋白表达均显著上调(P均<0.01)。姜黄素干预后,上述上调指标都被显著抑制(P<0.05或P<0.01)。结论:姜黄素可能通过抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞转分化而减轻肾间质纤维化。

温莪术通过ILK信号通路干预TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化

目的:探讨温莪术对转化生长因子(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用及机制。方法:通过体外培养肾小管上皮细胞(NRK-52E)及体外药物血清技术,运用MTT法检测不同浓度温莪术含药血清对细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学改变,细胞免疫荧光法检测各组肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达的变化,实时荧光定量PCR法检测细胞整合素连接激酶(ILK)mRNA表达的变化,ELISA法检测细胞上清液中胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)的分泌水平。结果:TGF-β1可诱导NRK-52E向成纤维细胞转化,出现肥大、拉长,显现梭形,胞浆内α-SMA表达明显增多(P<0.05),ILKmRNA的表达、Col-Ⅰ的分泌水平升高(P<0.05)。温莪术呈浓度依赖性抑制转分化发生,减少形态变化,下调α-SMA、ILK、Col-Ⅰ表达(P<0.05)。结论:TGF-β1可诱导转分化发生,伴有α-SMA、ILK、Col-Ⅰ等表达升高,而温莪术可抑制TGF-β1诱导的转分化,减少α-SMA、ILK、Col-Ⅰ的表达水平,并且有浓度依赖性。

三七总皂甙抗肾小管上皮细胞转分化的实验研究

目的探讨三七总皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)抗肾小管上皮细胞转分化(EMT)的分子病理机制。方法将雄性SD大鼠80只随机等分为4组:假手术组、UUO模型组、PNS治疗组和氯沙坦(ARB)治疗组。术后3、7、14天和21天每组随机选择5只大鼠处死,收集肾组织。分别用Western杂交、免疫组化检测α-SMA的表达;用Real-Time PCR检测UUO术后大鼠α-SMA mRNA的表达。结果大鼠肾组织α-SMA表达,对于3d、7d,仅UUO组、PMS组均高于SOR组,其余任意两组比较均相近;14d、21d,仅PNS组与氯沙坦组均相近,其余任意两组比较均不同。UUO组、PNS组、氯沙坦组的时间与α-SMA表达间存在相似的正相关的曲线关系。大鼠肾组织α-SMA mRNAΔCT值,SOR组、氯沙坦组的7d与14d观察值均相近,其他组14d观察值均低于7d。结论PNS能有效下调UUO大鼠肾脏组织α-SMAmRNA及其蛋白的表达,具有抗肾小管上皮细胞转分化的作用。

丹酚酸B对输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨丹酚酸B对输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响及作用机制。方法:雄性SD大鼠,建立单侧输尿管梗阻模型(UUO)。设假手术组、模型组、治疗组(丹酚酸B30mg·kg-1·d-1)术后第9天处死各组大鼠。采用光镜观察肾间质纤维化、炎细胞浸润,免疫组化观察肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Vi-mentin蛋白表达的变化。结果:(1)治疗组大鼠肾间质纤维化程度较模型组明显减轻;(2)UUO模型第9天时大鼠肾组织TGF-β1、α-SMA和Vimentin表达明显增强,炎细胞浸润明显增加。采用丹酚酸B治疗后,肾组织TGF-β1、α-SMA和Vi-mentin表达的异常增强能得到有效抑制,炎细胞浸润明显减少。结论:丹酚酸B具有减轻肾组织纤维化的作用,而这一作用与其能有效抑制炎细胞浸润和TGF-β1过度表达,进一步阻抑肾小管上皮细胞转分化(EMT)有关。

Smurf2在梗阻性肾病小鼠肾小管上皮细胞转分化形成中的作用

目的:探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在小鼠单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化进展中的作用机制。方法:采用结扎雄性CD-1小鼠单侧输尿管(UUO)的方法建立肾间质纤维化动物模型,设假手术为对照组(Sham组)。术后3、7、14 d处死小鼠。用常规病理染色法观察两组小鼠肾组织形态和肾间质纤维化程度;以免疫蛋白印迹及免疫组织化学染色法检测两组小鼠肾组织中Smurf2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接素(FN)的表达和分布。结果:与Sham组相比,UUO术后7 d小鼠出现部分肾小管扩张、萎缩和肾间质纤维化。同时,UUO术后肾组织中Smurf2、α-SMA和FN表达呈时间依赖性升高,E-cadherin表达则明显下降。并且,Smurf2蛋白主要分布于肾小管上皮细胞核内;α-SMA分布于肾小管上皮细胞和肾间质中;FN则分布于肾间质中。相关回归分析表明:UUO术后小鼠肾组织内Smurf2表达与α-SMA(r=0.765,P<0.001)和FN蛋白水平呈正相关(r=0.773,P<0.001);与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.656,P<0.001)。结论:梗阻性肾病小鼠肾组织中Smurf2可能通过诱导肾小管EMT形成促进肾间质纤维化的进展。

黄芪通过c-met调控TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞转分化

目的:探讨黄芪对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质分泌的作用及机制。方法:体外培养正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E),应用倒置相差显微镜观察NRK52E细胞形态学变化;免疫组织化学染色法及实时荧光定量PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),肝细胞生长因子HGF受体(c-met)的表达;ELISA法定量检测细胞上清液中胶原Ⅰ(Col-Ⅰ),胶原Ⅲ(Col-Ⅲ)和纤维黏连蛋白(FN)的水平。结果:TGF-β1可诱导肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转分化(TEMT),TGF-β1诱导组细胞肥大、拉长,呈长梭形,α-SMA表达明显增强,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN分泌增加(P<0.05)。加入不同浓度黄芪后,细胞形态接近正常肾小管上皮细胞形态,α-SMA表达、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN分泌均较TGF-β1诱导组明显抑制(P<0.05),c-met表达较TGF-β1诱导组增加(P<0.05)且呈剂量依赖性。结论:TGF-β1可以诱导肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转分化,增加细胞外基质成分Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的分泌;黄芪能够抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞转分化以及细胞外基质的分泌;黄芪抑制细胞转分化的机制可能与其增强c-met的表达有关。

糖尿病肾病患者蛋白尿中C3a致肾小管上皮细胞转分化

糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）已经成为导致终末期肾脏病（end-stage renal disease,ESRD）主要病因之一.肾小管间质纤维化是DN进展过程中起决定作用的组织学改变,关键环节就是肾小管上皮细胞发生上皮-间充质细胞转分化（ep-ithelial-mesenchymal transition,EMT）.研究表明补体C3裂解产物C3a可能是蛋白尿造成肾小管间质纤维化的因素之一.

益气活血法对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

[目的]观察益气活血法中药方剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调节,探讨其对肾小管上皮细胞转分化的影响。[方法]采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将30只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组。术后14d,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结果]益气活血法能减轻肾间质纤维化程度,并能下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结论]益气活血法可通过下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达,从而抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。

依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织胰岛素样生长因子-1表达及肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)依那普利对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达及肾小管上皮细胞转分化(EMT)的影响。方法采用UUO大鼠模型,雄性SD大鼠32只随机分为假手术组、模型组和依那普利组。依那普利组从造模前24 h开始以依那普利10 mg/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃。于造模后第14天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,苏木精-伊红染色(HE)和Masson染色观察肾组织病理改变;实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-q PCR)检测肾组织IGF-1m RNA的表达;Western blot检测肾组织IGF-1、α-血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果模型组大鼠肾间质损伤指数逐渐增加,肾间质胶原相对面积逐渐增大,IGF-1、α-SMA蛋白表达增加,IGF-1 m RNA和钙黏蛋白表达减少。经依那普利治疗后,肾间质损伤指数和肾间质胶原相对面积下降,IGF-1、α-SMA蛋白表达减少,IGF-1 m RNA和E-钙黏蛋白表达增加,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论依那普利可通过抑制肾组织IGF-1表达抑制EMT,进而防治肾间质纤维化。

大蒜素对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨大蒜素对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响。方法复苏并传代培养HK-2细胞,分为正常糖对照组(NG,5.5mmol/L)、高糖组(HG,25mmol/L)、高糖+不同剂量的大蒜素干预组(HG+2.5、5、10、20μg/ml Allicn)、高糖+JAK2抑制剂AG490组(HG+10μmol/L AG490)。倒置显微镜下观察高糖对细胞形态的影响,细胞免疫荧光检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达变化,荧光定量PCR检测TGF-β1mRNA的表达变化,Western blot法检测TGF-β1、p-STAT3、STAT3蛋白的表达变化。结果与正常对照组相比,高糖刺激后的HK-2细胞的形态发生明显的长梭形改变,上皮细胞标志物E-cadherin表达明显减少,而间充质细胞标志物ɑ-SMA及collagenⅠ的表达明显升高(P<0.01);TGF-β1及p-STAT3的表达明显增高(P<0.05);而加入大蒜素或JAK2抑制剂AG490后,均能不同程度抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,而且大蒜素可明显抑制TGF-β1及p-STAT3的表达,以20μg/ml尤为显著(P<0.05)。结论大蒜素可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路活化,从而抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化。

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)表型转化及细胞外基质分泌的影响。方法:体外培养NRK52E细胞,经Ang-(1-7)和AngⅡ(终浓度均为1×10-6mol/L)干预24、48、72、96 h后,应用细胞免疫化学法检测E-cadherin,α-SMA的表达;应用ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(ColⅠ)和纤维黏连蛋白(FN)的表达;采用实时荧光定量PCR(Real-tim e PCR)检测细胞中E-cadherin、α-SMA、ColⅠ和FN mRNA表达水平的变化。结果:AngⅡ作用96 h后,E-cadherin蛋白及mRNA表达显著减弱(P<0.05),α-SMA、ColⅠ、FN蛋白及mRNA表达显著增强(P<0.05);同时加入Ang-(1-7)后,与AngⅡ组比较,E-cadherin蛋白及mRNA的表达增强(P<0.05),α-SMA、ColⅠ、FN蛋白及mRNA表达减弱(P<0.05)。结论:Ang-(1-7)能够抑制AngⅡ诱导的大鼠肾小管上皮细胞表型转化及细胞外基质的分泌。